Name: nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart
Uploaded: 2018-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

El yazması okuma ve yazar Dr. IC Bruce kritik Yorumlar için teşekkür ederim. Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31430059, 31701272, 31730061, 81470399 ve 31521062), AstraZeneca Asya ve gelişmekte olan piyasa yenilikçi ilaç ve erken gelişme gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan prosedürleri kullanılan kurumsal hayvan bakım ve değerlendirme ve akreditasyon laboratuvar hayvan bakım Derneği tarafından tamamen akredite Pekin Üniversitesi'nde kullanım Komitesi tarafından onaylanmış zebra balığı protokol.
1. Tricaine çözüm hazırlanması
<ol><li>Tricaine hisse senedi çözüm hazırlamak için 400 mg etil 3-aminobenzoate methanesulfonate toz 97,9 mL distile su ekleyin ve sonra Tris pH ~ 7 ayarlamak için 1 M (pH 9,5) 2.1 mL ekleyin. Hisse se...

Zebra balığı organları yetişkin kalp5de dahil olmak üzere çeşitli Yenileyici tam olarak kullanabilir. Transgenik ve genetik yöntemleri zebra balığı embriyo gen fonksiyonları eğitimi için iyi gelişmiş olmakla birlikte, araştırmacılar hala koşullu mutant gen zebra balığı45,46yılında üretme zor bir görev ile karşı karşıyayız. Böylece, transgenik baskın negatif mutantlar veya küçük molekül inhibitörleri ...

Miyokard infarktüsü büyük bir ekonomik yük1dünya çapında önde gelen bir büyük sağlık tehdidi haline gelmiştir. Yetişkin memeli kalp yeniden ve skar doku ve sonraki kalp yetmezliği oluşumu için önde gelen yaralanma sonra makroskopik ölçüde kayıp cardiomyocytes doldurmak başarısız olur. Memeliler, zebra balığı kalp yaralanması, yapım o kalp yenilenme moleküler mekanizmaları araştıran bir ideal model organizma farklı türde sonra sağlam miyokardiyal yayılması yoluyla öncelikle kalp yenilenme yeteneğine sahip olan 2,3,4,5,6,7,8. Endojen mekanizmaları deşifre alttaki zebra balığı kalp rejenerasyon araştırma insan kalbi rejenerasyon9geliştirmek yeni tedavi stratejileri için arama heyecan verici alanıdır.
Genetik manipülasyon yöntemleri zebra balığı içinde kullanılabilir. Bunlar kurbağalar, piliç ve yanı sıra memelilerde zebra balığı10,11,12,13de yaygın olarak kullanılan morpholinos (MO) oluşur. MO hedef gen ekspresyonu yetişkin zebra balığı yüzgeci, beyin ve retina14,15,16,17,18,19verimli nakavt vardır. Knock down endojen gen ekspresyonu sadece zebra balığı embriyo zamanda yetişkin hayvan organları20,21,22, için kullanılan başka bir yapay oligonükleotid kilitli nükleik asit (LNA) olduğunu 23 , 24. ancak, yetişkinlerin kalpler için etkili işlev kaybı yöntemleri eksikliği organ rejenerasyon moleküler mekanizmaları eğitim bir engel kalmıştı. Mevcut, küçük molekül inhibitörleri veya baskın negatif mutant transgenik ifade öncelikle işlevi belirli bir gen veya yetişkin zebra balığı kalp rejenerasyon25,26 işlevini çalışmaya yol engellemek için kullanılır ,27. Ancak, tüm genler veya sinyal yolları bu yöntemleri için geçerlidir.
Preklinik hayvan çalışmalarında modelleri için28,29,30 RNA'ların (çift) küçük müdahale memeli hücrelerinde ve embriyo model organizmalar, hem de yetişkin organ fonksiyon kaybı analizi için yaygın olarak kullanılmaktadır , 31 , 32. Çift etkili bir şekilde kullanıldığını genler tümörler33,34,35 ve cardiomyocytes36,37,38,39 susturmak için ,40 farklı dağıtım sistemleri ile. Son zamanlarda, biz birkaç farklı nano tanecikleri41,42,43, kullanarak Yenileyici yetişkin kalbinde verimli siRNA kapsüllenmiş nanopartikül gen-susturmak için bir roman araç sağlayan gelişmiş Yetişkin zebra balığı organlarında genlerin fonksiyonel çalışmalar. Bizim önceki çalışmalar41,42,43numaraya bağlı olarak, burada siRNA gen f-PAMAM-PEG-R9 kullanarak Yenileyici yetişkin zebra balığı kalbinde susturmak için basit, pratik ama güçlü iletişim kuralı mevcut dendrimers. Aldh1a2 (aldehid dehidrojenaz 1 Aile, üye A2) gen zebra balığı apex rezeksiyonundan sonra upregulated oldu ve Aldh1a2 ablasyon bloke kardiyak rejenerasyon44. Burada biz almak aldh1a2 gen nanopartikül kapsüllenmiş siRNA enjeksiyonu ile aracılı gen devirme verimliliği test etmek için bir örnek olarak. Bu iletişim kuralı, Yetişkin zebra balığı kalbine zebra balığı kalp rezeksiyon, nano tanecikleri kimyasal sentez ve nano tanecikleri siRNA kapsüllü bir teslim yöntemi için bir yordam içerir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:765px;" width="765">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">tricaine</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">E10521</td>
			<td style="width:167px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:180px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:193px;">S8AP0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sharp forcep</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">14098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">iridectomy scissors</td>
			<td style="width:180px;">WPI</td>
			<td style="width:193px;">501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">elbow tweezers</td>
			<td style="width:180px;">Suzhou Liuliu</td>
			<td style="width:193px;">SE05Cr</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">&#945;,&#969;-dipyridyl disulfido polyethylene glycol(Py-PEG-Py)</td>
			<td style="width:180px;">Biomatrik (Jiaxing) Inc.</td>
			<td style="width:193px;">5239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">core of G4.0 polyamidoamine (PAMAM)</td>
			<td style="width:180px;">Andrews ChemServices</td>
			<td style="width:193px;">AuCS-297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">vacuum drying equipment</td>
			<td style="width:180px;">Yiheng</td>
			<td style="width:193px;">DZF-6020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:225px;">tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP)</td>
			<td style="width:180px;">Alfar Aesar</td>
			<td style="width:193px;">51805-45-9</td>
			<td>Causes severe skin burns and eye damage. Causes serious eye damage.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">freeze dryer</td>
			<td style="width:180px;">Martin Christ</td>
			<td style="width:193px;">Alpha 2-4 Ldplus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR spectrometer</td>
			<td style="width:180px;">Bruker</td>
			<td style="width:193px;">AV400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:225px;">Deuterium oxide(D2O)</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">174611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">NMR sample tube</td>
			<td>J&#38;K</td>
			<td>WG-1000-7-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 kDa MWCO ultrafiltration tube</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:193px;">UFC900308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:225px;">sea salts</td>
			<td style="width:180px;">Instant Ocean&#174;</td>
			<td style="width:193px;">SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nanoparticle-mediated sirna gene-silencing in adult zebrafish heart

Memeliler kalp akut miyokard infarktüsü sonrası yeniden oluşturmak için çok sınırlı bir kapasiteye sahip. Öte yandan, Yetişkin zebra balığı kalbini apex rezeksiyon veya yapım o kalp rejenerasyon çalışması için bir önemli model organizma cryoinjury, sonra yeniden oluşturur. Ancak, işlev kaybı yöntemleri yetişkin organları için eksikliği kalp rejenerasyon yatan mekanizmaları anlayışlar kısıtladı. RNA müdahale farklı dağıtım sistemleri üzerinden genlerini memeli hücrelerinde ve model organizmalar susturulması için güçlü bir araçtır. Biz daha önce siRNA kapsüllenmiş nano tanecikleri başarıyla hücreleri girin ve olağanüstü gene özgü köşenize Yenileyici yetişkin zebra balığı kalbinde neden bildirdin. Burada, basit, hızlı ve etkin iletişim kuralı dendrimer-aracılı siRNA teslimi ve gen susturmak için yenileyici yetişkin zebra balığı kalbinde mevcut. Bu yöntem, zebra balığı yetişkin organların işlevlerinde gen belirlemek için alternatif bir yaklaşım sağlar ve diğer canlılar için de uzatılabilir.

Dendrimer-aracılı siRNA teslim verimliliğini belirlemek için zebra balığı kalp ventrikül apeks rezeke ardından yaklaşık 10 µL (sahte grubu), yalnızca dendrimer, Cy5-siRNA sadece (çıplak grubu) veya f-PAMAM-PEG-R9 dendrimer kapsüllenmiş enjekte Cy5-siRNA (Cy5-siRNA grup) intrapleurally, sırasıyla (Şekil 2A-B). Floresans sinyal tespit dendrimer kapsüllü Cy5-siRNA 3, 24 ve 48 HPI (saat sonrası enjeksiyon) enjekte kalplerin...

Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart at JoVE.com

Nanoparticle-mediated siRNA Gene-silencing in Adult Zebrafish Heart

Nanopartikül aracılı siRNA Gene susturmak yetişkin zebra balığı kalbinde

Koşullu gen-nakavt veya etkili gen-nakavt yetişkin zebra balığı organlarında geliştirmek için büyük bir meydan okuma olarak kalır. Burada performans gösteren nanopartikül aracılı siRNA gen-yetişkin zebra balığı kalbinde susturmak, böylece yetişkin organlarda zebra balığı ve diğer canlılar çalışmak için yeni bir işlev kaybı yöntemi sağlayan bir protokol raporu.

Mammals have a very limited capacity to regenerate the heart after myocardial infarction. On the other hand, the adult zebrafish regenerates its heart ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Transkripsiyonal Analiz Büyük ölçekli Zebra balığı Embriyonik Kalp Diseksiyon

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

Yetişkin balığı beyin türevli Neurospheres İzolasyon ve Kültürü

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

İzolasyon ve Zebra balığı Embriyolar gelen Tek Hücre Karakterizasyonu

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Canlı Zebra balığı Embriyolarında Biosense Motor Nöron Membranı Potansiyeli

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Culture of Adult Transgenic Zebrafish Retinal Explants for Live-cell Imaging by Multiphoton Microscopy

Multiphoton Mikroskopi Canlı hücre Görüntüleme için Yetişkin Transgenik Zebra balığı Retina Eksplantlarından Kültür

An endogenous regeneration program is initiated by M&#252;ller glia in the adult zebrafish (Danio rerio) retina following neuronal damage and death. The ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

Yalıtım ve kültür insan yetişkin ve Fetal kalp örnekler elde edilen birincil Epicardial hücre

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...