Name: isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells
Uploaded: 2018-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av FORUN programmet i Rostock medisinske sentrum (889018) og fuktig Foundation (2016-11). I tillegg PM RD støttes av BMBF (VIP + 00240).

HDFSCs er isolert fra dental follikler av utdraget visdomstennene tilbys av Institutt for Oral og Maxillofacial plastikkirurgi i Rostock University Medical Center. Informert samtykke og skriftlig godkjennelse er Hentet fra alle pasienter. Denne studien ble godkjent av den lokale etikk av universitetet i Rostock (tillatelse No. A 2017-0158).
1. isolering av hDFSCs
Merk: For å hindre bakteriell forurensning, bør visdomstennene ikke være utbrudd før ...

Voksen stilk celler er i fokus for behandling av flere degenerative sykdommer. Spesielt bein margtransplantasjon (BM)-avledet stilk celler, inkludert blodkreft stamceller (HSCs) og MSCs, er under intens klinisk undersøkelse47. Men BM høsting er en invasiv prosedyre forårsaker smerte på stedet av donasjon og kan føre til uønskede hendelser48. Postnatal dental vevet har nylig dukket opp som en roman og lett tilgjengelig kilde til stamceller. Disse dental stamceller ble ...

Menneskelige dental hårsekken er en løs ectomesenchymally-avledet bindevev omgir utvikle tann1,2. Foruten sin funksjon å koordinere osteoclastogenesis og osteogenesis for tann utbruddet prosessen, havner Dette vevet stammen og stamfar celler spesielt for utviklingen av periodontium3,4,5. Derfor regnes dental hårsekken som en alternativ kilde å høste humant voksne stamceller6,7.
Flere studier vist at menneskelige dental hårsekken stamceller (hDFSCs) er i stand til å skille i periodontal slektslinje inkludert osteoblasts, leddbånd fibroblaster og cementoblasts8,9,10 . Videre disse cellene ble vist å matche alle karakteristikkene av mesenchymal stromal celler (MSCs) inkludert selv fornyende kapasitet, plast etterlevelse, uttrykk for bestemte overflate markører (f.eks, CD73, CD90, CD105) så vel som osteogenic, adipogenic og chondrogenic differensiering potensielle11,12,13. Andre studier viser også en neural differensiering potensialet i hDFSCs2,14,15,16,17,18.
Deres lovende egenskaper og enkel tilgang ble hDFSCs nylig relevante for tissue engineering19,20,21. Den første studier konsentrert om potensialet i DFSCs å regenerere beinet, periodontal og tann røtter19,22,23,24,25,26, 27,28,29,30. Kunnskap om neurogenic evnen til hDFSCs, deres program som potensielle behandling for nevrodegenerative sykdommer har vært undersøkt31,32,33. HDFSCs har også fått betydning med hensyn til den fornyelse av andre vev (f.eks hornhinnen epitel)34,35. Terapeutiske potensialet i hDFSC er ikke bare basert på deres direkte differensiering potensial men også på sin paracrine aktivitet. Nylig har hDFSCs vist seg å skille ut en rekke bioaktive faktorer, for eksempel matrise metalloproteinases (MMPs), insulin-lignende vekstfaktor (IGF), vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF), grunnleggende fibroblast vekstfaktor (bFGF) og hepatocyte vekst faktor (HGF), som spiller en avgjørende rolle for angiogenese, immunomodulation, ekstra mobil matrix remodeling og reparative prosesser36.
Bred klinisk oversettelse av stilk cellen terapi er imidlertid fortsatt nedsatt av flere utfordringer, som massiv første celledød og lav gunstig stamcelleforskningen effekter37,38. Genteknologi gir en lovende strategi for å møte disse utfordringene, og derfor kan øke den terapeutiske effekten av stamceller38,39,40. Forbigående celle manipulering er microRNAs (miRs) egnede kandidater, som disse små translasjonsforskning regulatorer kontrollere skjebne og oppførsel av stamceller uten fare for stabil genomet integrering41,42, 43. hittil har flere nyttige miRs er identifisert fremme stem celle spredning, overlevelse, homing, paracrine aktivitet samt deres differensiering inn flere overleveringslinjer44. For eksempel utviklet miR-133a MSCs viste en økt overlevelse og engraftment i infarcted rotten hjerter som resulterer i en bedre hjertefunksjon sammenlignet med uforandret MSCs45. Likeledes, miR-146a overexpressing MSCs ble vist å skille ut høyere mengder VEGF som i sin tur førte til en forbedret effektivitet i iskemiske vevet46.
Dette manuskriptet presenterer en detaljert protokoll for selektiv utvinning og genteknologi av hDFSCs. For dette formålet beskrev vi høsting og enzymatiske fordøyelsen av menneskelig dental follicles og påfølgende isolering av hDFSCs. For å karakterisere isolert celler, har viktige instruksjoner for verifikasjon av MSC egenskaper blitt inkludert i henhold til veiledning av det internasjonale samfunnet for mobilnettet terapi13. I tillegg gir vi en detaljert beskrivelse for generering av miR-modifisert hDFSCs ved å bruke en kationisk lipid-baserte transfection strategi og evalueringen av hva effektivitet og cytotoksisitet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1557A488</td>
			<td>Clone SN6, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928A488</td>
			<td>monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559883</td>
			<td>Clone MAR4, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555751</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550257</td>
			<td>Clone AD2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555749</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>339217</td>
			<td>Clone 104D2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557872</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560531</td>
			<td>Clone G44-26, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558304</td>
			<td>Clone 27-35, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90&#160;Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561557</td>
			<td>Clone 5E10, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>55095</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560777</td>
			<td>Clone HI30, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560787</td>
			<td>Clone X40, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td>0.5M, pH 8.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steritop</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>0.22 &#181;m, radio-sterilized, polyethersulfone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1040051000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>SC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17120</td>
			<td>5 nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17110</td>
			<td>5nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium; Fluoroshield with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6057-20ML</td>
			<td>histology mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS LSRII flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software 6.1.2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN2011 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine reactive dye; LIVE/DEAD&#8482; Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>pH: 7.4; w/o: Ca and Mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-S-G (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basal medium; Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic, ZellShield</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>W 13-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type I</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter, Sterifix syringe filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4099206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50&#160;mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask 75 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,910,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask, 25 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,911,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing medium, Biofreeze</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>F 2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td>0.4 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting chamber</td>
			<td>Paul Marienfeld</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001%</td>
			<td>Mibe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td>0.9 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl satures, Vicryl rapide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>3 - 0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells

Hittil er forskjellige på forskjellige utviklingsstadier stilk cellen i fokus for behandling av degenerative sykdommer. Likevel, enkelte aspekter som første massive celledød og lav terapeutiske effekter, nedsatt deres omfattende kliniske oversettelse. Genteknologi av stamceller før transplantasjon dukket opp som en lovende metode for å optimalisere terapeutisk stamcelleforskningen effekter. Sikker og effektiv genet leveringssystemer mangler imidlertid fortsatt. Utviklingen av passende metoder kan derfor gi en tilnærming for å løse dagens utfordringer i stilk cellen-basert behandling.
Nåværende protokollen beskriver utvinning og karakterisering av menneskelig dental hårsekken stamceller (hDFSCs) og deres ikke-viral genmodifisering. Postnatal dental hårsekken avduket som en lovende og lett tilgjengelig for høsting voksen multipotent stamceller besitter høy spredning potensial. Prosedyren beskrevet isolasjon presenterer en enkel og pålitelig metode for å høste hDFSCs fra påvirket visdom tennene. Denne protokollen omfatter også metoder for å definere stamcelleforskningen egenskaper isolert celler. Genetisk engineering av hDFSCs presenteres en optimalisert kationisk lipid-baserte transfection strategi muliggjør svært effektiv microRNA Introduksjon uten forårsaker cytotoksiske effekter. MicroRNAs er egnet kandidater til forbigående celle manipulasjon, disse små translasjonsforskning regulatorer kontrollere skjebne og oppførsel av stamceller uten fare stabil genomet integrering. Derfor representerer denne protokollen en sikker og effektiv fremgangsmåte for utvikling av hDFSCs som kan bli viktig for å optimalisere deres terapeutisk effekt.

Her presenterer vi en detaljert isolasjon instruksjon å høste hDFSCs fra menneskelige dental hårsekken vev. På grunn av den lette tilgangen til dental hårsekken under rutinemessig kirurgi er det en lovende kilde for utvinning av voksne stamceller.
Den isolerte hDFSCs viste alle kjennetegn på definisjonen av MSCs13. Faktisk celler var plast-tilhenger under beskrevet oppdrettsforholdene og vist en fib...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells

Denne protokollen beskriver forbigående genteknologi av dental stamceller hentet fra menneskelige dental hårsekken. Brukes ikke-viral endring strategi kan bli grunnlag for forbedring av terapeutiske stamcelleforskningen produkter.

Isolering og karakterisering MicroRNA-baserte genetisk modifisering av menneskelig Dental hårsekken stamceller

To date, several stem cell types at different developmental stages are in the focus for the treatment of degenerative diseases. Yet, certain aspects, such ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen regenerativ medisin, for eksempel hvor en menneskelig tannsekken stamceller kan være genetisk konstruert for å forbedre sine terapeutiske egenskaper. Den største fordelen med denne teknikken er at stamceller kan endres ved microRNA-introduksjon uten fare for stabil genomintegrasjon. Begynn prosedyren for enzymatisk fordøyelse av de to follikkelen, ved å forvarme til romtemperatur, menneskelig dental follikkel stamcelle eller hDFSC kultur medium og PBSPSG løsning.Tin en aliquot hver av Collagenase type I og Dispase II lager løsninger. Forbered en fordøyelsesløsning ved å legge til 500 mikroliter av Collagenase type I lagerløsning og 500 mikroliter av Dispase II lagerløsning til 4 milliliter Basal Medium som inneholder 1% antibiotikamiddel. For å unngå kontaminering på stedet under humant tannsekk stamcelleisolasjonsvaskbuffere og kulturmedier som brukes, må inneholde antibiotika.Legg en ekstrahert tannsekken i en steril petriskål. Tilsett 10 milliliter PBSPSG-løsning for å vaske det ekstraherte vevet. Aspirer og kast oppløsningen og tilsett fersk PBSPSG-oppløsning for å gjenta vasken.Ved hjelp av en steril skalpell hakke den ekstraherte follikkelen i stykker hvis ca 1 av 1 millimeter. Overfør hakket vev og PBSPSG-oppløsning fra petriskålen til et konisk sentrifugrør på 50 milliliter, vask petriskålen med 10 ml PBSPSG-oppløsning, og overfør løsningen til samme rør. Sentrifuger det koniske røret ved 353 x g ved romtemperatur i ti minutter.Tilsett 5 milliliter fordøyelsesløsning til det pallevevet, bland forsiktig løsningen og vevet, inkuber blandingen ved 37 grader celsius og 5% CO2 i en ristende inkubator i to timer. Etter to timer sentrifugerer den fordøyde cellen og vevssuspensjonen ved 353 g i ti minutter ved romtemperatur. Kast den overnaturlige og re-suspendere den oppnådde pallen i 6 milliliter HDFSC kultur medium.Seed celle suspensjon i en 25 kvadratcentimeter celle kultur kolbe, og inkuber cellene ved 37 grader celsius. Etter celleinnhøsting og karakterisering av HDFSC er som beskrevet i tekstprotokollen, frø hDFSCer i en 24 brønn celle kultur plate. Inkuber ved 37 grader celsius, 5% CO2 og 20% oksygen i 24 timer.På neste dag fortynne 40 picomoles av microRNA i 66,7 mikroliter av redusert serum medium, og vortex løsningen. Fortynn 0,67 mikroliter kationisk lipidbasert, transfeksjonsreagens i 66,7 mikroliter med redusert serummedium, vortex oppløsningen og inkuber ved romtemperatur i fem minutter. Etter fem minutter tilsett den forutgående microRNA til den forutgående transfection reagensen, bland løsningen og inkuber ved romtemperatur i femten minutter.Deretter legger du til de forberedte transfection-kompleksitetene, dråpe, direkte til kulturmediet på celler. Bland forsiktig ved å gynge 24 godt celle kultur plate frem og tilbake. Inkuber cellene ved 37 grader celsius i 24 timer.24 timer etter transfeksjon, samle supernatant av prøver i respektive 15 milliliter koniske sentrifuge rør. Vask cellene med 1 milliliter PBS, og overfør PBS til det respektive sentrifugerøret. Tilsett 500 mikroliter drypp og EDTA til cellene, og inkuber 24-brønnplaten ved 37 grader celsius, i 3 minutter.Stopp trypsiniseringen ved å legge til 1 milliliter cellekulturmedium for cellene, og overføre løsningen til det respektive sentrifugerøret. Sentrifuger cellene ved 300 x g og 4 grader celsius i ti minutter. Herfra holder du cellene og reagensene på isen med mindre annet er oppgitt.Kast de overnaturante, gjenoppusst cellene i 100 mikroliter med fargingsbuffer, og overfør celleløsningen til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør. Tilsett 0,5 milliliter aminreaktiv fargestoff til hver prøve for å skille mellom levende og døde celler. Bland forsiktig løsningen, og inkuber ved 4 grader celsius i ti minutter.Tilsett 1 milliliter PBS til cellene, og sentrifuge ved 300g og 4 grader celsius i ti minutter Kast supernatant og resuspend cellene i 100 mikroliter pbs, tilsett 33 mikroliter paraformaldehyd, og bland løsningene, lagre prøvene ved 4 grader celsius beskyttet mot lys til strømningscytimemålinger. Overfør prøvene til rør som er egnet for strømningscytokometri, og utfør strømningscytometri ved hjelp av gatingstrategien som er beskrevet i tekstprotokollen. De isolerte menneskelige dental follicle stamceller viste alle egenskaper som er beskrevet for definisjonen av mesenchymale stromal celler, celler var plast tilhenger og viste et glassfiber som morfologi, under standard kulturforhold.Flow cytometrisk analyse viste at hDFSCer uttrykte et panel av visse overflateantigener, inkludert CD29, CD44, CD73, CD90 og CD105. Mens CD45 og CD117 var fraværende. De adipogenic, osteogene og kondrogene differensieringspotensialet til celler under spesifikke In Vitro kulturforhold ble bekreftet ved immunstaining, et fettsyrebindende protein for: Osteocalcin og Aggrecan.Gating strategien som brukes for kvantifisering av cytotoksisitet og Cy3 merket microRNA opptak effektivitet 24 timer etter transfection, bekreftet microRNA opptak i 100% av levedyktige celler. Sammenlignbare mengder døde celler i trans infiserte og uoverførte prøver indikerer at microRNA innføres effektivt uten cytotoksiske effekter. Etter denne prosedyren kan andre metoder som transdifferentiation utføres for å svare på flere spørsmål som Cytolab plastisitet.

Research

JoVE Journal

Genetics

Engineering Artificial Factors to Specifically Manipulate Alternative Splicing in Human Cells

Ingeniør Kunstige Faktorer å Spesifikt Manipulere alternativ spleising i humane celler

The processing of most eukaryotic RNAs is mediated by RNA Binding Proteins (RBPs) with modular configurations, including an RNA recognition module, which ...

Immunostaining for DNA Modifications: Computational Analysis of Confocal Images

Immunostaining for DNA modifikasjoner: beregningsorientert analyse av AC Confocal bilder

For several decades, 5-methylcytosine (5mC) has been thought to be the only DNA modification with a functional significance in metazoans. The discovery of ...

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Generering av en gen-forstyrret Streptococcus mutans belastning uten Gene kloning

Typical methods for the elucidation of the function of a particular gene involve comparative phenotypic analyses of the wild-type strain and a strain in ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Grunnleggende og induserbart systemer for genetisk i Vivo endring av musen hepatocytter bruker etter halen blodåre injeksjon

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

Semi kvantitative påvisning av RNA-avhengig RNA Polymerase aktivitet av menneskelig Telomerase revers transkriptase Protein

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Svært effektiv Gene avbrudd i Murine og menneskelig blodkreft stamfar celler av CRISPR/Cas9

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

En kombinasjon encellede tilnærming som karakteriserer den molekylære og Immunophenotypic heterogenitet menneskelige stammen og stamfar bestander

Immunophenotypic characterization and molecular analysis have long been used to delineate heterogeneity and define distinct cell populations. FACS is ...

Endogenous Protein Tagging in Human Induced Pluripotent Stem Cells Using CRISPR/Cas9

Endogene Protein merking i menneskelig indusert Pluripotent stilk celler med CRISPR/Cas9

A protocol is presented for generating human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that express endogenous proteins fused to in-frame&#160;N- or ...

Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

Isolere, sekvensering og analysere ekstracellulære MicroRNAs fra menneskelige stamceller

Extracellular and circulating RNAs (exRNA) are produced by many cell types of the body and exist in numerous bodily fluids such as saliva, plasma, serum, ...

Preparation and Gene Modification of Nonhuman Primate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Forberedelse og genet modifikasjon Nonhuman primas blodkreft stilk og Progenitor celler

Hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) transplantation has been a cornerstone therapy for leukemia and other cancers for nearly half a century, ...