Name: a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion
Uploaded: 2018-08-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion at JoVE.com

Denne forskning blev støttet af tilskud NIH/NIAID AI112423 og NIH/NIGMS GM113885 at Benjamin K. Chen og NIH/NIAID K08-AI120806 til Talia H. Swartz. Vi vil gerne takke Icahn School of Medicine på Mount Sinai Dekanens flow flowcytometri kerne.

1. generation af Target cellelinjer
Bemærk: Dette trin er valgfrit; Hvis bruger en eksisterende RG target cellelinie, start på trin 2.
<ol><li>Cotransfect en 70% sammenflydende 10 cm plade af 293T celler11 [i 10 mL af Dulbeccos modificerede Eagle medium (DMEM) med 10% føtal bovint serum (FBS)] med pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE10 og pCL-10A112 (emballage plasmid) i en 1:1 ratio (20 µg samlede) ved hjælp af cal...

<ol>
	<li>Esposito, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+Cre-lox+activated+viral+membrane+fusion+assay+identifies+pharmacological+inhibitors+of+HIV+entry.">A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry.</a> Virology. 490, 6-16 (2016).</li><li>Cavrois, M., De Noronha, C., Greene, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+enzyme-based+assay+detecting+HIV-1+virion+fusion+in+primary+T+lymphocytes.">A sensitive and specific enzyme-based assay detecting HIV-1 virion fusion in primary T lymphocytes.</a> Nature Biotechnology. 20, 1151-1154 (2002).</li><li>Huerta, L., Lamoyi, E., Baez-Saldana, A., Larralde, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+envelope-dependent+cell-cell+fusion:+a+quantitative+fluorescence+cytometric+assay.">Human immunodeficiency virus envelope-dependent cell-cell fusion: a quantitative fluorescence cytometric assay.</a> Cytometry. 47, 100-106 (2002).</li><li>Sakamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+HIV+cell-cell+fusion+assay+by+using+two+genetically+modified+HeLa+cell+lines+and+reporter+gene.">Establishment of an HIV cell-cell fusion assay by using two genetically modified HeLa cell lines and reporter gene.</a> Journal of Virological Methods. 114, 159-166 (2003).</li><li>Herschhorn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+cell-cell+fusion+system+with+integrated+ability+to+measure+the+efficiency+and+specificity+of+HIV-1+entry+inhibitors.">An inducible cell-cell fusion system with integrated ability to measure the efficiency and specificity of HIV-1 entry inhibitors.</a> PLoS One. 6, e26731 (2011).</li><li>Swartz, T. H., Esposito, A. M., Durham, N. D., Hartmann, B. M., Chen, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2X-selective+purinergic+antagonists+are+strong+inhibitors+of+HIV-1+fusion+during+both+cell-to-cell+and+cell-free+infection.">P2X-selective purinergic antagonists are strong inhibitors of HIV-1 fusion during both cell-to-cell and cell-free infection.</a> Journal of Virology. 88, 11504-11515 (2014).</li><li>Marin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+HIV-Cell+Fusion+Assay+for+Discovery+of+Virus+Entry+Inhibitors.">High-Throughput HIV-Cell Fusion Assay for Discovery of Virus Entry Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 13, 155-166 (2015).</li><li>Giroud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+and+Functional+Profiling+of+Small-Molecule+HIV-1+Entry+and+Fusion+Inhibitors.">Screening and Functional Profiling of Small-Molecule HIV-1 Entry and Fusion Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 15, 53-63 (2017).</li><li>Hubner, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+(HIV-1)+Gag+localization+and+oligomerization+monitored+with+live+confocal+imaging+of+a+replication-competent,+fluorescently+tagged+HIV-1.">Sequence of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Gag localization and oligomerization monitored with live confocal imaging of a replication-competent, fluorescently tagged HIV-1.</a> Journal of Virology. 81, 12596-12607 (2007).</li><li>Koo, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+gene+expression+in+primary+Lgr5+organoid+cultures.">Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures.</a> Nature Methods. 9, 81-83 (2011).</li><li>Pear, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+high-titer+helper-free+retroviruses+by+transient+transfection.">Production of high-titer helper-free retroviruses by transient transfection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 90, 8392-8396 (1993).</li><li>Naviaux, R. K., Costanzi, E., Haas, M., Verma, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pCL+vector+system:+Rapid+production+of+helper-free,+high+titer,+recombinant+retroviruses.">The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses.</a> Journal of Virology. 70, 5701-5705 (1996).</li><li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Phosphate+Transfection.">Calcium Phosphate Transfection.</a> Current Protocols in Immunology. 10, 10-13 (2001).</li></ol>

Gag-iCre analysen har vist sig for at være meget nyttige til screening af lægemiddelkandidater, som kan hæmme trinnet fusion af viral replikation. Når du udfører denne analyse, er de vigtigste skridt til at få et godt signal ligner mest viral infektion assays. Den første kritiske trin producerer høj titers af god kvalitet virus. Dette trin kræver, at 293T cellerne er passaged ofte (mindst 1 x hver 48 h), så de ikke bliver overconfluent og klumper sig sammen. Derudover kan det være værd at eksperimentere med f...

Behovet for romanen antiretroviral terapi har bedt om udviklingen af høj overførselshastighed skærme for hæmmere af adgang til HIV-1. Gag-iCre reporter assay er udviklet til at identificere hæmmere af viral entry på trinnet fusion i en celle til celle infektion system af specielt måling viral membran fusion med vært cellemembranen1. En analyse blev udviklet til at screene for romanen hæmmere, der handlede specifikt på de tidlige stadier af HIV-1 infektion frem til viral membran fusion. En udfordring til at måle celle-celle infektion er, at den oprindelige inokulum indeholder inficerede donor celler og ininfected target-cellerne, så måle ny infektion er vanskelig at skelne fra inputcellerne for. Det ideelle system ville indebære en heterolog gen markør, der kan være fremkaldt ved indledningen af en target cell infektion og er ikke til stede i cellen donor. En populær viral indhold blanding analyse baseret på en viral protein-enzym fusion, BlaM-benzindampgenvinding, kan være effektive, men har begrænsninger for høj overførselshastighed, celle-celle screening2. Denne analyse indebærer en beta-lactamase (BlaM) reporter gen, der er smeltet til HIV-1 benzindampgenvinding, pakket ind i virioner og leveres i target-cellerne ved viral membran fusion. Substrat CCF2-AM er indlæst i cytoplasma af target-cellerne og gennemgår et fluorescens Skift ved spaltning. CCF2-AM substrat er dyre og kan være uoverkommelig for høj overførselshastighed skærme. For at skelne mellem donor- og target-cellerne, er det nødvendigt at dye-etiketten target populationer. Endelig kræver protokollen flere vask og inkubering trin, som kan være besværlige og bekostelige ved test af stort antal forbindelser.
Gag-iCre analysen blev udviklet som en løsning på disse spørgsmål, at udvikle en høj overførselshastighed screening for hæmmere af fusion i celle til celle transmission. Dette system kræver ikke substrat til indlæses i celler. Analysen kan også bruges til celle-gratis undersøgelser og kan tilpasses til andre virale fusion undersøgelser ved hjælp af pseudo maskinskrevet HIV-1 Gag-iCre viruspartikler. HIV Env medieret celle-celle fusion assays kan måle virus Env protein-medieret cellefusion, men disse ikke brug faktiske viruspartikler, som HIV-1 Gag-iCre assay gør3,4,5. Denne analyse kan læses med flow flowcytometri eller Fluorescens mikroskopi. Det har held været anvendt til at screene FDA bibliotek samt et lille bibliotek med purinergic hæmmere1,6. Andre efterforskere har også identificeret purinergic hæmmere i HIV-1 fusion ved hjælp af en tilpasset og optimeret høj overførselshastighed fusion assay, der rapporterer overførsel af virus-indkapslede beta-lactamase til cytoplasma7,8 .
Virussen Gag-iCre var designet med en lignende tilgang til Gag-iGFP virus, indsætte Cre recombinase mellem matrix og kapsid, flankeret af HIV-1 protease websteder9. Cre enzym er lavet som en forløber, indsættes i den Gag polyprotein, der modnes når HIV-1 protease aktiveres i den fremspirende virus partikel. Cre levering, er derfor afhængige af levering af indholdet af en protease-aktiveret HIV-1 partikel i en target cell via en viral membran fusion proces. To versioner af protokollen er angivet her. Først bruger en HIV-1 smittede befolkning til at inficere målceller for at studere direkte celle til celle overførsel af HIV. Den anden version bruger en celle-gratis virus til at studere en celle-gratis viral infektion. Celle til celle transmission analysen tager 7 dage til at fuldføre fra den dag cellerne er optøede eller 5 dage hvis cellerne er allerede optøet og passaged. Celle-fri infektion assay kan udføres i 5 dage hvis cellerne skal optøs og 3 dage, hvis cellerne er optøede og passaged. Vejledningen gives også til at generere en RG (rød til grøn) target cell linjen i den ønskede celletype (hvis en forudbestående RG target cell line ikke bruges) ved hjælp af et plasmid, lavet af Clevers Lab10. Det anbefales, at passende biosikkerhed forholdsregler træffes med virus og virus-udtrykker cellerne i denne analyse. Vi gennemfører den smitsomme del af denne analyse i et BSL2 + vævskultur facilitet. Når cellerne er rettet, kan de analyseres i standard flow flowcytometri og mikroskopi faciliteter.
Her beskriver vi anvendelsen af dette assay på skærmen om roman forbindelser der hæmmer HIV-1 viral membran fusion (figur 1). Purinergic receptorer er pro-inflammatoriske mediatorer. Vores laboratorium har påvist, at non-selektive hæmmere af purinergic receptorer fungerer som hæmmere af HIV-1 viral membran fusion6. Vi rapporterer, at udnyttelsen af denne analyse i høj overførselshastighed kan identificere roman HIV-1 viral membran fusion hæmmere. Vi demonstrere, at en hæmmer af klassen purinergic receptorer repræsenterer en ny klasse af HIV-1 viral membran fusion hæmmere.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td>Media for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R0883</td>
			<td>Media for Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16140-071</td>
			<td>Serum for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cosmic Calf Serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30087.03</td>
			<td>Serum for Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Pennecillin Streptomycin solution</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SV30010</td>
			<td>Penn/Strep used in both media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3073</td>
			<td>Used for Culture of Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10cm Tissue Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td>Used for Culture of 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plates (tissue culture Treated)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>Used for fusion assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyjet Transfection Reagent</td>
			<td>Signagen</td>
			<td>SL100688</td>
			<td>Used to transfect 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8537-100ML</td>
			<td>Used in wash steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Trypsin Protease</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td>For Trypsinization of 293 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Cell Line Nucleofector Kit V</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>VACA-1003</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque plus</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>17144002</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>13-678-11E</td>
			<td>For all tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P3020-CPS</td>
			<td>For all tissue culture and liquid handling steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex Syringe Filter (0.45 micron)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHA033</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile syringes</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>309656</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Nucleofector</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>2b</td>
			<td>for Nucleofection of Jurkats (various models available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>for flow cytometry analyss of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Hood</td>
			<td>Various models</td>
			<td>Fortessa 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-W PRE</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>32702</td>
			<td>Koo BK et al. Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures. Nature Methods 9:81-83 (2011).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCL10a1</td>
			<td>Novus Bio</td>
			<td>NBP2-29542</td>
			<td>Naviaux, RK, Costanzi, E, Haas, M and Verma, I. The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses. Journal of Virology 70: 5701-5705 (1996)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gag-iCre</td>
			<td>Benjamin Chen Lab</td>
			<td></td>
			<td>Esposito AM et al. A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry. Virology 490:6-16 (2016).</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion

Denne analyse er designet specifikt rapportere om HIV-1 fusion via udtryk for grøn fluorescerende proteiner (NGL) påvises af flow flowcytometri eller Fluorescens mikroskopi. En HIV-1 reporter virus (HIV-1 Gag-iCre) er genereret ved at indsætte Cre recombinase i HIV-1 genom mellem matrix og kapsid proteiner af Gag polyprotein. Dette resulterer i en emballage af Cre recombinase i viruspartikler, som derefter frigives ind i en målcelle linje stabilt udtrykker en Cre recombinase-aktiveret røde fluorescerende proteiner (RFP) til normal god landbrugspraksis Skift kassette. I tilstanden basal udtrykker denne kassette RFP kun. Efter levering af Cre recombinase i målcellen, RFP, flankeret af loxP websteder, punktafgifter, hvilket resulterer i normal god landbrugspraksis udtryk. Denne analyse kan bruges til at teste alle hæmmere af viral entry (specielt på trinnet fusion) i celle-fri og celle til celle infektion systemer og har været anvendt til at identificere en klasse af purinergic receptor antagonister som roman hæmmere af HIV-1 viral membran fusion.

Ikke-inficerede RG Jurkat celler udviser et lavt niveau af baggrunden normal god landbrugspraksis signal (0,3%) med en meget stærk RFP signal (figur 2A, ikke-inficerede kolonne). Infektion med Gag-iCre forårsager en stigning i normal god landbrugspraksis signal (24,9%) mens tilstedeværelsen af HIV-1 fusion hæmmer AMD3100 (20 µM) hæmmer udviklingen af dette signal, at bringe det ned til ikke-inficerede baggrundsværdier (0,34%). Når en hæmmer af en pos...

Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion at JoVE.com

A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion

Vi beskriver en celle-baseret analyse for at rapportere om HIV-1 fusion via udtryk for grøn fluorescerende proteiner kan påvises ved flow flowcytometri eller Fluorescens mikroskopi. Det kan bruges til at teste hæmmere af viral entry (specielt på trinnet fusion) i celle-fri og celle til celle infektion systemer.

En høj overførselshastighed Cre-Lox aktiveret Viral membran Fusion analyse for at identificere hæmmere af HIV-1 Viral membran Fusion

This assay is designed to specifically report on HIV-1 fusion via the expression of green fluorescent protein (GFP) detectable by flow cytometry or ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Etablering af en Liquid-dækket kultur Polarized humane luftveje Epitelial Calu-3-celler til at studere Host celle respons på luftvejspatogener<em&gt; In vitro</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

High-throughput Screening for Bredspektret Chemical hæmmere af RNA virus

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Konformationel Evaluering af HIV-1 trimere kappeglycoproteinerne hjælp af en celle-ELISA-assay

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis (NAME) Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis NAME Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-medieret Electrophoresis (NAME) Indhold Tillader hurtig identifikation af HIV-1 nucleocapsid inhibitorer

RNA or DNA folded in stable tridimensional folding are interesting targets in the development of antitumor or antiviral drugs. In the case of HIV-1, viral ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

Fag Phenomics: Fysiologiske tilgange til Karakterisere Novel virale proteiner

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

Udviklingen af ​​Frysetørret Loop-medierede Isotermiske Amplification reagenser til påvisning af<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Måling Influenza neuraminidase Inhibering Antistoftitere af Enzyme-linked lectin Assay

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Swab Sampling metode til påvisning af menneskelige Norovirus på overflader

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...