Name: spectrophotometric determination of phycobiliprotein content in cyanobacterium synechocystis
Uploaded: 2018-09-11T13:30:00
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Foi adoptado o protocolo de uma anterior publicação de11. T. z., ch. D. e J. Č... foram apoiados pelo Ministério da educação, juventude e desporto da República Checa, no âmbito do programa nacional de sustentabilidade eu (NPU eu), conceder o número LO1415. J. Č... era também apoiada pelos GA CR, Grant number 18-24397S. Acesso aos instrumentos e outras instalações foi apoiado em infra-estrutura checo de investigação para a biologia de sistemas C4SYS (projeto não LM2015055). M. A. S. foi apoiado por uma bolsa da Fundação de ciência russo [n. º 14-14-00904].

1. cultivo de cianobactérias

<ol><li>Cultive células Synechocystis em Erlenmeyers ou em fotobiorreatores10,19 em buffer BG11 médio20 para manter um pH de < 10 (por exemplo, usando 17 mM HEPES10). Nota: As condições de cultivo padrão exigem uma temperatura controlada (normalmente, 30 ° C, a temperatura ideal é 35 ° C)21, iluminação (normalmente, uma lu...

<ol>
	<li>Mimuro, M., Kikuchi, H., Green, B. R., Parson, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antenna+Systems+and+Energy+Transfer+in+Cyanophyta+and+Rhodophyta.">Antenna Systems and Energy Transfer in Cyanophyta and Rhodophyta.</a> Light-Harvesting Antennas in Photosynthesis. , 281-306 (2003).</li><li>Spear-bernstein, L., Miller, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+location+of+the+phycobiliprotein+light-harvesting+pigment+in+the+Cryptophyceae.">Unique location of the phycobiliprotein light-harvesting pigment in the Cryptophyceae.</a> Journal of Phycology. 25 (3), 412-419 (1989).</li><li>Kirst, H., Formighieri, C., Melis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+photosynthetic+efficiency+and+culture+productivity+in+cyanobacteria+upon+minimizing+the+phycobilisome+light-harvesting+antenna+size.">Maximizing photosynthetic efficiency and culture productivity in cyanobacteria upon minimizing the phycobilisome light-harvesting antenna size.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Bioenergetics. 1837 (10), 1653-1664 (2014).</li><li>Page, L. E., Liberton, M., Pakrasi, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+photoautotrophic+productivity+in+the+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+strain+PCC+6803+by+phycobilisome+antenna+truncation.">Reduction of photoautotrophic productivity in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 by phycobilisome antenna truncation.</a> Applied and Environmental Microbiology. 78 (17), 6349-6351 (2012).</li><li>Sonani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+production,+purification+and+applications+of+phycobiliproteins.">Recent advances in production, purification and applications of phycobiliproteins.</a> World Journal of Biological Chemistry. 7 (1), 100 (2016).</li><li>Bryant, D. 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Sequence features in the 1 Mb region from map positions 64% to 92% of the genome.</a> DNA Research. 2, 191-198 (1995).</li><li>Kaneko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+analysis+of+the+genome+of+the+unicellular+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+strain+PCC6803.+II.+Sequence+determination+of+the+entire+genome+and+assignment+of+potential+protein-coding+regions.">Sequence analysis of the genome of the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC6803. II. Sequence determination of the entire genome and assignment of potential protein-coding regions.</a> DNA Research. 3, 109-136 (1996).</li><li>Grigorieva, G., Shestakov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+in+the+cyanobacterium+Synechocystis+sp+6803.">Transformation in the cyanobacterium Synechocystis sp 6803.</a> FEMS Microbiology Letters. 13 (4), 367-370 (1982).</li><li>Zav&#345;el, T., Sinetova, M. A., B&#250;zov&#225;, D., Liter&#225;kov&#225;, P., &#268;erven&#253;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+model+cyanobacterium+Synechocystis+sp:+PCC+6803+autotrophic+growth+in+a+flat-panel+photobioreactor.">Characterization of a model cyanobacterium Synechocystis sp: PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor.</a> Engineering in Life Sciences. 15 (1), (2015).</li><li>Zav&#345;el, T., O&#269;en&#225;&#353;ov&#225;, P., &#268;erven&#253;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+characterization+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+substrains+reveals+differences+in+sensitivity+to+abiotic+stress.">Phenotypic characterization of Synechocystis sp. PCC 6803 substrains reveals differences in sensitivity to abiotic stress.</a> PLoS One. 12 (12), e0189130 (2017).</li><li>Bennett, A., Bogorad, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+chromatic+adaption+in+a+filamentous+blue-green+alga.">Complementary chromatic adaption in a filamentous blue-green alga.</a> The Journal of Cell Biology. 58, 419-435 (1973).</li><li>L&#252;der, U. 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PCC 6803 autotrophic growth in a flat-panel photobioreactor.</a> Engineering in Life Sciences. 15 (1), 122-132 (2015).</li><li>Hemlata, G., Fareha, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Anabaena+sp.+nccu-9+with+special+reference+to+phycocyanin.">Studies on Anabaena sp. nccu-9 with special reference to phycocyanin.</a> Journal of Algal Biomass Utilization. 2 (1), 30-51 (2011).</li><li>Rito-Palomares, M., Nuez, L., Amador, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+application+of+aqueous+two-phase+systems+for+the+development+of+a+prototype+process+for+c-phycocyanin+recovery+from+Spirulina+maxima.">Practical application of aqueous two-phase systems for the development of a prototype process for c-phycocyanin recovery from Spirulina maxima.</a> Journal of Chemical Technology &amp; Biotechnology. 76 (12), 1273-1280 (2001).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selenium-Containing+Allophycocyanin+Purified+from+Selenium-Enriched+Spirulina+platensis+Attenuates+AAPH-Induced+Oxidative+Stress+in+Human+Erythrocytes+through+Inhibition+of+ROS+Generation.">Selenium-Containing Allophycocyanin Purified from Selenium-Enriched Spirulina platensis Attenuates AAPH-Induced Oxidative Stress in Human Erythrocytes through Inhibition of ROS Generation.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (16), 8683-8690 (2011).</li><li>Nedbal, L., Trt&#237;lek, M., Cerven&#253;, J., Kom&#225;rek, O., Pakrasi, H. 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R., &#268;erven&#253;, J., Trt&#237;lek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+evaluation+of+ethylene+production+in+the+recombinant+cyanobacterium+Synechocystis+sp.+PCC+6803+harboring+the+ethylene-forming+enzyme+by+membrane+inlet+mass+spectrometry.">A quantitative evaluation of ethylene production in the recombinant cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 harboring the ethylene-forming enzyme by membrane inlet mass spectrometry.</a> Bioresource Technology. 202, 142-151 (2016).</li><li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid.">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).</li><li>Lawrenz, E., Fedewa, E. J., Richardson, T. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+isolation+of+phycocyanin+from+Spirulina+platensis+associated+with+high-pressure+extraction+process.">Stable isolation of phycocyanin from Spirulina platensis associated with high-pressure extraction process.</a> International Journal of Molecular Sciences. 14 (1), 1778-1787 (2013).</li><li>Touloupakis, E., Cicchi, B., Torzillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioenergetic+assessment+of+photosynthetic+growth+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+in+continuous+cultures.">A bioenergetic assessment of photosynthetic growth of Synechocystis sp. PCC 6803 in continuous cultures.</a> Biotechnology for Biofuels. 8 (1), 133 (2015).</li><li>Touloupakis, E., Cicchi, B., Benavides, A. M. S., Torzillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+pH+on+growth+of+Synechocystis+sp.+PCC+6803+cultures+and+their+contamination+by+golden+algae+(Poterioochromonas+sp.).">Effect of high pH on growth of Synechocystis sp. PCC 6803 cultures and their contamination by golden algae (Poterioochromonas sp.).</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (3), 1333-1341 (2016).</li><li>Ishii, A., Hihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+AbrB-Like+Transcriptional+Regulator,+Sll0822,+Is+Essential+for+the+Activation+of+Nitrogen-Regulated+Genes+in+Synechocystis+sp.+PCC+6803.">An AbrB-Like Transcriptional Regulator, Sll0822, Is Essential for the Activation of Nitrogen-Regulated Genes in Synechocystis sp. PCC 6803.</a> Plant Physiology. 148 (1), 660-670 (2008).</li></ol>

Este protocolo descreve um método simples, rápido e reprodutível para a quantificação do teor de phycobiliprotein na associação modelo Synechocystis. Vários métodos de homogeneização de células, extração de proteínas e quantificação de ficocianina e allophycocyanin são comparados, e o protocolo final representa uma combinação das etapas de cada procedimento único ideais. Como dados representativos, o conteúdo de phycobiliproteins foi quantificado em células de Synechocystis sob cr...

fPhycobiliproteins são complexos de proteína-pigmento hidrossolúvel que representam os componentes principais das antenas de luz-colheita em procariontes cianobactérias (Cyanophyta) e vários táxons eucariontes (Glaucophyta, Rhodophyta e Cryptophyta)1. Eles ocorrem principalmente como complexos supramoleculares chamados ficobilissoma captadores e estão normalmente ligados à superfície das membranas fotossintéticas do lado do estroma, com excepção dos Cryptophyta, onde os phycobiliproteins são localizadas no tilacoides lúmen2. Foram identificados quatro tipos de phycobiliproteins até a data: allophycocyanin o núcleo e o periférico ficocianina, ficoeritrina e phycoerythrocyanin1. Como os principais complexos de luz-colheita, ficobilissoma captadores representam um dos fatores cruciais de produtividade de culturas em massa de algas e cianobactérias. Foi demonstrado que truncamento ficobilissoma captadores pode aumentar o acúmulo de biomassa sob luz forte3. Por outro lado, sob o modesta ou baixa irradiância, o truncamento de antena resultou em taxas de crescimento e acúmulo de biomassa a redução3,4. Phycobiliproteins comercialmente são usados como corantes de alimentos, medicamentos e aditivos alimentares, na indústria de cosmético e como fluorescência sondas com aplicações em citometria de fluxo fluorescentes imunoensaios e de microscopia de fluorescência5.
Este protocolo centra-se na determinação quantitativa de phycobiliproteins na associação modelo Synechocystis. Cianobactérias são os primeiros autotróficos fotossintéticos Membros; Eles têm sido formando da Biosfera da terra por mais de 2,4 bilhões de anos6. Eles jogam um papel crucial nos ciclos biogeoquímicos globais de carbono, nitrogênio, oxigênio e outros elementos. Entre cianobactérias, uma estirpe unicelular Synechocystis ganhou uma posição única, já que foi a primeira associação com o todo o genoma sequenciado7,8, é naturalmente transformável por exógeno DNA9, e Ele executa o crescimento estável e relativamente rápido10,11. Em Synechocystis, o componente central de antena, allophycocyanin, está associado com as proteínas de membrana integrais e a ficocianina anexada está localizada na periferia de membrana tilacoides.
Vários métodos de extração de phycobiliprotein e quantificação são comparados neste protocolo. O procedimento de extração final foi aplicado com êxito Synechocystis, bem como outras estirpes de cianobactérias, incluindo Cyanothece sp de Spirulina SP., Synechococcuselongatus,., intoxicante SP..e Nostoc SP. e foi também aplicado com sucesso algas vermelhas Porphyridium Dendrobrium. Portanto, o método desenvolvido no presente protocolo pode ser considerado como um método universal para a extração de phycobiliprotein. Apesar de alguns dos métodos de extração testados resultaram em rendimentos mais elevados de proteína total, o aqui descrito procedimento de extração, desde o mais alto phycobiliprotein produz juntamente com o menor teor de um resíduo de clorofila na extrato de phycobiliprotein. Redução do teor de clorofila um foi essencial para a correta ficocianina e quantificação espectrofotométrica de allophycocyanin.
Os espectros de absorção de phycobiliprotein pode variar significativamente entre diferentes algas e cianobactérias espécie12,13,14,15,16,17 e até mesmo entre várias cepas de cianobactérias único género18. Portanto, os comprimentos de onda específicos e coeficientes de absorção como usado para a determinação de ficocianina e allophycocyanin em Synechocystis não são geralmente aplicáveis a outras estirpes. Além disso, Synechocystis não contiver ficoeritrina e phycoerythrocyanin que pode ser encontrado em algumas outras algas e cianobactérias. Para a determinação de phycobiliproteins em cepas diferentes Synechocystis, recomenda-se avaliar as equações espectrofotométricas para cada estirpe individualmente.
Embora o protocolo contém duas etapas mais tempo (durante a noite de liofilização de pelotas celulares e extração da proteína 1 hora), o tempo de trabalho total para a quantificação de phycobiliproteins é não mais de 2 horas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1588px;" width="1587">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Synechocystis sp. PCC 6803</td>
			<td style="width:417px;">Institut Pasteur, Paris, France</td>
			<td style="width:137px;">6803</td>
			<td style="width:627px;">Cyanobacterium strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roti-CELL PBS</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>9143.1</td>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS) solution, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf safe-lock tubes&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Eppendorf, Hamburk, Germany</td>
			<td>30120086</td>
			<td>Safe-lock tubes 1.5 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">VWR 80-Place Storage System</td>
			<td style="width:417px;">VWR International, Radnor, Pennsylvania, USA</td>
			<td>30128-282</td>
			<td>Holder for safe-lock tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RAININ 100 &#181;l -1000 &#181;l&#160;</td>
			<td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td>
			<td>17014382</td>
			<td>Pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GP-LTS-A-1000&#181;L-/F-768/8</td>
			<td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td>
			<td>30389272</td>
			<td>Pipette tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rotina 420R</td>
			<td>Hettich, Kirchlengern, Germany</td>
			<td>4701</td>
			<td>Refrigerated centrifuge for 1.5 ml safe-lock tubes and 15 ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCexv 4010</td>
			<td>Liebherr, Bulle, Switzerland</td>
			<td>9005382197172</td>
			<td>Refrigerator and freezer -20&#160;&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Revco ExF -86&#176;C Upright Ultra-Low Temperature Freezer</td>
			<td style="width:417px;">Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">EXF24086V&#160;</td>
			<td>Freezer -80&#160;&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CoolSafe</td>
			<td>LaboGene, Liller&#248;d, Denmark</td>
			<td>7.001.000.615</td>
			<td>Freeze dryer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UV-2600</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>UV-2600</td>
			<td>Spectrophotometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hellma absorption cuvettes, semi Micro</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>Z600288&#160;</td>
			<td>VIS/UV-VIS semi-micro cuvettes 0.75-1.5 ml, spectral range 200-2500 nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silamat S6</td>
			<td>Ivoclar Vivadent, Schaan, Liechtenstein</td>
			<td>602286WU</td>
			<td>Homogenizer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Solid-glass beads</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>Z273627</td>
			<td>Glass bead of the diameter 2&#160;mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CPA225D-0CE</td>
			<td>Sartorius AG, G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>SECURA225D-1OBR</td>
			<td>Analytical balances</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-Phycocyanin from Spirulina sp.&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>P2172</td>
			<td>Phycocyanin standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Allophycocyanin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td>A7472</td>
			<td>Allophycocyanin standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bicinchoninic Acid Kit&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td style="width:137px;">BCA1, B9643</td>
			<td>Complete kit for total proteins determination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">AlgaeTron&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Photon System Instruments Ltd., Dr&#225;sov, Czech Republic</td>
			<td style="width:137px;">AG 130-ECO&#160;</td>
			<td>Cultivation chamber for E. flasks, with controllable light and atmosphere</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Photobioreactor</td>
			<td style="width:417px;">Photon System Instruments Ltd., Dr&#225;sov, Czech Republic</td>
			<td style="width:137px;">FMT-150</td>
			<td>Cultivation equipment for cyanobacteria and algae with completely controllable environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellometer&#160;</td>
			<td style="width:417px;">Nexcelom Bioscience, Lawrence, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">Auto M10</td>
			<td>Cell counter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Corning 15 mL centrifuge tubes</td>
			<td style="width:417px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td>
			<td style="width:137px;">CLS430791&#160;</td>
			<td>15 ml Centrifuge tube for dry weigth sampling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herasafe KS</td>
			<td style="width:417px;">Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:137px;">51024579</td>
			<td>Laminar flow hood</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spectrophotometric determination of phycobiliprotein content in cyanobacterium synechocystis

Este é um protocolo simples para a determinação quantitativa do teor de phycobiliprotein na associação modelo Synechocystis. Phycobiliproteins são os componentes mais importantes de ficobilissoma captadores, as grandes antenas de luz-colheita em cianobactérias e vários táxons de algas. Os ficobilissoma captadores de Synechocystis contêm dois phycobiliproteins: ficocianina e allophycocyanin. Este protocolo descreve uma simples, eficiente e confiável método para a determinação quantitativa de ficocianina e allophycocyanin na associação deste modelo. Comparou-se vários métodos de extração de phycobiliprotein e quantificação espectrofotométrica. O procedimento de extração, conforme descrito neste protocolo foi aplicado também com sucesso para outras cepas de cianobactérias como Cyanothece SP., Synechococcuselongatus, Spirulina sp.,sp intoxicante ., e Nostoc SP., bem como sobre algas vermelhas Porphyridium Dendrobrium. No entanto, os coeficientes de extinção de phycobiliproteins específicas de vários táxons podem diferir e, portanto, recomenda-se validar o método de quantificação espectrofotométrica para cada estirpe única individualmente. O protocolo requer pouco tempo e pode ser executado em qualquer laboratório de Ciências da vida padrão, pois requer equipamento padrão somente.

Para os testes do método inicial, Synechocystis era cultivada como culturas de lote em Erlenmeyers num agitador em BG11 cultivo médio20 (suplementado com 17 mM HEPES) a 25 ° C, sob uma luz branca quente de uma intensidade de 50 µmol (fótons) / (m 2·s) e com 1% de CO2 na atmosfera de cultivo. Durante o cultivo, as culturas foram amostradas para tubos de bloqueio seguro e centrifugaram (15.000 x g a temperatura do laborat...

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Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Aqui, apresentamos um protocolo para determinar quantitativamente o conteúdo de phycobiliprotein na associação Synechocystis , usando um método espectrofotométrico. O procedimento de extração foi aplicado também com sucesso para outras cepas de cianobactérias e algas; no entanto, devido às variações em espectros de absorção do pigmento, é necessário testar as equações espectrofotométricas para cada estirpe individualmente.

Determinação espectrofotométrica de Phycobiliprotein conteúdo em associação Synechocystis

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

Automated acústico de distribuição para a diluição de série do Peptide agonistas em potência Determinação Ensaios

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

Bioquímica

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

Ensaio de Competição Oligopeptídica para Determinação de Sítio de Fosforilação

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Determination of the Glycogen Content in Cyanobacteria

Determinação do conteúdo de glicogênio em cianobactérias

Cyanobacteria accumulate glycogen as a major intracellular carbon and energy storage&#160;during photosynthesis. Recent developments in research have ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

Alto Throughput, absoluta determinação do conteúdo de uma proteína selecionada em níveis de tecido usando quantitativa Dot Blot Analysis (QDB)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Um método colorimétrico para medir o teor de ferro nas plantas

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

Usando o índice elevado de imagem para quantificar o destino noivado em células aderentes

Quantitating the interaction of small molecules with their intended protein target is critical for drug development, target validation and chemical probe ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Enriquecimento de partículas de lipoproteína nativa com microRNA e subsequente determinação de seu conteúdo de microRNA absoluto/relativo e sua taxa de transferência celular

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

Spectrophotometric Screening for Potential Inhibitors of Cytosolic Glutathione S-Transferases

Triagem espectrofotométrica para potenciais inibidores de Glutathione Citosolítica S-Transferases

Glutathione S-transferases (GSTs) are metabolic enzymes responsible for the elimination of endogenous or exogenous electrophilic compounds by glutathione ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Determinação rápida da afinidade anticorpo-antígeno por fotometria em massa

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

Cristalização e Determinação Estrutural de uma Enzima:Complexo de Substrato por Cristalografia Serial em um Chip Microfluido Versátil

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...