Name: intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model
Uploaded: 2018-10-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

Deneysel protokol kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Çocuk Hastanesi Philadelphia tarafından kabul edildi.
1. enjeksiyon pipetler oluşturulması
<ol><li>Bir dikey micropipette çektirmenin kullanarak, bir 100 µL microcapillary pipet (Şekil 1A - 1 C) çek. Konik sonuna > 1 cm uzunluğunda olması micropipette çektirme kalibre edin. Not: Başlangıçta, çektirme ayarlarını optimum bir uzunluk için ayarlanmalıdır. Daha yük...

<ol>
	<li>Loukogeorgakis, S., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+stem+cell+and+gene+therapy:+current+status+and+future+perspectives.">In utero stem cell and gene therapy: current status and future perspectives.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 24, 237-245 (2014).</li><li>Vrecenak, J., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+hematopoietic+cell+transplantation:+recent+progress+and+the+potential+for+clinical+application.">In utero hematopoietic cell transplantation: recent progress and the potential for clinical application.</a> Cytotherapy. 15, 525-535 (2013).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+murine+hemoglobinopathies+by+prenatal+tolerance+induction+and+postnatal+nonmyeloablative+allogeneic+BM+transplants.">Correction of murine hemoglobinopathies by prenatal tolerance induction and postnatal nonmyeloablative allogeneic BM transplants.</a> Blood. 126 (10), 1245-1254 (2015).</li><li>Vrecenak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Long-Term+Mixed+Chimerism+Achieved+in+a+Canine+Model+of+Allogeneic+in+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">Stable Long-Term Mixed Chimerism Achieved in a Canine Model of Allogeneic in utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Blood. 124 (12), 1987-1995 (2014).</li><li>Peranteau, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD26+Inhibition+Enhances+Allogeneic+Donor-Cell+Homing+and+Engraftment+after+in+utero+Hematopoietic-Cell+Transplantation.">CD26 Inhibition Enhances Allogeneic Donor-Cell Homing and Engraftment after in utero Hematopoietic-Cell Transplantation.</a> Blood. 108 (13), 4268-4274 (2006).</li><li>Waddington, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+gene+transfer+of+human+factor+IX+to+fetal+mice+can+induce+postnatal+tolerance+of+the+exogenous+clotting+factor.">In utero gene transfer of human factor IX to fetal mice can induce postnatal tolerance of the exogenous clotting factor.</a> Blood. 101 (4), 1359-1366 (2003).</li><li>Stitelman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Stage+Determines+Efficiency+of+Gene+Transfer+to+Muscle+Satellite+Cells+by+in+utero+Delivery+of+Adeno-Associated+Virus+Vector+Serotype+2/9.">Developmental Stage Determines Efficiency of Gene Transfer to Muscle Satellite Cells by in utero Delivery of Adeno-Associated Virus Vector Serotype 2/9.</a> Molecular Therapy - Methods &amp; Clinical Development. 1, 14040 (2014).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+to+Ocular+Stem+Cells+by+Early+Gestational+Intraamniotic+Injection+of+Lentiviral+Vector.">Gene Transfer to Ocular Stem Cells by Early Gestational Intraamniotic Injection of Lentiviral Vector.</a> Molecular Therapy. 15 (3), 579-587 (2007).</li><li>Boelig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Intravenous+Route+of+Injection+Optimizes+Engraftment+and+Survival+in+the+Murine+Model+of+In+utero+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">The Intravenous Route of Injection Optimizes Engraftment and Survival in the Murine Model of In utero Hematopoietic Cell Transplantation.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 22 (6), 991-999 (2016).</li><li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-amniotic+Transient+Transduction+of+the+Periderm+with+a+Viral+Vector+Encoding+TGF&#946;3+Prevents+Cleft+Palate+in+Tgf&#946;3-/-.+Mouse+Embryos.">Intra-amniotic Transient Transduction of the Periderm with a Viral Vector Encoding TGF&#946;3 Prevents Cleft Palate in Tgf&#946;3-/-. Mouse Embryos.</a> Molecular Therapy. 1, 8-17 (2013).</li><li>Roybal, J., Endo, M., Radu, A., Zoltick, P., Flake, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+gestational+gene+transfer+of+IL-10+by+systemic+administration+of+lentiviral+vector+can+prevent+arthritis+in+a+murine+model.">Early gestational gene transfer of IL-10 by systemic administration of lentiviral vector can prevent arthritis in a murine model.</a> Gene Therapy. 18 (7), 719-726 (2011).</li><li>Reay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full-Length+Dystrophin+Gene+Transfer+to+the+Mdx+Mouse+in+utero.">Full-Length Dystrophin Gene Transfer to the Mdx Mouse in utero.</a> Gene Therapy. 15 (7), 531-536 (2008).</li><li>Ahmed, S., Waddington, S., Boza-Mor&#225;n, M., Y&#225;&#241;ez-Mu&#241;oz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Efficiency+Transduction+of+Spinal+Cord+Motor+Neurons+by+Intrauterine+Delivery+of+Integration-Deficient+Lentiviral+Vectors.">High-Efficiency Transduction of Spinal Cord Motor Neurons by Intrauterine Delivery of Integration-Deficient Lentiviral Vectors.</a> Journal of Controlled Release. 273, 99-107 (2018).</li><li>Haddad, M., Donsante, A., Zerfas, P., Kaler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+Brain-Directed+AAV+Gene+Therapy+Results+in+Rapid,+Robust,+and+Persistent+Transduction+of+Mouse+Choroid+Plexus+Epithelia.">Fetal Brain-Directed AAV Gene Therapy Results in Rapid, Robust, and Persistent Transduction of Mouse Choroid Plexus Epithelia.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 2, 101 (2013).</li><li>Nijagal, A., Le, T., Wegorzewska, M., MacKenzie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+in+utero+transplantation.">A mouse model of in utero transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2303 (2011).</li><li>Davey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jaagsiekte+Sheep+Retrovirus+Pseudotyped+Lentiviral+Vector-Mediated+Gene+Transfer+to+Fetal+Ovine+Lung.">Jaagsiekte Sheep Retrovirus Pseudotyped Lentiviral Vector-Mediated Gene Transfer to Fetal Ovine Lung.</a> Gene Therapy. 19 (2), 201-209 (2011).</li></ol>

Rahim içinde nakli erken gebelik tanısı birçok konjenital bozukluklar için potansiyel bir tedavi yöntemidir. Fare modeli IUT için araştırmacılar fetal çevre keşfetmek için veya farklı terapileri ile deneme için izin verir. Ne enjekte edilir ve ne hedef bağlı olarak, intravenöz veya içi amniyotik rahim içinde nakli bir injectant bir güvenilir teslim istenen alanı içine sağlayabilir.
Belirli organ hedef olarak gösterirken, fetus yanı sıra enjeksiyon t...

Son gelişmeler antenatal tarama ve tanı fetus yeterli Doğum sonrası tedavi seçenekleri var ve önemli morbidite ve mortalite neden konjenital bozukluklar bir dizi tedavi imkanı ışık için getirdim. Özellikle, rahim içinde hematopoetik kök hücre transplantasyonu (IUHCT) ve gen terapisi/genom düzenleme hematolojik, bağışıklık ve genetik konjenital tedavisinde fetusun normal gelişim özelliklerinin avantajlarından yararlanın potansiyeline sahip daha verimli postnatal HSC nakli ve tedavi/Genom Gen düzenleme1,2yapabilirsiniz daha bozuklukları. Özellikle, fetus küçük boyutu nedeniyle, donör hücre veya viral vektör doz alıcı kilo maksimize. Ayrıca, fetusun immünolojik gelişmemişlik donör myeloablative ve immünsupresif Klima enjekte edilir HSCs Doğum sonrası organ nakli Protokoller'de gereklidir sağlar. Benzer şekilde, bir terapötik transgene ya da genom düzenleme teknoloji taşıyan viral vektörler transgene ürün ya da viral vektör bir sınırlayıcı bağışıklık yanıtı olmadan enjekte edilebilir. Son olarak, erişilebilirlik ve cenin kök/progenitor hücre proliferatif doğa Bisiklete binme gerektiren belirli modları genom düzenleme (Homoloji yönetmen onarım) yanı sıra hedef progenitör hücrelerin daha verimli bir iletim olasılığını göze verimli bir şekilde gerçekleşmesi için hücreleri. Fare modeli kök hücre biyolojisi ve İmmünoloji önceden klinik büyük hayvan modellerinde deneme önce önemli soruları ele için anlayışlı ve uygun fiyatlı bir araç olarak hizmet vermektedir ve bu nedenle, hangi IUHCT ve rahimde birincil model olarak hizmet vermiştir gen terapisi keşfedilmeyi1,2,3olmuştur.
Her ne kadar fazla değişken IUHCT ve rahim içinde gen terapisi/genom fare ve büyük hayvan modellerinde düzenleme başarısında önemli bir rol oynamaktadır, bir anahtar değişken teslim HSCs veya viral vektör yöntemidir. Donör HSCs fetal karaciğer, hematopoetik organ IUHCT, zaman içinde meydana gelen bir ilk geçiş etkisi ile yüksek dozda teslimini engraftment fare ve büyük hayvan modeller4 macrochimeric düzeyleri ulaşmada vesile olmak için gösterilen ,5. Bu elde ile donör hücreleri ile fare modeli vitelline ven ve üzerinden intra kardiyak iğne köpek modelindeki bir enjeksiyon yapıldı. Rota enjeksiyon de progenitör hücrelerin farklı organların gelişimi sırasında hedefleme temel bir rol oynar. Örneğin, bir İntravenöz enjeksiyon yolu ile vitelline ven verimli bir şekilde cardiomyocytes ve geç gebelik enjeksiyon6,7takip tetkikine transduce gösterilmiştir. Alternatif olarak, fiziksel olarak sunulan organları enjeksiyon8sırasında embriyonik katlanır/geliştirme üzerinde temel hedefleme viral vektörler içi amniyotik bir enjeksiyon sağlar. Bu en iyi solunum epitel ile gebelikte hangi amniyon içinde viral vektör için solunum yolu sunar "nefes" normal cenin hareketleri yararlanmak için geç içi amniyotik bir enjeksiyon hedefleyerek örneklenir sıvı9. Bu iki işletim modundan birinde IUT, intravenöz üzerinden vitelline ven ve içi amniyotik, birden çok geçmiş ve devam eden bizim laboratuvar deneylerinde temeli olmuştur. Bu protokol için biz Intravenöz ve içi amniyotik IUT fare modelinde gerçekleştirmek için yöntem ayrıntılı olarak tarif.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:827px;" width="826">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Gloves</td>
			<td style="width:168px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:147px;">2D73DP65</td>
			<td style="width:231px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/ teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Adson Forceps w/o teeth</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Curved scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14075-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heavy Scissors</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">14002-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Needle Driver</td>
			<td style="width:168px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:147px;">12005-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vicryl 2.0</td>
			<td style="width:168px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">JB945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transfer Pipette</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">GSI135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td style="width:168px;">Medline</td>
			<td style="width:147px;">MDS202000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">50 mL Conical tube</td>
			<td style="width:168px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:147px;">14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Tape</td>
			<td style="width:168px;">3M</td>
			<td style="width:147px;">1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Eye lubricant</td>
			<td style="width:168px;">Major LubriFresh</td>
			<td style="width:147px;">0904-6488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:168px;">K&#38;H</td>
			<td style="width:147px;">3060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:168px;">Leica</td>
			<td style="width:147px;">MZ16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Injector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">HI01PK01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Glass Capillary tubes</td>
			<td style="width:168px;">Kimble</td>
			<td style="width:147px;">71900-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vertical Micropipette Puller</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Microelectrode Beveler</td>
			<td style="width:168px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:147px;">BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">IM-300 Pneumatic Microinjector</td>
			<td style="width:168px;">Narishige</td>
			<td style="width:147px;">IM-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Insulin Syringe&#160;</td>
			<td style="width:168px;">BD&#160;</td>
			<td style="width:147px;">305935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Filter</td>
			<td style="width:168px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:147px;">25-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Compac5 Anesthesia Machine</td>
			<td style="width:168px;">VetEquip Compac5</td>
			<td style="width:147px;">901812&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:168px;">Piramal Critical Care</td>
			<td style="width:147px;">NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">N2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">NI 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">O2 gas</td>
			<td style="width:168px;">Airgas</td>
			<td style="width:147px;">OX 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ad-GFP viral vector</td>
			<td style="width:168px;">Penn Vector Core</td>
			<td style="width:147px;">H5&#39;.040.CMV.eGFP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravenous and intra-amniotic in utero transplantation in the murine model

Rahim içinde nakli (IUT) kök hücreler, viral vektörler veya herhangi bir diğer maddeler erken gebelik tanıtmak için kullanılan terapi, benzersiz ve çok yönlü bir modudur. IUT arkasındaki mantığı için tedavi amacıyla fetus, fetal immünolojik gelişmemişlik, erişilebilirlik ve cenin kök veya progenitör hücre ve bir hastalığı tedavi etmek için potansiyel proliferatif doğa veya belirtilerin başlangıcı küçük boyutuna göre Doğum öncesinde. Fetus, hematopoetik kök hücre (HSC) yolu ile gösterimi bu normal gelişim özelliklerini yararlanarak bir IUT gerekli olmadan orak hücre hastalığı gibi konjenital hematolojik bozuklukları tedavi potansiyeline sahiptir myeloablative veya immünsüpresif Klima postnatal HSC nakli için gerekli. Benzer şekilde, birden çok organlarda progenitör hücrelerin erişilebilirlik geliştirme sırasında potansiyel bir daha verimli bir gen tedavisi veya genom düzenleme viral vektörler IUT takip kök/progenitor hücre hedefleme için sağlar. Ayrıca, IUT olabilir de dahil olmak üzere normal gelişim süreçleri çalışırdım, ama immünolojik tolerans gelişimi için sınırlı değildir. Fare modeli potansiyeli ve önceden klinik büyük hayvan çalışmaları ve nihai bir klinik uygulama öncesinde IUT sınırlamaları anlamak için değerli ve uygun bir yol sağlar. Burada, intravenöz ve içi amniyotik yolları fare fetus bir IUT gerçekleştirmek için bir protokol açıklayın. Bu iletişim kuralı gerekli koşullar ve mekanizmaları rahim içinde hematopoetik kök hücre transplantasyonu, hoşgörü indüksiyon ve rahim içinde gen terapisi arkasında aydınlatmak için başarılı bir şekilde kullanılmıştır.

Hayatta kalma ve engraftment IUHCT deneyler için başarının önemli önlemlerdir. Bir deney bağlı olarak belirli bitiş noktaları, bir IUHCT alınan fetüsler prenatally sezeryan veya postnatally analiz. Ortalama olarak, İntravenöz enjeksiyonlar sonra sağkalım oranları % 75-100 aralığı. Sağkalım oranları içi amniyotik enjeksiyonları sonra yaklaşık % 85-100 İntravenöz enjeksiyon daha iyi Fuar eğilimindedir.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1...

Watch this Scientific Journal Video about Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model at JoVE.com

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

İntravenöz ve içi amniyotik rahim içinde nakli fare modeli

Biz bir rahim içinde nakli (IUT) intravenöz ve içi amniyotik yolları enjeksiyon fare modeli gerçekleştirmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı hücreleri, viral vektörel çizimler ve diğer maddelerin benzersiz bağışıklık dayanıklı fetal ortama tanıtmak için kullanılabilir.

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances ...

Bu yöntem embriyoloji, gen terapisi ve kök hücre naklinde anahtar soruların cevaplatına yardımcı olabilir. Bu tekniğin bir avantajı, farklı deneysel tedavilerin Mindik fetusları üzerindeki etkilerinin analizini sağlamasıdır. Bu prosedürü gösteren doktorlar Nicholas Ahn ve Barbara Coons, doktorlar ve araştırma araştırmacıları bizim laboratuvarda olacaktır.İşleme başlamadan önce, olası enkazdan temizlemek için cerrahi iğne ucunun içine ve dışına 5 ila 10 mikrolitre steril PBS bırakın. Daha sonra uygun deneysel hacim ve konsantrasyon ilgi reaktif ile iğne doldurun. Enjeksiyon kalibrasyon ekranına ilerlemek için mikro enjektördeki mod düğmesine üç kez basın.Enjeksiyon süresini ayarlamak için 10 veya 100 milisaniyearalık ekleyin ve mod düğmesine iki kez daha basın. Denge düğmesine basın ve ayak pedalına bir kez basın. Daha sonra tekrar pedala basın ve itme başına iğneden hangi çözelti hacminin boşaltılmış olduğunu değerlendirin.Mikro enjektör uygun deneysel hacime kalibre edildiğinde, iğneyi enjeksiyon için doğru seviyeye doldurun. Tüm iğneler temizlendiğinde, 2-6 aylık dişi farenin parmak ucuna yanıt verilmediğinden onaylayın. Karın tıraş, meme zarar vermemeye özen, ve supine pozisyonda bir ısıtma yastığı için hayvan transfer.Merhemi hayvanın gözlerine uygulayın ve bantla ısıtma yastığına uzuvları sabitleyin. Ve maruz kalan deriyi dezenfekte edin. Sonra 0.25% Bupivacaine deri altı 100 mikrolitre gibi lokal anestezikler enjekte.Daha sonra, alt sınır introitus bir santimetre daha yakın olduğu gibi bir ila iki santimetre lik deri kesi yapmak, ve fasya orta hat belirlemek, çevreleyen epigastrik damarları zarar vermemeye özen. Adson forseps kullanarak, altta yatan organ veya fetusherhangi kapma olmadan fasya çimdik ve makas ile doku açın. Bir kez güvenli bir şekilde karın boşluğu içinde, deri kesi uzunluğuna fasyal kesi uzatmak, ve gravid rahim ortaya çıkarmak için karın üst kısmına bağırsak taşımak için pamuk ucu aplikatörleri kullanın.Tüm fetusların sayıldığından emin olmak için sağ ve sol yumurtalıkları dikkatlice belirleyerek kesiden rahimi ayıklayın. Enjekte edilmeyen fetusları sıcak tutmak için sol rahmi karın içine yerleştirin, böylece sadece sağ rahim maruz kalır. Ve yavaşça olmayan baskın el başparmak ve işaret parmakları arasında en lateral amniyotik kese kavramak.Diseksiyon mikroskobu hayvanın üzerine yerleştirin ve gerektiğinde fetüsün daha iyi bir görüntülenmesi için odağı ve Aydınlatmayı ayarlayın. Bir intravenöz enjeksiyon için vitelline boşuna, enjekte edilecek iğne ucu naparalel olacak şekilde rahim döndürmek için. Ve rahim duvarını delmek için iğneyi beş derecelik açıyla rahime koy.Rahim duvarı ve amniyotik kese arasındaki ucu ile, doğrudan vitelline boşuna üstüne ve neredeyse teğet bir açıyla ucu yerleştirin, eğim damar içine ilerler kadar boşuna üzerinde iğne kayma. İğnenin geminin arka duvarına girmemesi için açının düşük kalması zorunludur. İğne ucunda bir kan lekesi gözlendiğinde, ayak pedalına basarak ilgi çekici maddenin tam hacmini damara enjekte edin.Bir intra amniyotik enjeksiyon için, damarlardan yoksun bir yer bulunana kadar amniyotik keseyi döndürün. İğneyi rahim duvarına dik olarak işaretle ve iğneyi rahim sarısı kesesine batırın ve amniyotik kese herhangi bir fetal dokuya nüfuz etmemeye özen gösterebilir. Daha sonra istenilen malzemenin uygun hacmini enjekte edin.Her iki enjeksiyon türünden sonra, istenilen hacim teslim edildikten sonra iğneyi enjeksiyon alanından çekin. Ve sağ rahim boynuzunun tüm fetüsleri enjekte edilene kadar bir sonraki fetüse geç. Sonra karın içine sağ rahim boynuzu dönün.Ve sol rahim boynuzu karın dışına çıkarın. Sol boynuz tüm fetuslar enjekte edildiğinde karın tüm rahim dönmek, bir rahim veya bağırsak volvulus önlemek için özen. Herhangi bir duyarsız kayıpları değiştirmek için, karın içine steril PBS yaklaşık iki mililitre dağıtmak için tek kullanımlık bir transfer pipet kullanın.Ve tek bir sürekli tabaka halinde fasya ve karın kapatmak için 4-0 poliglactin 910 sütür kullanın. Daha sonra fareyi tam yedek alana kadar izleyerek bir ısı lambası altında temiz bir kafese aktarın. Bu eğitim deneyinde, bir kursiyer tarafından rahim içi transplantasyon yapılan fetusların karaciğerleri enjeksiyondan 24 saat sonra, nakledilen GFP hücrelerinin daha düşük bir engraftment nedeniyle, deneyimli bir eğitmen tarafından enjekte edilen karaciğerler daha düşük floresan düzeyleri gösterdi.GFP pozitif donör hücreleri için akış sitometrik analizi de floresan mikroskopi altında gözlenen floresan alt düzeyi ile ilişkili. Amniyotik sıvı ile temas eden hücrelere intra-amniyotik yol üzerinden teslim viral vektöryeteneği. GFP transgeni gestasyonel gün 12.5 fetustaşıyan Adeno virüsünün rahim enjeksiyonundan 48 saat sonra epitel hücrelerinin transdüksiyonu ile örneklenir.Bu teknik hakim bir kez hamile fare başına 15-25 dakika içinde tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra fare fetuslarına nasıl güvenli ve etkili bir şekilde farklı tedaviler sunabileceğinizi iyi anlamalısınız.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Aktif ERK Mekansal ve Zamansal Analizi<em&gt; C. elegans</em&gt; Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Fare Embriyonik metatarsallara Kültürü: endokondral Kemikleşmenin bir Fizyolojik Modeli

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Vasküler Endotelyal Kök Hücrelerin Damar Oluşumunu Görselleştirmek İçin Yeni Bir Göğüs Göğsü Transplantasyon Tekniği

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Uygulama için yeniden programlamak Germ hücreleri için C. elegans nöronlarda RNAi ve transkripsiyon faktörü ifade ısı şok bağlı

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Hücre toplama Trans Drosophila çentikle bağlama değerlendirmek için deneyleri-ligandlar ve onun inhibisyon CIStarafından-ligandlar

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

CRISPR-mediated Loss of Function Analysis in Cerebellar Granule Cells Using In Utero Electroporation-based Gene Transfer

CRISPR-aracılı kaybı serebellar granül işlev analizinin gen transferi Elektroporasyon tabanlı rahim içinde kullanarak hücreleri

Brain malformation is often caused by genetic mutations. Deciphering the mutations in patient-derived tissues has identified potential causative factors ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...