Name: isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells
Uploaded: 2018-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Detta arbete stöds av programmet FORUN Rostock universitet medicinska centrum (889018) och fuktig stiftelsen (2016-11). I tillägg, P.M. och R.D. stöds av BMBF (VIP + 00240).

HDFSCs är isolerade från dental folliklar av extraherade visdomständer som tillhandahålls av institutionen av Oral och Maxillofacial plastikkirurgi för Rostock University Medical Center. Informerat samtycke och skriftligt godkännande erhölls från alla patienter. Studien var godkänd av den lokala etiska kommittén av det Universitetar av Rostock (tillåtelse No. A 2017-0158).
1. isolering av hDFSCs
Obs: För att förhindra bakteriell kontamina...

Adulta stamceller är för närvarande i fokus för behandling av flera degenerativa sjukdomar. I synnerhet ben märg (BM)-härrör stamcellerna, inklusive hematopoetiska stamceller (Förenta) och MSCs är under intensiv klinisk undersökning47. BM skörd är dock en invasiv förfarande som orsakar smärta på platsen för donation och kan leda till biverkningar48. Nyligen, postnatal dentala vävnaden har vuxit fram som en ny och lättillgänglig källa för stamceller. Des...

Mänskliga dentala follikeln är en lös ectomesenchymally-derived bindväv som omger den framkallande tand1,2. Bredvid sin funktion att samordna osteoclastogenesis och osteogenesis för tand utbrott processen, hamnar denna vävnad stamceller och stamceller celler särskilt för utvecklingen av den periodontium3,4,5. Därför, dentala follikeln är ansedd som en alternativ källa till skörd mänskliga stamceller6,7.
Flera studier visat att mänskliga dentala follikeln stamceller (hDFSCs) klarar av att skilja i den parodontala härstamning inklusive osteoblaster, ligament fibroblaster och cementoblasts8,9,10 . Dessutom dessa celler visades att matcha alla kännetecken av mesenkymala stromaceller (MSCs) inklusive själv förnya kapacitet, plast följsamhet, uttryck för specifika yta markörer (t.ex., CD73, CD90, CD105) samt som osteogent, adipogena och chondrogenic differentiering potentiella11,12,13. Andra studier visade också en neurala differentiering potential av hDFSCs2,14,15,16,17,18.
På grund av deras lovande egenskaper och enkel tillgång blev hDFSCs nyligen relevant för tissue engineering19,20,21. De första studierna koncentreras till DFSCs potential att regenerera ben, parodontala och tand rötter19,22,23,24,25,26, 27,28,29,30. Deras tillämpning som potentiell behandling för neurodegenerativa sjukdomar har sedan kunskapen av neurogen förmåga hDFSCs, undersökta31,32,33. HDFSCs har också blivit allt viktigare med den förnyelse av andra vävnader (t.ex. hornhinneepitelet)34,35. Den terapeutiska potentialen i hDFSC bygger inte endast på deras direkta differentiering potential men också på deras parakrin aktivitet. Nyligen, hDFSCs har visat att utsöndra en mängd bioaktiva faktorer, såsom matrix metalloproteinaser (MMP), insulin-liknande tillväxtfaktor (IGF), vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF), basic fibroblast tillväxtfaktor (bFGF) och hepatocyte tillväxt faktor (HGF), som spelar en avgörande roll för angiogenes, immunmodulering, extracellulära matrix remodeling och reparativa processer36.
Breda kliniska översättning av stamcellsterapi är dock fortfarande nedsatt av flera utmaningar, såsom massiva första celldöd och låg fördelaktigt stamceller effekter37,38. Genteknik ger en lovande strategi för att möta dessa utmaningar och därför kan kraftigt öka den terapeutiska effekten av stamceller38,39,40. För övergående cell manipulation är mikroRNA (miRs) lämpliga kandidater, som dessa små translationell regulatorer styr ödet och beteende av stamceller utan risk för stabil genomet integration41,42, 43. hittills har flera välgörande miRs har identifierats att främja stem cell spridning, överlevnad, dråpare, parakrin aktivitet samt deras differentiering till flera härstamningar44. Till exempel, konstruerad miR-133a MSCs visade en ökad överlevnad och engraftment i infarcted rat hjärtan vilket resulterar i en förbättrad hjärtfunktion jämfört med oförändrad MSCs45. Likaså visades miR-146a överuttryck MSCs att utsöndra större mängder VEGF som i sin tur ledde till en förbättrad terapeutisk effektivitet i ischemisk vävnad46.
Detta manuskript presenterar en detaljerad protokollet för selektiv extraktion och genteknik av hDFSCs. För detta ändamål beskrev vi skörd och enzymatisk nedbrytning av mänskliga dental folliklar samt efterföljande isoleringen av hDFSCs. För att karakterisera isolerade celler, har viktiga anvisningar för verifiering av MSC boenden inkluderats i enlighet med riktlinjerna från International Society for cellterapi13. Dessutom ger vi en detaljerad beskrivning för generering av miR-modifierat hDFSCs genom att tillämpa en strategi för katjoniska lipid-baserade transfection och utvärderingen av transfection effektivitet och cytotoxicitet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1557A488</td>
			<td>Clone SN6, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928A488</td>
			<td>monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559883</td>
			<td>Clone MAR4, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555751</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550257</td>
			<td>Clone AD2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555749</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>339217</td>
			<td>Clone 104D2, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557872</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560531</td>
			<td>Clone G44-26, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558304</td>
			<td>Clone 27-35, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90&#160;Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561557</td>
			<td>Clone 5E10, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>55095</td>
			<td>Clone MOPC-21, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560777</td>
			<td>Clone HI30, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V500 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control Antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560787</td>
			<td>Clone X40, monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td>0.5M, pH 8.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steritop</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td>0.22 &#181;m, radio-sterilized, polyethersulfone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1040051000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>SC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17120</td>
			<td>5 nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM17110</td>
			<td>5nmol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11055</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium; Fluoroshield with DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6057-20ML</td>
			<td>histology mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS LSRII flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva Software 6.1.2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN2011 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%)</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine reactive dye; LIVE/DEAD&#8482; Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>pH: 7.4; w/o: Ca and Mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-S-G (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basal medium; Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic, ZellShield</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>W 13-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type I</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter, Sterifix syringe filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4099206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50&#160;mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62,554,502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask 75 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,910,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask, 25 cm2</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833,911,002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing medium, Biofreeze</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>F 2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td>0.4 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Counting chamber</td>
			<td>Paul Marienfeld</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001%</td>
			<td>Mibe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td>0.9 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl satures, Vicryl rapide</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>3 - 0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization and microrna-based genetic modification of human dental follicle stem cells

Hittills har är flera stamceller typer i olika utvecklingsstadier i fokus för behandling av degenerativa sjukdomar. Ändå nedsatt vissa aspekter, såsom inledande massiva celldöd och låga terapeutiska effekter, deras breda kliniska översättning. Genteknik av stamceller före transplantation uppstod som en lovande metod för att optimera terapeutiska stamceller effekter. Säker och effektiv gen leveranssystem saknas dock fortfarande. Utvecklingen av lämpliga metoder kan därför ge en strategi för att lösa aktuella utmaningar i stamceller-baserade behandlingar.
Protokolls beskriver extraktion och karakterisering av mänskliga dentala follikeln stamceller (hDFSCs) samt deras icke-virala genetisk modifiering. Postnatal dentala follikeln Avtäcka som en lovande och lättillgänglig källa för skörd multipotenta stamceller från vuxna som har hög spridning potential. Förfarandet beskrivs isolering presenterar en enkel och tillförlitlig metod för att skörda hDFSCs från påverkade visdomständer. Detta protokoll omfattar också metoder för att definiera stamcellsforskning egenskaperna hos isolerade celler. För genteknik av hDFSCs presenteras en optimerad katjoniska lipid-baserade transfection strategi möjliggör högeffektiv mikroRNA introduktion utan att orsaka cytotoxiska effekter. MikroRNA är lämpliga kandidater för övergående cell manipulation, som dessa små translationell regulatorer styr ödet och beteende av stamceller utan risk för stabil genomet integration. Detta protokoll utgör därmed, ett säkert och effektivt förfarande för konstruktion av hDFSCs som kan bli viktiga för att optimera deras terapeutiska effekt.

Här presenterar vi en detaljerad isolering instruktion att skörda hDFSCs från mänskliga dentala follikeln vävnad. På grund av den stora tillgången på dentala follikeln under rutinmässig operation är det en lovande källa för utvinning av vuxna stamceller.
Den isolerade hDFSCs visade alla egenskaper beskrivs för definitionen av MSCs13. I själva verket celler var plast-anhängare under beskrivs...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells at JoVE.com

Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells

Det här protokollet beskriver övergående gentekniken dental stamceller utvinns ur mänskliga dentala follikeln. Tillämpad icke-virala modifiering strategin kan bli underlag för förbättring av terapeutiska stamceller produkter.

Isolering, karakterisering och mikroRNA-baserad genetisk modifiering av mänskliga dentala follikeln stamceller

To date, several stem cell types at different developmental stages are in the focus for the treatment of degenerative diseases. Yet, certain aspects, such ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom regenerativ medicin, till exempel där en mänsklig tandsäcksstamceller skulle kunna vara genetiskt modifierade för att förbättra deras terapeutiska egenskaper. Den största fördelen med denna teknik är att stamceller kan modifieras genom mikroRNA-introduktion utan fara med stabil genomintegration. Börja proceduren för enzymatisk matsmältning av de två follikeln, genom att föruppvärmning till rumstemperatur, mänskliga tandläkare follikel stamceller eller hDFSC kultur medium och PBSPSG lösning.Tina en alikvot var och en av Collagenas typ I och Dispase II lager lösningar. Bered en digestionslösning genom att tillsätta 500 mikroliter av stamlösningen Collagenas typ I och 500 mikroliter av dispase II-stamlösningen till 4 milliliter Basal Medium innehållande 1%antibiotiska medel. För att undvika området kontaminering under mänskliga tandläkare follikeln stamceller isolering tvätta buffertar och kultur medier som används måste innehålla antibiotika medel.Placera en extraherad tandfollikel i en steril Petriskål. Tillsätt 10 milliliter PBSPSG-lösning för att tvätta den extraherade vävnaden. Aspirera och kassera lösningen och tillsätt färsk PBSPSG-lösning för att upprepa tvätten.Med hjälp av en steril skalpell finhacka den extraherade follikeln i bitar om ca 1 av 1 millimeter. Överför den malda vävnaden och PBSPSG-lösningen från Petri-skålen till ett koniskt centrifugrör på 50 milliliter, tvätta Petriskålen med 10 milliliter PBSPSG-lösning och överför lösningen till samma rör. Centrifugera det koniska röret vid 353 x g vid rumstemperatur i tio minuter.Tillsätt 5 milliliter digestionslösning till den pallade vävnaden, blanda försiktigt lösningen och vävnaden, inkubera blandningen vid 37 grader celsius och 5%CO2 i en skakande inkubator i två timmar. Efter två timmar, centrifug den rötade cellen och vävnad suspension vid 353 g i tio minuter vid rumstemperatur. Kassera supernatanten och dra tillbaka den erhållna pallen i 6 milliliter HDFSC-odlingsmedium.Frö cellen suspension i en 25 kvadrat centimeter cellodling kolv, och inkubera cellerna i 37 grader celsius. Efter cell skörd och karakterisering av HDFSC är som beskrivs i textprotokollet, utsäde hDFSCs i en 24 väl cell kultur tallrik. Inkubera vid 37 grader celsius, 5%CO2 och 20%Syre i 24 timmar.På följande dag späd 40 picomoles av mikroRNA i 66,7 mikroliter av reducerat serum medium, och vortex lösningen. Späd 0,67 mikroliter av katjonlipid baserad, transfektionsreagens i 66,7 mikroliter av reducerat serummedium, vortex lösningen, och inkubera vid rumstemperatur i fem minuter. Efter fem minuter tillsätt förspädd microRNA till förspädd transfection reagens, blanda lösningen, och inkubera vid rumstemperatur i femton minuter.Därefter lägger du till de förberedda transfektionskomplexiteterna, dropwise, direkt till odlingsmediet på celler. Blanda försiktigt genom att gunga den 24 väl cellodlingsplattan fram och tillbaka. Inkubera cellerna vid 37 grader varmt i 24 timmar.24 timmar efter transfektion, samla supernatanten av prover i respektive 15 milliliter koniska centrifugrör. Tvätta cellerna med 1 milliliter PBS, och överför PBS i respektive centrifugrör. Tillsätt 500 mikroliter droppar och EDTA till cellerna, och inkubera 24 brunnsplattan vid 37 grader celsius, i 3 minuter.Stoppa trypsinization genom att lägga till 1 milliliter cellodlingsmedium för cellerna, och överföra lösningen i respektive centrifugrör. Centrifugera cellerna vid 300 x g och 4 grader celsius i tio minuter. Härifrån på hålla cellerna och reagenser på is om inte annat anges.Kassera supernatanten, resuspend cellerna i 100 mikroliter av färgningsbuffert, och överför celllösningen till ett 1,5 milliliter mikrocentrifugrör. Tillsätt 0,5 milliliter aminreaktiva färgämne till varje prov för att skilja mellan levande och döda celler. Blanda försiktigt lösningen, och inkubera vid 4 grader celsius i tio minuter.Tillsätt 1 milliliter PBS till cellerna, och centrifuge vid 300g och 4 grader celsius i tio minuter Kasta supernatant och resuspend cellerna i 100 mikroliter av PBS, tillsätt 33 mikroliter av paraformaldehyd, och blanda lösningarna, lagra proverna på 4 grader celsius skyddas från ljus tills flöde cytometriska mätningar. Överför proverna till rör som är lämpliga för flödescytometriska mätningar, och utför flödescytometri med hjälp av den gatingstrategi som beskrivs i textprotokollet. De isolerade mänskliga tandläkare follicle stamceller visade alla egenskaper som beskrivs för definitionen av mesenkymala stromal celler, celler var plast anhängare och visas en glasfiber som morfologi, under standard odlingsförhållanden.Flow cytometric analys visade att hDFSCs uttryckt en panel av vissa ytan antigener, inklusive CD29, CD44, CD73, CD90 och CD105. Medan CD45 och CD117 var frånvarande. Cellernas adipogena, osteogena och chondrogenic differentieringspotentialer under specifika In Vitro-odlingsförhållanden bekräftades genom immunostaining, ett fettsyrbindande protein för:Osteocalcin och Aggrecan.Den gating strategi som används för kvantifiering av cytotoxicitet och Cy3 märkt mikroRNA upptag effektivitet 24 timmar efter transfektion, bekräftade microRNA upptag i 100%av livskraftiga celler. Jämförbara mängder av döda celler i transfekterade och icke-infekterade prover indikerar att mikroRNA införs effektivt utan cytotoxiska effekter. Efter denna procedur, andra metoder såsom transdifferentiation kan utföras för att besvara ytterligare frågor som Cytolab plasticitet.

Research

JoVE Journal

Genetics

Engineering Artificial Factors to Specifically Manipulate Alternative Splicing in Human Cells

Engineering Artificiella Faktorer att specifikt Manipulera alternativ splitsning i humana celler

The processing of most eukaryotic RNAs is mediated by RNA Binding Proteins (RBPs) with modular configurations, including an RNA recognition module, which ...

Immunostaining for DNA Modifications: Computational Analysis of Confocal Images

Immunfärgning för DNA ändringar: tillämpad analys av Confocal bilder

For several decades, 5-methylcytosine (5mC) has been thought to be the only DNA modification with a functional significance in metazoans. The discovery of ...

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Generation of a Gene-disrupted Streptococcus mutans Strain Without Gene Cloning

Generation av en gen-stört Streptococcus mutans stam utan genen kloning

Typical methods for the elucidation of the function of a particular gene involve comparative phenotypic analyses of the wild-type strain and a strain in ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Konstituerande och inducerbara system för genetiska In Vivo modifiering av mus hepatocyter använder hydrodynamiska svans ven injektion

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

Halvkvantitativ detektion av RNA-beroende RNA-polymeras aktivitet av mänskliga telomeras omvänt transkriptas Protein

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

Highly Efficient Gene Disruption of Murine and Human Hematopoietic Progenitor Cells by CRISPR/Cas9

Högeffektiva gen störningar av murina och mänskliga hematopoetiska stamceller av CRISPR/Cas9

Advances in the hematopoietic stem cell (HSCs) field have been aided by methods to genetically engineer primary progenitor cells as well as animal models. ...

A Combinatorial Single-cell Approach to Characterize the Molecular and Immunophenotypic Heterogeneity of Human Stem and Progenitor Populations

En kombinatorisk Single-cell strategi att karaktärisera molekylära och Immunophenotypic heterogenitet av mänskliga stamceller och stamceller populationer

Immunophenotypic characterization and molecular analysis have long been used to delineate heterogeneity and define distinct cell populations. FACS is ...

Endogenous Protein Tagging in Human Induced Pluripotent Stem Cells Using CRISPR/Cas9

Endogen Protein taggning i mänskliga inducerade pluripotenta stamceller med CRISPR/Cas9

A protocol is presented for generating human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that express endogenous proteins fused to in-frame&#160;N- or ...

Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

Isolera, sekvensering och analysera extracellulära mikroRNA från humana mesenkymala stamceller

Extracellular and circulating RNAs (exRNA) are produced by many cell types of the body and exist in numerous bodily fluids such as saliva, plasma, serum, ...

Preparation and Gene Modification of Nonhuman Primate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Förberedelse och genmodifiering av Nonhuman Primate hematopoetiska stamceller och stamceller

Hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) transplantation has been a cornerstone therapy for leukemia and other cancers for nearly half a century, ...