Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

इस अध्ययन के मर्क एंड कं, इंक, केनिलवर्थ, ंयू जर्सी, संयुक्त राज्य अमेरिका द्वारा प्रायोजित किया गया था । funders अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि की तैयारी में कोई भूमिका निभाई ।

सभी प्रक्रियाओं को स्थानीय नैतिकता समिति (मानव अनुसंधान नैतिकता समिति, केंद्र Hospitalier Universitaire de Nice/Tumorothèque बीबी-0033-00025) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
नोट: यह प्रोटोकॉल विशेष रूप से एक व्यावसायिक रूप से उ?...

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	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

हम एक अनुकूलित LDT 22C3 पीडी-L1 एंटीबॉडी ध्यान केंद्रित का उपयोग कर, यह इसी के साथ तुलना द्वारा चिकित्सकीय सत्यापित वाणिज्यिक परीक्षण10,11। 22C3 केंद्रित एंटीबॉडी आधारित LDT बायोप्सी (~ १००%) औ?...

हाल के नैदानिक परीक्षणों pembrolizumab की प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया है, एक मानव मोनोक्लोनल IgG4 कापा isotype एंटीबॉडी कि ब्लॉक क्रमादेशित सेल मौत 1 के बीच बातचीत (पीडी-1) और उसके लाइगैंडों, पीडी-L1 और पीडी-L2 के साथ रोगियों के उपचार में, नत NSCLC1,2,3,4.
वर्तमान में, pembrolizumab एक पीडी-L1 अभिव्यक्ति टीपीएस ≥ ५०% और कोई एपिडर्मल वृद्धि कारक रिसेप्टर (EGFR) या anaplastic लिंफोमा कळेनासे (ALK) जीनोमिक ट्यूमर 3 के साथ दोनों उपचार-भोले रोगियों में पीडी-L1-व्यक्त NSCLC के उपचार के लिए मंजूरी दे दी है और ≥ 1%1के पीडी-L1 टीपीएस के साथ पहले से इलाज रोगियों के लिए.
पीडी-L1 प्रोटीन अभिव्यक्ति आइएचसी द्वारा पाया गया है व्यापक रूप से विरोधी पीडी-1/पीडी-L1 चिकित्सा के लिए एक भविष्यवाणी के रूप में मार्कर परख के रूप में इस्तेमाल किया गया है । pembrolizumab नैदानिक परीक्षणों में, पीडी-L1 टीपीएस formalin-फिक्स्ड आयल-एंबेडेड (FFPE) ऊतक नमूनों के साथ प्राप्त पीडी-L1 आइएचसी 22C3 साथी परख5का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । यह परख अमेरिका के खाद्य एवं औषधि प्रशासन (एफडीए) द्वारा अनुमोदित किया गया है और CE-ट्यूमर पीडी-L1 टीपीएस5के निर्धारण के लिए यूरोप में चिह्नित किया गया है ।
LDTs जो 22C3 एंटीबॉडी ध्यान का उपयोग के साथ पीडी L1 टीपीएस के विश्वसनीय और उच्च गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए संस्थानों में अतिरिक्त वैश्विक विकल्प pembrolizumab के लिए रोगी पात्रता के बारे में किए गए नैदानिक फैसलों का समर्थन करने के लिए आवश्यक हैं उपचार. बड़ी संख्या में पैथोलॉजी प्रयोगशालाओं के पास साथी डायग्नोस्टिक पीडी-L1 आइएचसी 22C3 परख तक नहीं पहुंच पाते हैं । इसलिए, विश्वसनीय और सुसंगत LDTs के साथ संगत के विकास के अतिरिक्त, व्यापक रूप से उपलब्ध आइएचसीer प्लेटफार्मों के लिए आवश्यक है ।
इसके अलावा, वहां एक cytology नमूनों का उपयोग कर LDTs स्थापित करने की जरूरत है कि केवल नमूना प्रकार अक्सर NSCLC रोगियों से उपलब्ध हैं । पीडी-L1 आइएचसी 22C3 साथी परख लकीरें, कोर सुई बायोप्सी के लिए मान्य है, और bronchoscopies केवल अगर ब्रोंकोस्कोपी पैदावार १०० ट्यूमर कोशिकाओं. हालांकि उपरोक्त नमूना प्रकार अक्सर प्राप्त कर रहे हैं, cytology नमूने और अधिक आसानी से एकत्र कर रहे हैं और कुछ संस्थानों में सबसे अधिक उपलब्ध नमूना प्रकार हैं6,7. हालांकि, वर्तमान में कोई मान्य नैदानिक परख cytology नमूनों में पीडी-L1 अभिव्यक्ति के मूल्यांकन के लिए उपलब्ध है; cytology नमूनों के साथ संगत विश्वसनीय LDTs उच्च गुणवत्ता पीडी-L1 परीक्षण की सुविधा होगी.
इसके अलावा, जब एक LDT के नैदानिक सत्यापन की स्थापना, आइएचसी इसी तरह के एक ही रास्ते में किया जाना चाहिए नैदानिक व्यावसायिक परीक्षण8की पुष्टि की । उदाहरण के लिए, कई महत्वपूर्ण कदम ऐसे एंटीबॉडी अनुमापन के रूप में धारावाहिक वर्गों में एक ही संकेत प्राप्त करने के लिए सत्यापित किया जाना चाहिए, इलाज देरी, मशीन समय, और प्रवर्धन प्रणाली9।
हमने हाल ही में एक अनुकूलित LDT का उपयोग करता है कि 22C3 एंटीबॉडी ट्यूमर बायोप्सी और cytology नमूने पर पीडी-L1 अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करने के लिए ध्यान केंद्रित10,11. हम "गोल्ड मानक" पीडी-L1 आइएचसी 22C3 परख10,11 बनाम LDT के साथ एक उच्च सामंजस्य पाया । इस नैदानिक सत्यापित प्रोटोकॉल दुनिया भर में क्षेत्रों में विश्वसनीय, उच्च गुणवत्ता पीडी-L1 परीक्षण का समर्थन करेंगे.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab मोनोथेरापी पीडी-L1-एक्सप्रेस उंनत गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (NSCLC) के साथ रोगियों की पहली और दूसरी लाइन उपचार के लिए अनुमोदित किया गया है । पीडी-L1 immunohistochemistry (आइएचसी) 22C3 साथी नैदानिक परख, जो एक ट्यूमर अनुपात स्कोर (टीपीएस) देता है के साथ पीडी-L1 अभिव्यक्ति के लिए परीक्षण, ट्यूमर ऊतक पर मान्य किया गया है. हम एक अनुकूलित प्रयोगशाला विकसित परीक्षण (LDT) का उपयोग करता है कि 22C3 एंटीबॉडी (Ab) बायोप्सी और cytology नमूनों के लिए एक व्यापक रूप से उपलब्ध आइएचसी के दाग पर ध्यान केंद्रित । पीडी-L1 टीपीएस १२० युग्मित पूरे ट्यूमर ऊतक वर्गों और बायोप्सी नमूनों के साथ और ७० युग्मित बायोप्सी और cytology नमूनों के साथ मूल्यांकन किया गया था (दमा, n = ४०; फुफ्फुस effusions, एन = 30) । 22C3 अब ध्यान केंद्रित LDT आधारित बायोप्सी (~ १००%) और cytology (~ ९५%) नमूनों के बीच एक उच्च सामंजस्य दर दिखाया जब पीडी-L1 आइएचसी अभिव्यक्ति की तुलना में पीडी-L1 आइएचसी 22C3 साथी परख दोनों टीपीएस कट अंक (≥ 1%, ≥ ५०%) अनुकूलित LDT यहां प्रस्तुत किया, 22C3 अटल बिहारी का उपयोग कर दोनों ट्यूमर ऊतक और cytology नमूनों में पीडी-L1 अभिव्यक्ति निर्धारित करने के लिए, दुनिया भर में प्रयोगशालाओं की क्षमता का विस्तार करने के साथ इलाज के लिए NSCLC के साथ रोगियों की पात्रता का आकलन करेंगे विश्वसनीय और reproducible तरीके से pembrolizumab मोनोथेरापी ।

यहां प्रस्तुत प्रक्रिया का उपयोग करना है, और के रूप में इस समूह के हाल के प्रकाशनों10,11में विस्तार से वर्णित है, अनुकूलित LDT चिकित्सकीय १२० अभिलेखीय FFPE के साथ मांय था NSCLC र?...

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Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

22C3 विरोधी पीडी-L1 एंटीबॉडी का उपयोग गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर के रोगियों से बायोप्सी और Cytology नमूनों पर ध्यान केंद्रित

pembrolizumab के साथ उपचार के लिए फेफड़ों के कैंसर के साथ रोगियों की पात्रता का आकलन करने के लिए दुनिया भर में प्रयोगशालाओं की क्षमता का विस्तार करने के लिए, एक विश्वसनीय और reproducible तरीके से, हम एक परख है कि 22C3 एंटीबॉडी का उपयोग करता है एक व्यापक रूप से उपलब्ध पर ध्यान विकसित immunohistochemical दोनों बायोप्सी और cytology नमूनों के लिए, दाग ।

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

ट्यूमर ऊतक और साइटोलॉजी नमूने दोनों में पीडी-एल1 अभिव्यक्ति निर्धारित करने के लिए 22C3 एंटीबॉडी ध्यान का उपयोग करने वाली यह विधि एक विश्वसनीय और प्रजनन तरीके से इम्यूनोथेरेपी के लिए गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर वाले रोगियों के चयन का आकलन करने के लिए प्रयोगशालाओं की क्षमता का विस्तार करेगी। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह सोने के मानक परख के साथ अत्यधिक सामंजस्य है और दुनिया भर के क्षेत्रों में विश्वसनीय, उच्च गुणवत्ता वाले पीडी-एल1 परीक्षण का समर्थन करेगा। सामान्य तौर पर, इस विधि के लिए नए पैथोलॉजिस्ट कभी-कभी दानेदार धुंधला होने के कारण संघर्ष करेंगे।इसके अलावा, मानव कोशिकाओं का धुंधला सोने के मानक के साथ मनाया गया कुछ अधिक तीव्र है। इसलिए 22C3 एलडीटी के साथ पीडी-एल1 धुंधला की सही व्याख्या प्राप्त करने के लिए रोगविज्ञानियों का प्रशिक्षण आवश्यक है। प्रक्रिया का प्रदर्शन श्रीमती होगी ।मारामे हमीला, मेरी प्रयोगशाला से एक तकनीशियन । शुरू करने के लिए, ट्यूमर ऊतक को एक कैसेट में 10% तटस्थ-बफर फॉर्मेलिन में ठीक करें और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में उल्लिखित पैराफिन में कैसेट को एम्बेड करें। एक मोल्ड के अंदर घुसपैठ ऊतक एम्बेड करें जो पिघले हुए पैराफिन से भरा हुआ है।टिश्यू को मोल्ड में तब तक रहने दें जब तक पैराफिन जम न जाए। इसके बाद, तीन माइक्रोमीटर की मोटाई पर पैराफिन एम्बेडेड ऊतक को अनुभागित करने के लिए एक माइक्रोटॉम का उपयोग करें। पैराफिन रिबन को सकारात्मक रूप से चार्ज ग्लास माइक्रोस्कोप स्लाइड में स्थानांतरित करें।इसके बाद एक घंटे तक 37 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सुखा लें। सबसे पहले, एक परिरक्षक समाधान में ब्रोंकियल धोने इकट्ठा करें। एक 50 मिलीलीटर शंकु नली के लिए धोने स्थानांतरित करें।दो ग्राम डीएल-डिइयोथरेटोल डालें और 30 मिनट के लिए ट्यूब को भंवर दें, फिर कमरे के तापमान पर पांच मिनट के लिए 250 गुना ग्राम पर सेंट्रलाइज करें। सुपरनेट निकालें और एक म्यूकोलिटिक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें। 20 मिनट के लिए मध्यम गति से नमूना हिलाएं और कमरे के तापमान पर पांच मिनट के लिए 250 गुना ग्राम पर अपकेंद्रित्र करें।इसके बाद, सुपरनेट को हटा दें और सेल पेलेट को 10% तटस्थ-बफर फॉर्मेलिन युक्त संग्रह ट्यूब में जमा करें। एक सेल ब्लॉक तैयारी एजेंट की चार बूंदें जोड़ें। सेल पेलेट को कैसेट में स्थानांतरित करें।पहले ट्यूमर ऊतक नमूने तैयार करने के लिए वर्णित प्रक्रिया का उपयोग कर पैराफिन एम्बेडिंग और सेक्शनिंग के लिए सेल पेलेट को ठीक करें। शुरू करने के लिए, ऑटोस्टैनर और कंप्यूटर पर बिजली। ऑटोस्टैनर आइकन पर डबल क्लिक करें और यूजर को चुनें।बनाएं लेबल पर और फिर प्रोटोकॉल पर क्लिक करें। 22C3 प्रोटोकॉल पर डबल क्लिक करें। मरीज की आईडी भरें और प्रिंट पर क्लिक करें।इसके बाद, लेबल को स्लाइड पर चिपकादें। इसे खोलने के लिए चुने गए स्लाइड दराज पर बटन दबाएं और थर्मल पैड पर लेबल स्लाइड को ऊपर और अंदर की ओर का सामना करने वाले लेबल के साथ रखें। स्लाइड दराज बंद करो।इसके बाद, डिस्पेंसर से टोपियां हटा दें। रिएजेंट्स रैक पर रिएजेंट्स लोड करें। स्टेनर के हुड खोलें और रिएजेंट हिंडोला पर रिएजेंट रैक रखें, यह सुनिश्चित करें कि वे ठीक से फिट हों और स्थिति में रहें, फिर हुड को बंद करें।सॉफ्टवेयर में, उस उपकरण पर क्लिक करें जिसका उपयोग किया जाएगा और फिर रनिंग पर क्लिक करें। आईएचसी प्रक्रिया के अंत में, कई सेकंड के लिए स्लाइड कुल्ला करने के लिए सफाई समाधान की एक बूंद के साथ नल के पानी का उपयोग करें। स्लाइड को कई सेकंड के लिए दो इथेनॉल स्नान में क्रमिक रूप से विसर्जित करके निर्जलित करें, फिर स्लाइड को कवर स्लिप को स्वचालित रूप से लोड करने के लिए एक कवरस्लिपिंग मशीन में रखें।पीडी-एल1 धुंधला की गुणवत्ता का आकलन शुरू करने के लिए, रोगी नमूने की जांच करने से पहले सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण का विश्लेषण करें। माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, कम से कम 100 व्यवहार्य ट्यूमर कोशिकाओं की उपस्थिति की पुष्टि करें। 4 बार के कम आवर्धन पर, सभी अच्छी तरह से संरक्षित सकारात्मक और नकारात्मक ट्यूमर क्षेत्रों का मूल्यांकन करें।इसके बाद, आंशिक या पूर्ण कोशिका झिल्ली धुंधला स्कोर और अच्छी तरह से संरक्षित ट्यूमर क्षेत्रों में मौजूद सभी ट्यूमर कोशिकाओं के सापेक्ष पीडी-L1-सकारात्मक ट्यूमर कोशिकाओं के अनुपात का आकलन करके ट्यूमर अनुपात स्कोर की गणना करें। इस अध्ययन में, ट्यूमर अनुपात स्कोर या टीपीएस ब्रोंकियल वॉश या प्ल्युरल एफ्युजन से तैयार कोशिकाओं ब्लॉकों में युग्मित ऊतक बायोप्सी नमूनों के लिए मूल्यांकन किया जाता है। बायोप्सी नमूनों के साथ प्रतिनिधि धुंधला पैटर्न पीडी-L1 IHC 22C3 साथी परख के खिलाफ 22C3-एंटीबॉडी ध्यान की तुलना करने के लिए उपयोग किया जाता है ।इंट्राक्लास सहसंबंध गुणांक, जिसका उपयोग टीपीएस स्कोर के सहसंबंध को निरंतर चर के रूप में मापने के लिए किया जाता है, एलडीएटी और सोने के मानक के बीच 99% है। साइटोलॉजी नमूनों के साथ प्रतिनिधि धुंधला पैटर्न भी पीडी-L1 IHC 22C3 साथी परख के खिलाफ 22C3-एंटीबॉडी ध्यान की तुलना करने के लिए उपयोग किया जाता है । टीपीएस कट पॉइंट्स में से किसी का उपयोग करते समय एलडीएटी के साथ बायोप्सी और साइटोलॉजी नमूनों की सामंजस्य दर 95% से अधिक है।टीपीएस को निरंतर चर के रूप में उपयोग करते समय इंट्राक्लास सहसंबंध गुणांक 0.88 और 0.90 के बीच है। एक बार महारत हासिल होने के बाद, यह तकनीक ऊतक और साइटोलॉजी नमूनों दोनों के लिए सकारात्मकता या ट्यूमर हिटोलॉजी के लिए कटऑफ का मूल्यांकन करने में सोने के मानक के साथ एक उच्च सामंजस्य दर देती है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि नमूनों का मूल्यांकन एचई स्लाइड के संदर्भ में किया जाना चाहिए और प्रतिरक्षा कोशिकाओं का आकलन करने के लिए पूरक दाग केवल ट्यूमर कोशिकाओं में पीडी-एल1 अभिव्यक्ति की गलत व्याख्या को बाहर करने के लिए किया जा सकता है।इस प्रक्रिया के बाद, फाइन-सुई बायोप्सी, ईयूएस-एफएनए या ब्रोंकियल ब्रश जैसे अन्य नमूनों का मूल्यांकन किया जा सकता है। क्लीनिकों में इसकी स्थापना के बाद, परख मजबूती को समय के साथ मान्यता की मांग करके, मानक परिचालन प्रक्रियाओं का पालन करके, और नियमित रूप से बाहरी गुणवत्ता मूल्यांकन योजनाओं में भाग लेकर बनाए रखने की आवश्यकता है। इस वीडियो को देखने के बाद, आपको इस बात की अच्छी समझ होनी चाहिए कि 22C3 एंटी-पीडी-एल1 एंटीबॉडी का उपयोग करके अनुकूलित प्रोटोकॉल को कैसे लागू किया जाए, गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर वाले रोगियों से बायोप्सी और साइटोलॉजी नमूने दोनों पर ध्यान केंद्रित करें।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

फेफड़ों के ट्यूमर सेल भर्ती परख

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA आधारित तरल बायोप्सी: फेफड़ों के कैंसर स्क्रीनिंग के लिए प्लाज्मा miRNA हस्ताक्षर वर्गीकारक (एमएससी) का अनुभव

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

स्पर्श छाप Cytology का उपयोग नैदानिक रोग नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले ट्यूमर डीएनए प्राप्त करने के लिए सरल और तेजी से विधि

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर ऊतक के पैराफिन-एम्बेडेड स्लाइड पर लोचदार दाग

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

कैंसर सेल आक्रमण और विरोधी मेटास्टेटिक दवा Hydrogel सूक्ष्म चैंबर सरणी (HMCA) का उपयोग कर स्क्रीनिंग के विश्लेषण-प्लेट्स आधारित

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymal लुगदी ऊतक और सह कैंसर कोशिकाओं के साथ संस्कृति से कोशिका अलगाव स्टेम उनके बातचीत का अध्ययन करने के लिए

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर रोगियों से अर्द्ध-स्वचालित पीडी-एल 1 विशेषता और परिसंचरण ट्यूमर कोशिकाओं की गणना

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

फेफड़ों के कैंसर सेल लाइन्स में कैंसर स्टेम सेल की रेडियो संवेदनशीलता

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

कैंसर रोगियों के रक्त प्लाज्मा नमूनों में सेल मुक्त डीएनए का पता लगाना

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

सेल और ऊतक नमूने से मानव स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं का अलगाव और कार्यात्मक मूल्यांकन

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...