Name: using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Bu çalışmada Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, ABD tarafından sponsor oldu. Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayımlamaya karar veya el yazması hazırlanması hiçbir rol oynamıştır.

Tüm yordamları Yerel Etik Komitesi tarafından onaylanmış olan (insan Araştırma Etik Komitesi, merkezi Hospitalier Universitaire de Nice/Tumorothèque BB-0033-00025).
Not: Bu protokol özel olarak piyasada bulunan bir otomatik IHC stainer (burada autostainer, Tablo malzemelerigörmek için denir) 22C 3 antikor konsantre kullanımı için tümör biyopsi ve sitoloji örnekler için ayarlanır.
1. tümör doku örneği hazırlanması
<ol><li>T...

<ol>
	<li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer.">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li><li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated,+PD-L1-positive,+advanced+non-small-cell+lung+cancer+(KEYNOTE-010):+a+randomised+controlled+trial.">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li><li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li><li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced,+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer:+a+randomised,+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study.">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li><li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing:+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer.">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li><li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis.">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li><li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer:+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center.">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li><li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).</li><li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective.">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms.">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).</li><li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients.">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li><li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx.">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li><li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas.">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li><li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma:+Comparison+among+cytology,+small+biopsy,+and+surgical+resection+specimens.">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li><li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy.">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li><li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them.">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li></ol>

Biz 22C 3 PD-L1 antikor konsantre ol, karşılık gelen klinik olarak doğrulanmış ticari test10,11ile karşılaştırarak kullanarak en iyi duruma getirilmiş bir LDT doğrulanmış var. 22C 3 antikor tabanlı LDT biyopsi (~ %100) ve PD-L1 IHC 22C 3 tahlil ≥1% TPS ve ≥50% kesme noktaları TPS olarak kullanarak kararlı PD-L1 IHC ifade karşılaştırıldığında sitoloji (~ %95) örnekler arasında yüksek bir uyumluluk oranı gösterdi yoğunlaşmıştı...

Son klinik deneyler pembrolizumab, programlanmış hücre ölümü 1 arasındaki etkileşimi (PD-1) engelleyen bir insanlaşmış monoklonal Igg4 kappa izotip antikor ve hastalarının tedavisinde PD-L1 ve PD-L2, onun ligandlar etkinliğini göstermiştir Gelişmiş NSCLC1,2,3,4.
Şu anda, pembrolizumab PD-L1-ifade NSCLC ≥50% ve hiçbir epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR) veya Anaplastik Lenfoma kinaz (ALK) genomik tümör anomalileri3 bir PD-L1 ifade TPS her iki tedavi-naif hastalarda tedavisi için onaylanmıştır ve için daha önce bir PD-L1 TPS ≥1%1' in tedavi.
PD-L1 protein ifade IHC tarafından tespit anti-PD-1/PD-L1 tedaviler için yaygın bir akıllı biyomarker tahlil olarak kullanılmıştır. Pembrolizumab klinik çalışmalarda, PD-L1 formalin sabit parafin gömülü (FFPE) doku örnekleri ile elde edilen TPS PD-L1 IHC 22C 3 arkadaşı tahlil5kullanarak tespit edilmiştir. Bu tahlil ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmıştır ve CE-Avrupa'da işaretlenmiş tümör PD-L1 TPS5belirlenmesi için olmuştur.
Ek genel seçenekleri PD-L1 TPS 22C 3 antikor konsantre kullanan UMTH ile güvenilir ve yüksek kaliteli değerlendirmeler için kurumlar arasında klinik hasta pembrolizumab uygunluk ile ilgili kararlar desteklemek için gerekli olan tedavi. Patoloji Laboratuvarı, çok sayıda arkadaşı tanılama PD-L1 IHC 22C 3 tahlil için erişemez. Bu nedenle, güvenilir ve tutarlı UMTH ek, yaygın olarak kullanılan IHC autostainer platformları ile uyumlu geliştirilmesi esastır.
Ayrıca, UMTH NSCLC hastalar sık sık kullanılabilir tek numune türü vardır sitoloji numuneleri kullanılarak kurmaya gerek yoktur. Bronkoskopi 100 tümör hücreleri belirtiyorsa PD-L1 IHC 22C 3 arkadaşı tahlil rezeksiyonu, çekirdek iğne biyopsileri ve bronchoscopies için doğrulanır. Her ne kadar yukarıdaki örnek türleri sık sık elde edilen, sitoloji örnekleri daha kolay toplanan ve bazı kurumlar6,7en yaygın olarak bulunan örnek türü vardır. Ancak, orada şu anda doğrulanan hiçbir teşhis tahlil sitoloji örnekleri PD-L1 ifadede değerlendirilmesi için kullanılabilir; güvenilir UMTH sitoloji örnekleri ile uyumlu daha fazla yüksek kaliteli PD-L1 test kolaylaştırmak.
Ayrıca, bir LDT klinik doğrulanmasını kurarken, IHC ilgili klinik olarak doğrulanmış ticari test8için benzer bir şekilde yapılmalıdır. Örneğin, birkaç önemli adımlar antikor titrasyonu, tedavi öncesi gecikmeler, kuluçka süresi ve güçlendirme sistemleri9gibi seri bölümlerde aynı sinyal almak için doğrulanması gerekir.
Son zamanlarda 22C 3 antikor konsantre tümör biyopsi ve sitoloji örnekleri10,11PD-L1 ifade değerlendirmek için kullandığı bir en iyi duruma getirilmiş LDT geliştirdik. Liberal düşünce topluluğu karşı "altın standart" PD-L1 IHC 22C 3 tahlil10,11ile yüksek bir uyum bulduk. Güvenilir, yüksek kaliteli PD-L1 bölgeler arasında genel olarak test bu klinik olarak doğrulanan iletişim kuralını destekler.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>NovaPrep HQ1</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Preservative solution for cytology specimens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaprep&#174; HQ+ B</td>
			<td>Novacyt</td>
			<td>NA</td>
			<td>Mucolytic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6042 VIP 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229 TEC 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope glass slide SuperFrost Plus</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph Multi Reax Vortex Shaker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-889-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Cytoblock</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7401150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>#M365329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>SK006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer Link 48</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>AS480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BenchMark ULTRA autostainer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#750-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HQ Universal Linker</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView HRP Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification H2O2</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplifier</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Amplification Multimer</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView DAB</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiView Copper</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin II</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#790-2208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Reagent</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#760-2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td>
			<td>Ventana</td>
			<td>#950-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Film Coverslipper</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4742</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 22c3 anti-pd-l1 antibody concentrate on biopsy and cytology samples from non-small cell lung cancer patients

Pembrolizumab tedavinin küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) PD-L1-gelişmiş ifade ile hastaların birinci ve ikinci basamak tedavisi için onaylanmıştır. PD-L1 mesaj PD-L1 immünhistokimya (IHC) 22C 3 arkadaşı teşhis tahlil ile test, (TPS) sayı hangi bir tümör oranını verir, tümör dokusu üzerinde doğrulandı. Biz 22C 3 antikor (Ab) konsantre üzerinde yaygın olarak kullanılan bir IHC autostainer biyopsi ve sitoloji örnekleri için kullandığı bir en iyi duruma getirilmiş laboratuar geliştirilen test (LDT) geliştirdi. PD-L1 TPS 120 eşleştirilmiş bütün tümör doku bölümleri ve biyopsi örnekleri ile değerlendirildi ve biyopsi ve sitoloji örnekleri 70 ile eşleştirilmiş (bronş yıkama, n = 40; plevral efüzyon, n = 30). Konsantre tabanlı LDT biyopsi (~ %100) ve sitoloji arasındaki yüksek bir uyumluluk oranı her iki TPS PD-L1 IHC 22C 3 arkadaşı tahlil kullanarak kararlı PD-L1 IHC ifade karşılaştırıldığında (~ %95) örnekler gösterdi. 22C 3 Ab noktaları (≥1%, ≥50%) kesti. PD-L1 ifade her iki tümör doku ve sitoloji örnekler, belirlemek için 22C 3 Ab konsantre kullanarak burada anlatılan en iyi duruma getirilmiş LDT NSCLC hastalar ile tedavi için uygunluğu değerlendirmek için yetenek laboratuvarları dünya çapında genişleyecektir pembrolizumab tedavinin güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde.

Burada ve ayrıntılı olarak açıklandığı gibi bu grubun son yayınlar10,11' de sunulan yordamı kullanarak, en iyi duruma getirilmiş LDT klinik olarak cerrahi uygulanan hastalar 120 arşivleme FFPE NSCLC biyopsi örnekleri ile doğrulandı rezeksiyon veya biyopsi Pasteur Üniversitesi Hastanesi, Nice, Mart 2016 arasındaki askeri yürüyüş 2007. Ayrıca, sitoloji örnekleri PD-L1 ifade değerlendirme için 70 eşleştiril...

Watch this Scientific Journal Video about Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients at JoVE.com

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

22C 3 kullanarak Anti-PD-L1 antikor konsantre biyopsi ve küçük hücreli dışı akciğer kanserli hastalarda sitoloji örnekleri

22C 3 antikor konsantre üzerinde yaygın olarak kullanılan kullanır bir tahlil geliştirdiğimiz uygunluk ile pembrolizumab, tedavi için akciğer kanseri hastalarının güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirmek için yetenek laboratuvarları dünya çapında genişletmek için immunohistokimyasal autostainer, biyopsi ve sitoloji örnekleri için.

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Tümör dokusu ve sitoloji örneğinde PD-L1 ekspresyonunu belirlemek için 22C3 antikor konsantresini kullanan bu yöntem, laboratuvarların immünoterapi için küçük hücreli dışı akciğer kanseri olan hastaların seçimini güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirme yeteneğini genişletecektir. Bu tekniğin en büyük avantajı, altın standart test ile son derece uyumlu olması ve dünya çapında bölgeler arasında güvenilir, yüksek kaliteli PD-L1 testlerini destekleyecek olmasıdır. Genel olarak bu yönteme yeni gelen patologlar zaman zaman gözlenen tanecikli boyama nedeniyle mücadele edeceklerdir.Ayrıca, insan hücrelerinin boyanma biraz daha altın standart ile gözlenen daha yoğundur. Bu nedenle 22C3 LDT ile PD-L1 boyamadoğru yorumunu elde etmek için patologların eğitimi gereklidir. Prosedürü gösteren Bayan olacaktır.Marame Hamila, laboratuvarımda teknisyen. Başlamak için, tümör dokusunu %10 nötr tamponlu formalin ile bir kasete sabitleyin ve kaseti metin protokolünde belirtildiği gibi parafine gömün. Erimiş parafin le dolu bir kalıba sızmış dokuyu gömün.Parafin katılanına kadar dokunun küfte kalmasına izin verin. Bundan sonra, parafin gömülü doku üç mikrometre kalınlığında bölüm için bir mikrotom kullanın. Parafin şeridini pozitif yüklü cam mikroskop slaytına aktarın.Sonra, 37 santigrat derece bir saat slayt kuru. İlk olarak, koruyucu bir çözelti içinde bronşiyal yıkama toplamak. Yıkamaları 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın.DL-Dithiothreitol iki gram ekleyin ve 30 dakika boyunca tüp girdap, sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g santrifüj. Supernatant çıkarın ve bir mukolitik çözelti 10 mililitre ekleyin. Odayı 20 dakika orta hızda sallayın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g santrifüj.Bundan sonra, supernatant çıkarın ve% 10 nötr-tamponlu formalin içeren bir toplama tüpü içine hücre pelet mevduat. Bir hücre bloğu hazırlama aracısı dört damla ekleyin. Hücre peletini kasete aktarın.Daha önce tümör doku örnekleri hazırlamak için açıklanan süreci kullanarak parafin katıştırma ve kesit için hücre pelet düzeltin. Başlamak için, autostainer ve bilgisayar üzerinde güç. Autostainer simgesine çift tıklayın ve kullanıcıyı seçin.Etiket Oluştur'a ve ardından Protokol'e tıklayın. 22C3 protokolüne çift tıklayın. Hastanın kimliğini doldurun ve Yazdır'ı tıklatın.Bundan sonra etiketi slayta yapıştırın. Açmak için seçilen slayt çekmecesindeki düğmeye basın ve etiketlenmiş slağı yukarı ve içe bakacak şekilde termal pede yerleştirin. Slayt çekmecesini kapatın.Ardından, dağıtıcılardan kapakları çıkarın. Reaktifleri reaktif rafına yükleyin. Boyanın kaputunu açın ve reaktif raflarını reaktiflerin atlıkarıncaya yerleştirin, düzgün bir şekilde sığdığından ve pozisyonda tuttuklarından emin olun, sonra kaputu kapatın.Yazılımda, kullanılacak enstrümana tıklayın ve ardından Çalıştır'ı tıklatın. IHC prosedürünün sonunda, kaydırağı birkaç saniye durulamak için tek bir damla temizleme çözeltisi ile musluk suyu kullanın. Kaydırağı her biri birkaç saniye liğine iki etanol banyosuna sırayla batırarak susuzlaştırın, ardından kapağı otomatik olarak yüklemek için kaydırağı bir kapak makinesine yerleştirin.PD-L1 boyama kalitesini değerlendirmeye başlamak için, hasta örneğini incelemeden önce pozitif ve negatif kontrolleri analiz edin. Bir mikroskop kullanarak, en az 100 canlı tümör hücresinin varlığını doğrulayın. 4 kez düşük büyütme, tüm iyi korunmuş pozitif ve negatif tümör alanları değerlendirmek.Bundan sonra, kısmi veya tam hücre zarı boyama puan ve iyi korunmuş tümör bölgelerinde mevcut tüm tümör hücrelerine göre PD-L1-pozitif tümör hücrelerinin oranını değerlendirerek tümör oranı hesaplamak. Bu çalışmada bronşiyal yıkar veya plevral efüzyondan hazırlanan hücre bloklarında tümör oran skoru veya TPS eşleştirilmiş doku biyopsisi örnekleri için değerlendirildi. 22C3 antikor konsantresini PD-L1 IHC 22C3 eşlik eden analizile karşılaştırmak için biyopsi numuneleri ile temsili boyama desenleri kullanılır.TPS skorunun sürekli bir değişken olarak korelasyonunu ölçmek için kullanılan sınıf içi korelasyon katsayısı LDT ile altın standardı arasında %99'dur. 22C3 antikor konsantresini PD-L1 IHC 22C3 eşlik eden analizle karşılaştırmak için sitoloji örnekleri ile temsili boyama desenleri de kullanılmaktadır. Biyopsi ve sitoloji örneklerinin LDT ile uyum oranı TPS kesme noktalarından herhangi birini kullanırken %95'ten fazladır.TPS sürekli değişken olarak kullanırken sınıf içi korelasyon katsayısı 0.88 ile 0.90 arasındadır. Bir kez hakim, bu teknik hem doku ve sitoloji örnekleri için pozitiflik veya tümör histolojisi için kesme değerlendirmek altın standart ile yüksek bir uyum oranı verir. Bu prosedürü denerken, örneklerin HE slaytı ile birlikte değerlendirilmesi gerektiğini ve bazı zor durumlarda bağışıklık hücrelerini değerlendirmek için tamamlayıcı lekelerin sadece tümör hücrelerinde PD-L1 ekspresyonunun yanlış yorumlanmasını dışlamak için yapılabileceği unutulmamalıdır.Bu işlem den sonra ince iğne biyopsisi, EUS-FNA veya bronşiyal fırça gibi diğer örnekler değerlendirilebilir. Kliniklerde ayarı sonrasında, taht ın sağlamlığının akreditasyon aranarak, standart çalışma prosedürlerini izleyerek ve düzenli olarak dış kalite değerlendirme programlarına katılarak zaman içinde korunması gerekmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, küçük hücreli dışı akciğer kanseri olan hastalardan yaygın olarak kullanılabilir IHC otostainer hem biyopsi ve sitoloji örnekleri üzerinde 22C3 anti-PD-L1 antikor konsantresi kullanarak optimize protokolü uygulamak için iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MikroRNA tabanlı sıvı biyopsi: Plazma miRNA imza Sınıflandırıcısı (MSC) akciğer kanseri süzmek için bir deneyim

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Yüksek kaliteli tümör DNA klinik-patolojik numunelerin Touch Künye Sitoloji kullanarak elde etmek için basit ve hızlı yöntemi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Parafin üzerinde elastik boyama-pT3N0M0 gastrik kanser dokusu gömülü slaytlar

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Kanser hücre işgali ve Anti-metastatik uyuşturucu kullanarak hidrojel mikro-odası dizi (HMCA) eleme Analizi-tabak dayalı

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mezenkimal kök hücre izolasyon hamuru doku ve kanser hücreleri ile ortak kültür ilişkileri incelemek için

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Akciğer Kanseri Hücre Hatlarında Kanser Kök Hücrelerinin Radyosensitivite

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Kanser Hastalarının Kan Plazma Örneklerinde Hücresiz DNA Tespiti

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...