Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Denne undersøgelse blev sponsoreret af Merck & Co, Inc., Kenilworth, NJ, USA. Finansieringskilderne spillede ingen rolle i undersøgelse design, dataindsamling og analyse, beslutningen om at offentliggøre eller forberedelse af manuskriptet.

Alle procedurer er blevet godkendt af det lokale etiske udvalg (menneskelige videnskabsetisk Komité, Centre Hospitalier Universitaire de Nice/Tumorothèque BB-0033-00025).
Bemærk: Denne protokol reguleres specifikt til brugen af 22C 3 antistof koncentrere sig om et kommercielt tilgængelige automatiserede IHC stainer (kaldet som autostainer her, se Tabel af materialer) for tumor biopsier og cytologi prøver.
1. forberedelse af Tumor vævsprøver...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

Vi har valideret en optimeret LDT ved hjælp af 22C 3 PD-L1 antistof koncentrat, ved at sammenligne den med den tilsvarende klinisk validerede kommercielle test10,11. 22C 3 koncentreret antistof-baserede LDT viste en høj overensstemmelse mellem biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC udtryk bestemmes ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 assay på både ≥ 1% TPS og ≥50% TPS cut point. Som for nylig anbefalet af den internationale sammensl...

Nylige kliniske forsøg har vist effekt af pembrolizumab, en humaniseret monoklonalt IgG4 kappa isotype antistof, der blokerer interaktion mellem programmeret celledød 1 (PD-1) og dens ligander, PD-L1 og PD-L2, til behandling af patienter med Fremskreden NSCLC1,2,3,4.
I øjeblikket er pembrolizumab godkendt til behandling af PD-L1-udtrykker NSCLC i både behandling-naive patienter med et PD-L1 udtryk TPS ≥50% og ingen epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) eller Anaplastisk lymfom kinase (ALK) genomisk tumor aberrationer3 og for tidligere behandlede patienter med et PD-L1 TPS ≥ 1%1.
PD-L1 protein udtryk opdaget af IHC har været meget anvendt som en intelligent biomarkør assay for anti-PD-1/PD-L1 terapier. I pembrolizumab kliniske forsøg, blev PD-L1 TPS fremstillet med formalin-fast paraffin-embedded (FFPE) vævsprøver bestemt ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay5. Denne analyse er blevet godkendt af US Food and Drug Administration (FDA) og er blevet CE-mærket i Europa til bestemmelse af tumor PD-L1 TPS5.
Supplerende globale indstillinger på tværs af institutioner for pålidelig og høj kvalitet evalueringer af PD-L1 TPS med LDTs, som bruger 22C 3 antistof koncentrat er vigtigt at støtte kliniske beslutninger omhandlende patienternes rettigheder for pembrolizumab behandling. Et stort antal patologi laboratorier har ikke adgang til følgesvend diagnostiske PD-L1 IHC 22C 3 assay. Udviklingen af pålidelige og sammenhængende LDTs kompatibel med yderligere, bredt tilgængelige IHC autostainer platforme er derfor afgørende.
Derudover er der behov for at etablere LDTs ved hjælp af cytologi prøver, der er den eneste eksemplar type ofte tilgængelige fra NSCLC patienter. PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay er valideret for resektion, core nål biopsier og bronchoscopies kun hvis bronkoskopi udbytter 100 tumorceller. Selv om ovenstående eksempel typer er ofte opnået, cytologi prøver er mere let indsamlet og er den mest almindeligt tilgængelige prøvetypen i nogle institutioner6,7. Men der er i øjeblikket ingen validerede diagnostiske assay tilgængelige for evaluering af PD-L1 udtryk i cytologi prøver; pålidelig LDTs kompatibel med cytologi prøver ønsker yderligere at lette høj kvalitet PD-L1 test.
Derudover ved fastlæggelsen af den kliniske validering af en LDT, bør IHC udføres på samme måde som de tilsvarende klinisk validerede kommercielle test8. For eksempel, bør flere kritiske trin kontrolleres for at opnå det samme signal i serie sektioner såsom antistoftitrering, forbehandling forsinkelser, inkubationstiden og forstærkning systemer9.
Vi har for nylig udviklet en optimeret LDT, der bruger 22C 3 antistof koncentrat til at evaluere PD-L1 udtryk på tumor biopsier og cytologi prøver10,11. Vi fandt en høj overensstemmelse med LDT versus "gold standard" PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. Denne klinisk validerede protokol vil støtte pålidelige, høj kvalitet PD-L1 test på tværs af regioner globalt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab monoterapi er blevet godkendt til første og anden linje behandling af patienter med PD-L1-udtryk for avancerede ikke-småcellet lungekræft (NSCLC). Testning for PD-L1 udtryk med PD-L1 Immunhistokemi (IHC) 22C 3 følgesvend diagnostisk analyse, hvilket giver en tumor andel scorer (TPS), er blevet valideret på tumor væv. Vi udviklet en optimeret laboratorium-udviklet test (LDT), bruger 22C 3 antistof (Ab) koncentrat på et bredt tilgængelige IHC autostainer til biopsi og cytologi prøver. PD-L1 TPS blev evalueret med 120 parrede hele-tumor væv sektioner og biopsi prøver og med 70 parret biopsi og cytologi prøver (bronkial vasker, n = 40; pleural udbrud, n = 30). 22C 3 Ab koncentrat-baserede LDT viste en høj overensstemmelse mellem biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC udtryk bestemmes ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay på begge TPS cut point (≥ 1%, ≥50%). Den optimerede LDT præsenteres her, ved hjælp af 22C 3 Ab koncentrat til at bestemme PD-L1 udtryk i begge tumor væv og cytologi prøver, vil udvide laboratorier verden over evne til at vurdere berettigelsen af patienter med NSCLC for behandling med pembrolizumab monoterapi på en pålidelig og reproducerbar måde.

Ved hjælp af den procedure, der er præsenteret her, og som er beskrevet i detaljer i gruppens seneste publikationer10,11, var de optimeret LDT klinisk valideret med 120 arkivers FFPE NSCLC biopsi prøver fra patienter, der undergik kirurgisk resektion eller en biopsi på universitetshospitalet Pasteur Nice, mellem marts 2007 og marts 2016. Desuden evaluering af PD-L1 udtryk for cytologi prøver TPS blev evalueret i 70 parrede bi...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Ved hjælp af 22C 3 Anti-PD-L1 antistof koncentrere sig om biopsi og cytologi prøver fra patienter med ikke-småcellet lungecancer

For at udvide laboratorier verden over evne til at vurdere berettigelsen af patienter med lungekræft behandling med pembrolizumab, i en pålidelig og reproducerbar måde, udviklede vi en analyse, der bruger 22C 3 antistof koncentrat på en alment tilgængelig immunhistokemiske autostainer, til både biopsi og cytologi prøver.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Denne metode ved hjælp af 22C3 antistofkoncentrat til bestemmelse af PD-L1 udtryk i både tumorvæv og cytologi prøve vil udvide laboratoriernes evne til at vurdere udvælgelsen af patienter med ikke-småcellet lungekræft for immunterapi på en pålidelig og reproducerbar måde. Den største fordel ved denne teknik er, at det er meget konkordans med guld standard assay og vil støtte pålidelige, høj kvalitet PD-L1 test på tværs af regioner over hele verden. Generelt, patologer nye til denne metode vil kæmpe på grund af den granulære farvning lejlighedsvis observeret.Desuden farvning af de menneskelige celler er noget mere intens end den observerede med guldstandarden. Derfor uddannelse af patologer er nødvendig for at opnå korrekt fortolkning af PD-L1 farvning med 22C3 LDT. At demonstrere proceduren vil være fru.Marame Hamila, en tekniker fra mit laboratorium. Til at begynde, fastsætte tumorvæv i 10% neutral-buffered formalin i en kassette og integrere kassetten i paraffin som skitseret i tekstprotokollen. Integrer det infiltrerede væv inde i en støbeform, der er fyldt med smeltet paraffin.Lad vævet blive i formen, indtil paraffinen er størknet. Derefter skal du bruge en mikrotom til at afsnit paraffin-indlejret væv ved en tykkelse på tre mikrometer. Overfør paraffinbåndet til et positivt opladet glasmikroskopslide.Tør derefter diaset i en time ved 37 grader Celsius. Først skal du indsamle bronkiale vask i en konserveringsmiddel opløsning. Vaskene overføres til et konisk rør med 50 milliliter.Tilsæt to gram DL-Dithiothreitol og vortex røret i 30 minutter, derefter centrifuge ved 250 gange g i fem minutter ved stuetemperatur. Fjern supernatanten og tilsæt 10 milliliter af en mucolytisk opløsning. Prøven rystes ved middel hastighed i 20 minutter og centrifugeres ved 250 gange g i fem minutter ved stuetemperatur.Derefter fjernes supernatanten, og cellepellet anbringes i et opsamlingsrør, der indeholder 10% neutral buffered formalin. Tilføj fire dråber af et celleblokpræparat. Overfør cellepille til en kassette.Fix cell pellet til paraffin indlejring og sektionsdannelse ved hjælp af den proces, der tidligere er beskrevet til forberedelse af tumorvævsprøver. Til at begynde, tænd for autostainer og computeren. Dobbeltklik på ikonet for automatisk adgang, og vælg brugeren.Klik på Opret etiket og derefter på Protokol. Dobbeltklik på 22C3-protokollen. Udfyld patientens id, og klik på Udskriv.Derefter skal du sætte etiketten på sliden. Tryk på knappen på den valgte glideskuffe for at åbne den og placere det mærkede dias på terminen med etiketten opad og indad. Luk glideskuffen.Fjern derefter hætterne fra dispenserne. Reagenserne på reagenserne indlæses på reagensholderen. Åbn hætten på pletten og placer reagensstativerne på reagenserne karrusel, og sørg for, at de passer ordentligt og holder på plads, og luk derefter emhætten.I softwaren skal du klikke på det instrument, der skal bruges, og derefter klikke på Løb. Ved afslutningen af IHC-proceduren skal du bruge postevand med en enkelt dråbe rengøringsopløsning til at skylle diaset i flere sekunder. Dehydrer diaset ved at nedsænke det sekventielt i to ethanolbade i flere sekunder hver, og placer derefter diaset i en dækselsmaskine for automatisk at indlæse dækslet.For at begynde at vurdere kvaliteten af PD-L1 farvning, analysere de positive og negative kontroller, før du undersøger patientens prøve. Ved hjælp af et mikroskop, bekræfte tilstedeværelsen af mindst 100 levedygtige tumorceller. Ved en lav forstørrelse på 4 gange, evaluere alle velbevarede positive og negative tumorområder.Efter dette, score delvis eller komplet cellemembran farvning og beregne tumor andel score ved at vurdere andelen af PD-L1-positive tumorceller i forhold til alle tumorceller til stede i de velbevarede tumorområder. I denne undersøgelse, tumor andel score eller TPS evalueres for parret væv biopsi prøver i celler blokke fremstillet af bronkiale vasker eller pleural effusions. Repræsentative farvningsmønstre med biopsiprøver anvendes til at sammenligne 22C3-antistofkoncentratet med PD-L1 IHC 22C3 følgesvendanalyse.Intraklasse korrelationskoefficienten, som bruges til at måle korrelationen af TPS-scoren som en kontinuerlig variabel, er 99 % mellem LDT og guldstandarden. Repræsentative farvningsmønstre med cytologiprøver bruges også til at sammenligne 22C3-antistofkoncentratet med PD-L1 IHC 22C3 følgesvendanalyse. Konkordansraten for biopsi- og cytologiprøver med LDT er større end 95 %, når der anvendes et af TPS-snitpunkterne.Intraklasse korrelationskoefficienten ved brug af TPS som en kontinuerlig variabel er mellem 0,88 og 0,90. Når mestrer, denne teknik giver en høj konkordans sats med guldstandarden i evaluere cutoff for positivitet eller tumor histologi for både væv og cytologi prøver. Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske, at prøverne skal evalueres med henvisning til HE dias og i nogle vanskelige tilfælde komplementære pletter til at vurdere immunceller kan udføres for at udelukke fejlfortolkning af PD-L1 udtryk i tumorceller alene.Efter denne procedure kan andre prøver som finnålbiopser, EUS-FNA'er eller bronkiale børster evalueres. Efter sin indstilling i klinikkerne, analysen robusthed skal opretholdes over tid ved at søge akkreditering, ved at følge standard driftsprocedurer, og ved regelmæssigt at deltage i eksterne kvalitetsvurdering ordninger. Efter at have set denne video, bør du have en god forståelse af, hvordan man gennemfører den optimerede protokol ved hjælp af 22C3 anti-PD-L1 antistof koncentrere sig om en bredt tilgængelig IHC autostainer både biopsi og cytologi prøver fra patienter med ikke-småcellet lungekræft.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Lunge Tumor celle rekruttering Assay

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MikroRNA baseret flydende biopsi: Oplevelsen af Plasma miRNA signatur klassificering (MSC) til lunge Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Enkel og hurtig metode til at opnå høj kvalitet Tumor DNA fra klinisk-patologisk prøvemateriale ved hjælp af Touch aftryk cytologi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastisk farvning på paraffin-indlejrede slides af pT3N0M0 gastrisk Cancer væv

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse af kræft celle Invasion og anti-metastatisk stof Screening ved hjælp af Hydrogel mikro-kammer Array (HMCA)-baseret plader

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenkymale stamceller isoleret fra Pulp væv og fælles kultur med kræftceller til at studere deres interaktioner

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering og optælling af cirkulerende tumor celler fra ikke-småcellet lunge cancer patienter ved immunofluorescens

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Røntgen følsomhed af kræft stamceller i lungekræft cellelinjer

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Påvisning af cellefri DNA i blodplasmaprøver af kræftpatienter

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Isolering og funktionel vurdering af stamceller fra brystkræft fra celle- og vævsprøver

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...