Name: nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart
Uploaded: 2018-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

저자는 중요 한 의견에 대 한 박사 IC 브루스를 감사 하 고 원고를 읽고. 이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (31430059, 31701272, 31730061, 81470399, 및 31521062), 아 스 트 라 아시아 및 신흥 시장 혁신적인 의학 및 초기 발달에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

모든 동물 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 평가 및 실험 동물 관리 인증 협회 인증는 북경 대학에서 승인한 zebrafish 프로토콜 사용.
1입니다. Tricaine 솔루션의 준비
<ol><li>Tricaine 재고 솔루션을 준비 하려면 97.9 mL 증 류 물, 400mg 에틸 3 aminobenzoate methanesulfonate 분말을 추가 하 고 2.1 mL 1 M 트리 스 (pH 9.5) ~ 7 pH 조정의 추가. 4 ° c.에 재고 솔루션 저장</li>
	<li>Tricaine 작업 솔루션...

Zebrafish는 완전히 성인 심장5를 포함 하는 기관의 다양 한 재생 가능 하다. 유전자 변형 및 유전자 메서드는 zebrafish의 배아에서 유전자 기능을 연구 개발, 조사 zebrafish45,46에서 생성 하는 조건부 돌연변이 체 대립 유전자의 발굴 작업으로 아직도 직면 된다. 따라서, 유전자 변형 지배적인 부정적인 돌연변이 또는 작은 분자 억제제 자주 ?...

심근 경색은 세계1주위 엄청난 경제적 부담으로 이어지는 주요 건강 위협이 되었다. 성인 포유류 심장 재생성 하 고 거시적인 규모 손실된 cardiomyocytes 흉터 조직 및 후속 심장 마비의 형성으로 이어지는 부상 후 보충 되지 않습니다. 포유류, 달리는 제 브라는 주로 심장 상해, 조사 심장 재생 의 분자 메커니즘에 대 한 이상적인 모델 유기 체 그것을 만들기의 다른 유형 후에 강력한 심근 확산을 통해 심장 재생 2,3,,45,6,,78. 해독 생 메커니즘 기본 zebrafish 심장 재생 인간의 심장 재생9를 개선 하기 위해 새로운 치료 전략에 대 한 검색에 있는 연구의 흥미로운 지역입니다.
유전자 조작 방법 zebrafish에 사용할 수 있습니다. 개구리, 병아리, 그리고 zebrafish10,11,,1213포유류 외에 널리 사용 되는 morpholinos (MO) 이들에 의하여 이루어져 있다. 모 성인 zebrafish 지 느 러 미, 뇌, 그리고 망막14,15,16,17,,1819에 대상 유전자 발현의 효율적인 최저가 있다. 잠겨-핵 산 (LNA)는 내 생 유전자 표현의 zebrafish 태아 뿐만 아니라 성인 동물 장기20,,2122, 에 노크를 사용 하는 다른 인공 oligonucleotide 23 , 그러나 24. 성인 마음에 대 한 효과적인 손실의 기능 방법의 부족 장기 중생의 분자 메커니즘을 공부에 장애를 유지 하는. 현재, 작은 분자 억제제 또는 지배적인 부정적인 돌연변이의 유전자 변형 식에서 주로 사용 특정 유전자 또는 성인 zebrafish 심장 재생25,26에에서 그것의 기능을 공부 하는 통로의 기능을 차단 하 ,27. 그러나, 모든 유전자 또는 신호 통로 이러한 방법에 대 한 적용.
작은 방해 RNAs (siRNAs)는 널리 사용 포유류 세포에 모형 유기 체 뿐만 아니라 성인 장기의 배아 손실의 기능 분석에 대 한 동물에서 전 임상 연구 모델28,,2930 , 31 , 32. siRNAs 종양33,,3435 그리고 cardiomyocytes36,,3738,39 유전자 침묵을 효과적으로 사용 되었습니다 ,40 다른 배달 시스템을 통해. 최근, 우리 개발 효율적인 siRNA로 캡슐화 된 나노 유전자-침묵 여러 다른 나노 입자41,,4243를 사용 하 여 재생 성인 심장에 대 한 새로운 도구를 제공 하 성인 zebrafish 장기에서 유전자의 기능 연구입니다. 우리의 이전 연구41,,4243을 바탕으로, 여기에 우리가 현재 siRNA 유전자 f PAMAM 페그-r 9을 사용 하 여 재생 성인 zebrafish 마음에 입을 위한 단순, 실용적인, 하지만 강력한 프로토콜 dendrimers입니다. Aldh1a2 (알데하이드 효소 1, 가족 A2) 유전자 upregulated zebrafish 정점 절제 후 되었고 Aldh1a2 의 제거 차단 심장 재생44. 여기 우리가 나노 캡슐화 siRNA 주입 하 여 중재 유전자 때 려 눕 힘 효율성을 테스트 하는 예제로 aldh1a2 유전자를 가져가 라. 이 프로토콜은 성인 zebrafish 마음에 zebrafish 심장 절제, 나노 입자의 화학 합성 siRNA 캡슐화 된 나노 입자에 전달 방법에 대 한 절차를 포함합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:765px;" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">tricaine</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">E10521</td>
			<td style="width:167px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:180px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:193px;">S8AP0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sharp forcep</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">14098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">iridectomy scissors</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">elbow tweezers</td>
			<td style="width:180px;">Suzhou Liuliu</td>
			<td style="width:193px;">SE05Cr</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">&#945;,&#969;-dipyridyl disulfido polyethylene glycol(Py-PEG-Py)</td>
			<td style="width:180px;">Biomatrik (Jiaxing) Inc.</td>
			<td style="width:193px;">5239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">core of G4.0 polyamidoamine (PAMAM)</td>
			<td style="width:180px;">Andrews ChemServices</td>
			<td style="width:193px;">AuCS-297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">vacuum drying equipment</td>
			<td style="width:180px;">Yiheng</td>
			<td style="width:193px;">DZF-6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP)</td>
			<td style="width:180px;">Alfar Aesar</td>
			<td style="width:193px;">51805-45-9</td>
			<td>Causes severe skin burns and eye damage. Causes serious eye damage.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">freeze dryer</td>
			<td style="width:180px;">Martin Christ</td>
			<td style="width:193px;">Alpha 2-4 Ldplus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR spectrometer</td>
			<td style="width:180px;">Bruker</td>
			<td style="width:193px;">AV400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:225px;">Deuterium oxide(D2O)</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">174611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR sample tube</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td>WG-1000-7-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 kDa MWCO ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sea salts</td>
			<td style="width:180px;">Instant Ocean&#174;</td>
			<td style="width:193px;">SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart

포유류 심근 경색 후 심 혼을 회생 하는 매우 제한 된 용량을가지고. 다른 한편으로, 성인 zebrafish 정점 절제 또는 cryoinjury, 그것에 게 심장 재생 연구에 대 한 중요 한 모형 유기 체를 만드는 후 그것의 심 혼을 재생성 합니다. 그러나, 성인 기관에 대 한 손실의 기능 방법의 부족은 심장 재생을 기본 메커니즘에 대 한 통찰력을 제한 했다. 다른 배달 시스템을 통해 RNA 간섭 포유류 세포 및 모형 유기 체에서 유전자 침묵 시키기를 위한 강력한 도구입니다. 우리 이전 siRNA 캡슐화 된 나노 성공적으로 셀 입력 및 재생 성인 zebrafish 마음에 놀라운 유전자 특정 최저에서 결과 보고 있다. 여기, 우리는 재생 성인 zebrafish 마음에 dendrimer 중재 siRNA 전달 및 유전자 침묵에 대 한 간단한 빠르고 효율적인 프로토콜을 제시. 이 메서드 zebrafish 성인 기관에서 유전자 기능을 결정 하기 위한 다른 접근을 제공 하 고 뿐만 아니라 다른 모델 유기 체에 확장 될 수 있습니다.

Dendrimer 중재 siRNA 전달의 효율성을 확인 하려면 우리 zebrafish 심장의 심 실의 꼭대기를 절제 후 약 10 µ L dendrimer만의 (모의 그룹), Cy5 siRNA만 (벌 거 벗은 그룹), 또는 f-PAMAM-말뚝-R9 dendrimer 캡슐을 주입 Cy5-siRNA (Cy5-siRNA 그룹) intrapleurally, 각각 (그림 2A-B). 형광 신호는 dendrimer 캡슐화 Cy5-siRNA 3, 24, 48 hpi (시간 후 주입)에 주사 하는 마음에서 감지 4...

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Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart

나노-중재 siRNA 유전자 입을 성인 Zebrafish 마음에

조건부 유전자 녹아웃 또는 효과적인 유전자-최저 성인 zebrafish 장기를 개발 하는 주요 도전 남아 있다. 여기 우리 보고 수행 나노 중재 siRNA 유전자-성인 zebrafish 마음에 입을, 성인 기관 zebrafish 및 다른 모형 유기 체 공부에 대 한 새로운 기능 손실 방법 제공에 대 한 프로토콜.

Mammals have a very limited capacity to regenerate the heart after myocardial infarction. On the other hand, the adult zebrafish regenerates its heart ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

겐타 마이신 유도 부상으로 성인 Zebrafish의에서 신장 재생

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

연구

발생학

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

전사 분석을위한 대규모 Zebrafish의 배아 심장의 해부

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

성인 Zebrafish의 뇌 유래 neurosphere를의 분리 및 문화

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

분리 및 Zebrafish의 배아에서 단일 세포의 특성

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Culture of Adult Transgenic Zebrafish Retinal Explants for Live-cell Imaging by Multiphoton Microscopy

다중 광자 현미경으로 라이브 셀 이미징을위한 성인 형질 전환 Zebrafish의 망막의 Explants의 문화

An endogenous regeneration program is initiated by M&#252;ller glia in the adult zebrafish (Danio rerio) retina following neuronal damage and death. The ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

분리와 인간 성인 그리고 태아 심장 표본에서 파생 하는 기본 Epicardial 세포의 문화

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...