Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

מחקר זה מומן על ידי מרק & ושות', בע מ, Kenilworth, ניו ג'רזי, ארה ב. התורמים שחיים אין תפקיד ב תכנון המחקר, איסוף נתונים, ניתוח, ההחלטה לפרסם או אופן ההכנה של כתב היד.

כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית (ועדת האתיקה מחקר אנושי, מרכז Hospitalier Universitaire דה ניס/Tumorothèque BB-0033-00025).
הערה: פרוטוקול זה במיוחד מותאמת לשימוש של נוגדן 22C 3 להתרכז זמינים מסחרית אוטומטיות IHC הוספת גוון לסמלים (המכונה כפי autostainer כאן, לראות את הטבלה של חומרים) עב?...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

הבדיקה והאימות של LDT ממוטב באמצעות. תתרכזי נוגדן PD-L1 22C 3, על-ידי השוואתה עם ה10,המקביל בדיקה קלינית המאומת מסחרי11. 22C 3 מרוכז נוגדן מבוססי LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) דגימות ציטולוגיה (~ 95%) בהשוואה הביטוי PD-L1 IHC נקבע באמצעות וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 ב...

האחרונות ניסויים קליניים הראו את היעילות של pembrolizumab, monoclonal IgG4 קאפה isotype מואנשים שחוסמת את האינטראקציה בין מות תאים מתוכנת 1 (PD-1), שלה ליגנדים, PD-L1 ו- PD-L2, לטיפול בחולים עם מתקדם NSCLC1,2,3,4.
כיום, pembrolizumab אושרה לטיפול של NSCLC PD-L1-הבעת ' בחולים הן טיפול-תמים עם ביטוי PD-L1 תוכנית-המיתאר של ≥50%, אין גורם הגדילה באפידרמיס קולטן (EGFR) או לימפומה אנפלסטית קינאז (ALK) הגידול גנומית סטיות3 בעבר מטופלים חולים עם תוכנית-מיתאר PD-L1 של ≥1%1.
PD-L1 חלבון הביטוי שזוהה על-ידי IHC כבר בשימוש נרחב עבור טיפולים אנטי-PD-1/PD-L1 כמו assay סמן ניבוי. בניסויים קליניים pembrolizumab, המיתאר PD-L1 שהושג עם פורמלין-קבוע-מוטבע פרפין (FFPE) דגימות רקמה נקבע באמצעות PD-L1 IHC 22C 3 assay לוויה, או5. Assay זו אושרה על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) ומאז CE המסומן באירופה מצפני הגידול PD-L1 TPS5.
אפשרויות נוספות גלובלית על פני מוסדות עבור הערכות איכותי ואמין של המיתאר PD-L1 עם LDTs להשתמש בו את תרכיז נוגדן 22C 3 חיוניים לתמיכה קלינית ההחלטות הנוגעות זכאות החולה pembrolizumab טיפול. מספר רב של מעבדות הפתולוגיה אין גישה PD-L1 IHC 22C 3 אבחון לוויה וזמינותו. לכן, הפיתוח של LDTs אמינה ועקבית תואם פלטפורמות autostainer IHC נוספים, הנפוצה היא חיונית.
יתר על כן, יש צורך בהקמת LDTs באמצעות דגימות ציטולוגיה המהווים סוג הדגימה היחיד הזמין לעתים קרובות מחולים NSCLC. PD-L1 IHC 22C 3 מסייע וזמינותו מאומת כריתות, ביופסיות מחט הליבה של bronchoscopies רק אם ברונכוסקופיה מניבה 100 תאים סרטניים. למרות סוגי דגימה לעיל מתקבלים לעיתים קרובות, ציטולוגיה דגימות נאספים ביתר קלות, סוג הדגימה הנפוץ ביותר הזמינים ב6,כמה מוסדות7. עם זאת, יש כיום אין assay אבחון המאומת זמין עבור הערכת הביטוי PD-L1 בדגימות ציטולוגיה; תואם עם דגימות ציטולוגיה אמין LDTs להמשיך לקדם את בדיקת PD-L1 באיכות גבוהה.
יתר על כן, בעת יצירת האימות קליני של LDT, IHC צריכה להתבצע באופן דומה מבחן מסחרי המאומת קלינית המתאימה8. למשל, מספר שלבים קריטיים צריך לאמת כדי לקבל את האות באותו בסעיפים טורית כגון נוגדנים טיטור, עיכובים pretreatment, זמן הדגירה, מערכות הגברה9.
לאחרונה פיתחנו של LDT ממוטבת העושה את תרכיז נוגדן 22C 3 להעריך את הביטוי PD-L1 על הגידול ביופסיות ו ציטולוגיה דגימות10,11. . מצאנו את הקונקורדנציה גבוהה עם LDT לעומת "תקן הזהב" PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. פרוטוקול המאומת קלינית זה יתמוך אמין, איכותי PD-L1 בדיקות על-פני אזורים ברחבי העולם.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

יחידני Pembrolizumab אושרה לטיפול, השנייה-שורה ראשונה של חולי PD-L1-הבעת מתקדמים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC). בדיקות עבור הביטוי PD-L1 PD-L1 אימונוהיסטוכימיה (IHC) 22C 3 לוויה אבחון וזמינותו, אשר נותן שיעור הגידול ניקוד (TPS), אומתה על גידול רקמות. פיתחנו ממוטבת מפותחות מעבדה מבחן (LDT) המשתמשת את תרכיז נוגדן 22C 3 (אלב) על autostainer IHC נרחב זמין עבור דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה. תוכנית-המיתאר PD-L1 הוערך עם דגימות ביופסיה ומקטעים לזווג רקמת הגידול כל 120, עם 70 לזווג דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה (שוטף הסמפונות, n = 40; השתפכות, n = 30). Ab 22C 3 שמבוסס להתרכז LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) ציטולוגיה דגימות (~ 95%) בהשוואה ל- PD-L1 IHC ביטוי באמצעות וזמינותו לוויה 22C 3 IHC PD-L1-TPS שני חותכים נקודות (≥1%, ≥50%). LDT ממוטבת המובאים כאן, באמצעות את תרכיז אלב 22C 3 כדי לקבוע את הביטוי PD-L1 ברקמת הגידול שני, דגימות ציטולוגיה, ירחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולי NSCLC לטיפול pembrolizumab יחידני באופן אמין לשחזור.

באמצעות ההליך שהוצגו כאן, ולא כפי שתואר בפירוט של קבוצה זו האחרונה פרסומים10,11, LDT ממוטבת קלינית אומתה עם 120 דגימות ביופסיה ארכיוני FFPE NSCLC של חולים שעברו ניתוח כריתה או ביופסיה בבית החולים האוניברסיטאי פסטר, ניס, בין מרץ 2007 ו- 2016 מרס. יתר על כן, ...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

באמצעות 22C 3 נוגדן Anti-PD-L1 להתרכז ביופסיה ודוגמאות ציטולוגיה של חולי סרטן ריאות שאינם קטנים התא

כדי להרחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולים עם סרטן ריאות לטיפול pembrolizumab, באופן אמין לשחזור, פיתחנו וזמינותו של העושה את תרכיז נוגדן 22C 3-נרחב זמין immunohistochemical autostainer, עבור דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

שיטה זו באמצעות 22C3 תרכיז נוגדנים כדי לקבוע ביטוי PD-L1 הן רקמת הגידול ודגימה ציטולוגיה ירחיב את היכולת של מעבדות להעריך את הבחירה של חולים עם סרטן ריאות תאים שאינם קטנים עבור אימונותרפיה באופן אמין לשחזור. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאוד קונקורדנטית עם הבדיקה הסטנדרטית של הזהב ותתמוך בבדיקות PD-L1 אמינות ואיכותיות ברחבי העולם. באופן כללי, פתולוגים חדשים בשיטה זו ייאבקו בגלל הכתמים פרטני שנצפו מדי פעם.יתר על כן, הכתם של התאים האנושיים הוא קצת יותר אינטנסיבי מזה שנצפה עם תקן הזהב. לכן אימון של פתולוגים יש צורך לקבל פרשנות נכונה של כתמי PD-L1 עם LDT 22C3. הפגנת ההליך תהיה גברת.מרים חמילה, טכנאית מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, לתקן את רקמת הגידול בפורמלין 10%ניטרלי-מאגר בקלטת ולהטביע את הקלטת בפרפין כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט. להטמיע את הרקמה הסתנן בתוך עובש כי הוא מלא פרפין מותך.תן לרקמה להישאר בתבנית עד הפרפין התגבש. לאחר מכן, השתמש במיקרוטום כדי לקטע את הרקמה המוטבעת בפרפין בעובי של שלושה מיקרומטרים. העבר את סרט הפרפין לשקופית מיקרוסקופ זכוכית טעונה באופן חיובי.לאחר מכן, לייבש את המגלשה במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס. ראשית, לאסוף את שטיפות הסופת בתתא משמר. מעבירים את הכביסה לצינור חרוט של 50 מיליליטר.מוסיפים שני גרם של DL-Dithiothreitol ומערבולת הצינור במשך 30 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 250 פעמים גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. הסר את העל-טבעי והוסף 10 מיליליטר של פתרון mucolytic. לנער את המדגם במהירות בינונית במשך 20 דקות צנטריפוגה ב 250 פעמים גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, להסיר את supernatant ולהפקיד את גלולת התא לתוך צינור איסוף המכיל 10% ניטרלי-מאגר פורמלין. הוסף ארבע טיפות של סוכן הכנה בלוק תא. העבר את גלולת התא לקלטת.לתקן את גלולת התא עבור הטבעה פרפין וקטע באמצעות התהליך שתואר בעבר להכנת דגימות רקמת הגידול. כדי להתחיל, לחץ על ה-autostainer ועל המחשב. לחץ פעמיים על סמל ה-autostainer ובחר את המשתמש.לחץ על צור תווית ולאחר מכן על פרוטוקול. לחץ פעמיים על פרוטוקול 22C3. מלאו את תעודת הזהות של המטופל ולחצו על 'הדפס'.לאחר מכן, תקע את התווית על השקופית. לחץ על הלחצן במגירת השקופיות שנבחרה כדי לפתוח אותה ול למקם את השקופית המסוווית על ה כרית התרמית כאשר התווית פונה כלפי מעלה והלאה. סגור את מגירת השקופיות.לאחר מכן, להסיר את הכובעים מהמתקן. טען את הריג'ינים על מתלה הריג'ינים. פתח את מכסה המנוע של הכתם והצב את מתלי הריג'נט על קרוסלה של חברי ההנהלה, מוודא שהם מתאימים כראוי והחזק בעמדה, ולאחר מכן סגור את מכסה המנוע.בתוכנה, לחץ על המכשיר שישמש ולאחר מכן לחץ על פועל. בסוף הליך IHC, השתמש במי ברז עם טיפה אחת של פתרון ניקוי כדי לשטוף את המגלשה במשך מספר שניות. ייבש את השקופית על ידי טבילה ברצף בשתי אמבטיות אתנול במשך מספר שניות כל אחת, ולאחר מכן מקם את השקופית לתוך מכונת כיסוי כדי לטעון באופן אוטומטי את החלקת המכסה.כדי להתחיל להעריך את איכות הכתם PD-L1, לנתח את הפקדים החיוביים ושליליים לפני בחינת הדגימה החולה. באמצעות מיקרוסקופ, לאשר את נוכחותם של לפחות 100 תאים סרטניים קיימא. בהגדלה נמוכה של 4 פעמים, להעריך את כל האזורים הגידול חיובי ושלילי השתמר היטב.לאחר מכן, ציון חלקי או מלא קרום התא מכתים ולחשב את ציון פרופורציית הגידול על ידי הערכת שיעור תאי הגידול PD-L1 חיובי יחסית לכל התאים הגידוליים הקיימים באזורי הגידול השתמרו היטב. במחקר זה, ציון פרופורציית הגידול או TPS מוערך עבור דגימות ביופסיה של רקמות מזווגות בתאים בלוקים שהוכנו משטיפת הסופות או התפכחות pleural. דפוסי כתמים מייצגים עם דגימות ביופסיה משמשים להשוואת 22C3-נוגדנים להתרכז נגד PD-L1 IHC 22C3 לוויה משוער.מקדם המתאם הבין-מחלקתי, המשמש למדידת המתאם של ציון ה- TPS כמשתנה רציף, הוא 99% בין LDT לבין תקן הזהב. דפוסי כתמים מייצגים עם דגימות ציטולוגיה משמשים גם כדי להשוות את 22C3-נוגדנים להתרכז נגד PD-L1 IHC 22C3 לוויה מוסט. שיעור הקונקורדנס של דגימות ביופסיה וציטולוגיה עם LDT גדול מ- 95% בעת שימוש בכל אחת מנקודות החיתוך של ה- TPS.מקדם המתאם הבין-מחלקתי בעת שימוש בת"ת כמשתנה רציף הוא בין 0.88 ל- 0.90. לאחר השליטה, טכניקה זו נותנת שיעור קונקורדנס גבוה עם תקן הזהב להעריך את הניתוק עבור חיוביות או היסטולוגיה הגידול עבור דגימות רקמות וציטולוגיה. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי יש להעריך את הדגימות בהתייחס לשקופית HE ובחלק מהמקרים קשה ניתן לבצע כתמים משלימים להערכת תאי החיסון כדי לא לכלול את התרגום השגוי של ביטוי PD-L1 בתאי הגידול בלבד.בעקבות הליך זה, ניתן להעריך דגימות אחרות כמו ביופסיות מחט עדין, EUS-FNAs או מברשות הסנוכיה. לאחר הגדרתו במרפאות, יש לשמור על חוסן הבדיקה לאורך זמן על ידי חיפוש הסמכה, על ידי ביצוע נהלי הפעלה סטנדרטיים, ועל ידי השתתפות קבועה בהערכות איכות חיצוניות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך ליישם את הפרוטוקול אופטימיזציה באמצעות 22C3 נוגדן נגד PD-L1 להתרכז autostainer IHC זמין נרחב הן ביופסיה ודגימות ציטולוגיה מחולים עם סרטן ריאות תאים שאינם קטנים.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

ריאות הגידול תא גיוס Assay

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA מבוסס נוזלי ביופסיה: החוויה של miRNA פלזמה החתימה מסווג (MSC) לסינון סרטן ריאות

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

שיטה פשוטה ומהירה להשיג גידול איכותיים הדנ א של דגימות קליני-פתולוגיים באמצעות מגע ההטבעה ציטולוגיה

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

מכתים אלסטי על פרפין-שקופיות מוטבעות של רקמת סרטן pT3N0M0 קיבה

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

ניתוח של סרטן תאים הפלישה ושל סמים אנטי גרורתי הקרנת באמצעות מערך הידרוג מיקרו-תא (HMCA)-המבוסס על צלחות

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

בידוד תאי גזע mesenchymal זולה רקמות, תרבות משותפת עם תאים סרטניים ללמוד אינטראקציות שלהם

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-אוטומטי PD-L1 אפיון וספירה של תאים סרטניים במחזור בין שאינם קטנים תאים סרטן ריאות חולים על ידי Immunofluorescence

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

רגישות רדיושל תאי גזע סרטן בסרטן ריאות תאים קווי

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

איתור דנ"א ללא תאים בדגימות פלזמה בדם של חולי סרטן

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...