Name: intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model
Uploaded: 2018-10-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

실험 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 필라델피아의 아동 병원에 의해 승인 되었다.
1입니다. 사출 펫의 창조
<ol><li>수직 micropipette 끌어당기는 사람을 사용 하 여 100 µ L microcapillary 피 펫 (그림 1A -1c)을 당겨. 테이퍼 끝입니다 > 1 ㎝ 길이 micropipette 끌어당기는 보정. 참고: 처음, 끌어당기는의 설정은 조정 해야 최적의 길이. 높은 열...

<ol>
	<li>Loukogeorgakis, S., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+stem+cell+and+gene+therapy:+current+status+and+future+perspectives.">In utero stem cell and gene therapy: current status and future perspectives.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 24, 237-245 (2014).</li><li>Vrecenak, J., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+hematopoietic+cell+transplantation:+recent+progress+and+the+potential+for+clinical+application.">In utero hematopoietic cell transplantation: recent progress and the potential for clinical application.</a> Cytotherapy. 15, 525-535 (2013).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+murine+hemoglobinopathies+by+prenatal+tolerance+induction+and+postnatal+nonmyeloablative+allogeneic+BM+transplants.">Correction of murine hemoglobinopathies by prenatal tolerance induction and postnatal nonmyeloablative allogeneic BM transplants.</a> Blood. 126 (10), 1245-1254 (2015).</li><li>Vrecenak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Long-Term+Mixed+Chimerism+Achieved+in+a+Canine+Model+of+Allogeneic+in+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">Stable Long-Term Mixed Chimerism Achieved in a Canine Model of Allogeneic in utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Blood. 124 (12), 1987-1995 (2014).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD26+Inhibition+Enhances+Allogeneic+Donor-Cell+Homing+and+Engraftment+after+in+utero+Hematopoietic-Cell+Transplantation.">CD26 Inhibition Enhances Allogeneic Donor-Cell Homing and Engraftment after in utero Hematopoietic-Cell Transplantation.</a> Blood. 108 (13), 4268-4274 (2006).</li><li>Waddington, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+gene+transfer+of+human+factor+IX+to+fetal+mice+can+induce+postnatal+tolerance+of+the+exogenous+clotting+factor.">In utero gene transfer of human factor IX to fetal mice can induce postnatal tolerance of the exogenous clotting factor.</a> Blood. 101 (4), 1359-1366 (2003).</li><li>Stitelman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Stage+Determines+Efficiency+of+Gene+Transfer+to+Muscle+Satellite+Cells+by+in+utero+Delivery+of+Adeno-Associated+Virus+Vector+Serotype+2/9.">Developmental Stage Determines Efficiency of Gene Transfer to Muscle Satellite Cells by in utero Delivery of Adeno-Associated Virus Vector Serotype 2/9.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 1, 14040 (2014).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+to+Ocular+Stem+Cells+by+Early+Gestational+Intraamniotic+Injection+of+Lentiviral+Vector.">Gene Transfer to Ocular Stem Cells by Early Gestational Intraamniotic Injection of Lentiviral Vector.</a> Molecular Therapy. 15 (3), 579-587 (2007).</li><li>Boelig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Intravenous+Route+of+Injection+Optimizes+Engraftment+and+Survival+in+the+Murine+Model+of+In+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">The Intravenous Route of Injection Optimizes Engraftment and Survival in the Murine Model of In utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 22 (6), 991-999 (2016).</li><li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-amniotic+Transient+Transduction+of+the+Periderm+with+a+Viral+Vector+Encoding+TGF&#946;3+Prevents+Cleft+Palate+in+Tgf&#946;3-/-.+Mouse+Embryos.">Intra-amniotic Transient Transduction of the Periderm with a Viral Vector Encoding TGF&#946;3 Prevents Cleft Palate in Tgf&#946;3-/-. Mouse Embryos.</a> Molecular Therapy. 1, 8-17 (2013).</li><li>Roybal, J., Endo, M., Radu, A., Zoltick, P., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+gestational+gene+transfer+of+IL-10+by+systemic+administration+of+lentiviral+vector+can+prevent+arthritis+in+a+murine+model.">Early gestational gene transfer of IL-10 by systemic administration of lentiviral vector can prevent arthritis in a murine model.</a> Gene Therapy. 18 (7), 719-726 (2011).</li><li>Reay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full-Length+Dystrophin+Gene+Transfer+to+the+Mdx+Mouse+in+utero.">Full-Length Dystrophin Gene Transfer to the Mdx Mouse in utero.</a> Gene Therapy. 15 (7), 531-536 (2008).</li><li>Ahmed, S., Waddington, S., Boza-Mor&#225;n, M., Y&#225;&#241;ez-Mu&#241;oz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Efficiency+Transduction+of+Spinal+Cord+Motor+Neurons+by+Intrauterine+Delivery+of+Integration-Deficient+Lentiviral+Vectors.">High-Efficiency Transduction of Spinal Cord Motor Neurons by Intrauterine Delivery of Integration-Deficient Lentiviral Vectors.</a> Journal of Controlled Release. 273, 99-107 (2018).</li><li>Haddad, M., Donsante, A., Zerfas, P., Kaler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+Brain-Directed+AAV+Gene+Therapy+Results+in+Rapid,+Robust,+and+Persistent+Transduction+of+Mouse+Choroid+Plexus+Epithelia.">Fetal Brain-Directed AAV Gene Therapy Results in Rapid, Robust, and Persistent Transduction of Mouse Choroid Plexus Epithelia.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 2, 101 (2013).</li><li>Nijagal, A., Le, T., Wegorzewska, M., MacKenzie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+in+utero+transplantation.">A mouse model of in utero transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2303 (2011).</li><li>Davey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jaagsiekte+Sheep+Retrovirus+Pseudotyped+Lentiviral+Vector-Mediated+Gene+Transfer+to+Fetal+Ovine+Lung.">Jaagsiekte Sheep Retrovirus Pseudotyped Lentiviral Vector-Mediated Gene Transfer to Fetal Ovine Lung.</a> Gene Therapy. 19 (2), 201-209 (2011).</li></ol>

이식 utero에서 임신 초기에 진단 될 수 있는 많은 선 천 성 질환에 대 한 잠재적인 치료 이다. IUT는 murine 모델 연구를 태아 환경을 탐구 하 또는 다른 치료와 함께 실험을 수 있습니다. 주입 되 고 타겟이 되 고에 따라 정 맥 또는 양수 내 utero에 이식 원하는 공간으로는 injectant의 안정적인 납품을 제공할 수 있습니다.
특정 장기를 대상으로, 그것은 주입 기술 뿐 아?...

태아 검사 및 진단의 최근 발전 태아 선 천 성 장애는 적절 한 산 후 치료 옵션 없고 중요 한 병 적 상태와 사망률의 수에 대 한 치료의 가능성을 빛을 가져왔다. 특히, utero에서 조 혈 줄기 세포 이식 (IUHCT) 및 유전자 치료/게놈 편집가지고 혈액, 면역, 그리고 유전자 치료 선 천 성 태아의 정상적인 발달 속성의 활용 가능성 출생 후 HSC 이식 및 유전자 치료/게놈 편집1,2를 할 수 있는 것 보다 더 효율적으로 장애. 특히, 태아의 작은 크기로 인해 기증자 셀 또는 바이러스 성 벡터 복용량 수 극대화 할 받는 사람의 무게 당. 또한, 태아의 면역학 미 숙 기증자 HSCs 없이 myeloablative 및 면역 조절 주사 하 산 후 이식 프로토콜에 필요한 수 있습니다. 마찬가지로, 치료 transgene 또는 게놈 편집 기술 바이러스 성 벡터는 transgene 제품 또는 바이러스 성 벡터에 대 한 제한 면역 응답 없이 주입 수 있습니다. 마지막으로, 접근성 및 태아 줄기/뿌리 세포의 증식 특성 줄 보다 효율적인 변환 대상 조상 세포의 게놈 편집 (homology 감독 수리)의 자전거 필요로 하는 특정 모드의 가능성 효율적으로 발생 하는 셀. Murine 모델 줄기 세포 생물학과 면역학 큰 전 임상 동물 모델에서 실험 이전에 중요 한 질문을 해결 하는 통찰력과 저렴 한 수단으로 제공 하 고, 따라서, IUHCT 및 utero에서 기본 모델 역임 했다 유전자 치료 탐험된1,2,3되었습니다.
많은 변수는 IUHCT 및 utero에서 유전자 치료/게놈 편집 murine 크고 동물 모델에서의 성공에 중요 한 역할을, 비록 주요 변수 HSCs 또는 바이러스 성 벡터의 납품의 방법입니다. 태아 간, IUHCT의 때에 조 혈 기관에에서 발생 하는 1 차 통과 효과 함께 기증자 HSCs의 큰 복용량의 납품 engraftment 마우스 및 큰 동물 모델4 macrochimeric 수준의 달성에 도움이 될 표시 되었습니다. ,5. 이것 달성을 통해 통해 개 모델에서 내 심장 주입 및 기증자 세포를 통해 마우스 모델에서 vitelline 정 맥 주사 했다. 주입의 경로 또한 개발 하는 동안 다른 장기의 조상 세포를 타겟팅에서 근본적인 역할을 하고있다. 예를 들어 한 정 맥 주사 를 통해 vitelline 정 맥 효율적으로 transduce cardiomyocytes와 늦은 임신 주입6,7다음 hepatocytes에 표시 되었습니다. 또는, 바이러스 성 벡터의 양수 내 주사 주입8시간에 배아 접는/개발에 따라 물리적으로 노출 되는 장기를 대상으로 수 있습니다. 이 최고의 활용 운동의 정상적인 태아 "호흡", 바이러스 성 벡터에는 양수를 호흡기 노출 임신에서 양수 내 주입을 통해 호흡기 상피의 대상으로 궁 행 유체9. IUT, 정 맥을 통해 vitelline 정 맥의 이러한 두 가지 모드와 양수 내, 우리의 실험실에서 여러 과거와 지속적인 실험에 대 한 기초가 되었습니다. 이 프로토콜에서 우리가 자세히 murine 모델에 정 맥 및 양수 내 IUT를 수행 하기 위한 방법을 설명 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:827px;" width="826">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Gloves</td>
			<td style="width:168px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:147px;">2D73DP65</td>
			<td style="width:231px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/ teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/o teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Curved scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14075-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heavy Scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14002-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Needle Driver</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">12005-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vicryl 2.0</td>
			<td style="width:168px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">JB945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transfer Pipette</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">GSI135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">MDS202000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">50 mL Conical tube</td>
			<td style="width:168px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:147px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Tape</td>
			<td style="width:168px;">3M</td>
			<td style="width:147px;">1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Eye lubricant</td>
			<td style="width:168px;">Major LubriFresh</td>
			<td style="width:147px;">0904-6488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:168px;">K&#38;H</td>
			<td style="width:147px;">3060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:168px;">Leica</td>
			<td style="width:147px;">MZ16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Injector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">HI01PK01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Glass Capillary tubes</td>
			<td style="width:168px;">Kimble</td>
			<td style="width:147px;">71900-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vertical Micropipette Puller</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Microelectrode Beveler</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">IM-300 Pneumatic Microinjector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">IM-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Insulin Syringe&#160;</td>
			<td style="width:168px;">BD&#160;</td>
			<td style="width:147px;">305935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Filter</td>
			<td style="width:168px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:147px;">25-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Compac5 Anesthesia Machine</td>
			<td style="width:168px;">VetEquip Compac5</td>
			<td style="width:147px;">901812&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:168px;">Piramal Critical Care</td>
			<td style="width:147px;">NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">N2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">NI 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">O2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">OX 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ad-GFP viral vector</td>
			<td style="width:168px;">Penn Vector Core</td>
			<td style="width:147px;">H5&#39;.040.CMV.eGFP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model

이식 (IUT) utero에서 의 치료는 임신 초기에 줄기 세포, 바이러스 성 벡터, 또는 다른 물질을 소개 하는 데 사용할 수 있는 독특하고 다양 한 모드입니다. 치료 목적 IUT 뒤에 근거는 태아, 태아 면역학 미 숙, 접근성 및 태아 줄기 또는 조상 세포 및 질병을 치료 하는 잠재력의 증식 특성 또는 증상의 작은 크기에 따라 이전에 출생. 필요 없이 낫 세포 질병 등 선 천 성 혈액 질환을 치료 하는 한 IUT 태아, 조 혈 줄기 세포 (HSC) 을 통해 전달의 이러한 정상적인 발달 속성의 활용 myeloablative 또는 출생 후 HSC 이식에 필요한 면역 조절. 마찬가지로, 개발 하는 동안 여러 장기에 조상 세포의 접근성은 잠재적으로 줄기/시 조 세포 유전자 치료 또는 게놈 편집과 바이러스 성 벡터의 IUT 다음의 보다 효율적인 타겟팅에 대 한 수 있습니다. 또한, IUT 포함 하 여, 정상적인 발달 과정을 연구 하는 데 사용 수 있지만, 면 역학적 관용의 개발에 국한 되지 않습니다. Murine 모델 잠재력과 전 임상 큰 동물 연구와 최종 임상 응용 프로그램 전에 IUT의 한계를 이해 하는 데 귀중 한 하 고 저렴 한 방법을 제공 합니다. 여기, 우리는 정 맥 및 양수 내 경로 통해 murine 태아의 한 IUT 수행을 위한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 명료 하 게 하는 필요 조건 및 조 혈 줄기 세포 이식 utero에서 , 관용 유도, 그리고 유전자 치료 utero에서 뒤에 메커니즘을 성공적으로 사용 되었습니다.

생존과 engraftment IUHCT 실험에 대 한 성공의 중요 한 조치는. 실험의 특정 끝점에 따라 태아는 IUHCT를 받은 수 있습니다 분석 prenatally 제왕 절 개 또는 postnatally. 평균, 정 맥 주사 후 생존 율은 75-100%에서 범위. 양수 내 주사 후 생존 율은 약 85-100%에서 정 맥 주사 보다 더 공정한 경향이 있습니다.
우리 실험실에서이 기술에 숙달을 ?...

Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

정 맥 및 양수 내 Utero Murine 모델에 이식

우리는 murine 모델에 주입의 정 맥 및 양수 내 노선을 통해는 utero에 이식 (IUT)을 수행 하기 위한 프로토콜을 설명 합니다. 독특한 면역 관용 태아 환경에 셀, 바이러스 성 벡터, 및 다른 물질을 소개 하는 것이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances ...

이 방법은 배아학, 유전자 치료 및 줄기 세포 이식에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 장점은 뮤린 태아에 대한 다른 실험 요법의 효과를 분석 할 수 있다는 것입니다. 이 절차를 보여주는 것은 우리의 실험실에 있는 닥터 니콜라스 안, 바바라 쿤스, 의사 및 연구 동료가 될 것입니다.시술을 시작하기 전에, 수술 바늘 팁안팎으로 멸균 PBS의 5~10마이크로리터를 2~3회 떨어뜨려 가능한 잔해를 치웁힙시다. 다음으로 적절한 실험용 부피 및 농도에 대한 관심의 시약으로 바늘을 채웁니다. 그리고 마이크로 인젝터에서 모드 버튼을 세 번 눌러 주사 교정 화면으로 진행합니다.10밀리초 또는 100밀리초의 간격을 추가하여 주입 시간을 조정하고 모드 버튼을 두 번 더 누릅니다. 밸런스 버튼을 누르고 발 페달을 한 번 누릅니다. 그런 다음 페달을 다시 누르고 푸시당 바늘에서 비워지는 용액의 양을 평가합니다.마이크로 인젝터가 적절한 실험 용 부피에 보정되면 주사를 위한 올바른 수준으로 바늘을 채웁니다. 모든 바늘이 청소되었을 때, 임신 2 ~ 6 개월 된 여성 마우스의 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인합니다. 복부를 면도하고 젖꼭지를 손상시키지 않도록 주의하고 동물을 척추 위치에있는 가열 패드로 옮기.동물의 눈에 연고를 바르고 테이프로 가열 패드에 팔다리를 고정하십시오. 그리고 노출된 피부를 소독합니다. 그런 다음 0.25%의 부피바카인 100마이크로리터와 같은 국소 마취제를 피하한다.다음으로, 하부 테두리가 내성에 1센티미터 이상 이될 정도로 1~2센티미터의 피부 절개를 하고, 근막의 중간선을 식별하여 주변 상복부 혈관을 손상시키지 않도록 주의한다. Adson 집게를 사용하여 기본 장기 나 태아를 잡지 않고 근막을 꼬집어 가위로 조직을 엽니다. 일단 안전하게 복강 내에서, 피부 절개의 길이에 매실 절개를 확장하고, 목팁 어플리케이터를 사용하여 내장을 복부의 상부로 이동하여 중력 자궁을 노출시합니다.절개를 통해 자궁을 추출하여 모든 태아가 계산되도록 오른쪽 과 왼쪽 난소를 주의 깊게 식별합니다. 왼쪽 자궁을 복부에 다시 넣고 오른쪽 자궁만 노출되도록 하여 주입되지 않은 태아를 따뜻하게 유지합니다. 그리고 엄지손가락과 엄지손가락 사이의 가장 측면 양수 낭을 부드럽게 잡습니다.해부 현미경을 동물 위에 배치하고 필요에 따라 태아의 더 나은 시각화를 위해 초점과 조명을 조정합니다. 정맥 주사의 경우 자궁을 회전하여 비텔린이 헛되도록 주입할 바늘 팁과 평행하게 주입됩니다. 그리고 자궁 벽을 관통하기 위해 5도 각도로 자궁에 바늘을 놓습니다.자궁 벽과 양수 낭 사이의 끝을 가진 끝은 팁을 비텔린 헛된 꼭대기에 직접 놓고 거의 접선 각도로 바늘을 헛된 각도로 놓고 베벨이 혈관으로 들어갈 때까지 헛된 위로 바늘을 미끄러뜨립니다. 바늘이 용기의 뒷벽을 관통하지 않도록 각도가 낮게 유지되는 것이 필수적입니다. 바늘 끝에서 혈액 의 반점이 관찰되면, 용기에 관심물질의 전체 볼륨을 주입하는 발 페달을 누릅니다.내 양수 주사의 경우 혈관이없는 위치가 발견 될 때까지 양수 주머니를 회전하십시오. 자궁 벽에 수직으로 바늘을 가리키고 자궁 노른자 낭을 통해 바늘을 관통하고 양수 낭을 복용하는 것은 태아 조직을 관통하지 않습니다. 그런 다음 원하는 물질의 적절한 볼륨을 주입합니다.주사의 두 종류 후, 원하는 볼륨이 전달되면 주사 사이트에서 바늘을 철회. 그리고 오른쪽 자궁 뿔의 모든 태아가 주입 될 때까지 다음 태아로 진행합니다. 그런 다음 오른쪽 자궁 경적을 복부에 반환합니다.그리고 복부에서 왼쪽 자궁 경적을 제거합니다. 왼쪽 뿔의 모든 태아가 자궁 또는 장 volvulus를 피하기 위해 주의하여 자궁 전체를 복부에 돌려 보내게 됩니다. 일회용 이송 파이펫을 사용하여 멸균 PBS의 약 2 밀리리터를 복부에 분배하여 무분별한 손실을 대체하십시오.그리고 4-0 폴리글락틴 910 봉합사를 사용하여 한 연속 층에서 근막과 복부를 닫습니다. 그런 다음 마우스를 열램프 아래의 깨끗한 케이지로 옮기고, 완전한 재조정이 있을 때까지 모니터링합니다. 본 훈련 실험에서 연수생에 의해 자궁 이식을 받은 태아의 간은 주입 후 24시간 낮은 형광 수준을 보였으며, 이는 이식된 GFP 세포의 더 낮은 이식으로 인해 숙련된 강사가 주입한 간보다 더 낮은 형광 수준을 보였다.GFP 양성 기증자 세포에 대한 유동 세포 측정 분석은 또한 형광 현미경 검사의 밑에 관찰된 형광의 더 낮은 수준과 상관관계. 양수와 접촉하여 세포를 트랜스듀스하기 위해 양수 내 경로를 통해 전달되는 바이러스 벡터의 능력. 임신일 12.5 태아에서 GFP 트랜스진을 운반하는 아데노 바이러스의 자궁 주입 후 48시간 후 상피 세포의 전이에 의해 예시된다.일단 이 기술은 임신 한 마우스 당 15-25 분 안에 완료 할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마우스 태아에게 다른 치료법을 안전하고 효과적으로 전달하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야 합니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

연구

발생학

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

활성 ERK의 공간 및 시간 분석<em&gt; C. 엘레</em&gt; 생식선

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

쥐 배아 중족골의 문화 : 연골 골화의 생리 학적 모델

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

C. 선 충 에서 신경 세포를 세균 세포를 재 설 정할 RNAi 및 열 충격 유도 하는 전사 인자 식의 적용

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

트랜스와 초파리 노치의 바인딩을 평가를 집계 분석 셀-Ligands 및 Cis에 의해 그것의 억제-Ligands

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

CRISPR 중재 손실 함수 분석 소 뇌과 립 세포를 사용 하 여 Utero에서 Electroporation 기반 유전자 이동

Brain malformation is often caused by genetic mutations. Deciphering the mutations in patient-derived tissues has identified potential causative factors ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

노드 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법, 면역 형광 산 전체를 사용 하 여 Gastrulating 마우스 배아에서 Notochordal 접시를 시각화

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Assessment of Ultrastructural Neuroplasticity Parameters After In Utero Transduction of the Developing Mouse Brain and Spinal Cord

평가의 개발 쥐의 뇌와 척수의 Utero 변환 후 Ultrastructural Neuroplasticity 매개 변수

The present study combines in utero transduction with transmission electron microscopy (TEM) aiming at a precise morphometrical analysis of ...