Name: cochlear implant surgery and electrically-evoked auditory brainstem response recordings in c57bl/6 mice
Uploaded: 2019-01-09T13:00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Yazarlar Pierre Stahl, Oticon tıp, Nice, Fransa, belgili tanımlık hayvan stimülasyon Platform ve tavsiye stimülasyon paradigmalar ve James B. Fallon ve Andrew K. akıllı biyonik Enstitüsü'nden, Melbourne, Avustralya, cerrahi tavsiye için verdiğiniz için teşekkür ederiz istiyorum . Bu eser İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (ERC transfer grant T.R.B. için) bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm yordamları, İsviçre Basel Üniversitesi, hayvan bakımı ve yönergelere göre yapılmıştır. Kanton Basel, İsviçre'nin veterinerlik ofisi tarafından lisanslı.
Not: 8-12 hafta (ağırlığı 20-30 g), yaşlı C57BL/6 yetişkin fareler bu çalışmada kullanılmıştır. Sol kulak deneysel kulak kullanılır. Sağ kulak içi hayvan bir denetimi olarak hizmet vermektedir ve cerrahi olarak değiştirilmiş değil.
1. ameliyat öncesi yordamları
<ol><li>
Ketamin/xylazine (80 mg/kg ketamin, 16 mg/kg xylazine, IP, 10 μL/g vücut ağırlığı enjekte ses) intra periton (IP) enjeksiyon yolu ile ameliyat öncesi hayvan 30 dk uyuşturan.
	<ol>
<li>Anestezi gerekli, bir pozitif pedal ve palpebral (ayak-tutam) refleks ve bıyık, hareketin ketamin (45 mg/kg, 10 μL/g vücut ağırlığı enjekte ı.p.) daha düşük bir doz tarafından karar gibi ilave. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine. Notlar: genel olarak, bu ajan ve doz rejimi ile her 45-60 dk bir enjeksiyon hayvan gerekir. Kapatma implante elektrot dizi çevresinde ilk kesi ortalama süre genellikle 1-1,5 saat var.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Normal solunum hızı ve ayak-çimdik refleksleri eksikliği ile işaretlenmiş hayvan tam sedasyon için kontrol edin. Anestezi tutması.</li>
	<li>Kapalı çevrim ısıtma yastığı ile 36.6 ° C'de hayvanın vücut ısısını korumak. Korneanın kurutma önlemek için göz merhem uygulamak. Bu aynı zamanda gürültü recoding için ekleyebilirsiniz hayvanın göz kırpma refleksi bastırır.</li>
	<li>Subkutan Enjeksiyon (SC) bupivacaine/lidokain ile yerel analjezik yönetmek (0.1 mg/mL bupivacaine ve 0.4 mg/mL lidokain, 0.1 mL s.c. yönetilen) cerrahi herhangi bir rahatsızlık en aza indirmek için amaçlanan kesi hattı boyunca. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine.</li>
	<li>Muscarinic antagonisti atropin yönetmek (atropinesulfate amino, 0.1 mg/mL, 20 μL yönetilen s.c., PBS içinde çözünmüş) ve boyun ve mukus salgısı azaltmak için nefes kolaylaştırmak için. Ajanlar ve doz rejimler kurumsal yönergeleri yerine.</li>
</ol>2. önceden sağır edici akustik İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (aABR)
Not: aABR işitme önce ve sonra sağır edici durumunu ölçmek için kullanılır. Test sol kulak ve ses yalıtımlı bir elektriksel olarak korumalı kulübesinde gerçekleştirilir. Test etmek ve daha sonra sağ elini kullanan biri için sol kulak implant öneririz. 13,14' te farelerde ABR hakkında daha fazla bilgi bulunabilir. Tucker Davis teknolojileri (TDT) donanım ve yazılım (BioSig) ABR kaydetmek için kullanılır ancak diğer sistemleri kullanılabilir.
<ol><li>Ipsilateral (sol) kulak ABR yanıtından yalıtmak için akustik köpük ile kontralateral (sağ) kulak engelleyin. 1 mL şırıngada köpük koymak ve köpük ile tüm belgili tanımlık kulak kanal karşılamak için fare sağ kulak kanalı içine enjekte etmek (0,1-0,2 mL köpük). Böylece köpük ta kulak kanalı içine alır şırınga mühürler yakından kulak için emin olun.</li>
	<li>Sol kulak 10 cm hoparlör yerleştirin. Not: Bu kurulum için hoparlör refefence15dakika içinde açıklandığı gibi bir PCB mikrofon kullanılarak kalibre.</li>
	<li>ABR elektrotlar % 70 etanol çözüm ile temizleyin. Derinin altında elektrotlar yer: aktif izdüşümü, (Ch1) başvuru (-) Ipsilateral kulak pinna ve zemin arka bacak (Şekil 1).</li>
	<li>Kafa-sahne ve ön amfi işitsel işlemci optik fiber bağlantı noktası üzerinden bağlayın.</li>
	<li>
Empedans aktif ve referans elektrot kontrol edin.
	<ol>
<li>Empedans 3 Ohm ise, onları yeniden düzenlemek ve yeniden ölçüm çekmek. Elektrotlar aynı empedans olduğunda en iyi kayıtları elde edilir. Ses geçirmez kabin kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tıklayın stimülasyon sunmak ve ABR ile karmaşık işitsel oluşum ve yazılım ücretsiz alan koşuldaki kaydedin. Yazılım tıklayın uyarıcı standartlaştırmak: 0.1 ms tek kanallı monophasic tıklama 21 Hz'de; sunulmaktadır Düzey 90 dB SPL 10 dB SPL 10 dB adımda azalır tıklatın; 10 ms pencere kayıt. 512 yanıt her dB düzeyinde toplam ortalama.</li>
	<li>2.000 Hz kurar filtre ve 300 Hz yüksek geçiren filtrenin çevrimdışı bir ısmarlama Matlab komut dosyası kullanarak kayıt gürültüyü azaltmak için geçerlidir.</li>
	<li>ABR eşik en düşük dB düzeyi ile tanınabilir ABR dalga yanıt (Şekil 2, Şekil 3) olarak belirleyin.</li>
</ol>3. cerrahi
Not: Kullanılan tipik aletler makas, neşter, düz veya eğimli ipuçları, bir doku Retraktörü araç, birkaç emme takozlar ve absorbe kağıt puan metalik forseps çifti içerir. Ameliyat sol kulaðýnýzda gerçekleştirilir.
<ol><li>Fare sağ yan koymak. Servikal vertebra üzerinde aşırı yüksek stres kaçının. Vücuttaki solunum yolları açık tutmak için düz tutmak için emin olun.</li>
	<li>Kürk bir makas ile sol kulağının arkasında kes (veya tıraş makinesi ile tıraş) cilt ortaya çıkarmak için. Cilt % 70 etanol çözüm ve betadin (povidone/iyot) ile sterilize.</li>
	<li>(16 x) mikroskobik büyütme altında neşteri ile 1-1,5 cm sonrası kulak çevresi kesi yapmak.</li>
	<li>Daha yüksek mikroskobik büyütme (25 x) geçin.</li>
	<li>Değişken kalınlığı olabilir, subkutan yağ katmanı yoluyla künt diseksiyon forseps ile gerçekleştirin. Not: Dış juguler ven bu alanı olarak dissekan dikkatli olun. Bu yapı aşırı kanama zarar verebilir.</li>
	<li>Tympanic bulla kapaklarini ortaya çıkarmak için boyun kas geri çek. Yüz sinir işitsel bulla tanımlaması yardım etmek için bir anahtar anatomik dönüm noktası kullanın. Yüz sinir boyun kas arka/dorsal kenarında tamamladı ve rostrally kulak kanalı pinna doğru çalışır. Yavaşça kendi kendine istinat Retraktörü aracı bulla (Şekil 4) erişimi kolaylaştırmak için belgili tanımlık kesme yerleştirin.</li>
	<li>Ridge bulla ve mastoid proses arasında açık görselleştirme izin vermek için bulla medio dorsal alan örten doku kaldırın.</li>
	<li>Bulla işlemek ve ridge (kemik bu tarafta daha ince) arka-çift tarafında bir delik (bullostomy) açmak için 30 G iğne yavaşça döndürün. Alternatif olarak, bir diş cerrahi matkap kullanmak. Not: Bu ve aşağıdaki adımları daha yüksek mikroskobik büyütme (40 x) ile tercih Eğer yapılabilir. Ayrıca, gerekirse mikroskop konumunu değiştirin. Orta kulak boşluğu cerrahi görünümünü en üst düzeye çıkarmak önemlidir.</li>
	<li>
Bullostomy küçük kemik parçaları orta kulak boşluğu ortaya çıkarmak için ince uçlu forseps kullanarak pinching tarafından genişletmek. Yuvarlak pencere niş kemik örten temizlenene kadar bullostomy dorsally mastoid süreci doğru genişletir. Stapedial arter, şahdamarını dalı yuvarlak pencere niş ventral çalışır.
	<ol>
<li>Aşırı kanama ölümcül olabilir gibi gemi zarar vermemeye dikkat et. Küçük Kenar taşmaları spongostan iç kulak boşluğunda küçük bir parça basarak durdurulabilir.</li>
		<li>Bullostomy üzengi, oval pencereye bağlı orta kulak kemik görselleştirmek için ön çift yöne doğru genişletir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Üzengi forseps ile oval pencere ortaya çıkarmak için kaldırın.</li>
</ol>4. yuvarlak pencere uygulaması ototoksik Aracısı
<ol><li>Yavaşça körelmenin 30 G iğne kullanarak yuvarlak pencere ve oval pencere membran sorgulamaktı. O perilymph ishal dışarı kontrol edin.</li>
	<li>Yavaş yavaş % 0.05 ağırlık/hacim paromisin oval pencereden PBS (pH 7.4 düzeltilmiş) içinde çözünmüş sıvı. Sıvı yuvarlak pencereden dışarı floş. Yuvarlak pencere üzerinde aynı işlemi tekrarlayın. Pencere kemik yapıları sıvı için kullanılan iğne ile zarar vermemeye dikkat et.</li>
	<li>Küçük bir parça (1 mm2) paromisin yuvarlak pencere ve oval pencere niş içinde batırılmış spongostan yerleştirin.</li>
	<li>Retraktörü aracı kaldırmak belgili tanımlık kesme kapatın ve 30 dk bekleyin.</li>
</ol>5. sonrası sağır edici akustik ABR
<ol><li>Kayıt aABR benzer bir şekilde (adım 2.2-2.8) sağır edici gibi önce (Şekil 2b, Şekil 3).</li>
</ol>6. CI elektrot dizi ekleme
Not: İntracochlear elektrot dizi dört platin bantları (Ø0.2 mm) bir silikon tüp (Şekil 5) korumalı platin/iridum parilen izole edilmiş tel ile oluşur.
<ol><li>Retraktörü aracın bulla yeniden erişmek için belgili tanımlık kesme getirin.</li>
	<li>4th platin yüzük sadece yuvarlak pencere içinde bulunduğu yuvarlak pencere (scala tympani) bir derinlikte elektrot dizi takın. Bu ~ 2 mm, ~ 30 kHz16yaşında bir intracochlear konumuna karşılık gelen bir ekleme derinlik verir.</li>
	<li>Bulla içinde kurşun tel bobin ve tel bulla yukarıda doku yapıştırıcı. Tel sarma deneyi boyunca yerde dizi tutmaya yardımcı olur.</li>
	<li>Dikkatle Retraktörü kaldırma ve ekleme doku yapıştırıcı ile kapatın.</li>
	<li>Küçük bir insizyon attım (0.5 mm) boynundan nerede arasındaki çizgi dik olun etkin ve başvuru ABR elektrotlar doku makas kullanarak. Subkutan cebinde platin yerden giden topu yerleştirin ve küçük kesi ile doku yapıştırıcı (Şekil 6) kapatın.</li>
	<li>Elektrot dizi kurulu hayvan Stimülatörü platforma bağlayın.</li>
</ol>7. elektrik İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR)
Not: Bir hayvan Stimülatörü platformu (ASP) elektrikle elektrot dizi uyarmak için kullanılır. Diğer akım kaynakları ve yazılım sistemleri kullanılabilir.
<ol><li>ABR elektrotlar olarak (adım 2.3-2.5) önce (Şekil 6) yer.</li>
	<li>ASP yazılımını açın ve elektrik darbe stimülasyon paradigma tanımlayın. 50 μs/faz ile şarj dengeli bifazik bakliyat kullandığımız ve 10 μs 23.3 Hz (pps) sunulan boşluğu Interphase. Elektrik stimülasyon monopolar elektrot yapılandırmasındaki mevcut seviyeleri artan ile teslim edilir. Toplam 400 tepkilerin geçerli her düzeyde ortalama.</li>
	<li>Elektrik darbe trenler sunmak ve kayıt çatışmaya eABR yanıt TDT headstage üzerinden sürekli olarak, ön amfi ve işitsel işlemci.</li>
	<li>Arsa ve ısmarlama matlab komut dosyası (Şekil 7) ile eABR veri analiz. Komut dosyası ve bir kayıt örneği ek temin edilmektedir.</li>
</ol>8. deney sonu
<ol><li>Deney sonunda, kurumsal esaslarına göre Hayvan ötenazi.</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde açmak belgili tanımlık kesme ve implant kaldırın.</li>
	<li>Ultra-distile su doku enkaz kaldırmak 10 min için elektrot dizide solüsyon içeren temizleyicide. Not: İmplant birkaç kez silinse, sağlam ve düzgün yürütülmesi elektrotlar. Bunu denetlemek için dizi kuru olduğunda bir multimetre ile elektrot empedans ölçmek.</li>
	<li>Elektrot dizi kuru bir yerde muhafaza ediniz.</li>
</ol>

<ol>
	<li>The-Ear-Foundation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cochlear Implants Update. , (2018).</li><li>Fallon, J. B., Irvine, D. R. F., Shepherd, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+Implants+and+Brain+Plasticity.">Cochlear Implants and Brain Plasticity.</a> Hearing Research. 238 (1-2), 110-111 (2008).</li><li>Pfingst, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+Gene+Therapy+in+Deafened+Ears+with+Cochlear+Implants:+Long-term+Effects+on+Nerve+Survival+and+Functional+Measures.">Neurotrophin Gene Therapy in Deafened Ears with Cochlear Implants: Long-term Effects on Nerve Survival and Functional Measures.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 18 (6), 731-750 (2017).</li><li>Miller, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+excitation+of+the+acoustically+sensitive+auditory+nerve:+single-fiber+responses+to+electric+pulse+trains.">Electrical excitation of the acoustically sensitive auditory nerve: single-fiber responses to electric pulse trains.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 7 (3), 195-210 (2006).</li><li>Irving, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+implantation+for+chronic+electrical+stimulation+in+the+mouse.">Cochlear implantation for chronic electrical stimulation in the mouse.</a> Hearing Research. 306, 37-45 (2013).</li><li>Soken, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cochleostomy:+a+minimally+invasive+dorsal+approach+for+modeling+cochlear+implantation.">Mouse cochleostomy: a minimally invasive dorsal approach for modeling cochlear implantation.</a> Laryngoscope. 123 (12), E109-E115 (2013).</li><li>Mistry, N., Nolan, L. S., Saeed, S. R., Forge, A., Taylor, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+implantation+in+the+mouse+via+the+round+window:+effects+of+array+insertion.">Cochlear implantation in the mouse via the round window: effects of array insertion.</a> Hearing Research. 312, 81-90 (2014).</li><li>Hartmann, R., Topp, G., Klinke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discharge+patterns+of+cat+primary+auditory+fibers+with+electrical+stimulation+of+the+cochlea.">Discharge patterns of cat primary auditory fibers with electrical stimulation of the cochlea.</a> Hearing Research. 13 (1), 47-62 (1984).</li><li>Sato, M., Baumhoff, P., Kral, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+Implant+Stimulation+of+a+Hearing+Ear+Generates+Separate+Electrophonic+and+Electroneural+Responses.">Cochlear Implant Stimulation of a Hearing Ear Generates Separate Electrophonic and Electroneural Responses.</a> The Journal of Neuroscience. 36 (1), 54-64 (2016).</li><li>Pfingst, B. E., Spelman, F. A., Sutton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operating+ranges+for+cochlear+implants.">Operating ranges for cochlear implants.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 89 (2), (1980).</li><li>Miller, C. A., Hu, N., Zhang, F., Robinson, B. K., Abbas, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+across+time+in+the+temporal+responses+of+auditory+nerve+fibers+stimulated+by+electric+pulse+trains.">Changes across time in the temporal responses of auditory nerve fibers stimulated by electric pulse trains.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 9 (1), 122-137 (2008).</li><li>Shepherd, R. K., Javel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+of+the+auditory+nerve.+I.+Correlation+of+physiological+responses+with+cochlear+status.">Electrical stimulation of the auditory nerve. I. Correlation of physiological responses with cochlear status.</a> Hearing Research. 108 (1-2), 112-144 (1997).</li><li>Akil, O., Oursler, A. E., Fan, K., Lustig, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Auditory+Brainstem+Response+Testing.">Mouse Auditory Brainstem Response Testing.</a> Bio Protocol. 6 (6), (2016).</li><li>Willott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+the+auditory+brainstem+response+(ABR)+to+study+auditory+sensitivity+in+mice.">Measurement of the auditory brainstem response (ABR) to study auditory sensitivity in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. Chapter 8 (Unit 8.21B. , (2006).</li><li>TDT. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ABR User Guide: A Guide to ABR Testing with the System 3 RZ6. , (2017).</li><li>Muller, M., von Hunerbein, K., Hoidis, S., Smolders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+place-frequency+map+of+the+cochlea+in+the+CBA/J+mouse.">A physiological place-frequency map of the cochlea in the CBA/J mouse.</a> Hearing Research. 202 (1-2), 63-73 (2005).</li><li>Cushing, S. L., Papsin, B. C., Gordon, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+characteristics+of+facial+nerve+stimulation+in+children+with+cochlear+implants.">Incidence and characteristics of facial nerve stimulation in children with cochlear implants.</a> Laryngoscope. 116 (10), 1787-1791 (2006).</li><li>Berrettini, S., Vito, D. A., Bruschini, L., Passetti, S., Forli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facial+nerve+stimulation+after+cochlear+implantation:+our+experience.">Facial nerve stimulation after cochlear implantation: our experience.</a> Acta Otorhinolaryngologica Italica. 31 (1), 11-16 (2011).</li><li>Hu, H., Kollmeier, B., Dietz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+stimulation+coherent+artifacts+in+electrically+evoked+auditory+brainstem+responses.">Reduction of stimulation coherent artifacts in electrically evoked auditory brainstem responses.</a> Biomedical Signal Processing and Control. 21, 74-81 (2015).</li><li>Wiegner, A., Wright, C. G., Vollmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multichannel+cochlear+implant+for+selective+neuronal+activation+and+chronic+use+in+the+free-moving+Mongolian+gerbil.">Multichannel cochlear implant for selective neuronal activation and chronic use in the free-moving Mongolian gerbil.</a> Journal of Neuroscience Methods. 273, 40-54 (2016).</li><li>Hessel, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meriones+unguiculatus+(Gerbil)+as+an+animal+model+for+the+ontogenetic+cochlear+implant+research.">Meriones unguiculatus (Gerbil) as an animal model for the ontogenetic cochlear implant research.</a> American Journal of Otolaryngology. 18 (S21), (1997).</li><li>Pinilla, M., Ramirez-Camacho, R., Jorge, E., Trinidad, A., Vergara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventral+approach+to+the+rat+middle+ear+for+otologic+research.">Ventral approach to the rat middle ear for otologic research.</a> Otolaryngology Head Neck Surgery. 124 (5), 515-517 (2001).</li><li>King, J., Shehu, I., Roland, J. T., Svirsky, M. A., Froemke, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+and+behavioral+system+for+hearing+restoration+with+cochlear+implants.">A physiological and behavioral system for hearing restoration with cochlear implants.</a> Journal of Neurophysiology. 116 (2), 844-858 (2016).</li><li>Lu, W., Xu, J., Shepherd, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+implantation+in+rats:+a+new+surgical+approach.">Cochlear implantation in rats: a new surgical approach.</a> Hearing Research. 205 (1-2), 115-122 (2005).</li><li>Poirrier, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ototoxic+drugs:+difference+in+sensitivity+between+mice+and+guinea+pigs.">Ototoxic drugs: difference in sensitivity between mice and guinea pigs.</a> Toxicology Letters. 193 (1), 41-49 (2010).</li><li>Wu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aminoglycoside+ototoxicity+in+adult+CBA,+C57BL+and+BALB+mice+and+the+Sprague-Dawley+rat.">Aminoglycoside ototoxicity in adult CBA, C57BL and BALB mice and the Sprague-Dawley rat.</a> Hearing Research. 158 (1-2), 165-178 (2001).</li><li>Taylor, R. R., Nevill, G., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+hair+cell+loss:+a+mouse+model+for+cochlear+lesions.">Rapid hair cell loss: a mouse model for cochlear lesions.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 9 (1), 44-64 (2008).</li></ol>

Hiçbir rakip mali çıkarlarının. Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu el yazması akut sağır edici ve fare, aynı zamanda CI uyarım İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile fonksiyonel değerlendirilmesi Koklear implantasyonu için cerrahi yaklaşım anlatılmaktadır. Fare koklea küçük olmasına rağmen ve zorlu cerrahi, CI fare modeli mümkün olduğunu ve işitsel araştırma değerli bir araç olarak hizmet vermektedir.
Stapedial arter fare orta kulakta mevcuttur. Arter bulla arka-hemen girer ve kasılır yuvarlak pencere niş ile çalışır ve sonra onu oval pencere niş konumlanmıştır. Fare modeli ilk gelişiminde, Biz esas olarak bulla erişilirken ölümcül intraoperatif kanama aşağıdaki travma stapedial arter için deneyimli. Sonuç olarak, daha sınırlı bir yaklaşım uyarlanmış ve daha küçük, zarif diseksiyon adımda bulla erişilebilir. Kanama nedeniyle daha da komplikasyon bundan sonra tespit edildi. Büyük bir özen ve dikkat ameliyat sırasında alınır sürece o stapedial arter Koterizasyon fareler5, bizce, işitme eşiği veya sarmal ganglion nöronların sayısı önemli etkisi yoktur aslında rağmen bu gereksizdir. Biz iyi psikomotor becerilerini geliştirmek ve teknik yeterlilik ulaşmak için gereken zaman ayırdığınız öneririz. Kapatma implante elektrot dizi çevresinde ilk kesi ortalama süre genellikle 1-1,5 saat var.
Açıklanan akut CI cerrahi farelerde "ventral" yordamı ve fareler ve gerbils20,21,22de dahil olmak üzere diğer kemirgen içinde kullanılan yuvarlak pencere ekleme benzer. Diğer kemirgen çalışmaları "dorsal yaklaşım" Bazal dönüş cochleostomy sa nın tamamen kaçınmak ve daha derin6,23,24dizi ekleme bir yuvarlak pencere ekleme yerine kullanmış. Kronik stimulasyon derleme farelerde implantasyonu implant ve ameliyat sonrası bakım5düzeltmek için Dacron kafes ilavesi ile bu iletişim kuralı açıklandığı gibi aynı adımlar izlenir.
Ana teknik zorluklar CI ameliyatları farelerde gerçekleştirirken fareler ve gerbils koklea ve büyük bir SA varlığı ile karşılaştırıldığında koklea küçük boyutu vardır. SA sıçanlar değil gerbils ama olan de vardır. Fare fareler ve gerbils küçük olduğundan, buna ek olarak, onlar için cerrahi işlemler daha savunmasızdır.
Electrophonic yanıt eABR kayıtları ortadan kaldırmak için ve saç hücre kaybı çoğu CI Kullanıcı içinde bulunan taklit etmek için biz hayvanlar CI ekleme önce sağır. Fareler çünkü sistemik aminoglikozitler ototoksisite neden için gerekli konsantrasyonları bir dar doz pencere ototoxically içinde vivo25 gerekirse mi çarpışacağız zor: alt Oysa hiçbir saç hücre kaybı birkaç gün sonuçlarında verilen doz tek bir enjeksiyon daha yüksek bir doz-ebilmek var olmak öldürücü26. Ayrıca, aminoglikozitler duyarlılık zorlanma bağımlı26yaşında. Ancak, aminoglikozitler bir döngü idrar söktürücü ile birlikte tek bir doz aşırı dış saç hücre kaybı olmadan ölümcül sonuçları27CBA/CaJ farelerde üretebilir gösterilmiştir. Gecikmeli iç saç hücre ölümü tüm muayene cochleae27yarısı bildirildi.
Bu makale, biz son zamanlarda C57BL/6 fareler5için kurulmuş Protokolü esinlenerek aminoglikozitler paromisin topikal uygulama kullanılır. Paromisin akut uygulanması önemli ölçüde tıklayın uyarılmış işitme eşiği artan 46 dB ± 6,1 tarafından. Bu artış Irving vd tarafından bildirilen 35 dB artış daha büyük olmasına rağmen (ön vs ameliyat sonrası: 41.6 dB ± 3.3 vs 76,6 dB ± 4.4, p = 0.02, n = 3) 5, aynı sonrası sağır edici eşik (75,7 dB ± 3.7 vs 76,6 dB ± 4.4) elde etti. iç saç hücre kaybı27gerçekleşmesi için daha fazla zaman alır gibi % 0.05 paromisin hızlı dış saç hücre ölümü, ağırlıklı olarak işitme kaybına neden bir kısmi düşünülmektedir. Bu nedenle mümkün olan bu electrophonic, her ikisi için de iç yanıtını ve dış saç hücreleri4,8,9,10,11,12, biricik kalan işitme ile Sağır Hayvanlarda kısmen ortadan kaldırılmıştır. Rağmen % 0.05 (ağırlık/hacim) paromisin 4 hafta5sonrası sağır edici sarmal ganglion nöronların sayısı azalmaz, olduğunu paromisin bizim akut kurulumunda işitsel sinir lifleri etkiler veya synaptopathy (sinapslarda kaybı teşvik bilinmeyen iç saç hücreleri ve türü arasındaki ben işitsel lifleri sinir). Başka bir belirsizlik topikal paromisin tedavi tekdüze dağılım koklea boyunca saç hücre kaybı üretmek olmayabilir olduğunu. Gelecekteki çalışmalar bu sorulara cevap vermek gerekir.
Özet olarak, genetik modeller için insan sağırlık ve biyokimyasal araçlar için giderek artan sayıda fare işitsel araştırma CIS alanı dahil olmak üzere için çekici bir hayvan model olun.

Koklear implant (CIS) İşitme duygusu ağır ve derin işitme kaybı kişilere sağlayabilir elektronik aygıtlardır. Bu doğrudan işitme uyarmak için cerrahi olarak iç kulak koklea içinde implante elektrotlar kullanılır. Bugüne kadar CI en başarılı duyusal protez ve fazla 600.000 kişi dünya çapında1yardımcı oldu. Ancak, cihaz eksiklikleri vardır. İlk olarak, aygıt tarafından sağlanan yararları büyük ölçüde alıcılar arasında değişir. İkinci olarak, gürültülü ortamlarda ve müzik konuşma hala kötü algılanan çoğu CI Kullanıcı tarafından.
Uzun yıllar boyunca, hayvan modelleri CI araştırma bu konuları daha iyi anlamak için ve güvenlik ve cihazların etkinliğini sürekli iyileştirmek için kullanılmıştır. Modelleri çeşitli olaylar, CI implantasyon2, aşağıdaki yer alan beyin plastik değişiklikler gibi değerli fikir verdik kalan işitme3ve biyofiziksel özellikleri korumak için gen tedavisi uygulayarak etkisini elektrikle siniri4, birçok diğer örnekler arasında teşvik.
Fareler güçlü model organizma sağırlık genetik modellerini büyük durumu nedeniyle değildir. Diğer avantajı yeteneği fare genom işlemek için içerir (örneğin, CRISPR-Cas sistemi üzerinden), kullanmak için fırsat mekanizmaları, özellikle de beyin, yüksek üreme hızı, hızlı bir gelişim eğitim teknikleri Imaging gelişmiş ve kolay yetiştirme ve işleme. CI ameliyatları farelerde performans ana teknik sorunları koklea küçük boyutu ve büyük stapedial arter (SA) varlığı vardır. SA genellikle insanlarda embriyonik gelişim sırasında kaldırılır, ancak hayatı, kemirgenler, fare, sıçan ve gerbils dahil olmak üzere bir dizi boyunca devam ederse. SA koklea erişim için sadelik ve cerrahi riski artırır yuvarlak pencere niş altında çalışır.
Önceki çalışmalar fareler5,6,7' CI implantasyon fizibilite göstermiştir. Irving vd. kronik intracochlear elektriksel stimülasyon en fazla bir ay için elde edilebilir gösterdi. Akut uyarılması da gerçekleştirildi ancak kayıtları değil sunuldu. Onlar stapedial arter doldurarak işitme eşiği veya sarmal ganglion nöronların sayısı üzerinde önemli bir etkisi vardı ve aminoglikosite paromisin, bir ototoksik ilaç topikal uygulama etkili bir sağır edici işlemi olduğunu gösterdi Fareler5. Soken vd. fare koklea yuvarlak pencereden daha iyi işitme durumu6korumak için değiştirilmiş bir dorsal yaklaşım nitelendirdi. Ekleme bir platin-iridyum tel önemli kalıntı işitme 28 dB (ABR) eşiğinde bir artan İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile gözlenmiştir. Otoacoustic emisyon (OAE) büyük ABR eşik vardiya6ile hayvanlarda kaybedildi. Mistry vd., elektrik stimülasyon7yokluğunda implantasyon işlevsel ve histopatolojik etkileri test. Rağmen işitme farelerde 3 ve 6 ay-eski implante düşük frekanslarda korundu, implantasyon fibrozis gibi doku implant etrafında ve çevresinde bullostomy7osteoneogenesis sonuçlandı.
Kısacası, farelerde dışında üç çalışmalar BDT Tarih, tek CI uyarım fonksiyonel kaydını gösterir. Irving ve arkadaşları hem akut ve kronik eABR kayıtları yapılır ama yalnızca veri kronik CI uyarım5gösterdi. Ancak, kronik modeli Irving vd tarafından geliştirilen tam implante edilebilir bir aygıt ile teknik olarak zordur. Akut CI uyarım, hem daha az zor ve daha hızlı, benzer sonuçlar elde edebilirsiniz Eğer henüz bilinmemektedir.
CIS artık işitme cihazları yarar ciddi ve derin işitme kaybı olan kişiler tarafından kullanılır. CI kullanıcılar için hayvan modelleri bu nedenle zaman normalde hayvanlar kullanılan işitme sağır edici bir yordam içermelidir. İşitme hayvanlar gerekirse mi çarpışacağız bir başka bir sağır veya işitme koklea elektriksel stimülasyon farklı sinirsel tepkiler4,8,9,10,11, üreten nedendir 12. bir sağır koklea elektriksel stimülasyon doğrudan işitsel sinir lifleri etkinleştirir ve bir electroneural yanıt (α) oluşturur. Kısa gecikme süresi ve küçük bir dinamik alan çevre8,10ile karakterizedir. Öte yandan, elektrik stimülasyon işitme koklea saç hücreleri uzun gecikmeleri ve daha geniş dinamik alan4,11ile karakterize bir electrophonic tepki (β) heyecanlandırıyor. Electrophonic yanıt sinir lifleri normal uyarma için iç saç hücreleri, dış saç hücrelerinin elektriksel olarak bağlı kasılma ve seyahat eden bir dalga4nesil tarafından atfedilir. Electroneural ve electrophonic yanıt da merkezi sinir sistemi9iki farklı etkinlik şekillerindeki neden. Sato ve ark. orta nöronlar implante CI eskiden şiling şimdi domuz bir önce ve sonra electrophonic katkı ortadan kaldırır paromisin ile kulakları sağır kaydetti. Onlar oranı düzeyinde işlev eğimini dik ve yüksek deafened durumda işitme durumu9' a göre oranları ateş gösterdi. Bu nedenle, belirtilen araştırma soru bağlı olarak, ayrı electrophonic ve electroneural yanıt işitme elektrik stimülasyon üzerine sağır edici dahil etmeyi düşünün önemlidir.
Burada, bir fare bir elektrot dizide koklear implantasyon yanı sıra elektrikle uyarılmış İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR) ile intracochlear elektrik stimülasyon ve fonksiyonel kayıt ve akut sağır edici yordamı açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hardware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sound-proof booth</td>
			<td>IAC Acoustics, Winchester, UK</td>
			<td>Mac-2 Enclosure RF Shielded Box 2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MF1 Speaker</td>
			<td>Tucker Davis Technologies (TDT), FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCB microphone</td>
			<td>PCB Piezotronics, Inc, NY, USA</td>
			<td>Model 378C01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low impedance headstage</td>
			<td>TDT, FL, USA</td>
			<td>RA4LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medusa pre-amplifier</td>
			<td>TDT, FL, USA</td>
			<td>RA4PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RZ6 auditory processor</td>
			<td>TDT, FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Stimulator Platform</td>
			<td>ASP, Oticon Medical, Nice, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multimeter</td>
			<td>Fluks</td>
			<td>#115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closed-loop heating pad</td>
			<td>FHC, Inc. ME, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alcon, CH</td>
			<td>Lacrinorm Augengel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acoustic foam</td>
			<td>Otoform Ak, Dreve Otoplastik GmbH</td>
			<td>#464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Disposable subdermal needle electrodes</td>
			<td rowspan="2">Horizon, Rochester Electro-Medical Inc.</td>
			<td rowspan="2">S83018-R9, 27G</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractor tool (Mini Collibri Retractor)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#17000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction wedges</td>
			<td>Agnthos, SE</td>
			<td>#42-886-460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable paper point (Medium)</td>
			<td>WPI, FL, USA</td>
			<td>#504182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intracochlear electrode array</td>
			<td>Bionics Institute, Melbourne, Australia</td>
			<td>4 channel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spongostan Standard</td>
			<td>Ferrosan Medical Devices</td>
			<td>#MS0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue glue. Loctite 4161 Superbond</td>
			<td>Henkel</td>
			<td>Part No 19743</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Stimulator Platform (ASP)</td>
			<td>Oticon Medical, Nice, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs/chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Narketan)</td>
			<td>Provet AG, CH</td>
			<td>100mg/mL, #VQ_320265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Rompun)</td>
			<td>Provet AG, CH</td>
			<td>Inj Diss 2%, # 1315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine</td>
			<td>Compendium, CH</td>
			<td>Bupivacain Sintetica inj Diss 0.5%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine (Atropinesulfat Amino)</td>
			<td>Amino AG, CH</td>
			<td>1 mg/ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine (Povidone/iodine)</td>
			<td>Provedic, CH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin (Neomycin trisulfate salt)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N1876-25G, Lot#WXBB7516V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioSigRZ</td>
			<td>TDT, FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab</td>
			<td>MathWorks, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASP software</td>
			<td>Oticon Medical, Nice, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cochlear implant surgery and electrically-evoked auditory brainstem response recordings in c57bl/6 mice

Koklear implant (CIS) İşitme duygusu için sağır kişi sağlayabilir neuroprosthetic cihazlardır. Ancak, bir CI işitme tüm yönleriyle geri yükleyemezsiniz. CI kullanıcılar müzik algıladıkları ve rakip Konuşmacılar, yansımaları ve diğer sesleri ile bir sesi işitme gibi daha doğal ortamlarda gerçekleştirmek üzereyseniz implant teknolojisi geliştirilmesi gereklidir. Böyle geliştirme koklea içinde elektrik stimülasyon ve yanıtları tüm işitme sisteminin içinde mekanizmaları daha iyi anlamak için deneysel hayvan gerektirir. Fare birçok genetik model kullanılabilir nedeniyle giderek daha cazip bir modeldir. Ancak, sınırlı bu tür CI model olarak ağırlıklı olarak küçük elektrot dizilerin Reproduction zorluk nedeniyle kullanmaktır. Bu nedenle cerrahi işlem hakkında daha fazla bilgi vardır CI araştırma farelerde kullanımı genişletmek için büyük ilgi.
Bu raporda, akut sağır edici ve C57BL/6 fare zorlanma bir elektrot dizide Koklear implantasyonu için protokolü biz ayrıntılı olarak tarif. Biz bu yordamı elektriksel olarak uyarılmış İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (eABR) ile fonksiyonel etkinliğini göstermek için ve yüz sinir stimülasyonu örnekleri gösterir. Son olarak, biz de normalde işitme kullanırken sağır edici bir yordam da dahil olmak üzere önemini tartışmak hayvan. Bu fare modeli CI kullanıcılar için konu ile ilgili olurdu genetik ve nörobiyolojik mekanizmaları incelemek için güçlü bir fırsat sağlar.

Bu çalışmada akut CI uyarım deafened Mouse için güvenilir bir model tanımlamak için yapıldı. Öncesi ve ameliyat sonrası işitme eşikleri sağır edici yordamı işlevsel bir okuma görev yaptı. Topikal uygulama % 0.05 paromisin oval ve yuvarlak penceresinde anlamlı bir tıklama uyarılmış işitme eşikleri 46 dB ± 6 artış (öncesi vs sonrası paromisin: 30,0 dB ± 3.8 vs 75,7 dB ± 3.7, p = 0,0003, eşleştirilmiş t-testi, n = 7) (Şekil 3). Fare büyüklüğünde elektrot dizi bundan sonra yuvarlak pencere (4 rakam, Şekil 5) eklenir. Elektrikli bir intracochlear elektrot simülasyonu güvenilir eABR aktivite oluşturabilir. (Şekil 7). Bazı durumlarda, CI uyarım yüz sinir aktif ve ya kısa ya da uzun gecikme süresi ile yüksek genlik dalgası (Şekil 8A ve resim 8B, sırasıyla). Kısa gecikme süresi yanıt hızlı amplifikasyon dalga IV yaklaşık 3 ms tarafından karakterize edildi ve yüz sinir doğrudan bir yanıt olması muhtemeldir. Uzun gecikme süresi yanıt yaklaşık 5-6 ms ortaya çıktı ve dolaylı olarak yüz sinir tarafından uyarılmış işitsel kas (myogenic) yanıt olması muhtemeldir. Yüz sinir yanıt-e doğru hayvan çalışmaları edebiyat nadiren ihbar ama insan CI kullanıcılar17,18,19' iyi bilinen bir komplikasyondur. İçinde Şekil 8, yüz sinir stimülasyonu çıktı geçerli görece orta düzeyde (150-200 μA) ve iki farklı hayvanlarda. Diğer durumlarda, her iki yanıt (gösterilmez) çok yüksek geçerli düzeyde aynı hayvan ortaya çıkabilir. Biz yüz sinir stimülasyonu görünümünü altındaki düzeyler geçerli düzeye sınırlama öneririz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig1.jpg"> Şekil 1: işitsel beyin sapı yanıt (ABR) Kur. Deri altı elektrotlar köşe (aktif/Kanal 1 [Ch1]), Ipsilateral (başvuru [Ref]) kulak arkasında ve imzalat fare arka bacak (zemin [Gnd]) yerleştirilir. Elektrot sinyalleri güçlendirilmiş ve bir TDT sistemi tarafından kaydedildi. Akustik ve elektrik stimülasyon sunulmaktadır bir mikrofon ve bir hayvan Stimülatörü platformu ile anılan sıraya göre. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig2.jpg"> Şekil 2: temsilcisi aABR dalgalar önce ve sonra % 0.05 paromisin ile sağır edici stimülasyon vahşi tipi fareden tıklatmaya. (A) normal işitme aABR desen-V ve düşük işitme eşiği, burada 30 dB SPL (ok) etiketli dalgaları ile karakterizedir. (B) deafened aABR desen bir artan işitme eşiği, burada 70 dB SPL (ok) gösterir. Dalgalar daha uzun bir gecikme süresi ve daha fazla Zamansal değişimi var. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig3.jpg"> Şekil 3: aABR eşik önce ve sağır edici sonra. Paromisin uygulanması önemli ölçüde aABR eşikleri arttı 46 dB ± 6. Öncesi vs sonrası paromisin: 30,0 dB ± 3.8 vs 75,7 dB ± 3.7, p = 0,0003, eşleştirilmiş t-testi, n = 7. Standart hata anlamına gelir hatalardır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig4.jpg"> Şekil 4: ameliyat. İşitsel bulla(a)maruz kalma. Bullostomy olduğunu tympanic bulla (Siyah noktalı çizgi) üzerinde sırt boyunca (beyaz noktalı çember) gerçekleştirilen. (B) bullostomy yuvarlak pencere, stapedial arter ve oval pencere görselleştirme sağlar. Paromisin olduğunu nazikçe oval pencere, sonra yuvarlak pencere ilk yoluyla temizlendi. (C) elektrot dizisi 4th elektrot sadece yuvarlak pencere niş içinde yer alan kadar eklenir. Elektrot tel bulla içinde belgili tanımlık kesme kapatılmadan önce dizinin tutmak için bağlamışsın. CN VII kranial sinir VII (yüz sinir), OW = = oval pencere, RW pencere, SA = stapedial arter, SCM = boyun kas, TB = tympanic bulla =. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig5.jpg"> Şekil 5: fare koklear implant. (A) intracochlear elektrot dizi oluşur bir çapı d0.4 mm aralıklarla aralıklı dört platin Grup: 0 [İpucu] (d 0.21 =), 1 (d 0,23 =), 2 (d = 0,25), 3 (d = 0,27). Elektroda 0.2 mm genişliğidir. Dört platin/iridyum (90/10) parilen İzoleli teller bir silikon tüp içinde korunuyor. (B) büyütme elektrot dizi uç (kırmızı noktalı kare). Elektrot dizi ve platin başvuru topu bir baskı kartına bağlanır. Ölçek çubuğu 1 mm. = <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig6.jpg"> Şekil 6: elektriksel olarak uyarılmış ABR (eABR) Kur. CI platin yerden giden topu (Gnd, kırmızı) ve boyun fare subkutan bir cebinde yerleştirilir. Etkin (izdüşümü, Ch1(+)) ve Referans (Ref (-) Ipsilateral kulakta) ABR elektrotlar arasında en iyi eABR yanıt elde etmek için elektrot dizi ve zemin arasındaki çizgi dikey çizgidir. EABR zemin elektrot (Gnd, siyah) arka bacağından yerleştirilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig7.jpg"> Şekil 7: temsilcisi eABR dalgalar CI uyarım deafened Mouse için. Bifazik darbe tren elektrot #1 23.3 Hz (pps) 400 yineleyerek, monopolar yapılandırma için sunulmuştur. Bir çekim gücü düzeyi 0-175 μA 25 μA adım (bkz. Adım 7.2 ayrıntılarda stimülasyon) gösterilir. Romen rakamları eABR dalga numarasını gösterir. Dalga genlikleri ve gecikme süresi artırmak ve azaltmak, sırasıyla, giderek artan bir geçerli düzeyi. Bu örnekte, wave II ortaya çıktı yaklaşık 1 ms, dalga III yaklaşık 2 ms, dalga IV çevresinde 3 ms, dalga V yaklaşık 4 ms. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig8.jpg"> Şekil 8: yüz sinir stimülasyonu örneği. Bazı durumlarda, CI uyarım yüz sinir etkinleştirmek ve bir kısa gecikme süresi (A) (ok) ile doğrudan yanıt ya da daha uzun gecikme süresi (B) (ok) ile dolaylı yanıt çağrıştırıyor. Gösterilen örnekleri iki CI implante hayvanlardan olan 0-300 kullanarak bifazik darbe tren ile uyarılan μA 50 μA içinde (bkz. Adım 7.2 ayrıntılarda stimülasyon) adımlar. Romen rakamları eABR dalga numaralarını gösterir. * kırpma amplifikatör doygunluk nedeniyle eABR dalgasının gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

Koklear implant hayvan modelleri elektrik stimülasyonu ile kalıcı sensorinöral işitme kaybı tedavisinde teknolojik üsler bilgisine ilerletebilirsiniz. Bu çalışmada akut sağır edici ve fareler hem de işlevsel değerlendirme İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile bir elektrot dizinin koklear implantasyon için cerrahi bir Protokolü sunar.

Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57BL/6 farelerde

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

Koklear implantların hayvan modelleri, kalıcı duyusal sinirsel işitme kaybını elektrik stimülasyonu ile tedavi etmenin teknolojik temeli hakkındaki bilgimizi ilerletebilir. Bu protokol farede akut sağır edici ve koklear implantasyon göstermektedir. Ve işitsel beyin sapı yanıtı ile koklear implant stimülasyonufonksiyonel değerlendirilmesi.Farelerde koklear implant cerrahisi yapmanın bazı temel zorlukları koklea küçük boyutu ve yuvarlak pencere niş yakınında büyük stapedial arter varlığı vardır. Normal işitme durumunu ölçmek için, bir mililitreşli şırınga içine akustik köpük yükleyin ve bir anestezi sekiz ila on iki haftalık C57 siyah 6 fare nin kontralateral kulak kanalına köpük 100 ila 200 mikrolitre enjekte ipsilateral kulak gelen işitsel beyin kök yanıtı izole etmek için, şırınga kulak kanalı içine köpük teslim ivedi kulak için kulak yakın mühürler dikkat. Daha sonra, ipsilateral kulaktan 10 santimetre lik bir hoparlör yerleştirin ve aVR elektrotlarını %70 etanol ile temizleyin.Referans elektrotu ipsilateral kulağın pinna sının altına ve aktif elektrotun vertex'in derisinin altına yerleştirin. Zemin elektrotunun arka bacağının derisinin altına konmuştur. Başlık ve preamplifikatör optik fiber bağlantı noktası üzerinden işitsel işlemciye bağlayın.Ve aktif ve referans elektrotların empedansını kontrol edin. Elektrotlar aynı empedansı gösterdiğinde, ses geçirmez kabini kapatın ve tıklama stimülasyonunu sunun. Uygun karmaşık işitsel işlemci ve yazılım ile aVR'yi serbest alan koşulunda kaydetme.10 milisaniyelik kayıt penceresinde 10 desibel basamakta ses basıncı seviyesinin 90 desibelden 10 desibel ses basıncı seviyesine düşüren tıklama seviyesiyle 21 hertz'de sunulan 0,1 milisaniye tek kanalmonophasik tıklamaları standartlaştırın. Daha sonra aVR eşiğini tanınabilir bir aVR dalga tepkisi ile en düşük desibel düzeyi olarak belirleyin. Sağır edici ikna etmek için, hava yolları açık kalması için vücut düz tutmak için dikkat ederek sağ tarafında fare yerleştirin.Ipsilateral kulağın arkasındaki kürkü çıkarın ve maruz kalan cildi sıralı %70 etanol çözeltisi ve Povione-İyot Solüsyonu Scrubs ile dezenfekte edin. Bir diseksiyon mikroskop altında hayvan hareket ettirin ve 16 kez objektif ve bir neşter kullanarak bir buçuk santimetre lik postaüri kesisi yapın. 25-40x büyütme altında, maruz kalan deri altı yağ tabakası ile künt incelemek ve timpanik bulla periost ortaya çıkarmak için sternokleidomastoid kas geri çekmek için forceps kullanın.Yüz sinirsternokleidomastoid kas ın arka sırt kenarı etrafında sarar ve pinna doğru kulak kanalı boyunca rostrally çalışır. İşitsel bulla belirlenmesi için bir dönüm noktası olarak yüz siniri kullanarak yavaşça bulla erişim için kesi içine kendini istinat retraktör aracı yerleştirin. Bulla ve mastoid süreci arasındaki sırtın net görselleştirme sağlamak ve nazik sırtın arka üst tarafında bir delik oluşturmak için bulla içine 30 guage iğne döndürmek için bulla mediodorsal alan üzerinde doku çıkarın.Orta kulak boşluğu ortaya çıkana kadar bullastomi genişletmek için ince uçlu forceps ile çimdik küçük kemik parçaları. Ve yuvarlak pencere niş kemik örten açık olana kadar mastoid sürecine doğru delik dorsally uzatın. En kritik adım pencere nişinin hazırlanmasıdır.Böylece stapedial arter zarar vermemek için zaman ayırın emin olun. Stapedial arter zarar vermemeye dikkat, stapes görselleştirmek için ön üstün yönde bullastomi uzatmak, oval pencereye bağlı orta kulak kemiği. Sonra oval pencereyi ortaya çıkarmak için stapes kaldırın.Ototoksik ajan uygulamak için, hafifçe yuvarlak ve oval pencere zarları delik için körpli 30 guage iğne kullanın, perilenf biterse doğrulayan. Ve oval pencereden PBS çözünmüş hacim neomisin tarafından% 5 ağırlık 0.2 mililitre perfuse yavaş yavaş 30 gauge iğne ile donatılmış bir mililitreşşük kullanın. Tüm madde hacmi teslim edildiğinde, çözeltiyi yuvarlak pencereye kadar kullanarak pencere kemik yapılarına zarar vermemeye özen gösterilmiştir.Ve yuvarlak pencere ve oval pencere niş içinde neomisin batırılmış spongostan bir milimetre kare parçalar yerleştirin. Daha sonra retraktörü çıkarın ve 30 dakika sonra gösterildiği gibi sağır edici sonrası akustik aVR kaydederek kesiği kapatın. Koklear implant elektrot dizisini yerleştirmek için, retraktör aletini bulbaya yeniden erişmek için kesiye geri yerleştirin ve elektrot dizisini dizinin dördüncü platin halkasının yuvarlak pencerenin hemen içinde yer alacak şekilde scala timpanisine yerleştirin.Elektrot dizisinin eklenmesi de zor olabilir. Bu yüzden tel kurşun ve başka bir dizi eklemek için bir forcep aracı kullanarak iyi bir ekleme açısı bulmak için zaman ayırın. Kurşun teli bullanın içine sarın ve teli bulonun üzerindeki dokuya yapıştırın.Retraktörü dikkatlice çıkardıktan ve eklemeyi doku tutkalı ile kapattıktan sonra, aktif ve referans aVR elektrotlarının olacağı çizgiye dik olarak boyunda 0,5 milimetrelik bir kesi yapmak için bir scalepel kullanın. Yerleştirme de zemin topu yerleştirin ve hayvan uyarıcı platformuelektrot dizi kurulu bağlayın. Gerçekleştirmek ve elektrikli aVR için, elektrotlar daha önce gösterildiği gibi yerleştirin ve hayvan uyarıcı platform yazılımı açın.Daha sonra elektrik darbestimülasyon paradigmasını tanımlayın ve TBT Headstage, preamplifikatör ve işitsel işlemci aracılığıyla uyarılmış elektrikli aVR yanıtlarını sürekli olarak kaydeden elektrikli darbe litrenleri sunun. Ameliyat öncesi ve sonrası işitme eşikleri sağır edici prosedürün fonksiyonel bir okuması olarak hizmet vermektedir. Oval ve yuvarlak pencerelere %5 neomisin topikal uygulama tıklanan uyarılan işitme eşiklerini önemli ölçüde artırır.Bir intrakoklear elektrot sonrası sağır elektrik stimülasyonu güvenilir elektrik aVR aktivitesi oluşturabilir. Bazı durumlarda koklear implant stimülasyonu fasiyal siniri aktive eder ve dalga III'ün üç milisaniye civarında hızlı bir amplifikasyonu ve muhtemelen yüz sinirinin doğrudan yanıtı veya beş ila altı milisaniye civarında görünen ve işitsel olmayan miyojenik bir yanıt olması muhtemel uzun bir gecikme ile karakterize kısa bir gecikme li yüksek genlik dalgası üretir. , dolaylı olarak yüz sinir tarafından çağrıldı. Bu çalışmada koklear implant fare modelinin uygulanabilir olduğunu ve koklear implantın küçük ve cerrahi: zorlu olduğunu gösterdik.Bu prosedürü denerken, aVR kayıtlarındaki elektrofonik yanıtları ortadan kaldırmak ve çoğu C.I. kullanıcısında bulunan saç hücresi kaybını taklit etmek için sağır edici bir protokol dikkate almak önemlidir. Özetle, insan sağırlık genetik modellerinin giderek artan sayıda ve farelerde mevcut biyomedikal araçlar bize koklear implantlar için de dahil olmak üzere araç araştırma için cazip bir hayvan modeli yapar.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

Preparation and Culture of Chicken Auditory Brainstem Slices

Tavuk İşitsel Beyin Sapı Dilimleri hazırlanması ve Kültür

The chicken auditory brainstem is a well-established model system that has been widely used to study the anatomy and physiology of auditory processing at ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Alkole bağlı C57BL Hamilelik sırasında Apoptoz / 6 Fare Karşı, Nörotrofik Peptit, ADNF-9 Etkilerinin Test için Deneysel Yöntemler

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Fare Koklear Eksplantlarından uzun vadeli Time Lapse Görüntüleme

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Direct Visualization of the Murine Dorsal Cochlear Nucleus for Optogenetic Stimulation of the Auditory Pathway

İşitsel Yolu ve optogenetic Stimülasyon için Murin Dorsal Koklear Çekirdek Doğrudan Görselleştirme

Investigation into the use of virus-mediated gene transfer to arrest or reverse hearing loss has largely been relegated to the peripheral auditory system. ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Korteks, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- ve Striatum özgü<em&gt; In Utero</em&gt; C57BL / 6 Fare Elektroporasyon

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Sagittal düzlem kinematik yürüyüş analizi MOG35-55 için tabi C57BL/6 farelerde deneysel otoimmun ensefalomiyelit indüklenen

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

C57BL/6 farelerde deneysel otoimmün nörite fonksiyonel ve Neuropathological değerlendirmeler için ikna etmek için basit bir yaklaşım

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Auditory Brainstem Response and Outer Hair Cell Whole-cell Patch Clamp Recording in Postnatal Rats

İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda

The outer hair cell is one of the two types of sensory hair cells in the mammalian cochlea. They alter their cell length with the receptor potential to ...

Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice

Farelerde beyin sapı uyarılmış yanıt odyometrisi veri edinme ve Analizi

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as ...