Name: spectrophotometric determination of phycobiliprotein content in cyanobacterium synechocystis
Uploaded: 2018-09-11T13:30:00
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プロトコルは、以前出版11から採用されました。T. Z.、d. ch. と j. Č. 教育省、青年および国家の持続可能性プログラムの中でチェコ共和国のスポーツによって支えられた私 (当社私)、許可番号 LO1415。J. Č。 また GA CR、許可番号 18-24397S によって支えられました。楽器やその他の施設へのアクセスは、システム生物学 (プロジェクトなし LM2015055) C4SYS チェコ研究基盤によって支えられました。M. A. s. はロシアの科学財団 [第 14-14-00904] からの助成金によって支えられました。

1 シアノ バクテリア栽培

<ol><li>エルレンマイヤー フラスコまたは < 10 (例えば、17 mM HEPES10を使用して) の pH を維持するためにバッファーに格納された BG11 の中20フォトバイオリアクター10,19 阻害細胞を養います。 注: 標準的な栽培条件温度制御を必要とする (通常は、30 ° C、最適温度は 35 ?...

<ol>
	<li>Mimuro, M., Kikuchi, H., Green, B. R., Parson, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+Systems+and+Energy+Transfer+in+Cyanophyta+and+Rhodophyta.">Antenna Systems and Energy Transfer in Cyanophyta and Rhodophyta.</a> Light-Harvesting Antennas in Photosynthesis. , 281-306 (2003).</li><li>Spear-bernstein, L., Miller, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+location+of+the+phycobiliprotein+light-harvesting+pigment+in+the+Cryptophyceae.">Unique location of the phycobiliprotein light-harvesting pigment in the Cryptophyceae.</a> Journal of Phycology. 25 (3), 412-419 (1989).</li><li>Kirst, H., Formighieri, C., Melis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+photosynthetic+efficiency+and+culture+productivity+in+cyanobacteria+upon+minimizing+the+phycobilisome+light-harvesting+antenna+size.">Maximizing photosynthetic efficiency and culture productivity in cyanobacteria upon minimizing the phycobilisome light-harvesting antenna size.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Bioenergetics. 1837 (10), 1653-1664 (2014).</li><li>Page, L. E., Liberton, M., Pakrasi, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+photoautotrophic+productivity+in+the+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+strain+PCC+6803+by+phycobilisome+antenna+truncation.">Reduction of photoautotrophic productivity in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 by phycobilisome antenna truncation.</a> Applied and Environmental Microbiology. 78 (17), 6349-6351 (2012).</li><li>Sonani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+production,+purification+and+applications+of+phycobiliproteins.">Recent advances in production, purification and applications of phycobiliproteins.</a> World Journal of Biological Chemistry. 7 (1), 100 (2016).</li><li>Bryant, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Molecular Biology of Cyanobacteria. , (1994).</li><li>Kaneko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+analysis+of+the+genome+of+the+unicellular+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+strain+PCC6803.+I.+Sequence+features+in+the+1+Mb+region+from+map+positions+64%+to+92%+of+the+genome.">Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. I. Sequence features in the 1 Mb region from map positions 64% to 92% of the genome.</a> DNA Research. 2, 191-198 (1995).</li><li>Kaneko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+analysis+of+the+genome+of+the+unicellular+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+strain+PCC6803.+II.+Sequence+determination+of+the+entire+genome+and+assignment+of+potential+protein-coding+regions.">Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. II. Sequence determination of the entire genome and assignment of potential protein-coding regions.</a> DNA Research. 3, 109-136 (1996).</li><li>Grigorieva, G., Shestakov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+in+the+cyanobacterium+Synechocystis+sp+6803.">Transformation in the cyanobacterium Synechocystis sp 6803.</a> FEMS Microbiology Letters. 13 (4), 367-370 (1982).</li><li>Zav&#345;el, T., Sinetova, M. A., B&#250;zov&#225;, D., Liter&#225;kov&#225;, P., &#268;erven&#253;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+model+cyanobacterium+Synechocystis+sp:+PCC+6803+autotrophic+growth+in+a+flat-panel+photobioreactor.">Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp: PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor.</a> Engineering in Life Sciences. 15 (1), (2015).</li><li>Zav&#345;el, T., O&#269;en&#225;&#353;ov&#225;, P., &#268;erven&#253;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+characterization+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+substrains+reveals+differences+in+sensitivity+to+abiotic+stress.">Phenotypic characterization of Synechocystis sp. PCC 6803 substrains reveals differences in sensitivity to abiotic stress.</a> PLoS One. 12 (12), e0189130 (2017).</li><li>Bennett, A., Bogorad, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+chromatic+adaption+in+a+filamentous+blue-green+alga.">Complementary chromatic adaption in a filamentous blue-green alga.</a> The Journal of Cell Biology. 58, 419-435 (1973).</li><li>L&#252;der, U. H., Knoetzel, J., Wiencke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acclimation+of+photosynthesis+and+pigments+to+seasonally+changing+light+conditions+in+the+endemic+antarctic+red+macroalga+Palmaria+decipiens.">Acclimation of photosynthesis and pigments to seasonally changing light conditions in the endemic antarctic red macroalga Palmaria decipiens.</a> Polar Biology. 24 (8), 598-603 (2001).</li><li>Evans, L. V., Lobban, C. S., Chapman, D. J., Kremer, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+spectral+composition+and+irradiance+level+on+pigment+levels+in+seaweeds.">The effects of spectral composition and irradiance level on pigment levels in seaweeds.</a> Experimental Phycology: A Laboratory Manual. , 123-133 (1988).</li><li>Sampath-Wiley, P., Neefus, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+estimating+R-phycoerythrin+and+R-phycocyanin+contents+from+crude+aqueous+extracts+of+Porphyra+(Bangiales,+Rhodophyta).">An improved method for estimating R-phycoerythrin and R-phycocyanin contents from crude aqueous extracts of Porphyra (Bangiales, Rhodophyta).</a> Journal of Applied Phycology. 19 (2), 123-129 (2007).</li><li>Chung, Y. H., Park, Y. M., Moon, Y. J., Lee, E. M., Choi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photokinesis+of+Cyanobacterium+Synechocystis+sp.+PCC+6803.">Photokinesis of Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.</a> Journal of Photoscience. 11 (3), 89-94 (2004).</li><li>Sun, L., Gault, P. M., Marler, H. 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A., B&#250;zov&#225;, D., Liter&#225;kov&#225;, P., &#268;erven&#253;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+model+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+PCC+6803+autotrophic+growth+in+a+flat-panel+photobioreactor.">Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor.</a> Engineering in Life Sciences. 15 (1), 122-132 (2015).</li><li>Hemlata, G., Fareha, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Anabaena+sp.+nccu-9+with+special+reference+to+phycocyanin.">Studies on Anabaena sp. nccu-9 with special reference to phycocyanin.</a> Journal of Algal Biomass Utilization. 2 (1), 30-51 (2011).</li><li>Rito-Palomares, M., Nuez, L., Amador, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+application+of+aqueous+two-phase+systems+for+the+development+of+a+prototype+process+for+c-phycocyanin+recovery+from+Spirulina+maxima.">Practical application of aqueous two-phase systems for the development of a prototype process for c-phycocyanin recovery from Spirulina maxima.</a> Journal of Chemical Technology &amp; Biotechnology. 76 (12), 1273-1280 (2001).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selenium-Containing+Allophycocyanin+Purified+from+Selenium-Enriched+Spirulina+platensis+Attenuates+AAPH-Induced+Oxidative+Stress+in+Human+Erythrocytes+through+Inhibition+of+ROS+Generation.">Selenium-Containing Allophycocyanin Purified from Selenium-Enriched Spirulina platensis Attenuates AAPH-Induced Oxidative Stress in Human Erythrocytes through Inhibition of ROS Generation.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (16), 8683-8690 (2011).</li><li>Nedbal, L., Trt&#237;lek, M., Cerven&#253;, J., Kom&#225;rek, O., Pakrasi, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+photobioreactor+system+for+precision+cultivation+of+photoautotrophic+microorganisms+and+for+high-content+analysis+of+suspension+dynamics.">A photobioreactor system for precision cultivation of photoautotrophic microorganisms and for high-content analysis of suspension dynamics.</a> Biotechnology and Bioengineering. 100 (5), 902-910 (2008).</li><li>Zav&#345;el, T., Knoop, H., Steuer, R., Jones, P. R., &#268;erven&#253;, J., Trt&#237;lek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+evaluation+of+ethylene+production+in+the+recombinant+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+PCC+6803+harboring+the+ethylene-forming+enzyme+by+membrane+inlet+mass+spectrometry.">A quantitative evaluation of ethylene production in the recombinant cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 harboring the ethylene-forming enzyme by membrane inlet mass spectrometry.</a> Bioresource Technology. 202, 142-151 (2016).</li><li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid.">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).</li><li>Lawrenz, E., Fedewa, E. J., Richardson, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+protocols+for+the+quantification+of+phycobilins+in+aqueous+phytoplankton+extracts.">Extraction protocols for the quantification of phycobilins in aqueous phytoplankton extracts.</a> Journal of Applied Phycology. 23 (5), 865-871 (2011).</li><li>Lea-Smith, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phycobilisome-Deficient+Strains+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+Have+Reduced+Size+and+Require+Carbon-Limiting+Conditions+to+Exhibit+Enhanced+Productivity.">Phycobilisome-Deficient Strains of Synechocystis sp. PCC 6803 Have Reduced Size and Require Carbon-Limiting Conditions to Exhibit Enhanced Productivity.</a> Plant Physiology. 165 (2), 705-714 (2014).</li><li>Seo, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+isolation+of+phycocyanin+from+Spirulina+platensis+associated+with+high-pressure+extraction+process.">Stable isolation of phycocyanin from Spirulina platensis associated with high-pressure extraction process.</a> International Journal of Molecular Sciences. 14 (1), 1778-1787 (2013).</li><li>Touloupakis, E., Cicchi, B., Torzillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioenergetic+assessment+of+photosynthetic+growth+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+in+continuous+cultures.">A bioenergetic assessment of photosynthetic growth of Synechocystis sp. PCC 6803 in continuous cultures.</a> Biotechnology for Biofuels. 8 (1), 133 (2015).</li><li>Touloupakis, E., Cicchi, B., Benavides, A. M. S., Torzillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+pH+on+growth+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+cultures+and+their+contamination+by+golden+algae+(Poterioochromonas+sp.).">Effect of high pH on growth of Synechocystis sp. PCC 6803 cultures and their contamination by golden algae (Poterioochromonas sp.).</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (3), 1333-1341 (2016).</li><li>Ishii, A., Hihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+AbrB-Like+Transcriptional+Regulator,+Sll0822,+Is+Essential+for+the+Activation+of+Nitrogen-Regulated+Genes+in+Synechocystis+sp.+PCC+6803.">An AbrB-Like Transcriptional Regulator, Sll0822, Is Essential for the Activation of Nitrogen-Regulated Genes in Synechocystis sp. PCC 6803.</a> Plant Physiology. 148 (1), 660-670 (2008).</li></ol>

このプロトコルでは、単純な高速で、再現性のあるモデル シアノ バクテリア阻害フィコビリタンパク質含量の定量法について説明します。セルの均質化、蛋白質の抽出、フィコシアニン、アロフィコシアニン定量化のいくつかの方法が比較され、最終的なプロトコルは、すべて単一の最適な手順の組み合わせを表します。代表的なデータとして光強度の増加の下で阻害細胞の?...

fPhycobiliproteins は原核生物のシアノ バクテリア (ラン藻) 光捕集アンテナといくつかの真核生物分類群 (Glaucophyta、紅藻の主要コンポーネントを表す水溶性色素蛋白複合体、およびCryptophyta)1。超分子複合体フィコビリソームを呼ばれてとして主に発生して、彼らは通常間質側Cryptophytaで、フィコビリタンパク質をローカライズする場所を除いて光合成膜の表面に接続されて、チラコイド ルーメン2。日までフィコビリタンパク質の 4 つのタイプが識別されている: コア アロフィコシアニンと末梢フィコシアニン、フィコエ リスリンと phycoerythrocyanin1。主要集光性複合体としてフィコビリソームは藻類やシアノ バクテリアの大量文化生産性の重要な要因の 1 つを表します。フィコビリソーム切り捨ては強い光3の下でバイオマス蓄積を高めることができることが実証されています。一方、中程度あるいは低照度下でアンテナ切り捨ては成長率とバイオマス蓄積低減3,4で起因しました。フィコビリタンパク質、食品添加物、化粧品業界、医薬品、食品の着色剤と蛍光として商業栽培されているプローブをフローサイトメトリー、蛍光イムノアッセイ蛍光顕微鏡5のアプリケーション。
このプロトコルは、モデル シアノ バクテリア阻害のフィコビリタンパク質の定量分析に焦点を当てください。シアノ バクテリアが、最も早く酸素光合成独立栄養;彼らは 24 億年6以上の地球の生物圏を形成しました。彼らは、窒素、炭素、酸素、およびその他の要素のグローバル物質循環に重要な役割を果たします。シアノ バクテリアの間で単細胞ひずみ阻害全体のゲノムを持つ最初のシアノ バクテリアだったのでユニークなポジションを得たシーケンス7、8、外因性 DNA9、当然のことながら変形、安定的かつ比較的高速な成長10,11を実行します。阻害アンテナのコアコンポーネントにアロフィコシアニン、不可欠な膜タンパク質に関連付けられてし、添付のフィコシアニンはチラコイド膜周辺に位置します。
フィコビリタンパク質抽出と定量化のためのいくつかのメソッドは、このプロトコルで比較されます。Cyanothece sp Synechococcuselongatus、スピルリナsp.、 Arthrospiraを含む他のシアノ バクテリアの系統だけでなく阻害、最終的な抽出プロシージャが正常に適用されましたsp.と藍藻の sp は、紅藻チノリモにも正常に適用されました。したがって、このプロトコルで提案する手法は、フィコビリタンパク質抽出のための普遍的な方法として考えることが。ここに抽出手順が説明されている最高のフィコビリタンパク質利回りクロロフィルの残渣の最も低いコンテンツと共に提供されるにもかかわらず、いくつかのテストの抽出方法は、総蛋白収量の結果、フィコビリタンパク質を抽出します。クロロフィルの内容を減らすことは、正しいフィコシアニン、アロフィコシアニン吸光光度定量のために不可欠だった。
フィコビリタンパク質吸収スペクトルが様々 な藻類やシアノ バクテリア種12,13,14,15,16,17の間で大きく異なるし、も単一のシアノ バクテリア属18系統。したがって、特定の波長と吸収係数としてフィコシアニン、アロフィコシアニン阻害での定量は一般的に他の系統に適用されません。また、フィコエ リスリンと他の藻類とシアノ バクテリアで見つけることができる phycoerythrocyanin、阻害は含まれません。阻害以外の系統のフィコビリタンパク質の定量を目的として、各緊張に吸光光度式を個別に評価することをお勧めします。
プロトコルには (細胞ペレットおよび 1 時間蛋白質の抽出の一晩凍結乾燥) 長いの 2 つの手順が含まれています、フィコビリタンパク質定量化のための総労働時間は 2 時間以内。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1588px;" width="1587">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Synechocystis sp. PCC 6803</td>
			<td style="width:417px;">Institut Pasteur, Paris, France</td>
			<td style="width:137px;">6803</td>
			<td style="width:627px;">Cyanobacterium strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roti-CELL PBS</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>9143.1</td>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS) solution, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf safe-lock tubes&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Eppendorf, Hamburk, Germany</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Safe-lock tubes 1.5 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">VWR 80-Place Storage System</td>
			<td style="width:417px;">VWR International, Radnor, Pennsylvania, USA</td>
			<td>30128-282</td>
			<td>Holder for safe-lock tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RAININ 100 &#181;l -1000 &#181;l&#160;</td>
			<td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td>
			<td>17014382</td>
			<td>Pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GP-LTS-A-1000&#181;L-/F-768/8</td>
			<td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td>
			<td>30389272</td>
			<td>Pipette tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rotina 420R</td>
			<td>Hettich, Kirchlengern, Germany</td>
			<td>4701</td>
			<td>Refrigerated centrifuge for 1.5 ml safe-lock tubes and 15 ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCexv 4010</td>
			<td>Liebherr, Bulle, Switzerland</td>
			<td>9005382197172</td>
			<td>Refrigerator and freezer -20&#160;&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Revco ExF -86&#176;C Upright Ultra-Low Temperature Freezer</td>
			<td style="width:417px;">Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">EXF24086V&#160;</td>
			<td>Freezer -80&#160;&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CoolSafe</td>
			<td>LaboGene, Liller&#248;d, Denmark</td>
			<td>7.001.000.615</td>
			<td>Freeze dryer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UV-2600</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>UV-2600</td>
			<td>Spectrophotometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hellma absorption cuvettes, semi Micro</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>Z600288&#160;</td>
			<td>VIS/UV-VIS semi-micro cuvettes 0.75-1.5 ml, spectral range 200-2500 nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silamat S6</td>
			<td>Ivoclar Vivadent, Schaan, Liechtenstein</td>
			<td>602286WU</td>
			<td>Homogenizer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Solid-glass beads</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>Z273627</td>
			<td>Glass bead of the diameter 2&#160;mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPA225D-0CE</td>
			<td>Sartorius AG, G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>SECURA225D-1OBR</td>
			<td>Analytical balances</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-Phycocyanin from Spirulina sp.&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>P2172</td>
			<td>Phycocyanin standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Allophycocyanin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>A7472</td>
			<td>Allophycocyanin standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bicinchoninic Acid Kit&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td style="width:137px;">BCA1, B9643</td>
			<td>Complete kit for total proteins determination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">AlgaeTron&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Photon System Instruments Ltd., Dr&#225;sov, Czech Republic</td>
			<td style="width:137px;">AG 130-ECO&#160;</td>
			<td>Cultivation chamber for E. flasks, with controllable light and atmosphere</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Photobioreactor</td>
			<td style="width:417px;">Photon System Instruments Ltd., Dr&#225;sov, Czech Republic</td>
			<td style="width:137px;">FMT-150</td>
			<td>Cultivation equipment for cyanobacteria and algae with completely controllable environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellometer&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Nexcelom Bioscience, Lawrence, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">Auto M10</td>
			<td>Cell counter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Corning 15 mL centrifuge tubes</td>
			<td style="width:417px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td style="width:137px;">CLS430791&#160;</td>
			<td>15 ml Centrifuge tube for dry weigth sampling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herasafe KS</td>
			<td style="width:417px;">Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">51024579</td>
			<td>Laminar flow hood</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spectrophotometric determination of phycobiliprotein content in cyanobacterium synechocystis

モデル シアノ バクテリア阻害フィコビリタンパク質含量の定量のための単純なプロトコルです。フィコビリタンパク質は、フィコビリソーム、シアノ バクテリアにおける主要集光性アンテナの最も重要なコンポーネントといくつかの藻類の分類群。阻害のフィコビリソームを含む 2 つのフィコビリタンパク質: フィコシアニン、アロフィコシアニン。このプロトコルでは、シンプルで効率的とフィコシアニン、アロフィコシアニンこのモデル シアノ バクテリアでの定量のための信頼性の高い方法をについて説明します。フィコビリタンパク質抽出吸光光度定量のいくつかの方法を比較しました。このプロトコルに従って抽出プロシージャもに応用したArthrospira sp.、 Cyanothece 、 Synechococcuselongatusの spスピルリナsp.など他のシアノ バクテリアの系統藍藻sp 紅藻チノリモに関して。様々 な分類から特定のフィコビリタンパク質の消散係数が異なることができ、それは、したがって、すべての単一のひずみの吸光光度定量法を個別に検証にオススメします。プロトコルは、少し時間が必要です、のみ標準装備が必要なので、任意の標準的な生命科学の研究所で実行できます。

BG11 栽培中20 (17 mM HEPES を補充) 25 ° c、50 µmol (光子) の強さの暖かい白色光の下で阻害されたシェーカーのエルレンマイヤー フラスコで培養として栽培初期メソッドのテスト/(m2·s) と養殖の雰囲気の中で 1% CO2 。、栽培期間中文化安全ロック チューブにサンプリングされた (15,000 x gで 5 分間実験室の温度) を遠心、上清が...

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Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

ここでは、定量的阻害吸光光度法によるシアノ バクテリアのフィコビリタンパク質の内容を決定するためのプロトコルを提案する.抽出手順でした; 他のシアノ バクテリアや藻類の系統に適用も正常にただし、色素の吸収スペクトルの違いは、各緊張に吸光光度式を個別にテストする必要が。

シアノ バクテリア阻害のフィコビリタンパク質の吸光光度定量

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

効力決意アッセイにおけるペプチドアゴニストの連続希釈のために調剤自動アコースティック

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

リン酸化部位決定のためのオリゴペプチド競合アッセイ

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Determination of the Glycogen Content in Cyanobacteria

シアノバクテリアにおけるグリコーゲン含有量の測定

Cyanobacteria accumulate glycogen as a major intracellular carbon and energy storage&#160;during photosynthesis. Recent developments in research have ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

高スループット、定量的なドットを使用して組織レベルで選択されたタンパク質の含有量の絶対測定のしみの分析 (おっ)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

植物の鉄含有量を測定するための比色定量法

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

付着性のセルのターゲット婚約を定量化するイメージングの高いコンテンツを使用してください。

Quantitating the interaction of small molecules with their intended protein target is critical for drug development, target validation and chemical probe ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

マイクロ Rna による天然リポタンパク質粒子の濃縮とその絶対/相対マイクロ Rna 含量とその細胞移動速度の決定

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

Spectrophotometric Screening for Potential Inhibitors of Cytosolic Glutathione S-Transferases

細胞細胞性グルタチオンSトランスレセファーゼの潜在的阻害剤に対する分光測定法

Glutathione S-transferases (GSTs) are metabolic enzymes responsible for the elimination of endogenous or exogenous electrophilic compounds by glutathione ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

質量光測定による抗体-抗原アフィニティーの迅速な測定

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

酵素の結晶化と構造決定:多用途マイクロ流体チップにおける連続結晶学による基質複合体

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

シアノ バクテリア阻害のフィコビリタンパク質の吸光光度定量

シアノバクテリア阻害のフィコビリタンパク質の吸光光度定量