Name: nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart
Uploaded: 2018-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

लेखकों गंभीर टिप्पणी के लिए डॉ आईसी ब्रूस धंयवाद और पांडुलिपि पढ़ने । यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (३१४३००५९, ३१७०१२७२, ३१७३००६१, ८१४७०३९९, और ३१५२१०६२), AstraZeneca एशिया, और उभरते बाजार अभिनव चिकित्सा और जल्दी विकास से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।

सभी पशु प्रक्रियाओं एक zebrafish संस्थागत पशु देखभाल और पेकिंग विश्वविद्यालय है, जो पूरी तरह से मूल्यांकन और प्रयोगशाला पशु देखभाल के प्रत्यायन के लिए संघ द्वारा मांयता प्राप्त है पर उपयोग समिति द्वारा अन?...

zebrafish वयस्क दिल5सहित अंगों की एक किस्म को फिर से पैदा करने में पूरी तरह से सक्षम है । जबकि ट्रांसजेनिक और आनुवंशिक तरीके अच्छी तरह से zebrafish के भ्रूण में जीन कार्यों का अध्ययन करने के लिए विकसित कर र?...

रोधगलन एक प्रमुख स्वास्थ्य खतरा बन गया है, दुनिया भर में एक जबरदस्त आर्थिक बोझ के लिए अग्रणी1। वयस्क स्तनधारी दिल को पुनर्जीवित करने और चोट के बाद एक macroscopic पैमाने पर खो cardiomyocytes की भरपाई करने में विफल रहता है, निशान ऊतकों और बाद में दिल की विफलता के गठन के लिए अग्रणी । स्तनधारियों के विपरीत, zebrafish दिल पुनर्जनन के लिए सक्षम है, मुख्य रूप से मजबूत रोधगलन के माध्यम से दिल की चोट के विभिन्न प्रकार के बाद, यह हृदय उत्थान के आणविक तंत्र की जांच के लिए एक आदर्श मॉडल जीव बना रही है 2,3,4,5,6,7,8. अंतर्जात zebrafish हृदय पुनर्जनन अंतर्निहित तंत्र को समझने के उपंयास चिकित्सीय रणनीतियों के लिए खोज में अनुसंधान के एक रोमांचक क्षेत्र के लिए मानव हृदय9उत्थान में सुधार है ।
आनुवंशिक हेरफेर तरीकों zebrafish में उपलब्ध हैं । ये morpholinos (मो) कि भी व्यापक रूप से मेंढक, चूजा, और zebrafish में10,11,12,13के अलावा स्तनधारियों में इस्तेमाल किया जाता है से मिलकर बनता है । मो वयस्क zebrafish फिन, मस्तिष्क, और रेटिना14,15,16,17,18,19में लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति की कुशल पछाड़ना है । बंद-न्यूक्लिक एसिड (LNA) एक और कृत्रिम oligonucleotide न केवल zebrafish भ्रूण में अंतर्जात जीन अभिव्यक्ति नीचे दस्तक करने के लिए इस्तेमाल किया है, लेकिन यह भी वयस्क पशु अंगों में20,21,22, 23 , 24. हालांकि, ' वयस्कों के दिलों के लिए प्रभावी हानि के समारोह तरीकों की कमी अंग पुनर्जनन के आणविक तंत्र का अध्ययन करने में एक बाधा बनी हुई है । वर्तमान में, छोटे अणु अवरोधकों या प्रमुख नकारात्मक म्यूटेंट के ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति मुख्य रूप से एक निश्चित जीन या मार्ग के समारोह को ब्लॉक करने के लिए उपयोग किया जाता है वयस्क zebrafish दिल पुनर्जनन25,26 में अपने समारोह का अध्ययन ,27. हालांकि, नहीं सभी जीन या संकेत रास्ते इन तरीकों के लिए लागू होते हैं ।
छोटे हस्तक्षेप RNAs (siRNAs) व्यापक रूप से स्तनधारी कोशिकाओं और मॉडल जीवों के भ्रूण में हानि-समारोह विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है, साथ ही पशु मॉडल में नैदानिक अध्ययन के लिए वयस्क अंगों28,29,30 , 31 , ३२. siRNAs प्रभावीढंग से ट्यूमर३३,३४,३५ और cardiomyocytes३६,३७,३८,३९ में जीन मौन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ,४० विभिंन वितरण प्रणालियों के माध्यम से । हाल ही में, हम कुशल सिरना-encapsulated nanoparticle जीन मुंह बंद करने-regenerating वयस्क दिल में कई अलग नैनोकणों४१,४२,४३का उपयोग कर विकसित, के लिए एक उपंयास उपकरण प्रदान वयस्क zebrafish अंगों में जीन के कार्यात्मक अध्ययन । हमारे पिछले अध्ययन४१,४२,४३के आधार पर, यहां हम सिरना जीन के लिए एक सरल, व्यावहारिक, अभी तक शक्तिशाली प्रोटोकॉल वर्तमान-मुंह बंद करने वयस्क zebrafish दिल में एफ पमम-खूंटी-R9 का उपयोग कर dendrimers । Aldh1a2 (एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज 1 परिवार, सदस्य A2) जीन zebrafish एपेक्स लकीर और Aldh1a2 के पृथक के बाद अनियमित था हृदय पुनर्जनन४४अवरुद्ध । यहां हम एक उदाहरण के रूप में जीन पछाड़ना दक्षता nanoparticle-encapsulated सिरना इंजेक्शन द्वारा मध्यस्थता परीक्षण के रूप में aldh1a2 जीन ले । इस प्रोटोकॉल zebrafish दिल लकीर, नैनोकणों के रासायनिक संश्लेषण के लिए एक प्रक्रिया है, और सिरना पर एक प्रसव विधि-encapsulated नैनोकणों वयस्क zebrafish दिल में शामिल हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:765px;" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">tricaine</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">E10521</td>
			<td style="width:167px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:180px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:193px;">S8AP0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sharp forcep</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">14098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">iridectomy scissors</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">elbow tweezers</td>
			<td style="width:180px;">Suzhou Liuliu</td>
			<td style="width:193px;">SE05Cr</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">&#945;,&#969;-dipyridyl disulfido polyethylene glycol(Py-PEG-Py)</td>
			<td style="width:180px;">Biomatrik (Jiaxing) Inc.</td>
			<td style="width:193px;">5239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">core of G4.0 polyamidoamine (PAMAM)</td>
			<td style="width:180px;">Andrews ChemServices</td>
			<td style="width:193px;">AuCS-297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">vacuum drying equipment</td>
			<td style="width:180px;">Yiheng</td>
			<td style="width:193px;">DZF-6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP)</td>
			<td style="width:180px;">Alfar Aesar</td>
			<td style="width:193px;">51805-45-9</td>
			<td>Causes severe skin burns and eye damage. Causes serious eye damage.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">freeze dryer</td>
			<td style="width:180px;">Martin Christ</td>
			<td style="width:193px;">Alpha 2-4 Ldplus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR spectrometer</td>
			<td style="width:180px;">Bruker</td>
			<td style="width:193px;">AV400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:225px;">Deuterium oxide(D2O)</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">174611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR sample tube</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td>WG-1000-7-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 kDa MWCO ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sea salts</td>
			<td style="width:180px;">Instant Ocean&#174;</td>
			<td style="width:193px;">SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart

स्तनधारी हृदय को रोधगलन के बाद पुनर्जीवित करने की बहुत सीमित क्षमता होती है । दूसरी ओर, वयस्क zebrafish शीर्ष लकीर या cryoinjury के बाद अपने दिल पुनर्जीवित, यह दिल पुनर्जनन अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल जीव बना । हालांकि, वयस्क अंगों के लिए हानि के समारोह तरीकों की कमी के कारण हृदय पुनर्जनन तंत्र में अंतर्दृष्टि सीमित है । विभिन्न वितरण प्रणालियों के माध्यम से आरएनए हस्तक्षेप स्तनधारी कोशिकाओं और मॉडल जीवों में मुंह बंद करने जीन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है । हमने पहले बताया है कि सिरना-encapsulated नैनोकणों सफलतापूर्वक regenerating वयस्क zebrafish दिल में एक उल्लेखनीय जीन विशिष्ट पछाड़ना में कोशिकाओं और परिणाम दर्ज करें । यहां, हम dendrimer के लिए एक सरल, तेजी से, और कुशल प्रोटोकॉल प्रस्तुत वयस्क zebrafish दिल में मध्यस्थता सिरना वितरण और जीन मुंह बंद करने । इस विधि zebrafish में वयस्क अंगों में जीन कार्यों का निर्धारण करने के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण प्रदान करता है और अंय मॉडल जीवों के लिए भी बढ़ाया जा सकता है ।

dendrimer-मध्यस्थता सिरना वितरण की दक्षता का निर्धारण करने के लिए, हम zebrafish के दिल निलय के शीर्ष, तो dendrimer के बारे में 10 µ l इंजेक्शन केवल (नकली समूह), Cy5-सिरना केवल (नग्न समूह), या एफ पमम-खूंटी-R9 dendrimer-समझाया resect ...

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Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart

वयस्क Zebrafish दिल में Nanoparticle-मध्यस्थता सिरना जीन-मुंह बंद करने

वयस्क zebrafish अंगों में सशर्त जीन-नॉकआउट या प्रभावी जीन-पछाड़ना विकसित करना एक प्रमुख चुनौती बनी हुई है. यहाँ हम वयस्क zebrafish दिल में nanoparticle मध्यस्थता सिरना जीन-मुंह बंद करने प्रदर्शन के लिए एक प्रोटोकॉल की रिपोर्ट, इस प्रकार zebrafish और अन्य मॉडल जीवों में वयस्क अंगों के अध्ययन के लिए एक नया नुकसान की समारोह विधि प्रदान करते हैं.

Mammals have a very limited capacity to regenerate the heart after myocardial infarction. On the other hand, the adult zebrafish regenerates its heart ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

Gentamicin प्रेरित चोट से वयस्क zebrafish में किडनी पुनर्जनन

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Transcriptional विश्लेषण के लिए बड़े पैमाने पर Zebrafish भ्रूण दिल विच्छेदन

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

इवांस नीले रंग की डाई के साथ zebrafish लार्वा कंकाल की मांसपेशी वफ़ादारी का विश्लेषण

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

अलगाव और वयस्क Zebrafish मस्तिष्क व्युत्पन्न Neurospheres की संस्कृति

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

अलगाव और zebrafish भ्रूण से एकल कक्ष की विशेषता

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

जीवित जेबराफिश भ्रूण में बायोसेंसिंग मोटर न्यूरॉन झिल्ली संभावित

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Culture of Adult Transgenic Zebrafish Retinal Explants for Live-cell Imaging by Multiphoton Microscopy

Multiphoton माइक्रोस्कोपी द्वारा लाइव सेल इमेजिंग के लिए वयस्क ट्रांसजेनिक Zebrafish रेटिना explants की संस्कृति

An endogenous regeneration program is initiated by M&#252;ller glia in the adult zebrafish (Danio rerio) retina following neuronal damage and death. The ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

मानव वयस्क और भ्रूण दिल नमूनों से व्युत्पंन प्राथमिक Epicardial कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

पूरे माउंट-वयस्क कान त्वचा के लिए फोकल माइक्रोस्कोप: एक मॉडल प्रणाली न्यूरो संवहनी Morphogenesis और प्रतिरक्षा कोशिका वितरण शाखाओं का अध्ययन करने के लिए