Name: nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart
Uploaded: 2018-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

يشكر المؤلفون الدكتور جيم روس للتعليقات الانتقادية وقراءة المخطوطة. وأيد هذا العمل منح من الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية (31430059، 31701272، 31730061، 81470399، و 31521062)، وآسيا استرا زينيكا، والطب المبتكرة الأسواق الناشئة والتنمية في وقت مبكر.

استخدام كافة الإجراءات الحيوان الزرد بروتوكول أقرته لجنة الاستخدام في جامعة بكين، والذي الكامل معتمدة من قبل جمعية التقييم والاعتماد لرعاية الحيوانات المختبرية ورعاية الحيوان المؤسسية.
1-إعداد حل تريكيني
<ol><li>لإعداد حل الأسهم تريكيني، إضافة مسحوق ميثانيسولفوناتي 3-أمين?...

الزرد قادر تماما على تجديد مجموعة متنوعة من الأجهزة بما في ذلك في قلب الكبار5. بينما المعدلة وراثيا والوراثية أساليب متطورة لدراسة وظائف الجينات في أجنة الزرد، تزال تواجه المحققين مع المهمة الشاقة المتمثلة في توليد الآليلات متحولة الشرطي في الزرد45،<sup class="x...

احتشاء عضلة القلب قد أصبح يشكل تهديدا رئيسيا لصحة، المؤدية إلى عبئا اقتصاديا هائلا حول العالم1. فشل قلب الثدييات الكبار لإنعاش وتجديد cardiomyocytes المفقودة على نطاق عيانية بعد الإصابة، مما يؤدي إلى تشكيل ندبة الأنسجة وقصور القلب اللاحقة. خلافا للثدييات، الزرد قادرة على إنعاش القلب، أساسا من خلال انتشار احتشاء عضلة القلب قوية بعد أنواع مختلفة من إصابات القلب، جعله كائن نموذج مثالي للتحقيق في الآليات الجزيئية لإنعاش القلب 2،3،4،،من56،،من78. فك رموز الآليات الذاتية الكامنة وراء تجديد القلب الزرد مجالاً مثيرة للبحث في البحث عن رواية الاستراتيجيات العلاجية لتحسين قلب الإنسان التجديد9.
تتوفر أساليب التلاعب بالجينات في الزرد. وتتألف هذه من مورفولينوس (MO) التي تستخدم أيضا على نطاق واسع في الفرخ، الضفادع والثدييات إلى جانب في الزرد10،11،،من1213. وقد مو كفاءة ضربة قاضية للتعبير الجيني المستهدف في فنلندا الزرد الكبار والمخ، وشبكية العين14،،من1516،17،،من1819. الأحماض النووية مؤمنة (LNA) هو آخر اليغنوكليوتيد الاصطناعية المستخدمة نهدم التعبير الجيني الذاتية ليس فقط في الأجنة الزرد ولكن أيضا في أجهزة الحيوان البالغين20،،من2122، 23 , 24-ومع ذلك، لا يزال انعدام أساليب فقدان لوظيفة فعالة لقلوب الكبار عقبة في دراسة الآليات الجزيئية لتجديد الجهاز. في مثبطات الحاضر، جزيء صغير أو التعبير المحورة وراثيا من طفرات السلبية المهيمنة تستخدم أساسا لمنع وظيفة الجينات معينة أو مسار لدراسة وظيفتها في الزرد الكبار قلب التجديد25،26 ،27. ومع ذلك، ليس كل الجينات أو مسارات إشارات قابلة للتطبيق لهذه الأساليب.
الكشف التدخل الصغيرة (سيرناس) تستخدم على نطاق واسع لتحليل الخسارة من الدالة في خلايا الثدييات والأجنة من طراز الكائنات الحية، فضلا عن أجهزة الكبار لنماذج الدراسات الإكلينيكية في الحيوان28،،من2930 , 31 , 32-سيرناس قد استخدمت فعلياً لإسكات الجينات في أورام33،،من3435 وفي cardiomyocytes36،،من3738،39 ،40 عبر مختلف نظم إيصالها. في الآونة الأخيرة، قمنا بتطوير كفاءة نانوحبيبات مغلفة siRNA إسكات الجينات في قلب الكبار تجديد استخدام عدة جسيمات نانوية مختلفة41،،من4243، توفير أداة جديدة الدراسات الفنية للجينات في الأجهزة الزرد الكبار. تستند جهودنا السابقة الدراسات42،،من4143، هنا نقدم بروتوكول بسيطة، وعملية، ولكن قوية لإسكات الجينات في قلب الكبار الزرد تجديد استخدام f-بامام-شماعة-R9 siRNA ديندريميرس. Aldh1a2 (ألدهيد نازعة 1، أفراد الأسرة A2) الجينات upregulated بعد الزرد ابيكس الاستئصال والاجتثاث من Aldh1a2 حظر تجديد القلب44. ونحن هنا نلقي جين aldh1a2 كمثال لاختبار كفاءة ضربة قاضية الجيني بحقن siRNA مغلفة نانوحبيبات وساطة. يتضمن هذا البروتوكول إجراء لاستئصال القلب الزرد والتوليف الكيميائي لجسيمات نانوية وأسلوب تسليم على جسيمات نانوية siRNA مغلفة في قلب الزرد الكبار.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:765px;" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">tricaine</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">E10521</td>
			<td style="width:167px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:180px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:193px;">S8AP0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sharp forcep</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">14098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">iridectomy scissors</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">elbow tweezers</td>
			<td style="width:180px;">Suzhou Liuliu</td>
			<td style="width:193px;">SE05Cr</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">&#945;,&#969;-dipyridyl disulfido polyethylene glycol(Py-PEG-Py)</td>
			<td style="width:180px;">Biomatrik (Jiaxing) Inc.</td>
			<td style="width:193px;">5239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">core of G4.0 polyamidoamine (PAMAM)</td>
			<td style="width:180px;">Andrews ChemServices</td>
			<td style="width:193px;">AuCS-297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">vacuum drying equipment</td>
			<td style="width:180px;">Yiheng</td>
			<td style="width:193px;">DZF-6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP)</td>
			<td style="width:180px;">Alfar Aesar</td>
			<td style="width:193px;">51805-45-9</td>
			<td>Causes severe skin burns and eye damage. Causes serious eye damage.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">freeze dryer</td>
			<td style="width:180px;">Martin Christ</td>
			<td style="width:193px;">Alpha 2-4 Ldplus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR spectrometer</td>
			<td style="width:180px;">Bruker</td>
			<td style="width:193px;">AV400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:225px;">Deuterium oxide(D2O)</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">174611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR sample tube</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td>WG-1000-7-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 kDa MWCO ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sea salts</td>
			<td style="width:180px;">Instant Ocean&#174;</td>
			<td style="width:193px;">SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart

الثدييات لديها قدرة محدودة للغاية لتجديد القلب بعد احتشاء عضلة القلب. من ناحية أخرى، تجدد الزرد الكبار قلبها بعد بتر ابيكس أو كريوينجوري، مما يجعل من الكائن حي نموذجا هاما لدراسة تجديد القلب. ومع ذلك، قيدت عدم وجود أساليب فقدان لوظيفة لأجهزة الكبار ثاقبة الآليات الأساسية لإنعاش القلب. تدخل الجيش الملكي النيبالي عبر مختلف نظم إيصالها أداة قوية لإسكات الجينات في خلايا الثدييات والكائنات نموذج. وقد أبلغنا سابقا أن جسيمات نانوية siRNA مغلفة بنجاح إدخال الخلايا وينتج ضربة قاضية خاصة بالجينات ملحوظا في قلب الكبار الزرد تجديد. نقدم هنا، بروتوكول بسيطة وسريعة وفعالة لإيصال ديندريمير بوساطة siRNA وإسكات الجينات في قلب الكبار الزرد تجديد. هذا الأسلوب يوفر نهج بديل لتحديد وظائف الجينات في الأجهزة الكبار في الزرد، ويمكن تمديدها إلى نموذج الكائنات الحية الأخرى، وكذلك.

لتحديد كفاءة إنجاز siRNA dendrimer بوساطة، نحن مستأصل قمة البطين القلب الزرد، ثم حقن حوالي 10 ميليلتر من ديندريمير فقط (مجموعة صورية) أو Cy5 siRNA فقط (مجموعة عارية) وبامام-شماعة-R9 مغلفة ديندريمير إينترابليورالي Cy5-siRNA (مجموعة Cy5-siRNA)، على التوالي (الشكل 2أ-ب). إش...

Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart

SiRNA نانوحبيبات بوساطة إسكات الجينات في قلب الزرد الكبار

فإنه يظل تحديا كبيرا لوضع الشرطي الجينات-خروج المغلوب أو فعالية الجينات-ضربة قاضية في الأجهزة الزرد الكبار. هنا نحن تقرير وضع بروتوكول للمنفذ siRNA نانوحبيبات بوساطة إسكات الجينات في قلب الزرد الكبار، مما يوفر طريقة فقدان لوظيفة جديدة لدراسة الأجهزة الكبار في الزرد والكائنات الأخرى في النموذج.

Mammals have a very limited capacity to regenerate the heart after myocardial infarction. On the other hand, the adult zebrafish regenerates its heart ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

التجديد الكلى في اسماك الزرد الكبار قبل جنتاميسين المستحثة الإصابات

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

على نطاق واسع اسماك الزرد الجنينية القلب تشريح لتحليل الترانسكربتي

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

العزلة وثقافة Neurospheres المستمدة الدماغ الكبار الزرد

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

عزل وتوصيف الخلايا واحدة من اسماك الزرد الأجنة

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

بيوسنسينغ موتور الخلايا العصبية الغشاء المحتملة في الأجنة الزرد الحية

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Culture of Adult Transgenic Zebrafish Retinal Explants for Live-cell Imaging by Multiphoton Microscopy

ثقافة الكبار المعدلة وراثيا الزرد الشبكية إإكسبلنتس التصوير خلية حية من قبل Multiphoton المجهر

An endogenous regeneration program is initiated by M&#252;ller glia in the adult zebrafish (Danio rerio) retina following neuronal damage and death. The ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

بالعزلة وثقافة الخلايا Epicardial الأولية المستمدة من عينات من قلب الكبار والأجنة البشرية

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...