Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

أشرفت على هذه الدراسة من شركة ميرك & Co., Inc.، كينيلورث، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكية. الممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

جميع إجراءات أقرتها لجنة الأخلاقيات المحلية (البشرية لجنة أخلاقيات البحوث، المركز الاستشفائي الجامعي دي نيس/Tumorothèque BB-0033-00025).
ملاحظة: هذا البروتوكول تحديداً يعدل لاستخدام التركيز جسم 3 22 على الملطخ المدينة الآلي متاحة تجارياً (يشار إليها أوتوستاينير هنا، انظر الجدول ل?...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

ونحن قد التحقق من صحة LDT أمثل استخدام تركيز الضد PD-L1 3 22, بمقارنته مع ال10،اختبار التجاري المصادق عليه سريرياً المقابلة11. 3 22 تتركز LDT المستندة إلى جسم أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100 ٪) وعينات عنق (~ 95 ٪) عند مقارنتها بتعبير "المدينة" PD-L1 تحدد باستخدام مقاي?...

وقد أظهرت التجارب السريرية الأخيرة كفاءة بيمبروليزوماب، أنسنة [مونوكلونل] IgG4 كابا ايستب جسم الذي يمنع التفاعل بين موت الخلايا المبرمج 1 (PD-1)، وأن يغاندس، PD-L1 و PD-L2، في علاج المرضى الذين يعانون من متقدمة NSCLC1،2،،من34.
حاليا، هو الموافقة على بيمبروليزوماب المعاملة للإعراب عن PD-L1 NSCLC في كلا المرضى العلاج-السذاجة مع تعبير PD-L1 TPS إيه فايف زيرو % ولا من مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR) أو الأورام اللمفاوية المتحولة كيناز (ALK) الورم الجينوم الانحرافات3 وعن سبق تعامل المرضى مع TPS PD-L1 إيه وان %1.
تعبير البروتين PD-L1 الكشف عنها بواسطة المدينة قد استخدمت على نطاق واسع من وصفها فحص العلامات البيولوجية تنبؤية للعلاجات المضادة-PD-1/PD-L1. في التجارب السريرية بيمبروليزوماب، مصممة TPS PD-L1 الحصول عليها مع الفورمالين--الثابتة جزءا لا يتجزأ من البارافين (FFPE) عينات الأنسجة باستخدام مقايسة رفيق PD-L1 "المدينة" 22 35. هذا التحليل قد أقرها "لنا الغذاء" والدواء (FDA)، وقد تم وضع علامة CE في أوروبا لتحديد الورم TPS PD-L15.
خيارات عالمية إضافية عبر المؤسسات لتقييمات موثوقة وعالية الجودة من TPS PD-L1 مع LDTs الذي استخدم تركيز الضد 22 3 ضرورية لدعم اتخاذ القرارات السريرية فيما يتعلق بأهلية المريض بيمبروليزوماب العلاج. عدد كبير من مختبرات علم الأمراض لا يحصلون على مقايسة PD-L1 "المدينة" 3 22 التشخيص رفيق. ولذلك، ضروري وضع LDTs موثوقة ومتسقة متوافقة مع منصات أوتوستاينير إضافية، ومتاحة على نطاق واسع في المدينة.
وعلاوة على ذلك، هناك حاجة إلى إنشاء LDTs باستخدام عينات الخلايا التي هي نوع العينة الوحيدة المتاحة كثيرا من مرضى NSCLC. التحقق من صحة المقايسة رفيق PD-L1 "المدينة" 3 22 ريسيكشنز وكور إبرة الخزعات، ويقوم إلا إذا كان القصبات غلة 100 ورم الخلايا. على الرغم من أن كثيرا ما يتم الحصول على أنواع العينات المذكورة أعلاه، عينات الخلايا التي تم جمعها بسهولة أكبر وهي نوع العينة المتاحة الأكثر شيوعاً في بعض المؤسسات6،7. ومع ذلك، هناك لا فحص التشخيص تم التحقق من صحتها المتاحة حاليا لتقييم التعبير PD-L1 في عينات عنق؛ LDTs موثوقة متوافقة مع عينات عنق ستيسر اختبار PD-L1 عالية الجودة.
وعلاوة على ذلك، عند وضع المصادقة LDT السريرية، ينبغي أن يجري في المدينة بطريقة مشابهة ل اختبار التجاري المصادق عليه سريرياً الموافق8. على سبيل المثال، ينبغي التحقق من عدة خطوات حاسمة للحصول على إشارة نفسه في مقاطع المسلسل مثل معايرة الأجسام المضادة وتأخير المعالجة المسبقة ووقت الحضانة و نظم التضخيم9.
ونحن مؤخرا بوضع LDT أمثل الذي يستخدم تركيز الضد 3 22 لتقييم التعبير PD-L1 في ورم الخزعات وعنق عينات10،11. يمكننا العثور على الفهرس أبجدي عالية مع LDT مقابل "المعيار الذهبي" المدينة PD-L1 3 22 مقايسة10،11. سوف تدعم هذا البروتوكول سريرياً المصادق عليها موثوقة وعالية الجودة PD-L1 اختبار مختلف المناطق على الصعيد العالمي.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

وافقت الأحادي بيمبروليزوماب لعلاج المرضى المصابين بسرطان الرئة الخلية غير الصغيرة PD-L1-الإعراب عن المتقدم (NSCLC) السطر الأول والثاني. إجراء اختبار للتعبير PD-L1 مع 3 22 رفيق PD-L1 إيمونوهيستوتشيميستري (المدينة) التشخيص المقايسة، الذي يعطي نسبة ورم نقاط (TPS)، وقد صودق على أنسجة الورم. لقد طورنا أمثل تطوير مختبر تجربة (LDT) يستخدم الركاز 3 22 جسم (Ab) في أوتوستاينير المدينة متاحة على نطاق واسع لعينات خزعة وعلم الخلايا. تم تقييم مع 120 أبواب إقران كل ورم الأنسجة وعينات خزعة TPS PD-L1 ومع 70 إقران عينات خزعة وعنق (يغسل الشعب الهوائية، n = 40؛ الاراقة الجنبي، ن = 30). قص Ab 3 22 LDT المستندة إلى التركيز أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100%)، وعلم الخلايا العينات (~ 95 ٪) بالمقارنة مع "المدينة" PD-L1 التعبير المحدد باستخدام مقايسة رفيق 3 22 PD-L1 "المدينة" في كل النقاط النقاط (% إيه وان، إيه فايف زيرو %). وستوسع LDT الأمثل المعروضة هنا، باستخدام تركيز Ab 3 22 لتحديد التعبير PD-L1 في كلا ورم الأنسجة وعينات عنق، قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم أهلية مرضى NSCLC للعلاج مع بيمبروليزوماب الأحادي بطريقة موثوقة واستنساخه.

استخدام الإجراء المعروضة هنا، وعلى النحو المبين بالتفصيل في هذه المجموعة الأخيرة منشورات10،11، صدق LDT الأمثل سريرياً مع 120 FFPE NSCLC المحفوظات خزعة عينات أخذت من المرضى الذي خضع لجراحة بتر أو خزعة في مستشفى الجامعة باستور، نيس، بين آذار/مارس 2007...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

3 22 باستخدام الأجسام المضادة-PD-L1 تركز على خزعة وعينات عنق من مرضى سرطان الرئة من الخلايا غير الصغيرة

لتوسيع قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم الأهلية للمرضى المصابين بسرطان الرئة للمعاملة مع بيمبروليزوماب، بطريقة موثوقة واستنساخه، قمنا بتطوير مقايسة يستخدم تركيز الضد 3 22 على نطاق واسع أوتوستاينير المناعي، لعينات خزعة وعلم الخلايا.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

هذه الطريقة باستخدام الأجسام المضادة 22C3 التركيز لتحديد التعبير PD-L1 في كل من أنسجة الورم وعينة الخلايا سوف توسع قدرة المختبرات على تقييم اختيار المرضى الذين يعانون من سرطان الرئة غير صغير الخلايا للعلاج المناعي بطريقة موثوقة وقابلة للتكرار. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها متطابقة للغاية مع معيار الذهب المقايسة وسوف تدعم موثوق بها، عالية الجودة PD-L1 اختبار في جميع أنحاء العالم. بشكل عام ، سيكافح أخصائيو الأمراض الجدد في هذه الطريقة بسبب التلطيخ الحبيبي الملاحظ أحيانًا.وعلاوة على ذلك، تلطيخ الخلايا البشرية هو إلى حد ما أكثر كثافة من تلك التي لوحظت مع معيار الذهب. ولذلك فإن تدريب أخصائيي الأمراض ضروري للحصول على تفسير صحيح لتلوين PD-L1 مع 22C3 LDT. إثبات الإجراء سيكون السيدة(مارام هاميلا)، فني من مختبري. للبدء، إصلاح أنسجة الورم في 10٪ محايد-buffered formalin في كاسيت وتضمين الكاسيت في البارافين كما هو مبين في بروتوكول النص. تضمين الأنسجة المتسللة داخل القالب الذي هو مليئة البارافين المنصهر.دع الأنسجة تبقى في القالب حتى يتوطد البارافين. بعد ذلك، استخدم ميكروتوم لقسم الأنسجة المدمجة البارافين بسمك ثلاثة ميكرومتر. نقل الشريط البارافين إلى شريحة المجهر الزجاجي المشحونة بشكل إيجابي.ثم جفف الشريحة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. أولاً ، اجمع غسيل الشعب الهوائية في محلول حافظ. نقل الغسيل إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.إضافة غرامين من DL-Dithiothreitol ودوامة الأنبوب لمدة 30 دقيقة، ثم الطرد المركزي في 250 مرة ز لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. إزالة عظمى وإضافة 10 ملليلتر من محلول المخاطي. هز العينة بسرعة متوسطة لمدة 20 دقيقة وطاردة مركزية عند 250 مرة ز لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.بعد ذلك، إزالة عظمى وإيداع بيليه الخلية في أنبوب جمع تحتوي على 10٪ محايد-buffered formalin. إضافة أربع قطرات من خلية عامل إعداد كتلة. نقل بيليه الخلية إلى كاسيت.إصلاح بيليه الخلية لالبارافين تضمين والقسم باستخدام العملية التي سبق وصفها لإعداد عينات أنسجة الورم. للبدء، الطاقة على الـ autostainer والكمبيوتر. انقر نقرا مزدوجا فوق رمز autostainer واختيار المستخدم.انقر على إنشاء تسمية ثم على بروتوكول. انقر نقراً مزدوجاً على بروتوكول 22C3. املأ بطاقة هوية المريض وانقر على طباعة.بعد ذلك، ضع التسمية على الشريحة. اضغط على الزر الموجود على درج الشريحة المختار لفتحه ووضع الشريحة المسماة على الوسادة الحرارية مع الملصق الذي يواجه الصعود و إلى الداخل. أغلق درج الشريحة.بعد ذلك، إزالة القبعات من موزعات. تحميل الكواشف على رف الكواشف. افتح غطاء محرك السيارة من البقعة ووضع رفوف الكاشف على الكواشف، والتأكد من أنها تناسب بشكل صحيح وعقد في الموقف، ثم إغلاق غطاء محرك السيارة.في البرنامج، انقر على الصك الذي سيتم استخدامه ثم انقر فوق تشغيل. في نهاية الإجراء IHC، استخدام مياه الصنبور مع قطرة واحدة من محلول التنظيف لشطف الشريحة لعدة ثوان. يجفف الشريحة عن طريق غمرها بشكل متسلسل في حمامين من الإيثانول لعدة ثوانٍ لكل منهما، ثم ضع الشريحة في آلة أغطية لتحميل زلة الغطاء تلقائيًا.للبدء في تقييم نوعية تلطيخ PD-L1 ، قم بتحليل الضوابط الإيجابية والسلبية قبل فحص عينة المريض. باستخدام المجهر، تأكد من وجود ما لا يقل عن 100 خلية ورم قابلة للحياة. في التكبير منخفضة من 4 مرات، وتقييم جميع المناطق الورم الإيجابي والسلبي الحفاظ عليها بشكل جيد.بعد ذلك، يسجل غشاء الخلية الجزئي أو الكامل تلطيخ وحساب درجة نسبة الورم عن طريق تقييم نسبة خلايا الورم PD-L1 إيجابية نسبة إلى جميع الخلايا السرطانية الموجودة في مناطق الورم المحفوظة بشكل جيد. في هذه الدراسة، يتم تقييم درجة نسبة الورم أو TPS لعينات خزعة الأنسجة المقترنة في كتل الخلايا المعدة من يغسل الشعب الهوائية أو الانصباب الجنبي. يتم استخدام أنماط تلطيخ تمثيلية مع عينات خزعة لمقارنة تركيز الأجسام المضادة 22C3 ضد اختبار مرافق PD-L1 IHC 22C3.معامل الارتباط بين الطبقة، والذي يستخدم لقياس الارتباط من نقاط TPS كمتغير مستمر، هو 99٪ بين LDT ومعيار الذهب. كما تستخدم أنماط تلطيخ تمثيلية مع عينات الخلايا لمقارنة 22C3-الأجسام المضادة التركيز ضد PD-L1 IHC 22C3 مصاحبة المقايسة. معدل التوافق من عينات خزعة وعلم الخلايا مع LDT هو أكبر من 95٪ عند استخدام أي من نقاط قطع TPS.معامل الارتباط بين الطبقة أثناء استخدام TPS كمتغير مستمر بين 0.88 و 0.90. مرة واحدة يتقن, هذه التقنية يعطي معدل التوافق عالية مع معيار الذهب في تقييم قطع للإيجابية أو علم الأنسجة الورم لكل من الأنسجة وعينات الخلايا. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أنه يجب تقييم العينات مع الإشارة إلى الشريحة HE وفي بعض الحالات الصعبة يمكن تنفيذ البقع التكميلية لتقييم الخلايا المناعية لاستبعاد سوء تفسير التعبير PD-L1 في الخلايا السرطانية فقط.بعد هذا الإجراء، يمكن تقييم عينات أخرى مثل خزعات الإبرة الدقيقة، EUS-FNAs أو فرش الشعب الهوائية. بعد وضعها في العيادات، يجب الحفاظ على قوة الفحص مع مرور الوقت من خلال السعي للحصول على الاعتماد، باتباع إجراءات التشغيل الموحدة، والمشاركة بانتظام في خطط تقييم الجودة الخارجية. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ بروتوكول الأمثل باستخدام 22C3 المضادة PD-L1 التركيز على السيارات IHC المتاحة على حد سواء عينات خزعة وعلم الخلايا من المرضى الذين يعانون من سرطان الرئة الخلايا غير الصغيرة.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

الرئة ورم الخلية تجنيد الإنزيم

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

ميكرورنا استناداً إلى خزعة سائلة: تجربة ميرنا البلازما التوقيع المصنف (MSC) "فحص سرطان الرئة"

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

طريقة بسيطة وسريعة للحصول على جودة عالية الورم الحمض النووي من العينات السريرية المرضية باستخدام جهائز بصمة اللمس

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

تلطيخ مطاطي على الشرائح جزءا لا يتجزأ من البارافين من أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

تحليل لغزو خلايا السرطان والمنتشر لمكافحة المخدرات فحص استخدام صفيف المائية الصغيرة-الدائرة (همكا)-على أساس لوحات

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

شبه التلقائي PD-L1 توصيف وتعداد الخلايا السرطانية المتداولة من غير الصغيرة خلية سرطان الرئة المرضى عن طريق الفلورة المناعية

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

الحساسية الإشعاعية للخلايا الجذعية السرطانية في خطوط خلايا سرطان الرئة

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

الكشف عن الحمض النووي خالية من الخلايا في عينات بلازما الدم من مرضى السرطان

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

العزل والتقييم الوظيفي للخلايا الجذعية لسرطان الثدي البشري من عينات الخلايا والأنسجة

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...