Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Diese Studie wurde unterstützt von Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Die Geldgeber spielte keine Rolle im Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung, zu veröffentlichen oder der Manuskripterstellung.

Alle Verfahren wurden von der lokalen Ethikkommission genehmigt (menschliche Forschungsethikkommission, Centre Hospitalier Universitaire de Nizza/Tumorothèque BB-0033-00025).
Hinweis: Dieses Protokoll ist speziell für den Einsatz von die 22 3 Antikörper konzentrieren sich auf eine kommerziell erhältliche automatisierte IHC Stainer (bezeichnet als Autostainer hier, die Tabelle der Materialiensehen) für Tumor Biopsien und zytologische Proben angepasst.
<p class="jove_ti...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

Wir haben eine optimierte LDT mit den 22 3 PD-L1-Antikörper-Konzentrat, durch den Vergleich mit den entsprechenden klinisch validierte kommerziellen Test10,11validiert. Die 22 3 konzentriert Antikörper-basierten LDT zeigten eine hohe Übereinstimmung zwischen Biopsie (~ 100 %) und Zytologie (~ 95 %) Exemplare im Vergleich zu den PD-L1 IHC-Ausdruck mit Hilfe des PD-L1 IHC 22 3 Tests bei ≥1 % TPS und ≥50 % TPS Schnitt Punkte ermittelt. Wie vor kurzem empfohle...

Neue klinische Studien belegen die Wirksamkeit von Pembrolizumab, ein humanisierter monoklonaler IgG4 Kappa Isotype Antikörper, die die Interaktion zwischen den programmierten Zelltod 1 (PD-1) blockiert und die Liganden, PD-L1 und PD-L2, bei der Behandlung von Patienten mit fortgeschrittenen NSCLC1,2,3,4.
Derzeit Pembrolizumab zur Behandlung von NSCLC PD-L1 mit dem Ausdruck in beiden Behandlung-naiven Patienten mit PD-L1 Ausdruck TPS ≥50 % und keine epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) oder anaplastische Lymphom Kinase (ALK) Tumor genomische Aberrationen3 zugelassen und für vorher behandelte Patienten mit einem PD-L1-TPS ≥1 %1.
PD-L1-Protein-Expression von IHC erkannt wurde weithin als eine prädiktive Biomarker-Assay für Anti-PD-1/PD-L1 Therapien eingesetzt wurde. In klinischen Studien Pembrolizumab war der PD-L1-TPS mit Formalin fixierten Paraffin-eingebetteten (FFPE) Gewebeproben erhalten anhand der PD-L1 IHC 22 3 Begleiter Assay5. Dieser Test wurde von der US Food and Drug Administration (FDA) genehmigt und wurde CE-Kennzeichnung in Europa für die Bestimmung des Tumors PD-L1 TPS5.
Weitere globale Optionen über Einrichtungen für zuverlässige und qualitativ hochwertige Auswertungen der PD-L1 TPS mit LDTs die 22 3 Antikörper Konzentrat verwenden sind unerlässlich, um klinische Entscheidungen bezüglich Patienten Anspruch auf Pembrolizumab unterstützen Behandlung. Eine große Anzahl von Pathologie-Laboratorien haben keinen Zugriff auf der Begleiter diagnostische PD-L1 IHC 22 3 Test. Daher ist die Entwicklung von zuverlässigen und Konstanten LDTs kompatibel mit zusätzlichen, weithin verfügbar IHC Autostainer Plattformen wichtig.
Darüber hinaus gibt es eine notwendige Schaffung LDTs mit zytologische Proben, die einzige Exemplar von NSCLC-Patienten häufig erhältlich sind. Der PD-L1 IHC 22 3 Begleiter Assay ist validiert für Resektionen, Kern Nadel Biopsien und Bronchoscopies nur dann, wenn die Bronchoskopie 100 Tumorzellen ergibt. Obwohl die oben genannten Probenarten häufig erhalten werden, zytologische Proben werden leichter gesammelt und sind die am weitesten verbreitete Probentyp in einigen Institutionen6,7. Allerdings gibt es derzeit keine validierten diagnostischen Test für die Auswertung des Ausdrucks PD-L1 in zytologische Proben zur Verfügung; kompatibel mit zytologische Proben zuverlässig LDTs würde weiter qualitativ hochwertige PD-L1 Prüfung erleichtern.
Darüber hinaus sollte bei der Festlegung der klinischen Validierung eine LDT der IHC in ähnlicher Weise auf die entsprechenden klinisch validierte kommerziellen Test8durchgeführt werden. Zum Beispiel sollte mehrere kritische Schritte überprüft werden, um das gleiche Signal in Schnittserien wie Antikörper-Titration, Vorbehandlung Verzögerungen, Inkubationszeit und Verstärkung Systeme9zu erhalten.
Wir haben vor kurzem eine optimierte LDT, die das 22 3 Antikörper-Konzentrat verwendet den PD-L1-Ausdruck auf Tumor Biopsien und zytologische Proben10,11auswerten entwickelt. Wir fanden eine hohe Übereinstimmung mit der LDT im Vergleich zu der "Goldstandard" PD-L1 IHC 22 3 Assay10,11. Dieses klinisch validierte Protokoll wird zuverlässige, qualitativ hochwertige PD-L1 Tests in den Regionen weltweit unterstützen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab-Monotherapie ist für die First- und Second-Line-Behandlung von Patienten mit PD-L1-mit dem Ausdruck ihrer fortgeschrittenen nicht-kleinzelligen-Lungenkrebs (NSCLC) zugelassen. Test für PD-L1-Ausdruck mit dem PD-L1 Immunhistochemie (IHC) 22 3 Begleiter diagnostischen Assay, wodurch einen Tumor-Anteil (TPS) Gäste, auf Tumorgewebe validiert wurde. Wir entwickelten einen optimierte Labor entwickelten Test (LDT), der 22 3 Antikörper (Ab) Konzentrat auf eine weithin verfügbar IHC Autostainer Biopsie und Zytologie Proben verwendet. Der PD-L1-TPS wurde mit 120 gekoppelten ganze Tumorgewebe Abschnitte und Biopsie Proben ausgewertet und gepaart mit 70 Biopsie und Zytologie Proben (bronchiale Waschungen, n = 40; pleural Ergüsse, n = 30). Die 22 3 Ab das Konzentrat-basierte LDT zeigte eine hohe Übereinstimmung zwischen Biopsie (~ 100 %) und Zytologie (~ 95 %) Exemplare im Vergleich zum PD-L1 IHC Ausdruck anhand der PD-L1 IHC 22 3 Begleiter Assay an beiden TPS Schnitt Punkte (≥1 %, ≥50 %). Die optimierte LDT das hier vorgestellte mit 22 3 Ab Konzentrat den PD-L1-Ausdruck in beiden Tumorgewebe und zytologische Proben bestimmen wird die Fähigkeit des Labors weltweit zur Bewertung der Förderfähigkeit von Patienten mit NSCLC für die Behandlung mit erweitern Pembrolizumab-Monotherapie in zuverlässig und reproduzierbar.

Mit dem Verfahren präsentiert hier und wie beschrieben im Detail in dieser Gruppe den letzten Veröffentlichungen10,11, wurde optimierte LDT klinisch mit 120 Archivierung FFPE NSCLC Biopsie Proben von Patienten validiert, die eine chirurgische Resektion oder eine Biopsie an der Universitätsklinik von Pasteur, Nizza, von März 2007 bis März 2016. Darüber hinaus wurde für die Bewertung der PD-L1 Ausdruck zytologische Proben, TP...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Mit 22 3 Anti-PD-L1-Antikörper konzentrieren sich auf Biopsie und Zytologie Proben von Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs

Um die Fähigkeit des Labors weltweit, die Förderfähigkeit von Patienten mit Lungenkrebs Behandlung mit Pembrolizumab, auf eine zuverlässige und reproduzierbare Weise beurteilen zu erweitern, haben wir eine Probe, die das 22 3 Antikörper-Konzentrat auf eine weithin verfügbar verwendet entwickelt. immunhistochemische Autostainer, Biopsie und Zytologie Proben.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Diese Methode, mit der das 22C3-Antikörperkonzentrat zur Bestimmung der PD-L1-Expression sowohl in Tumorgewebe als auch in zytologischer Probe verwendet wird, wird die Fähigkeit von Laboratorien erweitern, die Auswahl von Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs für die Immuntherapie zuverlässig und reproduzierbar zu bewerten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie sehr gut mit dem Goldstandard-Assay kordatet und zuverlässige, qualitativ hochwertige PD-L1-Tests über Regionen weltweit hinweg unterstützt. Im Allgemeinen werden Pathologen, die neu in dieser Methode sind, wegen der gelegentlich beobachteten granularen Färbung kämpfen.Darüber hinaus ist die Färbung der menschlichen Zellen etwas intensiver als die, die mit dem Goldstandard beobachtet wird. Daher ist die Ausbildung von Pathologen notwendig, um eine korrekte Interpretation der PD-L1-Färbung mit dem 22C3 LDT zu erhalten. Frau wird das Verfahren demonstrieren.Marame Hamila, ein Techniker aus meinem Labor. Fixieren Sie zunächst das Tumorgewebe in 10% neutral gepuffertem Formalin in einer Kassette und betten Sie die Kassette in Paraffin ein, wie im Textprotokoll beschrieben. Betten Sie das infiltrierte Gewebe in eine Form ein, die mit geschmolzenem Paraffin gefüllt ist.Lassen Sie das Gewebe in der Form bleiben, bis das Paraffin verfestigt ist. Danach verwenden Sie ein Mikrotome, um das paraffinierte Gewebe mit einer Dicke von drei Mikrometern zu schneiden. Übertragen Sie das Paraffinband auf ein positiv geladenes Glasmikroskopschlitten.Dann trocknen Sie die Rutsche für eine Stunde bei 37 Grad Celsius. Zuerst die Bronchialwäsche in einer Konservierungslösung sammeln. Übertragen Sie die Waschungen auf ein 50-Milliliter-Konustube.Fügen Sie zwei Gramm DL-Dithiothreitol und Wirbel das Rohr für 30 Minuten, dann Zentrifuge bei 250 mal g für fünf Minuten bei Raumtemperatur. Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie 10 Milliliter einer Mukolytiklösung hinzu. Schütteln Sie die Probe mit mittlerer Geschwindigkeit für 20 Minuten und Zentrifuge bei 250 mal g für fünf Minuten bei Raumtemperatur.Danach den Überstand entfernen und das Zellpellet in ein Sammelrohr legen, das 10% neutral gepuffertes Formalin enthält. Fügen Sie vier Tropfen eines Zellblockpräparationsmittels hinzu. Übertragen Sie das Zellpellet auf eine Kassette.Fixieren Sie das Zellpellet für Paraffineinbettung und Schnitte mit dem zuvor beschriebenen Verfahren zur Vorbereitung von Tumorgewebeproben. Schalten Sie zunächst den Autostainer und den Computer ein. Doppelklicken Sie auf das Autostainer-Symbol und wählen Sie den Benutzer aus.Klicken Sie auf Label erstellen und dann auf Protokoll. Doppelklicken Sie auf das 22C3-Protokoll. Geben Sie die ID des Patienten ein, und klicken Sie auf Drucken.Danach kleben Sie das Etikett auf die Folie. Drücken Sie die Taste auf der gewählten Schiebeschublade, um sie zu öffnen, und platzieren Sie die beschriftete Folie auf dem Thermopad mit dem Etikett nach oben und innen. Schließen Sie die Schublade.Entfernen Sie als Nächstes die Kappen aus den Spendern. Die Reagenzien auf das Reagenzien-Rack legen. Öffnen Sie die Kapuze des Flecks und legen Sie die Reagenzienregale auf das Reagenzienkarussell, um sicherzustellen, dass sie richtig passen und in Position halten, und schließen Sie dann die Kapuze.Klicken Sie in der Software auf das verwendete Instrument und dann auf Ausführen. Verwenden Sie am Ende des IHC-Verfahrens Leitungswasser mit einem einzigen Tropfen Reinigungslösung, um die Rutsche für einige Sekunden zu spülen. Dehydrieren Sie den Schlitten, indem Sie ihn für jeweils mehrere Sekunden sequenziell in zwei Ethanolbäder eintauchen, und legen Sie ihn dann in eine Abdeckungsrutschmaschine, um den Deckelschlupf automatisch zu laden.Um mit der Bewertung der Qualität der PD-L1-Färbung zu beginnen, analysieren Sie die positiven und negativen Kontrollen, bevor Sie die Patientenprobe untersuchen. Bestätigen Sie mit einem Mikroskop das Vorhandensein von mindestens 100 lebensfähigen Tumorzellen. Bei einer geringen Vergrößerung von 4 mal, bewerten Sie alle gut erhaltenen positiven und negativen Tumorbereiche.Danach punkten Sie teilweise oder vollständig Zellmembranfärbung und berechnen sie den Tumoranteil, indem Sie den Anteil der PD-L1-positiven Tumorzellen relativ zu allen Tumorzellen in den gut erhaltenen Tumorbereichen bewerten. In dieser Studie wird der Tumoranteil score oder TPS für gepaarte Gewebebiopsieproben in Zellblöcken ausgewertet, die aus Bronchial-Washes oder Pleuraergüssen hergestellt werden. Repräsentative Färbemuster mit Biopsieproben werden verwendet, um das 22C3-Antikörperkonzentrat mit dem PD-L1 IHC 22C3 Begleittest zu vergleichen.Der intraklassale Korrelationskoeffizient, der verwendet wird, um die Korrelation des TPS-Scores als kontinuierliche Variable zu messen, beträgt 99 % zwischen dem LDT und dem Goldstandard. Repräsentative Färbemuster mit zytologischen Proben werden auch verwendet, um das 22C3-Antikörperkonzentrat mit dem PD-L1 IHC 22C3 Begleittest zu vergleichen. Die Konkordanzrate von Biopsie- und Zytologieproben mit dem LDT beträgt mehr als 95 %, wenn man einen der TPS-Schnittpunkte verwendet.Der intraklassale Korrelationskoeffizient bei Verwendung von TPS als fortlaufender Variable liegt zwischen 0,88 und 0,90. Einmal gemeistert, gibt diese Technik eine hohe Übereinstimmungsrate mit dem Goldstandard bei der Bewertung der Cutoff für Positivität oder Tumorhistologie für Gewebe- und Zytologie-Proben. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Proben in Bezug auf das HE-Dia bewertet werden müssen und in einigen schwierigen Fällen ergänzende Flecken zur Beurteilung von Immunzellen durchgeführt werden können, um eine Fehlinterpretation der PD-L1-Expression nur in Tumorzellen auszuschließen.Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Proben wie Feinnadelbiopsien, EUS-FNAs oder Bronchialbürsten ausgewertet werden. Nach der Einstellung in den Kliniken muss die Robustheit des Assays im Laufe der Zeit aufrechterhalten werden, indem die Akkreditierung beantragt wird, standardbetriebliche Verfahren befolgt werden und regelmäßig an externen Qualitätsbewertungssystemen teilgenommen wird. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das optimierte Protokoll mit dem 22C3 Anti-PD-L1-Antikörper implementieren können, konzentrieren sich auf einen weit verbreiteten IHC-Autostainer sowohl Biopsie- als auch Zytologieproben von Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Lung Tumor Zelle Rekrutierung Assay

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Forschung

Krebsforschung

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Flüssigbiopsie: Die Erfahrung der Plasma MiRNA Signatur Klassifikator (MSC) für Lung Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Einfache und schnelle Methode, um qualitativ hochwertige Tumor DNA von klinischen pathologischen Proben mit Touch Impressum Zytologie zu erhalten

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastische Färbung auf Paraffin-eingebetteten Dias von pT3N0M0 Magenkrebsgewebe

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse der Krebs Zellinvasion und anti-metastatischen Drogen-Screening mit Hydrogel Micro-Kammer Array (HMCA)-basierte Platten

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymale Stammzellen isoliert von Pulpagewebe und Kokultur mit Krebszellen ihre Interaktionen zu untersuchen

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Halbautomatische PD-L1-Charakterisierung und Aufzählung zirkulierender Tumorzellen von nicht-kleinen Lungenkrebspatienten durch Immunfluoreszenz

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Strahlenempfindlichkeit von Krebsstammzellen in Lungenkrebszelllinien

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Nachweis zellfreier DNA in Blutplasmaproben von Krebspatienten

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Isolierung und funktionelle Beurteilung menschlicher Brustkrebsstammzellen aus Zell- und Gewebeproben

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...