Name: a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion
Uploaded: 2018-08-14T14:00:00
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इस शोध को NIH/NIAID AI112423 और NIH/NIGMS GM113885 बेंजामिन K. चेन और NIH/NIAID K08-AI120806 को तिलिया H Swartz करने के लिए अनुदान का समर्थन किया गया था । हम माउंट सिनाई डीन फ्लो Cytometry कोर में Icahn स्कूल ऑफ मेडिसिन का शुक्रिया अदा करना चाहेंगे ।

1. लक्ष्य सेल लाइनों की पीढ़ी
नोट: यह चरण वैकल्पिक है; यदि मौजूदा आरजी लक्ष्य कक्ष पंक्ति का उपयोग कर रहा है, तो चरण 2 पर प्रारंभ करें ।
<ol><li>Cotransfect 10% भ्रूण गोजातीय के साथ Dulbecco के संशोधित ईगल के मध्यम (DMEM...

<ol>
	<li>Esposito, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+Cre-lox+activated+viral+membrane+fusion+assay+identifies+pharmacological+inhibitors+of+HIV+entry.">A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry.</a> Virology. 490, 6-16 (2016).</li><li>Cavrois, M., De Noronha, C., Greene, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+enzyme-based+assay+detecting+HIV-1+virion+fusion+in+primary+T+lymphocytes.">A sensitive and specific enzyme-based assay detecting HIV-1 virion fusion in primary T lymphocytes.</a> Nature Biotechnology. 20, 1151-1154 (2002).</li><li>Huerta, L., Lamoyi, E., Baez-Saldana, A., Larralde, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+envelope-dependent+cell-cell+fusion:+a+quantitative+fluorescence+cytometric+assay.">Human immunodeficiency virus envelope-dependent cell-cell fusion: a quantitative fluorescence cytometric assay.</a> Cytometry. 47, 100-106 (2002).</li><li>Sakamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+HIV+cell-cell+fusion+assay+by+using+two+genetically+modified+HeLa+cell+lines+and+reporter+gene.">Establishment of an HIV cell-cell fusion assay by using two genetically modified HeLa cell lines and reporter gene.</a> Journal of Virological Methods. 114, 159-166 (2003).</li><li>Herschhorn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+cell-cell+fusion+system+with+integrated+ability+to+measure+the+efficiency+and+specificity+of+HIV-1+entry+inhibitors.">An inducible cell-cell fusion system with integrated ability to measure the efficiency and specificity of HIV-1 entry inhibitors.</a> PLoS One. 6, e26731 (2011).</li><li>Swartz, T. H., Esposito, A. M., Durham, N. D., Hartmann, B. M., Chen, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2X-selective+purinergic+antagonists+are+strong+inhibitors+of+HIV-1+fusion+during+both+cell-to-cell+and+cell-free+infection.">P2X-selective purinergic antagonists are strong inhibitors of HIV-1 fusion during both cell-to-cell and cell-free infection.</a> Journal of Virology. 88, 11504-11515 (2014).</li><li>Marin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+HIV-Cell+Fusion+Assay+for+Discovery+of+Virus+Entry+Inhibitors.">High-Throughput HIV-Cell Fusion Assay for Discovery of Virus Entry Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 13, 155-166 (2015).</li><li>Giroud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+and+Functional+Profiling+of+Small-Molecule+HIV-1+Entry+and+Fusion+Inhibitors.">Screening and Functional Profiling of Small-Molecule HIV-1 Entry and Fusion Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 15, 53-63 (2017).</li><li>Hubner, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+(HIV-1)+Gag+localization+and+oligomerization+monitored+with+live+confocal+imaging+of+a+replication-competent,+fluorescently+tagged+HIV-1.">Sequence of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Gag localization and oligomerization monitored with live confocal imaging of a replication-competent, fluorescently tagged HIV-1.</a> Journal of Virology. 81, 12596-12607 (2007).</li><li>Koo, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+gene+expression+in+primary+Lgr5+organoid+cultures.">Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures.</a> Nature Methods. 9, 81-83 (2011).</li><li>Pear, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+high-titer+helper-free+retroviruses+by+transient+transfection.">Production of high-titer helper-free retroviruses by transient transfection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 90, 8392-8396 (1993).</li><li>Naviaux, R. K., Costanzi, E., Haas, M., Verma, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pCL+vector+system:+Rapid+production+of+helper-free,+high+titer,+recombinant+retroviruses.">The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses.</a> Journal of Virology. 70, 5701-5705 (1996).</li><li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Phosphate+Transfection.">Calcium Phosphate Transfection.</a> Current Protocols in Immunology. 10, 10-13 (2001).</li></ol>

चुप-iCre परख के लिए बहुत उपयोगी साबित हो गया है स्क्रीनिंग दवा उंमीदवारों जो वायरल प्रतिकृति के फ्यूजन कदम को बाधित कर सकते हैं । जब इस परख प्रदर्शन, सबसे महत्वपूर्ण कदम एक अच्छा संकेत पाने के लिए सबसे वाय?...

उपंयास एंटीरेट्रोवाइरल चिकित्सा के लिए आवश्यकता एचआईवी के अवरोधकों के लिए उच्च प्रवाह स्क्रीन के विकास के लिए प्रेरित किया है-1 प्रविष्टि । चुप-iCre रिपोर्टर परख विशेष रूप से मेजबान सेल झिल्ली1के साथ वायरल झिल्ली संलयन को मापने से एक सेल में फ्यूजन कदम पर वायरल प्रविष्टि के अवरोधकों की पहचान करने के लिए विकसित की है-सेल संक्रमण प्रणाली । एक परख उपंयास अवरोधकों कि एचआईवी के प्रारंभिक चरण-1 वायरल झिल्ली संलयन के बिंदु तक संक्रमण पर विशेष रूप से काम के लिए स्क्रीन को विकसित किया गया था । कोशिका-कोशिका संक्रमण को मापने के लिए एक चुनौती यह है कि प्रारंभिक इनोक्युलम में संक्रमित दाता कोशिकाओं और संक्रमित लक्षित कोशिकाओं को शामिल किया जाता है, इसलिए नए संक्रमण को मापने से इनपुट कोशिकाओं से भेदभाव करना मुश्किल होता है । आदर्श प्रणाली एक heterologous जीन मार्कर कि एक लक्ष्य कोशिका संक्रमण की दीक्षा द्वारा प्रेरित किया जा सकता है शामिल है और दाता सेल में मौजूद नहीं है । एक लोकप्रिय वायरल एक वायरल प्रोटीन के आधार पर परख मिश्रण सामग्री-एंजाइम फ्यूजन, दोष-Vpr, प्रभावी हो सकता है, लेकिन उच्च प्रवाह के लिए सीमाएं हैं, सेल सेल स्क्रीनिंग2। इस परख एक बीटा lactamase (दोष) रिपोर्टर जीन है कि एचआईवी से जुड़े-1 Vpr, virions में पैक, और वायरल झिल्ली संलयन पर लक्षित कोशिकाओं में दिया शामिल है । सब्सट्रेट CCF2-AM लक्ष्य कोशिकाओं के कोशिका द्रव्य में भरी हुई है और दरार पर एक प्रतिदीप्ति बदलाव से गुजरती है । CCF2 सब्सट्रेट महंगा है और उच्च प्रवाह स्क्रीन के लिए प्रतिबंधित किया जा सकता है । आदेश में दाता और लक्ष्य कोशिकाओं भेद करने के लिए, यह आवश्यक है डाई-लेबल लक्ष्य आबादी । अंत में, प्रोटोकॉल कई धोने और गर्मी कदम है जो भारी और महंगा हो सकता है जब यौगिकों की बड़ी संख्या के परीक्षण की आवश्यकता है ।
चुप-iCre परख इन मुद्दों के लिए एक समाधान के रूप में विकसित किया गया था, सेल में फ्यूजन के अवरोधकों के लिए एक उच्च प्रवाह स्क्रीनिंग को विकसित करने के लिए सेल संचरण । इस प्रणाली सब्सट्रेट कोशिकाओं में लोड करने के लिए की आवश्यकता नहीं है. परख भी सेल मुक्त अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और अंय वायरल संलयन छद्म टाइप एचआईवी-1 ढकोसला-iCre वायरस कणों का उपयोग कर अध्ययन के लिए अनुकूल है । एचआईवी Env मध्यस्थता सेल-सेल फ्यूजन परख वायरस Env प्रोटीन के उपाय कर सकते सेल संलयन मध्यस्थता, लेकिन इन एचआईवी के रूप में वास्तविक वायरस कणों का उपयोग नहीं करते-1 चुप-iCre परख3,4,5करता है । इस परख प्रवाह cytometry या प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के साथ पढ़ा जा सकता है । यह सफलतापूर्वक एफडीए पुस्तकालय के रूप में के रूप में अच्छी तरह से purinergic1,6के एक छोटे पुस्तकालय स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । अंय जांचकर्ताओं को भी एचआईवी में purinergic अवरोधकों की पहचान-1 फ्यूजन एक अनुकूलित और अनुकूलित उच्च प्रवाह संलयन परख कि वायरस के हस्तांतरण-encapsulated बीटा-lactamase कोशिका द्रव्य7,8 में रिपोर्ट का उपयोग कर .
चुप-iCre वायरस चुप-iGFP वायरस के लिए एक समान दृष्टिकोण के साथ बनाया गया था, मैट्रिक्स और कैप्सिड के बीच Cre recombinase डालने, एचआईवी द्वारा पार्श्व-1 चिढ़ा साइटें9। Cre एंजाइम एक ढोंग polyprotein के भीतर डाला है कि परिपक्व जब एचआईवी 1 चिढ़ा नवजात वायरस कण के भीतर सक्रिय है अग्रदूत के रूप में किया जाता है । Cre वितरण, इस प्रकार, एक एक वायरल झिल्ली संलयन प्रक्रिया के माध्यम से एक लक्ष्य सेल में एक तंग-एचआईवी सक्रिय-1 कण की सामग्री के वितरण पर निर्भर है । प्रोटोकॉल के दो संस्करणों यहां प्रदान की जाती हैं । पहले एक एचआईवी-1 संक्रमित आबादी को संक्रमित लक्ष्य कोशिकाओं का उपयोग करता है, के लिए प्रत्यक्ष सेल अध्ययन करने के लिए-एचआईवी के सेल संचरण । दूसरे संस्करण एक सेल मुक्त वायरस का उपयोग करता है एक सेल मुक्त वायरल संक्रमण का अध्ययन । कोशिका के लिए सेल संचरण परख दिन कोशिकाओं गल रहे हैं, या 5 दिन अगर कोशिकाओं को पहले से ही गल रहे है और मार्ग से पूरा करने के लिए 7 दिन लगते हैं । सेल मुक्त संक्रमण परख 5 दिनों में किया जा सकता है अगर कोशिकाओं को गल और 3 दिन अगर कोशिकाओं गल और पारित कर रहे है की जरूरत है । निर्देश भी एक आरजी (रेड-टू-ग्रीन) लक्ष्य सेल लाइन में वांछित सेल प्रकार (अगर एक मौजूदा आरजी लक्ष्य सेल लाइन का उपयोग नहीं किया जा रहा है) चालाकी10लैब द्वारा बनाई गई प्लाज्मिड का उपयोग कर उत्पंन करने के लिए दिए गए हैं । यह अनुशंसित है कि उचित सुरक्षा सावधानियों वायरस और इस परख में वायरस व्यक्त कोशिकाओं के साथ लिया जाता है । हम एक BSL2 + ऊतक संस्कृति की सुविधा में इस परख के संक्रामक भाग आचरण । कोशिकाओं को ठीक करने के बाद, वे मानक प्रवाह cytometry और सूक्ष्म सुविधाओं में विश्लेषण किया जा सकता है ।
यहाँ हम उपन्यास यौगिकों कि एचआईवी-1 वायरल झिल्ली फ्यूजन को बाधित करने के लिए स्क्रीन करने के लिए इस परख के आवेदन का वर्णन (चित्रा 1). Purinergic रिसेप्टर्स समर्थक भड़काऊ मध्यस्थों हैं । हमारी प्रयोगशाला का प्रदर्शन किया है कि गैर purinergic रिसेप्टर्स के चुनिंदा अवरोधकों के रूप में एचआईवी के अवरोधकों-1 वायरल झिल्ली फ्यूजन6. हम रिपोर्ट है कि उच्च प्रवाह में इस परख के उपयोग के उपंयास एचआईवी-1 वायरल झिल्ली फ्यूजन अवरोधकों की पहचान कर सकते हैं । हम यह प्रदर्शित करता है कि रिसेप्टर्स के purinergic वर्ग के एक अवरोधक एचआईवी-1 वायरल झिल्ली फ्यूजन अवरोधकों के एक उपंयास वर्ग का प्रतिनिधित्व करता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td>Media for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R0883</td>
			<td>Media for Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16140-071</td>
			<td>Serum for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cosmic Calf Serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30087.03</td>
			<td>Serum for Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Pennecillin Streptomycin solution</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SV30010</td>
			<td>Penn/Strep used in both media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3073</td>
			<td>Used for Culture of Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10cm Tissue Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td>Used for Culture of 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plates (tissue culture Treated)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>Used for fusion assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyjet Transfection Reagent</td>
			<td>Signagen</td>
			<td>SL100688</td>
			<td>Used to transfect 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8537-100ML</td>
			<td>Used in wash steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Trypsin Protease</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td>For Trypsinization of 293 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Cell Line Nucleofector Kit V</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>VACA-1003</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque plus</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>17144002</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>13-678-11E</td>
			<td>For all tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P3020-CPS</td>
			<td>For all tissue culture and liquid handling steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex Syringe Filter (0.45 micron)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHA033</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile syringes</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>309656</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Nucleofector</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>2b</td>
			<td>for Nucleofection of Jurkats (various models available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>for flow cytometry analyss of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Hood</td>
			<td>Various models</td>
			<td>Fortessa 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-W PRE</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>32702</td>
			<td>Koo BK et al. Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures. Nature Methods 9:81-83 (2011).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCL10a1</td>
			<td>Novus Bio</td>
			<td>NBP2-29542</td>
			<td>Naviaux, RK, Costanzi, E, Haas, M and Verma, I. The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses. Journal of Virology 70: 5701-5705 (1996)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gag-iCre</td>
			<td>Benjamin Chen Lab</td>
			<td></td>
			<td>Esposito AM et al. A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry. Virology 490:6-16 (2016).</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion

इस परख के लिए विशेष रूप से एचआईवी पर रिपोर्ट-ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति के जरिए 1 संलयन (GFP) प्रवाह cytometry या प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा detectable बनाया गया है । एक एचआईवी-1 रिपोर्टर वायरस (एचआईवी-1 ढकोसला-iCre) एचआईवी में Cre recombinase डालने-मैट्रिक्स और झूठ polyprotein के कैप्सिड प्रोटीन के बीच 1 जीनोम के द्वारा उत्पंन होता है । वायरस कणों में Cre recombinase की एक पैकेजिंग में यह परिणाम है, जो तो एक लक्ष्य सेल लाइन में जारी छुरा एक Cre recombinase-आरएफपी स्विच कैसेट के लिए लाल फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) सक्रिय व्यक्त । बेसल राज्य में यह कैसेट आरएफपी ही व्यक्त करता है. लक्ष्य कक्ष में Cre recombinase के वितरण के बाद, आरएफपी, loxP साइटों, उत्पाद, GFP अभिव्यक्ति में जिसके परिणामस्वरूप द्वारा पार्श्व । इस परख के लिए वायरल प्रवेश के किसी भी अवरोधकों का परीक्षण किया जा सकता है (विशेष रूप से संलयन चरण में) सेल मुक्त और सेल में करने के लिए सेल संक्रमण प्रणालियों और purinergic रिसेप्टर विरोधी के एक वर्ग की पहचान के लिए इस्तेमाल किया गया है के रूप में एचआईवी के उपंयास अवरोधों-1 वायरल झिल्ली संलयन ।

अनसंक्रमित आरजी Jurkat सेल एक बहुत मजबूत आरएफपी सिग्नल (चित्रा 2a, अनसंक्रमित कॉलम) के साथ बैकग्राउंड GFP सिग्नल (०.३%)) के निम्न स्तर का प्रदर्शन करते हैं । झूठ के साथ संक्रमण-iCre GFP संकेत मे?...

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A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion

हम एक सेल का वर्णन करने के लिए आधारित परख एचआईवी पर रिपोर्ट करने के लिए हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति के माध्यम से 1 फ्यूजन प्रवाह cytometry या प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा । यह वायरल प्रवेश के अवरोधकों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता (विशेष रूप से संलयन कदम पर) सेल में मुक्त और सेल-टू-सेल संक्रमण प्रणालियों ।

एक उच्च प्रवाह Cre-लोक्स सक्रिय वायरल झिल्ली फ्यूजन परख एचआईवी के अवरोधकों की पहचान के लिए-1 वायरल झिल्ली संलयन

This assay is designed to specifically report on HIV-1 fusion via the expression of green fluorescent protein (GFP) detectable by flow cytometry or ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

एक पैन वायरल माइक्रोएरे परख (Virochip) का प्रयोग वायरल रोगज़नक़ों के लिए नैदानिक ​​नमूनों स्क्रीन

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying और मानक नैदानिक ​​Assays द्वारा जांच की सीमा से नीचे वायरल लोड के साथ एचआईवी संक्रमित व्यक्तियों में एचआईवी -1 शाही सेना बढ़ाता

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Polarized मानव airway के एक तरल से ढके संस्कृति की स्थापना उपकला Calu 3 मेजबान सेल श्वसन रोगज़नक़ों रिस्पांस कोशिकाओं के अध्ययन<em&gt; इन विट्रो में</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

आरएनए वायरस के व्यापक स्पेक्ट्रम रासायनिक inhibitors के लिए उच्च throughput प्रदर्शन

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

एक सेल आधारित एलिसा परख का उपयोग एचआईवी -1 trimeric लिफाफा glycoproteins के गठनात्मक मूल्यांकन

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis (NAME) Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis NAME Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid एनीलिंग की मध्यस्थता वैद्युतकणसंचलन (नाम) परख एचआईवी -1 nucleocapsid inhibitors का तेजी से पहचान की अनुमति देता है

RNA or DNA folded in stable tridimensional folding are interesting targets in the development of antitumor or antiviral drugs. In the case of HIV-1, viral ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

फेज Phenomics: शारीरिक दृष्टिकोण उपन्यास वायरल प्रोटीन विशेषताएँ

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

की जांच के लिए Lyophilized लूप की मध्यस्थता इज़ोटेर्माल प्रवर्धन अभिकर्मकों का विकास<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

मापने एंजाइम से जुड़ी Lectin परख द्वारा इन्फ्लुएंजा neuraminidase निषेध एंटीबॉडी titers

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

पर सतहों मानव Norovirus की जांच के लिए स्वाब नमूने विधि

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...