Name: isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells
Uploaded: 2018-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

この作品は、ロストック大学医療センター (889018) および湿気がある基礎 (2016-11) の FORUN プログラムによって支えられました。さらに、午後、ジャネットボンドブリル BMBF (VIP + 00240) によってサポートされています。

HDFSCs は、ロストック大学医療センター歯科口腔外科学講座によって提供される抽出の知恵の歯の歯科小胞から分離されています。インフォームド コンセントと書面による承認は、すべての患者から得られました。この研究は、(許可番号 2017年-0158) ロストック大学の倫理委員会で承認されました。
1. hDFSCs の単離
注:親知らずは、細菌汚染?...

成体幹細胞は現在いくつかの変性疾患の治療のための焦点に。特に、骨髄 (BM)-由来幹細胞、造血幹細胞 (造血) を含む、MSCs では、集中的な臨床調査47。しかし、BM 収穫寄付のサイトで痛みを引き起こす侵襲で、48有害事象につながる可能性があります。最近、産後の歯科組織は小説および幹細胞に簡単にアクセスできるソースとして浮上しています。これら...

人間の歯小嚢は、発展途上の歯1,2を取り巻く緩やかな ectomesenchymally から派生した結合組織です。破骨細胞形成と骨延長法歯の噴火プロセスの調整するため、その機能の横には、この組織は、特に歯周組織3,4、5の開発のための茎および祖先のセルを隠し持っています。したがって、歯小嚢は成体幹細胞6,7を収穫するための代替ソースとしてと見なされます。
いくつかの研究人間の歯小嚢の幹細胞 (hDFSCs) の骨芽細胞、歯根膜線維芽細胞と酵素8,9,10を含む歯周の系統に分化の実証.さらに、これらの細胞は自己複製能力、プラスチックの付着、特定の表面マーカーの発現を含む間葉系間質細胞 (MSCs) のすべての特性に合わせて示されていた (例えば, CD73, CD90, CD105) 同様、骨、脂肪細胞と軟骨細胞分化ポテンシャル11,12,13。他の研究はまた、hDFSCs2,14,15,16,17,18の神経の微分の潜在性を明らかにしました。
それらの有望なプロパティとの容易なアクセスのために hDFSCs なった最近ティッシュ工学19,20,21に関連します。最初の研究は、骨、歯周組織を再生する DFSCs の可能性に集中しているし、歯の根19,22,23,24,25,26、 27,28,29,30。HDFSCs の神経因性の機能の知識、神経変性疾患の潜在的な治療として応用以来調査31,32,33。HDFSCs に関しての重要性は益々 も、他の組織 (例えば、角膜上皮)34,35の再生。HDFSC の治療の可能性は、傍分泌活動にも直接微分の潜在性にのみ基づいていません。最近では、hDFSCs は、豊富なマトリックスメタロプロテアーゼ (Mmp)、インスリン様成長因子 (IGF)、血管内皮増殖因子 (VEGF)、塩基性繊維芽細胞成長因子 (bFGF) と肝細胞の成長などの生理活性因子を分泌する示されています。因子 (HGF)、血管新生、抗炎症、細胞外マトリックスを改造、修復プロセス36の重要な役割を果たしています。
しかし、幹細胞療法の広範な臨床翻訳はまだ大規模な初期細胞死や低有益な幹細胞効果37,38など、いくつかの課題が損なわれます。遺伝子工学はこれらの課題に対処するための有望な戦略を提供し、したがって、幹細胞38,39,40の治療効果を大きく向上できます。一時的なセルの操作マイクロ Rna (miRs) は、適切な候補者は、これらの小さな並進レギュレータ運命と安定したゲノム統合41,42,のハザードの幹細胞の挙動を制御43. までに、いくつかの有益な miRs は幹細胞の増殖、生存、ホーミング、パラクリン活動としていくつか系統44に分化を促進識別されています。例えば、ミール 133a 改善心機未変更の MSCs45と比較した場合、梗塞ラット心における生存率の増加と生着を示した MSCs を設計されています。同様に、ミール 146a 過剰 MSCs 虚血組織46で治療効率につながった VEGF の多量を分泌することが示されました。
この原稿は、選択的な抽出と hDFSCs の遺伝子工学のための詳しいプロトコルを提示します。このため、人間の歯科小胞の収穫と酵素の消化だけでなく、hDFSCs の後続の分離について述べる。隔離されたセルを特徴付けるために MSC プロパティの検証のための重要な手順は、国際細胞治療13学会のガイドラインに従って含まれています。また、カチオン性脂質ベースのトランスフェクション戦略とトランスフェクション効率性と細胞毒性の評価を適用することによってミール変更 hDFSCs の世代の詳細な説明を提供します。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1557A488</td>
			<td>Clone SN6, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928A488</td>
			<td>monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559883</td>
			<td>Clone MAR4, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555751</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550257</td>
			<td>Clone AD2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555749</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>339217</td>
			<td>Clone 104D2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557872</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560531</td>
			<td>Clone G44-26, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558304</td>
			<td>Clone 27-35, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90&#160;Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561557</td>
			<td>Clone 5E10, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>55095</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560777</td>
			<td>Clone HI30, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560787</td>
			<td>Clone X40, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td>0.5M, pH 8.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steritop</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>0.22 &#181;m, radio-sterilized, polyethersulfone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1040051000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>SC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17120</td>
			<td>5 nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17110</td>
			<td>5nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium; Fluoroshield with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6057-20ML</td>
			<td>histology mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS LSRII flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software 6.1.2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN2011 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine reactive dye; LIVE/DEAD&#8482; Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>pH: 7.4; w/o: Ca and Mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-S-G (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basal medium; Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic, ZellShield</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>W 13-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type I</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter, Sterifix syringe filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4099206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50&#160;mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask 75 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,910,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask, 25 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,911,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing medium, Biofreeze</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>F 2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td>0.4 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting chamber</td>
			<td>Paul Marienfeld</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001%</td>
			<td>Mibe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td>0.9 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl satures, Vicryl rapide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>3 - 0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells

日には、発達段階別にいくつかのタイプの幹細胞は、変性疾患の治療のための焦点。まだ、初期大規模な細胞死と治療効果は低いなどの特定の側面は、広範な臨床翻訳障害。移植前に幹細胞の遺伝子工学は、治療の幹細胞の効果を最適化する有望な方法として浮上しました。しかし、安全で効率的な遺伝子送達システムはまだ欠けています。したがって、適切な手法の開発には、幹細胞ベースの治療の現在の課題を解決するアプローチがあります。
この議定書では、彼らの非ウイルス性遺伝子組み換えだけでなく、抽出と人間の歯小嚢の幹細胞 (hDFSCs) の性質について説明します。産後の歯小嚢は、高拡散潜在性を有する多能性幹細胞を収穫するための有望で、簡単にアクセスできるソースとして発表しました。記載されている分離の手順は、埋伏智歯の歯から hDFSCs を収穫する、シンプルで信頼性の高い方法を示します。またこのプロトコルには、単離細胞の幹細胞の特性を定義するメソッドが装備されています。HDFSCs の遺伝子工学、最適化されたカチオン性脂質ベースのトランスフェクション戦略に細胞毒性を引き起こすことがなく有効にする非常に効率的なマイクロ Rna の導入を示します。マイクロ Rna は、これらの小さな並進レギュレータは運命と安定したゲノム統合の危険なしで茎セルの動作を制御、一時的なセルの操作に適した候補です。したがって、このプロトコルは、その治療の有効性を最適化するために重要となる hDFSCs の工学の安全で効率的な手順を表します。

人間の歯小嚢の組織から hDFSCs を収穫する詳細な分離命令を紹介します。ルーチン手術中に歯小嚢への簡単アクセス、ため成体幹細胞の抽出のための有望なソースです。
孤立した hDFSCs は、MSCs13の定義に記述されているすべての特性を示した。実際には、細胞がプラスチック付着下培養条件を説明し、線?...

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Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells

このプロトコルでは、人間の歯小嚢から抽出された歯の幹細胞の一時的な遺伝子工学について説明します。適用の非ウイルス性変更戦略は治療幹細胞製品の改善のための基礎になることがあります。

分離の特性と人間の歯小嚢細胞のマイクロ Rna を用いた遺伝子組み換え

To date, several stem cell types at different developmental stages are in the focus for the treatment of degenerative diseases. Yet, certain aspects, such ...

この方法は、ヒト歯卵胞幹細胞を遺伝子操作して治療特性を改善できる場所など、再生医療の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、安定したゲノム集積の危険なしにマイクロRNA導入によって幹細胞を改変できることである。2つの卵胞の酵素消化の手順を開始し、前温から室温、ヒトの歯包幹細胞またはhDFSC培養液およびPBSPSG溶液に予め温める。コラゲターゼタイプIとディスパスIIストックソリューションの各アリコートを解凍します。コラゲラーゼタイプIストック溶液500マイクロリットルと1%抗生物質を含む基底培地の4ミリリットルにジスパーゼIIストック溶液500マイクロリットルを加えることによって消化液を調製する。ヒトの歯包幹細胞分離洗浄バッファーおよび使用される培養培地中の部位汚染を避けるためには、抗生物質剤が含まれなければならない。抽出した歯包を滅菌ペトリ皿に入れます。10ミリリットルのPBSPSG溶液を加え、抽出した組織を洗浄します。吸引し、溶液を捨てて、洗浄を繰り返すために新鮮なPBSPSG溶液を追加します。滅菌メスを使用すると、抽出した卵胞を約1 x 1ミリメートルであれば粉々にミンチする。ペトリ皿から50ミリリットルの円錐遠心管に細かく組織とPBSPSG溶液を移し、10ミリリットルのPBSPSG溶液でペトリ皿を洗い、同じチューブに溶液を移します。円錐管を室温で353 x gで10分間遠心する。5ミリリットルの消化液をパレット組織に加え、溶液と組織を穏やかに混合し、37°Cで混合物を2時間振る振るインキュベーターで5%CO2でインキュベートする。2時間後、消化した細胞と組織懸濁液を室温で10分間353gで遠心分離する。上清を捨て、得られたパレットを6ミリリットルのHDFSC培地で再中断する。細胞懸濁液を25平方センチメートルの細胞培養フラスコに播種し、37°Cで細胞をインキュベートする。HDFSCの細胞収穫および特性評価がテキストプロトコルに記載されているようにした後、24ウェル細胞培養板中のhDfsをシードする。摂氏37度、CO25%、酸素20%を24時間インキュベートします。翌日、マイクロRNAの40ピコモールを66.7マイクロリットルの減少した血清培地で希釈し、溶液をボルテックスした。0.67マイクロリットルのカチオン脂質を希釈し、66.7マイクロリットルの還元血清培地でトランスフェクション試薬、溶液をボルテックス、室温で5分間インキュベートする。5分後、希釈済みのトランスフェクション試薬に希釈済みのマイクロRNAを加え、溶液を混合し、室温で15分間インキュベートします。次に、調製したトランスフェクション複合体を、ドロップワイズで、細胞上の培養培地に直接加える。24ウェル細胞培養プレートを前後に揺らすことで、穏やかに混ぜます。24時間摂氏37度で細胞をインキュベートします。トランスフェクションの24時間後、各15ミリリットル円錐形遠心分離管にサンプルの上清を集める。1ミリリットルのPBSで細胞を洗浄し、PBSをそれぞれの遠心管に移します。500マイクロリットルの点滴とEDTAを細胞に加え、24ウェルプレートを摂氏37度で3分間インキュベートします。トリプシンを停止するには、細胞に対して1ミリリットルの細胞培養培地を添加し、溶液をそれぞれの遠心管に移します。細胞を300 x gで遠心し、摂氏4度で10分間遠心します。特に明記されていない限り、ここから氷の上に細胞と試薬を保管してください。上清を捨て、細胞を100マイクロリットルの染色バッファーに再懸濁し、細胞溶液を1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離管に移した。生細胞と死細胞を区別するために、各サンプルに0.5ミリリットルのアミン反応性染料を加えます。溶液を軽く混ぜ、摂氏4度で10分間インキュベートします。細胞にPBSを1ミリリットル、遠心分離機を300g、摂氏4度で10分間加え、上澄み物を捨てて100マイクロリットルのPBSで細胞を再懸濁し、33マイクロリットルのパラホルムアルデヒドを加え、溶液を混合し、サンプルを水量計まで光から保護して4°Cで保存します。フローサイトメトリック測定に適したチューブにサンプルを転送し、テキストプロトコルに記載されているゲート方式を使用してフローサイトメトリーを実行します。分離されたヒト歯包幹細胞は、間葉間質細胞の定義に関して記載されたすべての特徴を示し、細胞はプラスチック付着性であり、標準的な培養条件下で形態のようなガラス繊維を示した。フローサイトメトリック解析では、hDfsがCD29、CD44、CD73、CD90、CD105を含む特定の表面抗原のパネルを発現することが明らかになった。CD45とCD117は不在であった。特定のIn Vitro培養条件下での細胞の脂肪異性、骨形成性、および軟骨発生性分化ポテンシャルを、免疫染色、脂肪酸結合タンパク質:骨カルシン、およびアグレカンによって確認した。細胞毒性とCy3標識マイクロRNA取り込み効率の定量化に使用される格言戦略はトランスフェクション後24時間で、生細胞の100%におけるマイクロRNA取り込みが確認された。トランスフェクトおよび未感染サンプルの死んだ細胞の同等量は、マイクロRNAが細胞毒性作用を及ぼすことなしに効率的に導入されることを示している。この手順に従って、細胞膜の可塑性のような追加の質問に答えるために、トランスセノニテーションのような他の方法を実行することができます。

Research

JoVE Journal

Genetics

Engineering Artificial Factors to Specifically Manipulate Alternative Splicing in Human Cells

具体的にはヒト細胞における選択的スプライシングを操作するために工学人工要因

The processing of most eukaryotic RNAs is mediated by RNA Binding Proteins (RBPs) with modular configurations, including an RNA recognition module, which ...

Immunostaining for DNA Modifications: Computational Analysis of Confocal Images

DNA 変更染色: 共焦点画像の数値解析

For several decades, 5-methylcytosine (5mC) has been thought to be the only DNA modification with a functional significance in metazoans. The discovery of ...

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

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遺伝子破壊ミュータンス連鎖球菌緊張せず遺伝子クローニングの生成

Typical methods for the elucidation of the function of a particular gene involve comparative phenotypic analyses of the wild-type strain and a strain in ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

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流体の尾静脈注射を使用してマウス肝細胞の生体内で遺伝的変更の構成および誘導システム

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

テロメラーゼ逆転写酵素蛋白質の RNA 依存 RNA ポリメラーゼ活性の半定量的な検出

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 によるマウスおよび人間の造血前駆細胞の高効率遺伝子破壊

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

組合せの単一セルは分子を特徴付ける方法・肺浸潤異質性ひと幹と前駆細胞集団

Immunophenotypic characterization and molecular analysis have long been used to delineate heterogeneity and define distinct cell populations. FACS is ...

Endogenous Protein Tagging in Human Induced Pluripotent Stem Cells Using CRISPR/Cas9

人間でタグ内因性のタンパク質誘導多能性幹細胞 CRISPR/Cas9 を使用して

A protocol is presented for generating human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that express endogenous proteins fused to in-frame&#160;N- or ...

Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

分離、シーケンスおよびヒト間葉系幹細胞からの細胞のマイクロ Rna を分析

Extracellular and circulating RNAs (exRNA) are produced by many cell types of the body and exist in numerous bodily fluids such as saliva, plasma, serum, ...

Preparation and Gene Modification of Nonhuman Primate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

準備とヒト以外の霊長造血幹・前駆細胞の遺伝子の改変

Hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) transplantation has been a cornerstone therapy for leukemia and other cancers for nearly half a century, ...