Name: a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion
Uploaded: 2018-08-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion at JoVE.com

Denne forskningen ble støttet av tilskudd NIH/NIAID AI112423 og NIH/NIGMS GM113885 til Benjamin K. Chen og NIH/NIAID K08-AI120806 til Talia H. Swartz. Vi vil gjerne takke Icahn medisinavdelingen på Mount Sinai Deans flyt cytometri kjernen.

1. generasjon av målet cellelinjer
Merk: Dette trinnet er valgfritt. Hvis du bruker en eksisterende RG målet cellen linje, start på trinn 2.
<ol><li>Cotransfect en 70% confluent 10 cm plate av 293T celler11 [i 10 mL av Dulbeccos endret Eagle's medium (DMEM) med 10% fosterets bovin serum (FBS)] med pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE10 og pCL-10A112 (emballasje plasmider) i en 1:1 ratio (20 µg totale) bruker kalsium-...

<ol>
	<li>Esposito, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+Cre-lox+activated+viral+membrane+fusion+assay+identifies+pharmacological+inhibitors+of+HIV+entry.">A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry.</a> Virology. 490, 6-16 (2016).</li><li>Cavrois, M., De Noronha, C., Greene, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+enzyme-based+assay+detecting+HIV-1+virion+fusion+in+primary+T+lymphocytes.">A sensitive and specific enzyme-based assay detecting HIV-1 virion fusion in primary T lymphocytes.</a> Nature Biotechnology. 20, 1151-1154 (2002).</li><li>Huerta, L., Lamoyi, E., Baez-Saldana, A., Larralde, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+envelope-dependent+cell-cell+fusion:+a+quantitative+fluorescence+cytometric+assay.">Human immunodeficiency virus envelope-dependent cell-cell fusion: a quantitative fluorescence cytometric assay.</a> Cytometry. 47, 100-106 (2002).</li><li>Sakamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+HIV+cell-cell+fusion+assay+by+using+two+genetically+modified+HeLa+cell+lines+and+reporter+gene.">Establishment of an HIV cell-cell fusion assay by using two genetically modified HeLa cell lines and reporter gene.</a> Journal of Virological Methods. 114, 159-166 (2003).</li><li>Herschhorn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+cell-cell+fusion+system+with+integrated+ability+to+measure+the+efficiency+and+specificity+of+HIV-1+entry+inhibitors.">An inducible cell-cell fusion system with integrated ability to measure the efficiency and specificity of HIV-1 entry inhibitors.</a> PLoS One. 6, e26731 (2011).</li><li>Swartz, T. H., Esposito, A. M., Durham, N. D., Hartmann, B. M., Chen, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2X-selective+purinergic+antagonists+are+strong+inhibitors+of+HIV-1+fusion+during+both+cell-to-cell+and+cell-free+infection.">P2X-selective purinergic antagonists are strong inhibitors of HIV-1 fusion during both cell-to-cell and cell-free infection.</a> Journal of Virology. 88, 11504-11515 (2014).</li><li>Marin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+HIV-Cell+Fusion+Assay+for+Discovery+of+Virus+Entry+Inhibitors.">High-Throughput HIV-Cell Fusion Assay for Discovery of Virus Entry Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 13, 155-166 (2015).</li><li>Giroud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+and+Functional+Profiling+of+Small-Molecule+HIV-1+Entry+and+Fusion+Inhibitors.">Screening and Functional Profiling of Small-Molecule HIV-1 Entry and Fusion Inhibitors.</a> Assay and Drug Development Technologies. 15, 53-63 (2017).</li><li>Hubner, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+(HIV-1)+Gag+localization+and+oligomerization+monitored+with+live+confocal+imaging+of+a+replication-competent,+fluorescently+tagged+HIV-1.">Sequence of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Gag localization and oligomerization monitored with live confocal imaging of a replication-competent, fluorescently tagged HIV-1.</a> Journal of Virology. 81, 12596-12607 (2007).</li><li>Koo, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+gene+expression+in+primary+Lgr5+organoid+cultures.">Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures.</a> Nature Methods. 9, 81-83 (2011).</li><li>Pear, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+high-titer+helper-free+retroviruses+by+transient+transfection.">Production of high-titer helper-free retroviruses by transient transfection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 90, 8392-8396 (1993).</li><li>Naviaux, R. K., Costanzi, E., Haas, M., Verma, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pCL+vector+system:+Rapid+production+of+helper-free,+high+titer,+recombinant+retroviruses.">The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses.</a> Journal of Virology. 70, 5701-5705 (1996).</li><li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Okayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Phosphate+Transfection.">Calcium Phosphate Transfection.</a> Current Protocols in Immunology. 10, 10-13 (2001).</li></ol>

Gag-iCre analysen har vist seg for å være svært nyttig for screening narkotika kandidater som kan hemme fusion trinn i viral replikasjon. Når du utfører denne analysen, er de viktigste trinnene å få et godt signal like mest viral infeksjon analyser. Det første kritiske trinnet produserer høy titers av god kvalitet virus. Dette trinnet krever at 293T cellene er passaged ofte (minst 1 x hver 48 h) så de ikke blir overconfluent og clump sammen. I tillegg kan det være verdt å eksperimentere med forskjellige hva m...

Behovet for romanen antiretroviral terapi har bedt utviklingen av høy gjennomstrømming skjermene hemmere av HIV-1 oppføring. Gag-iCre reporter analysen er utviklet for å identifisere hemmere av viral oppføringen ved fusion trinn i en celle til celle infeksjon systemet ved å måle spesielt viral membran fusjon med verten celle membran1. En analysen ble utviklet til skjermen for romanen hemmere som fungerte spesielt i de tidlige stadiene av HIV-1 smitte opp til punktet av viral membran fusion. En utfordring å måle celle-celle infeksjon er at det første inoculum inneholder infiserte donor cellene og ininfected mål, så måle ny infeksjon er vanskelig å skille fra innsettingscellene. Det ideelle systemet ville innebære en heterologous gene markør som kan indusert ved initiering av en målet cellen infeksjon og finnes ikke i giveren cellen. En populær viral innhold blanding analysen basert på en viral protein-enzym fusion, BlaM-Vpr, kan være effektive, men har begrensninger for høy ytelse, celle-celle screening2. Denne analysen omfatter en beta-lactamase (BlaM) reporter genet som er sammensmeltet med HIV-1 Vpr, pakket inn i virions og leveres til målcellene på viral membran fusion. Underlaget CCF2-AM er lastet inn i cytoplasma av målcellene og gjennomgår et fluorescens skifte på cleavage. CCF2-AM underlaget er dyrt og være uoverkommelige for høy gjennomstrømming skjermer. For å skille giver og målet celler, er det nødvendig å fargestoff-label målet befolkningen. Til slutt, protokollen krever flere vask og inkubasjon trinn som kan være plagsom og kostbare når testing stort antall forbindelser.
Gag-iCre analysen ble utviklet som en løsning på disse problemene, å utvikle en høy gjennomstrømming screening for hemmere av fusjon i celle til celle overføring. Dette systemet krever ikke substrat lastes inn celler. Analysen kan også brukes for celle-fri studier og tilpasses andre viral fusion studier med pseudo skrevet viruspartikler for HIV-1 Gag-iCre. HIV konv mediert celle-celle fusion analyser kan måle virus konv protein-mediert celle fusion, men disse ikke bruker faktiske viruspartikler som HIV-1 Gag-iCre analysen gjør3,4,5. Denne analysen kan leses med flyt cytometri eller fluorescens mikroskopi. Det har blitt brukt til skjermen FDA biblioteket samt et lite bibliotek purinergic hemmere1,6. Andre etterforskere har også identifisert purinergic hemmere i HIV-1 fusion bruker en tilpasset og optimert høy gjennomstrømming fusion analyse som overføring av virus-innkapslet beta-lactamase i cytoplasma7,8 -rapporter .
Gag-iCre virus ble designet med en lignende tilnærming til Gag-iGFP virus, sette grobunn recombinase mellom matrise og kapsid, flankert av HIV-1 protease nettsteder9. Grobunn enzymet er laget som en forløper satt inn i den Gag polyprotein som modnes når HIV-1 protease aktiveres innen begynnende viruset partikkel. Grobunn levering er dermed avhengig for levering av innholdet i en protease-aktivert HIV-1-partikkel i en målet cellen via en viral membran fusion prosessen. To versjoner av protokollen tilbys her. Først bruker en HIV-1 infisert befolkning for å infisere målcellene, å studere direkte celle til celle overføring av HIV. Den andre versjonen bruker en celle-gratis virus for å studere en celle virusinfeksjon. Celle til celle overføring analysen tar 7 dager å fullføre dagen cellene er tint, eller 5 dager hvis cellene er allerede Tint og passaged. Cellen gratis infeksjon analysen kan utføres i 5 dager hvis cellene må være Tint og 3 dager hvis cellene er Tint og passaged. Instruksjoner gitt også generere en RG (rød til grønn) målet cellen linje i ønsket celle type (Hvis en eksisterende RG målet cellen linje ikke brukes) bruker en plasmider skapt av Clevers laboratorium10. Det anbefales at riktig biosikkerhet forholdsregler er tatt med viruset og virus-uttrykke cellene i denne analysen. Vi gjennomfører den smittsomme delen av denne analysen i BSL2 + vev kultur anlegg. Når cellene er faste, kan de bli analysert i standard flyt cytometri og mikroskopi fasiliteter.
Her beskriver vi anvendelsen av denne analysen til skjermen for romanen forbindelser som hemmer HIV-1 viral membran fusion (figur 1). Purinergic reseptorer er pro-inflammatoriske mediatorer. Vårt laboratorium har vist at ikke-selektive hemmere av purinergic reseptorer fungere som hemmere av HIV-1 viral membran fusion6. Vi rapporterer at bruken av denne analysen i høy gjennomstrømning kan identifisere romanen HIV-1 viral membran fusion hemmere. Vi viser at en inhibitor av purinergic klassen av reseptorer representerer en roman klasse av HIV-1 viral membran fusion hemmere.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5546</td>
			<td>Media for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R0883</td>
			<td>Media for Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16140-071</td>
			<td>Serum for 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cosmic Calf Serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30087.03</td>
			<td>Serum for Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Pennecillin Streptomycin solution</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SV30010</td>
			<td>Penn/Strep used in both media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3073</td>
			<td>Used for Culture of Jurkat Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10cm Tissue Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td>Used for Culture of 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Plates (tissue culture Treated)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>Used for fusion assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyjet Transfection Reagent</td>
			<td>Signagen</td>
			<td>SL100688</td>
			<td>Used to transfect 293 Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8537-100ML</td>
			<td>Used in wash steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyclone Trypsin Protease</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td>For Trypsinization of 293 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Cell Line Nucleofector Kit V</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>VACA-1003</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque plus</td>
			<td>GE Healthcare Life sciences</td>
			<td>17144002</td>
			<td>For Nucleofection of Jurkats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>13-678-11E</td>
			<td>For all tissue culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P3020-CPS</td>
			<td>For all tissue culture and liquid handling steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex Syringe Filter (0.45 micron)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHA033</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile syringes</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>309656</td>
			<td>For filtration of virus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amaxa Nucleofector</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>2b</td>
			<td>for Nucleofection of Jurkats (various models available)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>for flow cytometry analyss of samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Hood</td>
			<td>Various models</td>
			<td>Fortessa 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-W PRE</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>32702</td>
			<td>Koo BK et al. Controlled gene expression in primary Lgr5 organoid cultures. Nature Methods 9:81-83 (2011).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCL10a1</td>
			<td>Novus Bio</td>
			<td>NBP2-29542</td>
			<td>Naviaux, RK, Costanzi, E, Haas, M and Verma, I. The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high titer, recombinant retroviruses. Journal of Virology 70: 5701-5705 (1996)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gag-iCre</td>
			<td>Benjamin Chen Lab</td>
			<td></td>
			<td>Esposito AM et al. A high throughput Cre-lox activated viral membrane fusion assay identifies pharmacological inhibitors of HIV entry. Virology 490:6-16 (2016).</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput cre-lox activated viral membrane fusion assay to identify inhibitors of hiv-1 viral membrane fusion

Denne analysen er designet spesielt rapportere om HIV-1 fusion via uttrykk for grønne fluorescerende protein (GFP) oppdages av flyt cytometri eller fluorescens mikroskopi. En HIV-1 reporter virus (HIV-1 Gag-iCre) genereres ved å sette inn grobunn recombinase i HIV-1 genomet mellom matrix og kapsid proteiner av Gag polyprotein. Dette resulterer i en emballasje av grobunn recombinase i viruspartikler, som deretter sluppet inn en Målcelle linje stabilt uttrykke en grobunn recombinase-aktivert røde fluorescerende protein (RFP) på GFP bytte kassett. I basale staten uttrykker denne kassetten RFP bare. Etter levering av grobunn recombinase i målcellen, den RFP, flankert av loxP avgifter, noe som resulterer i GFP uttrykk. Denne analysen kan brukes til å teste noen hemmere av viral inngang (spesielt på fusion trinn) i celle-fri og celle-til-celle systemer og har blitt brukt til å identifisere en klasse purinergic reseptor antagonister som roman hemmere av HIV-1 viral membran fusion.

Infisert RG Jurkat celler utstilling lave bakgrunn GFP signal (0,3%) med en veldig sterk RFP signal (figur 2A, infisert kolonne). Infeksjon med Gag-iCre forårsaker en økning i GFP signal (24,9%), mens tilstedeværelsen av HIV-1 fusion hemmer AMD3100 (20 µM) hemmer utviklingen av signalet, bringe den til uninfected bakgrunn nivåer (0,34%). Når en inhibitor av en post fusion hendelsen den omvendte transkripsjon inhibitor AZT (2 µM) brukes, signalet påvir...

Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion at JoVE.com

A High-throughput Cre-Lox Activated Viral Membrane Fusion Assay to Identify Inhibitors of HIV-1 Viral Membrane Fusion

Vi beskriver en cellebasert analysen for å rapportere om HIV-1 fusion via uttrykk for grønne fluorescerende protein detectable av flyt cytometri eller fluorescens mikroskopi. Den kan brukes til å teste hemmere av viral inngang (spesielt på fusion trinn) i celle-fri og celle-til-celle systemer.

En høy gjennomstrømming grobunn-Lox aktivert Viral membran Fusion analysen for å identifisere hemmere av HIV-1 Viral membran Fusion

This assay is designed to specifically report on HIV-1 fusion via the expression of green fluorescent protein (GFP) detectable by flow cytometry or ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Etablering av en flytende dekket Culture of Polarized Menneskelig Airway Epiteliale Calu-3 Cells å studere Host Cell Response til luftveispatogener<em&gt; In vitro</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

Høy gjennomstrømming Screening for Bredspektret Chemical hemmere av RNA-virus

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

Conformational Evaluering av HIV-1 Trimeric kappeglykoproteiner Ved hjelp av en Cell-basert ELISA-analysen

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis (NAME) Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis NAME Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid annealing-mediert elektroforese (NAVN) analysen Lar Rapid Identifikasjon av HIV-1 nucleocapsid hemmere

RNA or DNA folded in stable tridimensional folding are interesting targets in the development of antitumor or antiviral drugs. In the case of HIV-1, viral ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

Fag Phenomics: Fysiologiske tilnærminger for å karakter Novel virale proteiner

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

Utvikling av lyofilisert Loop-mediert Isotermiske amplifiseringsreagenser for deteksjon av<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Måling av Influensa neuraminidase Inhibering antistofftitere ved enzym-bundet lektin Assay

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Pinne Prøvetaking metode for påvisning av humant Norovirus på overflater

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...