Name: isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells
Uploaded: 2018-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Эта работа была поддержана программа FORUN медицинский центр университета Ростока (889018) и Фондом влажной (2016-11). Кроме того, часов и р.д. поддерживаются BMBF (VIP + 00240).

HDFSCs изолированы от стоматологических фолликулов предоставляемые Департаментом оральных и челюстно-лицевой пластической хирургии медицинского центра Университета Ростока зубов мудрости. Осознанного согласия и письменное согласие было получено от всех больных. Это исследование был?...

Взрослые стволовые клетки в настоящее время в фокусе для лечения ряда дегенеративных заболеваний. В частности, костного мозга (BM)-стволовые клетки, включая гемопоэтических стволовых клеток (СКК) и MSCs, находятся под интенсивным клиническое исследование47. Однако BM уборки инв...

Человеческих зубов фолликула это рыхлой соединительной ткани, ectomesenchymally производные, окружающих развивающихся зуба1,2. Помимо своей функции по координации osteoclastogenesis и Остеогенез для процесса извержения зуба эта ткань затаивает стволовых и прогениторных клеток, особенно для развития периодонт3,4,5. Таким образом Стоматологическая фолликула рассматривается как альтернативного источника для сбора стволовых клеток человека взрослых6,7.
Несколько исследований показали, что человека Стоматологическая фолликула стволовых клеток (hDFSCs) способны дифференцироваться в линии пародонта, включая остеобластов, связки фибробластов и cementoblasts8,9,10 . Кроме того, эти клетки были показаны для соответствия всех характеристик мезенхимальных стромальных клеток (МСК) включая самостоятельного обновления потенциала, пластиковые присоединения, выражения конкретных поверхностных маркеров (например, CD73, CD90, CD105) также как остеогенные, адипогенном и хондрогенном дифференциация потенциальных11,12,13. Другие исследования также показали нейронных дифференциация потенциал hDFSCs2,14,,1516,17,18.
Благодаря их перспективных свойств и легкий доступ hDFSCs стала недавно соответствующие ткани инженерных19,,2021. Первые исследования сосредоточены на потенциал DFSCs для регенерации костей, пародонта и зуб корни,19,,2223,24,25,26 27,28,29,30. Знание нейрогенный возможности hDFSCs их применение в качестве потенциальных лечение нейродегенеративных заболеваний после исследованы31,,3233. HDFSCs также приобрели важное значение в связи с регенерации других тканей (например, эпителий роговицы)34,35. Терапевтический потенциал hDFSC основан не только на их потенциал прямых дифференциации, но и на их ответные действия. Недавно было показано hDFSCs выделяют множество биологически активных факторов, таких как матрицы металлопротеиназ (MMPs), инсулин подобный фактор роста (IGF), Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), основные фибробластический фактор роста (bFGF) и роста гепатоцитов фактор (HGF), которые играют решающую роль по ангиогенез, иммуномодуляция, Ремоделирование дополнительных клеточных матриц и репаративные процессы36.
Однако широкого клинического перевод стволовых клеток до сих пор препятствует ряд проблем, таких, как массовые первоначальная клеточная смерть и низкой выгодно стволовых клеток эффекты37,38. Генной инженерии обеспечивает перспективные стратегии для решения этих проблем и поэтому могут значительно повысить терапевтическую эффективность стволовых клеток38,,3940. Для манипуляции переходных клеток микроРНК (Мирс) являются подходящими кандидатами, как эти небольшие поступательные регуляторов управления судьбу и поведением стволовых клеток без опасности стабильным геномом интеграции41,42, 43. до настоящего времени, были определены несколько полезных Мирс, поощрение распространения стволовых клеток, выживание, головка самонаведения, паракринными деятельность, а также их дифференцировку в несколько линий44. К примеру мир 133а инженерии MSCs, показало увеличение выживаемости и приживления в сердцах infarcted крысы, что приводит к улучшению функции сердца, по сравнению с неизмененной MSCs45. Кроме того мир 146А избытком MSCs были продемонстрированы секретировать VEGF, который в свою очередь привело к расширенной терапевтическую эффективность при ишемии ткани46большее количество.
Эта рукопись представляет подробный протокол для селективного извлечения и генной инженерии hDFSCs. Для этой цели мы описали, сбора урожая и ферментативные пищеварения человека Стоматологическая фолликулов, а также последующие изоляции hDFSCs. Для того чтобы характеризовать изолированных клеток, были включены в соответствии с руководящими принципами международного общества для клеточной терапии13важные инструкции для проверки свойств MSC. Кроме того мы предоставляем подробное описание для поколения мир модифицированных hDFSCs, применяя стратегию Катионный липидных transfection и оценки эффективности transfection и цитотоксичность.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1557A488</td>
			<td>Clone SN6, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928A488</td>
			<td>monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559883</td>
			<td>Clone MAR4, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555751</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550257</td>
			<td>Clone AD2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555749</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>339217</td>
			<td>Clone 104D2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557872</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560531</td>
			<td>Clone G44-26, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558304</td>
			<td>Clone 27-35, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90&#160;Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561557</td>
			<td>Clone 5E10, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>55095</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560777</td>
			<td>Clone HI30, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560787</td>
			<td>Clone X40, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td>0.5M, pH 8.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steritop</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>0.22 &#181;m, radio-sterilized, polyethersulfone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1040051000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>SC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17120</td>
			<td>5 nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17110</td>
			<td>5nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium; Fluoroshield with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6057-20ML</td>
			<td>histology mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS LSRII flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software 6.1.2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN2011 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine reactive dye; LIVE/DEAD&#8482; Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>pH: 7.4; w/o: Ca and Mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-S-G (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basal medium; Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic, ZellShield</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>W 13-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type I</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter, Sterifix syringe filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4099206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50&#160;mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask 75 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,910,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask, 25 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,911,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing medium, Biofreeze</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>F 2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td>0.4 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting chamber</td>
			<td>Paul Marienfeld</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001%</td>
			<td>Mibe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td>0.9 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl satures, Vicryl rapide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>3 - 0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells

На сегодняшний день, несколько типов стволовых клеток на разных этапах своего развития находятся в центре внимания для лечения дегенеративных заболеваний. Тем не менее некоторые аспекты, такие как первоначальный массивные клеточной смерти и низкий терапевтический эффект, нарушение их широкого клинического перевод. Генной инженерии стволовых клеток до трансплантации возникла как перспективный метод для оптимизации эффекты терапевтического стволовых клеток. Однако по-прежнему отсутствуют гена безопасных и эффективных систем доставки. Таким образом разработка подходящих методов могут обеспечить подход к решению текущих проблем в терапии на основе стволовых клеток.
Настоящий Протокол описывает добычи и характеристика человека Стоматологическая фолликула стволовых клеток (hDFSCs) а также их не вирусная генетическая модификация. Послеродовой Стоматологическая фолликула обнародовал как источник перспективных и легко доступны для уборки Multipotent с экстрактами стволовых клеток обладающих высоким распространением потенциал. Процедуре описано изоляции представляет простой и надежный способ для сбора hDFSCs от Ретинированные зубы мудрости. Также этот протокол включает методы для определения характеристик стволовых клеток изолированных клеток. Для генной инженерии hDFSCs оптимизированный Катионный липидных трансфекции стратегия представлен стимулирующей внедрение высокоэффективных микроРНК не вызывая цитотоксических эффектов. МикроРНК, подходящих кандидатов для манипуляции переходных клеток, эти небольшие поступательные регуляторов управления судьбу и поведением стволовых клеток без опасности стабильной генома интеграции. Таким образом этот протокол является безопасной и эффективной процедуры для техники hDFSCs, которые могут оказаться важными для оптимизации их терапевтической эффективности.

Здесь мы представляем подробную изоляции инструкция урожай hDFSCs из ткани человека Стоматологическая фолликула. Из-за легкий доступ Стоматологическая фолликул во время обычной операции это перспективный источник для извлечения стволовых клеток.
<p class="jove_content" fo:keep-tog...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells

Этот протокол описывает переходных генной инженерии Стоматологическая стволовых клеток, извлеченные из человеческих зубов фолликула. Прикладной-вирусных модификации стратегия может стать основой для улучшения продуктов терапевтического стволовых клеток.

Изоляция, характеристика и микроРНК основе генетической модификации человека Стоматологическая фолликула стволовых клеток

To date, several stem cell types at different developmental stages are in the focus for the treatment of degenerative diseases. Yet, certain aspects, such ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области регенеративной медицины, например, где стволовые клетки зубного фолликула человека могут быть генетически модифицированы для улучшения их терапевтических свойств. Основным преимуществом этого метода является то, что стволовые клетки могут быть изменены путем введения микроРНК без опасности стабильной интеграции генома. Начните процедуру для энзиматического пищеварения двух фолликулов, предварительно нагревая до комнатной температуры, стволовых клеток зубного фолликула человека или hDFSC культуры среднего и PBSPSG раствора.Оттепель один aliquot каждый из коллагеназы типа I и Dispase II фондовых решений. Подготовь решение для пищеварения, добавив 500 микролитров раствора коллагеназы типа I и 500 микролитров раствора бульона Dispase II в 4 миллилитров Базальной среды, содержащей 1%-ю антибиотико-препарат. Чтобы избежать загрязнения сайта во время изоляции стволовых клеток человека стволовых клеток мыть буферов и культуры средств массовой информации, используемые должны содержать антибиотики агентов.Поместите извлеченный зубной фолликул в стерильную чашку Петри. Добавьте 10 миллилитров раствора PBSPSG для мытья извлеченных тканей. Аспирировать и отказаться от раствора и добавить свежий раствор PBSPSG повторить мыть.Используя стерильный скальпель фарш извлеченный фолликул на куски, если около 1 на 1 миллиметр. Перенесите рубленую ткань и раствор PBSPSG из чашки Петри в 50-миллилитровую коническую центрифугу, вымойте чашку Петри 10 миллилитров раствора PBSPSG и перенесите раствор в ту же трубку. Центрифуга конической трубки при температуре 353 х г при комнатной температуре в течение десяти минут.Добавьте 5 миллилитров раствора пищеварения в поддонную ткань, аккуратно смешайте раствор и ткань, инкубировать смесь при 37 градусах по Цельсию и 5%CO2 в трясущимся инкубаторе в течение двух часов. Через два часа центрифуга усваивается клеточной и тканевой суспензией при температуре 353 г в течение десяти минут при комнатной температуре. Откажитесь от супернатанта и повторно приостановьте полученный поддон в 6 миллилитров среды культуры HDFSC.Семя подвески клетки в 25 квадратных сантиметров клеточной культуры колбу, и инкубировать клетки при 37 градусов по Цельсию. После сбора клеток и характеристики HDFSC, как описано в текстовом протоколе, семена hDFSCs в 24 хорошо пластины культуры клеток. Инкубация при 37 градусах по Цельсию, 5%CO2 и 20%Кислород в течение 24 часов.На следующий день разбавить 40 пикомолов микроРНК в 66,7 микролитров уменьшенной среды сыворотки и вихрем раствора. Разбавить 0,67 микролитров катионных липидов на основе, трансфекции реагента в 66,7 микролитров уменьшенной среды сыворотки, вихрь раствора, и инкубировать при комнатной температуре в течение пяти минут. Через пять минут добавить предварительно разбавленную микроРНК в преразумый трансфектный реагент, смешать раствор и инкубировать при комнатной температуре в течение пятнадцати минут.Затем добавьте подготовленные сложности трансфекции, dropwise, непосредственно к среде культуры на клетках. Смешайте осторожно, качая 24 хорошо пластины культуры клеток вперед и назад. Инкубировать клетки при 37 градусах по Цельсию в течение 24 часов.Через 24 часа после трансфекции, собирать супернатант образцов в соответствующих 15 миллилитров конической центрифуги труб. Вымойте клетки с 1 миллилитров PBS, и передать PBS в соответствующие центрифуги трубки. Добавить 500 микролитров капель и ЭДТА в клетки, и инкубировать 24 хорошо пластины при 37 градусов по Цельсию, в течение 3 минут.Остановите трипсинизацию, добавив 1 миллилитр среды клеточной культуры для клеток и переведя раствор в соответствующие центрифуги. Центрифуга клеток при 300 х г и 4 градуса по Цельсию в течение десяти минут. Отсюда держать клетки и реагенты на льду, если не указано иное.Откажитесь от супернатанта, перерасходуйте клетки в 100 микролитров буфера окрашивания и перенесите клеточный раствор в 1,5-миллилитровую микроцентрифугную трубку. Добавьте 0,5 миллилитров реактивного красителя амина в каждый образец, чтобы различать живые и мертвые клетки. Аккуратно смешайте раствор и инкубировать при 4 градусах по Цельсию в течение десяти минут.Добавьте 1 миллилитр PBS в клетки, и центрифуга при 300г и 4 градусах по Цельсию в течение десяти минут Отбросьте супернатант и повторно посовестите клетки в 100 микролитров PBS, добавьте 33 микролитера параформальдегида и смешайте растворы, храните образцы при 4 градусах Цельсия, защищенных от света до цитометрических измерений потока. Передача образцов в трубки, пригодные для цитометрических измерений потока, и выполнить цитометрию потока с использованием стратегии гэтинга, описанной в текстовом протоколе. Изолированные стволовые клетки стоматологического фолликула человека показали все характеристики, описанные для определения мезенхимальных стромальных клеток, клетки были пластиковыми адептами и отображали стекловолокно, как морфология, в стандартных условиях культуры.Цитометрический анализ потока показал, что hDFSCs выразили панель некоторых поверхностных антигенов, включая CD29, CD44, CD73, CD90 и CD105. В то время как CD45 и CD117 отсутствовали. Адипогенный, остеогенный и хондрогенный потенциал дифференциации клеток в специфических условиях культуры In Vitro был подтвержден иммуностай, жирным кислотным связывающим белком для:Остеокальцина и Аггрекана.Стратегия гэтинга, используемая для количественной оценки цитотоксичности и Cy3 помечены микроРНК поглощения эффективности 24 часов после трансфекции, подтвердил поглощение микроРНК в 100% жизнеспособных клеток. Сопоставимое количество мертвых клеток в трансфицированных и нетрансфицированных образцах указывает на то, что микроРНК эффективно вводится без цитотоксического воздействия. Следуя этой процедуре, другие методы, такие как трансдифференцирование могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как пластичность Cytolab.

Research

JoVE Journal

Genetics

Engineering Artificial Factors to Specifically Manipulate Alternative Splicing in Human Cells

Инженерной искусственных факторов в частности Манипулирование альтернативного сплайсинга в клетках человека

The processing of most eukaryotic RNAs is mediated by RNA Binding Proteins (RBPs) with modular configurations, including an RNA recognition module, which ...

Immunostaining for DNA Modifications: Computational Analysis of Confocal Images

Иммуноокрашивания для модификации ДНК: Вычислительный анализ конфокальный изображений

For several decades, 5-methylcytosine (5mC) has been thought to be the only DNA modification with a functional significance in metazoans. The discovery of ...

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Поколение ген нарушена Streptococcus mutans штамм без генов клонирования

Typical methods for the elucidation of the function of a particular gene involve comparative phenotypic analyses of the wild-type strain and a strain in ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Учредительные и индуцибельной систем для генетических в естественных условиях изменения мыши гепатоцитов, используя инъекции Вену гидродинамических хвост

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

Полуколичественного обнаружение РНК зависимой РНК-полимеразы активности человека теломеразы транскриптазы белка

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Высокоэффективные гена срыв мышиных и человека гемопоэтических предшественников клеток ТРИФОСФАТЫ/Cas9

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

Комбинаторные одноклеточных подход к характеризуют молекулярных и иммунофенотипических неоднородность человеческих стволовых и прогениторных населения

Immunophenotypic characterization and molecular analysis have long been used to delineate heterogeneity and define distinct cell populations. FACS is ...

Endogenous Protein Tagging in Human Induced Pluripotent Stem Cells Using CRISPR/Cas9

Эндогенного белка, пометки в человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием ТРИФОСФАТЫ/Cas9

A protocol is presented for generating human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that express endogenous proteins fused to in-frame&#160;N- or ...

Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

Изоляция, виртуализации и анализа внеклеточного микроРНК от мезенхимальных стволовых клеток человека

Extracellular and circulating RNAs (exRNA) are produced by many cell types of the body and exist in numerous bodily fluids such as saliva, plasma, serum, ...

Preparation and Gene Modification of Nonhuman Primate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Подготовка и генной модификации нечеловеческих приматов гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток

Hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) transplantation has been a cornerstone therapy for leukemia and other cancers for nearly half a century, ...