Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Denna studie var sponsrad av Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Finansiärerna spelade ingen roll i den studiedesign, datainsamling och analys, beslut om att offentliggöra eller beredning av manuskriptet.

Alla förfaranden har godkänts av den lokala etiska kommittén (mänskliga forskningsetisk kommitté, Centre Hospitalier Universitaire de Nice/Tumorothèque BB-0033-00025).
Obs: Detta protokoll justeras specifikt för användning av 22C 3 antikropp koncentratet på ett kommersiellt tillgängliga automatiserade IHC stainer (som avses som autostainer här, se Tabell för material) för tumör biopsier och cytologi prover.
1. beredning av tumör vävnad...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

Vi har validerat en optimerad LDT använder 22C 3 PD-L1 antikropp koncentratet, genom att jämföra det med motsvarande kliniskt validerade kommersiella test10,11. Den 22C 3 koncentrerade antikroppsbaserade LDT visade en hög överensstämmelse mellan biopsi (~ 100%) och cytologi (~ 95%) exemplar jämfört med PD-L1 IHC uttrycket bestäms med PD-L1 IHC 22C 3-analys på både ≥1% TPS och ≥50% TPS skär punkter. Som nyligen rekommenderas av den internationella ...

Senaste kliniska studier har visat effekt av pembrolizumab, en humaniserad monoklonal IgG4 kappa isotypen antikropp som blockerar interaktionen mellan programmerad celldöd 1 (PD-1) och dess ligander, PD-L1 och PD-L2, vid behandling av patienter med avancerad NSCLC1,2,3,4.
För närvarande är pembrolizumab godkänt för behandling av PD-L1-uttryckande NSCLC i båda behandlingsnaiva patienter med en PD-L1-uttryck TPS av ≥50% utan epidermal tillväxtfaktor (EGFR) eller Anaplastisk lymfom Kinas (ALK) genomisk tumör avvikelser3 för tidigare behandlade patienter med en PD-L1 TPS ≥1%1.
PD-L1 proteinuttryck upptäcks av IHC har använts som en Prediktiva biomarkörer test för anti-PD-1/PD-L1 terapier. I pembrolizumab kliniska prövningar bestämdes PD-L1 TPS erhålls med formalin-fast paraffin-inbäddat (FFPE) vävnadsprover med hjälp av PD-L1 IHC 22C 3 följeslagare assay5. Denna analys har godkänts av den amerikanska Food and Drug Administration (FDA) och har varit CE-märkt i Europa för att fastställa tumörens PD-L1 TPS5.
Ytterligare globala alternativ över institutioner för tillförlitlig och högkvalitativ utvärderingar av PD-L1 TPS med LDTs som använder 22C 3 antikropp koncentratet är viktigt att stödja kliniska besluten gällande patientens behörighet för pembrolizumab behandling. Ett stort antal patologi laboratorier har inte tillgång till följeslagare diagnostiska PD-L1 IHC 22C 3 analysen. Utveckling av tillförlitliga och konsekventa LDTs som är kompatibelt med ytterligare, allmänt tillgängliga IHC autostainer plattformar är därför viktig.
Dessutom finns det ett behov av att upprätta LDTs med cytologi prover som är den enda exemplar typ ofta tillgängliga från NSCLC patienter. PD-L1 IHC 22C 3 följeslagare analysen är validerad för resektioner, nålbiopsi och bronchoscopies endast om bronkoskopi ger 100 tumörceller. Även om ovanstående provtyper erhålls ofta, cytologi prover samlas in lättare och är oftast tillgängliga provtypen i vissa institutioner6,7. Det finns dock för närvarande inga validerade diagnostiska test för utvärdering av PD-L1-uttryck i cytologi prover; pålitlig LDTs kompatibel med cytologi prover skulle ytterligare underlätta högkvalitativa PD-L1 testning.
Dessutom när du upprättar klinisk validering av en LDT, bör IHC utföras på ett liknande sätt till den motsvarande kliniskt validerade kommersiella test8. Exempelvis bör flera kritiska steg kontrolleras för att erhålla samma signal i seriell sektioner såsom titrering av antikroppar, förbehandling förseningar, inkubationstiden och förstärkning system9.
Vi har nyligen utvecklat en optimerad LDT som använder 22C 3 antikropp koncentratet för att utvärdera de PD-L1-uttrycket på tumör biopsier och cytologi prover10,11. Vi hittade en hög samstämmighet med den LDT kontra den ”gyllene standarden” PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. Detta kliniskt validerade protokoll kommer att stödja tillförlitliga, högkvalitativa PD-L1 testning över regioner globalt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab monoterapi har godkänts för första och andra linjens behandling av patienter med PD-L1-uttryck för avancerad icke-småcellig lungcancer (NSCLC). Test för PD-L1-uttryck med PD-L1 immunhistokemi (IHC) 22C 3 följeslagare diagnostiska analysen, vilket ger en tumör andel Poäng (TPS), har validerats på tumörvävnad. Vi utvecklat en optimerad laboratorium utvecklade test (LDT) som använder 22C 3 antikropp (Ab) koncentratet på en allmänt tillgänglig IHC autostainer för biopsi och cytologi exemplar. PD-L1 TPS utvärderades med 120 Parade hela-tumörvävnad sektioner och biopsiprover och 70 ihopkopplade biopsi och cytologi prover (bronkial tvättar, n = 40; pleural utgjutningar, n = 30). Den 22C 3 Ab koncentrat-baserade LDT visade en hög överensstämmelse mellan biopsi (~ 100%) och cytologi (~ 95%) exemplar jämfört med PD-L1 IHC uttryck bestäms med PD-L1 IHC 22C 3 följeslagare analys på båda TPS skär punkter (≥1%, ≥50%). Den optimerade LDT som presenteras här, använder 22C 3 Ab koncentratet för att bestämma de PD-L1-uttrycket i både tumörvävnad och cytologi exemplar, kommer att expandera laboratorier världen över möjlighet att bedöma huruvida patienter med NSCLC för behandling med pembrolizumab monoterapi i ett tillförlitligt och reproducerbart sätt.

Använda proceduren presenteras här, och som beskrivs i detalj i gruppens senaste publikationer10,11, var den optimerade LDT kliniskt validerade med 120 arkivens FFPE NSCLC biopsiprover från patienter som genomgick kirurgiska resektion eller en biopsi vid Pasteur Universitetssjukhuset, Nice, mellan mars 2007 och mars 2016. Dessutom för utvärdering av PD-L1-uttryck av cytologi prover, TPS utvärderades i 70 Parade biopsi vävna...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Använda 22C 3 Anti-PD-L1 antikropp koncentreras biopsi och cytologi prover från icke-small Cell Lung cancerpatienter

För att expandera laboratorier världen över förmåga att bedöma stödberättigande för patienter med lungcancer för behandling med pembrolizumab, på ett sätt som tillförlitliga och reproducerbara, utvecklade vi ett test som använder 22C 3 antikropp koncentratet på en allmänt tillgänglig immunhistokemisk autostainer, för både biopsi och cytologi exemplar.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Denna metod med 22C3 antikroppskoncentrat för att bestämma PD-L1 uttryck i både tumör vävnad och cytologi exemplar kommer att utöka möjligheten för laboratorier att bedöma urval av patienter med icke-småcellig lungcancer för immunterapi på ett tillförlitligt och reproducerbart sätt. Den största fördelen med denna teknik är att det är mycket samstämmig med guldmyntfoten analys och kommer att stödja tillförlitliga, högkvalitativa PD-L1 testning över regioner över hela världen. I allmänhet kommer patologer nya till denna metod kamp på grund av granulat färgning ibland observerats.Dessutom är färgningen av de mänskliga cellerna något mer intensiv än den som observerats med guldmyntfoten. Därför utbildning av patologer är nödvändigt att få korrekt tolkning av PD-L1 färgning med 22C3 LDT. Att demonstrera förfarandet kommer att vara Mrs.Marame Hamila, en tekniker från mitt labb. Till att börja, fixa tumörvävnaden i 10%neutral-buffrad formalin i en kassett och bädda in kassetten i paraffin som beskrivs i textprotokollet. Bädda in den infiltrerade vävnaden inuti en form som är fylld med smält paraffin.Låt vävnaden stanna i formen tills paraffin har stelnat. Efter detta, använd en mikrotom för att dela upp den paraffinininbäddade vävnaden vid en tjocklek av tre mikrometer. Överför paraffinbandet till ett positivt laddat glasmikroskopsglas.Torka sedan bilden i en timme vid 37 grader Celsius. Först samla bronkial tvättning i en konserveringsmedel lösning. Överför tvättningen till ett koniskt rör på 50 milliliter.Tillsätt två gram DL-Dithiothreitol och vortexa röret i 30 minuter, sedan centrifug vid 250 gånger g i fem minuter vid rumstemperatur. Ta bort supernatanten och tillsätt 10 milliliter av en mucolytisk lösning. Skaka provet i medelhög hastighet i 20 minuter och centrifugera vid 250 gånger g i fem minuter vid rumstemperatur.Efter detta, ta bort supernatanten och sätt in cellpelletsen i ett uppsamlingsrör som innehåller 10%neutral-buffrad formalin. Tillsätt fyra droppar av ett cellblock förberedelsemedel. Överför cellpelletsen till en kassett.Fix cell pelleten för paraffin inbäddning och snittning med hjälp av den process som tidigare beskrivits för att förbereda tumör vävnadsprover. Till att börja med ström på autostainer och datorn. Dubbelklicka på ikonen autostainer och välj användaren.Klicka på Skapa etikett och sedan på Protokoll. Dubbelklicka på 22C3-protokollet. Fyll i patientens ID och klicka på Skriv ut.Efter detta, stick etiketten på bilden. Tryck på knappen på den valda skjutlådan för att öppna den och placera den märkta bilden på termodyn med etiketten uppåt och inåt. Stäng dialådan.Därefter tar du bort locken från automaterna. Ladda reagenserna på reagensstället. Öppna huven på färgaren och placera reagensställen på reagenserna karusell, se till att de passar ordentligt och håller i position, stäng sedan huven.I programvaran, klicka på instrumentet som kommer att användas och sedan klicka på Running. I slutet av IHC-proceduren använder du kranvatten med en enda droppe rengöringslösning för att skölja av objektglaset i flera sekunder. Torka av bilden genom att fördjupa den sekventiellt i två etanolbad i flera sekunder vardera, placera sedan bilden i en coverslipping maskin för att automatiskt ladda locket slip.För att börja bedöma kvaliteten på PD-L1-färgningen, analysera de positiva och negativa kontrollerna innan patientens prov undersöks. Med hjälp av ett mikroskop, bekräfta förekomsten av minst 100 livskraftiga tumörceller. Vid en låg förstoring av 4 gånger, utvärdera alla välbevarade positiva och negativa tumörområden.Efter detta, poäng partiell eller komplett cellmembranet färgning och beräkna tumör proportionen poäng genom att bedöma andelen PD-L1-positiva tumörceller i förhållande till alla tumörceller som finns i de välbevarade tumör områden. I denna studie utvärderas tumören proportionen score eller TPS för parade-vävnad biopsi prover i celler block beredda från bronkial tvättar eller pleura-effusions. Representativa färgningsmönster med biopsiprover används för att jämföra 22C3-antikroppskoncentratet mot PD-L1 IHC 22C3-följeanalysen.Intraklasskorrelationskoefficienten, som används för att mäta korrelationen för TPS-poängen som en kontinuerlig variabel, är 99%mellan LDT och guldstandarden. Representativa färgning mönster med cytologi exemplar används också för att jämföra 22C3-antikroppskoncentrat mot PD-L1 IHC 22C3 följeslagare analysen. Konkordansen av biopsi och cytologi prover med LDT är större än 95%när du använder någon av TPS skärpunkter.Den intraklassiska korrelationskoefficienten medan TPS används som en kontinuerlig variabel ligger mellan 0,88 och 0,90. När behärskar, ger denna teknik en hög konkordans takt med guldmyntfoten i utvärdera cutoff för positivitet eller tumör histologi för både vävnad och cytologi exemplar. Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att proverna måste utvärderas med hänvisning till HE bilden och i vissa svåra fall kompletterande fläckar för att bedöma immunceller kan utföras för att utesluta feltolkning av PD-L1 uttryck i tumörceller bara.Efter detta förfarande kan andra exemplar som fin-nål tarmbiopsier, EUS-FNAs eller luftrörsborstar utvärderas. Efter dess inställning i klinikerna, analysen robusthet måste upprätthållas över tiden genom att söka ackreditering, genom att följa standard operativa förfaranden, och genom att regelbundet delta i externa system för kvalitetsbedömning. Efter att ha sett den här videon, bör du ha en god förståelse för hur man genomför det optimerade protokollet med hjälp av 22C3 anti-PD-L1 antikropp koncentrera sig på en allmänt tillgänglig IHC autostainer både biopsi och cytologi prover från patienter med icke-småcellig lungcancer.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Lung tumör Cell rekrytering Assay

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MikroRNA baserat Liquid Biopsy: Upplevelsen av den Plasma miRNA signatur klassificerare (MSC) för Lung Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Enkel och snabb metod att få hög kvalitet tumör DNA från klinisk-patologiska exemplar med Touch avtryck cytologi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastisk färgning på paraffin-inbäddade diabilder av pT3N0M0 mag cancer vävnad

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analys av Cancer Cell Invasion och anti metastaserande Drug Screening med hjälp av Hydrogel Micro-kammare Array (HMCA)-baserade plattor

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenkymala stamceller isolering från massa vävnad och samtidig kultur med cancerceller för att studera deras interaktioner

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering och uppräkning av cirkulerande tumörceller från icke-småcellig Lung cancer patienter genom Immunofluorescensering

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Radio känslighet av cancer stamceller i Lung cancer cellinjer

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Påvisande av cellfritt DNA i blodplasmaprover från cancerpatienter

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Isolering och funktionell bedömning av mänskliga bröstcancerstamceller från cell- och vävnadsprover

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...