Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Denne studien ble sponset av Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Fond spilte ingen rolle i studien design, innsamling og analyse, beslutningen om å publisere eller utarbeidelse av manuskriptet.

Alle prosedyrer er godkjent av den lokale etikk (menneskelige forskning komité, sentrum Hospitalier Universitaire de Nice/Tumorothèque BB-0033-00025).
Merk: Denne protokollen er spesielt justert for bruk av 22C 3 antistoff konsentrat på en kommersielt tilgjengelig automatisert IHC fargemaskin (referert til som autostainer her, se Tabellen for materiale) for svulst biopsier og cytologi eksempler.
1. forberedelse av svulst
<ol><li>Fastsette tumor...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

Vi har validert en optimalisert LDT bruker 22C 3 PD-L1 antistoff konsentrat, ved å sammenligne den med den tilsvarende klinisk godkjent kommersielle test10,11. 22C 3 konsentrert antistoff-baserte LDT viste et høyt for overensstemmelse mellom biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC uttrykket bestemmes ved hjelp av PD-L1 IHC 22C 3 analysen på både ≥1% TPS og ≥50% TPS kuttet poeng. Nylig anbefalt av International Association for s...

Siste kliniske studier har bevist effekten av pembrolizumab, et humanized monoklonalt IgG4 kappa isotype antistoff som blokkerer samspillet mellom programmert celledød 1 (PD-1) og dens ligander, PD-L1 og PD-L2, i behandling av pasienter med Avansert NSCLC1,2,3,4.
Foreløpig er pembrolizumab godkjent for behandling av PD-L1-uttrykke NSCLC i begge behandling-naive pasienter med en PD-L1 uttrykk TPS ≥50% og ingen epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) eller anaplastisk lymfom kinase (ALK) genomisk svulst avvik3 og for tidligere behandlet pasienter med en PD-L1 TPS ≥1%1.
PD-L1 protein uttrykk oppdaget av IHC har vært mye brukt som en prediktiv biomarkør analysen anti-PD-1/PD-L1 terapi. I pembrolizumab kliniske forsøk identifiserte PD-L1 TPS med formalin-fast parafin-embedded (FFPE) vevsprøver bruker PD-L1 IHC 22C 3 følgesvenn analysen5. Denne analysen har blitt godkjent av US Food and Drug Administration (FDA) og er CE-merket i Europa for fastsettelse av svulsten PD-L1 TPS5.
Globale tilleggsalternativer over institusjoner for pålitelig og høy kvalitet vurderinger av PD-L1 TPS med LDTs som bruker 22C 3 antistoff konsentrat er avgjørende for å støtte klinisk beslutninger om pasienten valgbarhet for pembrolizumab behandling. Et stort antall rutinelaboratorier har ikke tilgang til følgesvenn diagnostiske PD-L1 IHC 22C 3 analysen. Derfor er utviklingen av pålitelig og konsekvent LDTs kompatibel med ekstra, allment tilgjengelig IHC autostainer plattformer viktig.
Videre er det behov for å etablere LDTs cytologi utvalg som er den eneste prøven ofte tilgjengelig fra NSCLC pasienter. PD-L1 IHC 22C 3 følgesvenn analysen er godkjent for resections, kjernen nål biopsier og bronchoscopies hvis bronkoskopi gir 100 kreftceller. Selv om typene over eksempel hentes ofte, cytologi eksempler er lettere samlet og er den mest tilgjengelige utvalget i noen institusjoner6,7. Men er det ikke validert diagnostiske analysen tilgjengelig for vurdering av PD-L1 uttrykket i cytologi eksempler; pålitelig LDTs kompatibel med cytologi eksempler vil ytterligere lette høykvalitets PD-L1 testing.
Videre bør etablering klinisk valideringen av en LDT, IHC utføres når på en lignende måte til tilsvarende klinisk godkjent kommersielle test8. Flere kritiske trinn bør for eksempel kontrolleres for å få samme signal i seriell delene som antistoff titrering, forbehandling forsinkelser, inkubasjonstiden og forsterkning systemer9.
Vi har nylig utviklet en optimalisert LDT som bruker 22C 3 antistoff konsentrat evaluere PD-L1 uttrykket på svulst biopsier og cytologi eksempler10,11. Vi fant en høy overensstemmelse med den LDT versus "gullstandarden" PD-L1 IHC 22C 3 analysen10,11. Denne klinisk godkjent protokollen støtter pålitelig, høy kvalitet PD-L1 testing på tvers av områder globalt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab monoterapi er godkjent for første - og andre-linje behandling av pasienter med PD-L1-uttrykke avansert ikke-småcellet lungekreft (NSCLC). Testing av PD-L1 uttrykk med PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22C 3 følgesvenn diagnostiske analysen, som gir en svulst andel score (TPS), har blitt validert på tumor vev. Vi utviklet en optimalisert laboratorium utviklet test (LDT) som bruker 22C 3 antistoff (Ab) konsentrat på en allment tilgjengelig IHC autostainer for biopsi og cytologi prøver. PD-L1 TPS ble evaluert med 120 sammenkoblede hele-tumor vev deler og biopsi prøver og med 70 sammen biopsi og cytologi eksempler (bronkial vasker, n = 40; pleural effusions, n = 30). 22C 3 Ab konsentrat-baserte LDT viste et høyt for overensstemmelse mellom biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC uttrykk bestemmes ved hjelp av PD-L1 IHC 22C 3 følgesvenn analysen på begge TPS kuttet poeng (≥1%, ≥50%). Optimalisert LDTEN presenteres her, bruker 22C 3 Ab konsentrat til å bestemme PD-L1 uttrykket i begge tumor vev og cytologi prøver, vil utvide evnen til laboratorier over hele verden for å vurdere kvalifiseringskravene for pasienter med NSCLC for behandling med pembrolizumab monoterapi på en pålitelig og reproduserbar måte.

Ved hjelp av prosedyren som presenteres her, og som er beskrevet i detalj i denne gruppen siste publikasjoner10,11, ble optimalisert LDTEN klinisk godkjent med 120 arkivering FFPE NSCLC biopsi prøver fra pasienter som gjennomgikk kirurgisk resection eller en biopsi på Pasteur University Hospital, Nice, mellom mars 2007 og mars 2016. Videre for vurdering av PD-L1 uttrykk for cytologi eksempler, TPS ble evaluert i 70 sammenkoblede...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Med 22C 3 Anti-PD-L1 antistoff konsentrere seg om biopsi og cytologi eksempler fra ikke-småcellet lungekreft pasienter

For å utvide evnen til laboratorier over hele verden for å vurdere kvalifiseringskravene for pasienter med lungekreft behandling med pembrolizumab, på en pålitelig og reproduserbar måte, utviklet vi en analyse som bruker 22C 3 antistoff konsentrat på en allment tilgjengelig Immunohistochemical autostainer, for både biopsi og cytologi prøver.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Denne metoden ved hjelp av 22C3 antistoffkonsentrat for å bestemme PD-L1 uttrykk i både tumorvev og cytologi prøven vil utvide evnen til laboratorier å vurdere valg av pasienter med ikke-småcellet lungekreft for immunterapi på en pålitelig og reproduserbar måte. Den største fordelen med denne teknikken er at den er svært konkordant med gullstandardanalysen og vil støtte pålitelig PD-L1-testing av høy kvalitet på tvers av regioner over hele verden. Generelt vil patologer som er nye på denne metoden slite på grunn av den granulære fargingen som av og til observeres.Videre er fargingen av de menneskelige cellene noe mer intens enn det som er observert med gullstandarden. Derfor er trening av patologer nødvendig for å oppnå riktig tolkning av PD-L1 farging med 22C3 LDT. Å demonstrere prosedyren vil være Mrs.Marame Hamila, en tekniker fra laboratoriet mitt. For å begynne, fikse tumorvevet i 10% nøytral-bufret formalin i en kassett og legg inn kassetten i parafin som beskrevet i tekstprotokollen. Bygg inn det infiltrerte vevet inne i en mugg som er fylt med smeltet parafin.La vevet holde seg i formen til parafinen har størknet. Etter dette, bruk en mikrotom for å seksjonere parafin-innebygd vev med en tykkelse på tre mikrometer. Overfør parafinbåndet til et positivt ladet glassmikroskoplysbilde.Tørk deretter lysbildet i en time ved 37 grader Celsius. Først samler du bronkial vask i en konserveringsmiddelløsning. Overfør vaskene til et konisk rør på 50 milliliter.Tilsett to gram DL-Dithiothreitol og vortex røret i 30 minutter, deretter sentrifuge på 250 ganger g i fem minutter ved romtemperatur. Fjern det overnaturlige og tilsett 10 milliliter av en mucolytisk løsning. Rist prøven ved middels hastighet i 20 minutter og sentrifuge ved 250 ganger g i fem minutter ved romtemperatur.Etter dette fjerner du det overnaturlige og deponerer cellepellet i et oppsamlingsrør som inneholder 10% nøytralbufret formalin. Tilsett fire dråper av et celleblokkforberedelsesmiddel. Overfør cellepelleten til en kassett.Fest cellepellet for parafin innebygging og snitting ved hjelp av prosessen som tidligere er beskrevet for å forberede tumorvevsprøver. For å begynne, slå på autostaineren og datamaskinen. Dobbeltklikk på autostainerikonet og velg brukeren.Klikk på Opprett etikett og deretter på Protokoll. Dobbeltklikk på 22C3-protokollen. Fyll ut pasientens ID, og klikk på Skriv ut.Etter dette, fest etiketten på lysbildet. Trykk på knappen på den valgte skyveskuffen for å åpne den og plasser det merkede lysbildet på termalputen med etiketten vendt oppover og innover. Lukk lysbildeskuffen.Deretter fjerner du hettene fra dispenserne. Legg reagensene på reagensstativet. Åpne panseret på staineren og plasser reagensstativene på reagenskarusellen, og pass på at de passer riktig og holder på plass, og lukk deretter panseret.I programvaren klikker du på instrumentet som skal brukes, og klikk deretter Kjører. På slutten av IHC-prosedyren bruker du vann fra springen med en enkelt dråpe rengjøringsløsning for å skylle lysbildet i flere sekunder. Dehydrere lysbildet ved å senke det sekvensielt i to etanolbad i flere sekunder hver, og plasser deretter lysbildet i en dekkslippingsmaskin for å automatisk laste dekselet slip.For å begynne å vurdere kvaliteten på PD-L1-fargingen, analyser de positive og negative kontrollene før du undersøker pasientprøven. Ved hjelp av et mikroskop, bekreft tilstedeværelsen av minst 100 levedyktige tumorceller. Ved en lav forstørrelse på 4 ganger, vurdere alle godt bevarte positive og negative tumorområder.Etter dette, score delvis eller fullstendig cellemembran farging og beregne tumorproporsjonen score ved å vurdere andelen PD-L1-positive tumorceller i forhold til alle tumorceller som finnes i de godt bevarte tumorområdene. I denne studien, tumor andel score eller TPS er evaluert for pared-vev biopsi prøver i celler blokker utarbeidet fra bronkial vasker eller pleural effusjoner. Representative fargemønstre med biopsiprøver brukes til å sammenligne 22C3-antistoffkonsentratet mot PD-L1 IHC 22C3-følgeanalysen.Den intraklasse korrelasjonskoeffisienten, som brukes til å måle korrelasjonen av TPS-poengsummen som en kontinuerlig variabel, er 99% mellom LDT og gullstandarden. Representative fargingsmønstre med cytologiprøver brukes også til å sammenligne 22C3-antistoffkonsentratet mot PD-L1 IHC 22C3-følgeanalysen. Konkordanshastigheten av biopsi- og cytologiprøver med LDT er større enn 95% ved bruk av en av TPS-kuttpunktene.Den intraklassekorrelasjonskoeffisienten ved bruk av TPS som en kontinuerlig variabel er mellom 0,88 og 0,90. Når mestret, gir denne teknikken en høy konkordansrate med gullstandarden i å evaluere cutoff for positivitet eller tumorhetologi for både vev og cytologiprøver. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske at prøvene må evalueres med henvisning til HE-lysbildet, og i noen vanskelige tilfeller kan komplementære flekker for å vurdere immunceller utføres for å utelukke feiltolkning av PD-L1-uttrykket bare i tumorceller.Etter denne prosedyren kan andre prøver som finnålbiopsier, EUS-FNAer eller bronkialbørster evalueres. Etter innstillingen i klinikkene må analysens robusthet opprettholdes over tid ved å søke akkreditering, ved å følge standard driftsprosedyrer, og ved regelmessig å delta i eksterne kvalitetsvurderingsordninger. Etter å ha sett denne videoen, bør du ha en god forståelse av hvordan du implementerer den optimaliserte protokollen ved hjelp av 22C3 anti-PD-L1-antistoffet konsentrere seg om en allment tilgjengelig IHC autostainer både biopsi og cytologiprøver fra pasienter med ikke-småcellet lungekreft.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Lunge svulst celle rekruttering analysen

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA basert flytende biopsi: Opplevelsen av Plasma miRNA signatur klassifiserer (MSC) for Lung Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Enkel og rask metode å få høy kvalitet svulst DNA fra klinisk-patologisk prøver bruker Touch forlaget cytologi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastisk farging på parafin-embedded lysbilder av pT3N0M0 magekreft vev

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse av kreft cellen invasjon og anti-metastatisk narkotikarelaterte Screening bruker Hydrogel mikro-kammer Array (HMCA)-baserte plater

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymal stamceller isolert fra cellulose vev og co kultur kreftceller å studere deres samhandling

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering og opplisting av sirkulerende tumor celler fra ikke-liten celle Lungekreftpasienter ved Immunofluorescence

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Radiosensitivity av kreft stamceller i lungekreft cellelinjer

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Påvisning av cellefritt DNA i blodplasmaprøver av kreftpasienter

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Isolering og funksjonell vurdering av humane brystkreftstamceller fra celle- og vevsprøver

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...