Name: an in vitro assay to detect trna-isopentenyl transferase activity
Uploaded: 2018-10-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity at JoVE.com

我々 は彼の指導と有用なコメントがこの原稿のため博士デイヴィッド Engelke を感謝したいです。PJS - ボール州立大学研究所スタートアップ資金;軽打 - 1R15AI130950-01 を付与します。

注: プロトコルは、Ref. 24から適応されました。
1. 関心の酵素と RNA を取得します。
<ol><li>使用の in vitro転写 Rna 内部で32P でラベルしてエシェリヒア属大腸菌、前述した24から精製組換え His6 Mod5 で表現。<ol>
<li>紹介の in vitro転写 Rna (セクション 3) ラベル ATP、UTP、CTP、GTP、10 µCi ゲル精製、エタノール沈殿 α...

<ol>
	<li>Boccaletto, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MODOMICS:+a+database+of+RNA+modification+pathways.+2017+update.">MODOMICS: a database of RNA modification pathways. 2017 update.</a> Nucleic Acids Research. 46 (D1), 303-307 (2018).</li><li>Lewis, C. 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RNA 修飾は、細胞・個体機能のこれまで以上に重要かつ多様な役割を果たすことに表示し続けます。など、RNA 修飾酵素を尋問するアッセイの開発は生物学の基本的な側面を理解するより良い中心です。このプロトコルでは、高解像度の in vitroアッセイで Mod5 の tRNA の修正活動の特性について説明します。
このプロトコルには、isopentenylation の直接と簡単に解釈でき?...

Rna に、コンテキストに依存する多様な機能、直接 RNA の構造に影響を与える、他の RNA の相互作用に影響を与えるこれらの変更で少なくとも 163 異なる転写後の RNA の修正も確認されています。分子1,2。番号とさまざまな RNA 編集のための感謝が増えると、RNA 修飾とそれらを触媒する酵素の両方を問い合わせること確実に試金の開発が急務です。
識別される最初の RNA 修飾の一つは、基本 37 Trna、3' 側3,4反のコドンに隣接してに発生します。イソペンテニル グループ dimethylallylpyrophosphate (DMAPP) からアデノシン 37 の N6 位置に転送されます (私6A37) 3,5細胞質とミトコンドリア Trna のサブセット。私6A37 翻訳忠実度を向上させるし、6リボソーム4,6と私の tRNA の親和性を高めることによって効率 A37 細菌7のストレス反応にとって重要です。この変更を行う酵素 tRNA イソペンテニル トランスフェラーゼと呼ばれている、非常に高い真核生物13、植物12ワーム11菌10細菌8,9で保存、人間14を含みます。
ヒト tRNA イソペンテニル トランスフェラーゼの遺伝子、 TRIT1、突然変異は人間の病気と関連付けられます。たとえば、 TRIT1の突然変異ミトコンドリアのタンパク質合成15,16の欠陥によって引き起こされる可能性が高い重大なミトコンドリア病と相関しています。さらに、 TRIT1は腫瘍のサプレッサー遺伝子17,18として記載されている、癌悪性黒色腫19、乳房20、胃21、肺癌22 などのいくつかの種類に関与しています。 ,23。最後に、TRIT1 と Mod5 (酵母) イソペンテニル トランスフェラーゼ、集計しやすいタンパク質プリオンのようなアミロイド繊維24,25,26を形成します。これの直接的な証拠は示されていないが、これらの観察は潜在的神経変性疾患における tRNA イソペンテニル トランスフェラーゼを巻き込みます。
イソペンテニル トランスフェラーゼ活性の翻訳と病気、私に6を直接測る方法イソペンテニル トランスフェラーゼが果たす役割を考えるこれらの通常の下で酵素と病気の状態の機械論的理解のために重要であります。私に肯定的な交配の in vitro isopentenylation アッセイを含む6A RNA 改変を検出するメソッド数の増加があります私の不在で6(PHA6) を試金、薄層クロマトグラフィー (TLC)、アミノ酸受け入れ活性測定法および質量分析法によるアプローチ (Ref. 4レビュー)。
14C DMAPP とラベルの Trna を利用した isopentenylationの in vitroアッセイが記載されています。このアッセイで、放射性炭素がイソペンテニル トランスフェラーゼでは14C DMAPP から RNA に転送されます。この試金は高感度が、しばしば特定の残基を変更9,20,27を判断することは困難です。PHA6 試金、かさばるに頼る私6A の変更変更後の残渣をまたがる32P 標識プローブの交配を妨げること。ですから、交配は私の不在で大きい6修正18,28,29。PHA6 試金は非常に敏感な細胞溶解液から抽出されたトータル RNA を分析する能力が。さらに、関心の RNA に固有のプローブの設計機能柔軟性をこのメソッド実質的なターゲット。ただし、PHA6 の試金はプローブの対象地域内の残留発生、新規修飾部位を特定しにくいため変更の評価に限定されます。また、バインディングの有無の変更を示すものとして他の変更または RNA 結合に影響を与える突然変異にデータ分析が混同されます。
別のアプローチは、tRNA30で6A 変更私の読み出しとしてアミノ酸受入れ活動とベンジル DEAE セルロース (BD) セルロース クロマトグラフィーを組み合わせたものです。この方法は、関数を直接試金 i の6A の変更、しかし、それは私に6A の変更を検出する間接アプローチと RNA の特定の残基への変更をマップする解像度が不足します。TLC のアプローチは、合計 tRNA を検出する使用されています私6A の変更。このアプローチで単一ヌクレオチドに32P 標識 Trna を消化する内部的、二次元 TLC 分析は、isopentenylation を識別するために使用されます。このアプローチは非常に敏感な検出、私に与えられた RNA サンプル6A を合計が、消化時にシーケンスのすべての情報が失われます。したがって、調査官はどの残基が変更された31をされているを確認する方法はありません。
最近では、液体クロマトグラフィー ・ タンデム質量分析法 (MS/LCMS) 方法開発されている定量的に比較する種、細胞の種類、および実験条件32,33、間の総 RNA の修正 34。この方法の制限が少ない派生した34の id と変更されたヌクレオシドがいたから RNA 内の位置を決定することができます。さらに、専門知識とこれらの実験を実行するために必要な機器は、このアプローチの実用性を制限します。
さらに、RNA の変更トランスクリプトーム34をマップするいくつかの次世代シーケンシング技術をしました。特定の変更 (RIP Seq) に特異抗体を免疫沈降の Rna は、特定の変更35,36を含むすべてのシーケンスを識別するために調査官を有効にします。さらに、化学 Seq など非ランダムな不一致シーケンス逆転写酵素ベースのアプローチは変更された残37,38,39逆転写反応の摂動に依存します。RNA トランスクリプトームの変更をマップするこれらの技術の利点にもかかわらず RIP seq とケム Seq 技術は信頼性の高い抗体の反応性化学物質ごとの特定の変更は、それぞれ34の不足によって制限されます。また、逆転写酵素の酵素化学 Seq を実行する、非ランダムな不一致の配列解析技術は、安定した RNA の構造によって妨げられることができます。Trna の非常に変更された、構造的に安定した性質は、それらがこれらの技術を使用して調査する特に困難にします。までに、次世代シーケンス技術は私に6の変更34をマップにまだ活用されていません。
ここで、私に6A tRNA 変更体外を検出する単純で直接的アプローチについて述べる.このメソッドは、Rna 組換え酵母イソペンテニル トランスフェラーゼ (Mod5) と続いて、RNase T1 消化と 1 二次元のゲルの電気泳動分析私の6A の変更をマップするを利用しています。この方法は直接、データの分析に少し専門知識が必要です。さらに、このメソッドは修正の酵素、RNA またはゲルによる RNA のモビリティの分子量を変更する共有結合酵素を含む他の RNA に適応されます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:677px;" width="678">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Reagents</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:216px;">UreaGel Concentrate</td>
			<td style="width:176px;">National Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">EC-833</td>
			<td>As part of a kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UreaGel Diluent</td>
			<td style="width:176px;">National Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">EC-833</td>
			<td>As part of a kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UreaGel Buffer</td>
			<td style="width:176px;">National Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">EC-833</td>
			<td>As part of a kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10x TBE</td>
			<td style="width:176px;">National Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">EC-833</td>
			<td>As part of a kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ammonium persulfate (APS)</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">7727-54-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">N,N,N&#8242;,N&#8242;-Tetramethylethylenediamine (TMED)</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tris base</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Boric acid</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">10043-35-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EDTA</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">60-00-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ATP</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">34369-07-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">MgCl2</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">7786-30-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMAPP</td>
			<td style="width:176px;">Caymen Chemical</td>
			<td style="width:119px;">1186-30-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Super RNaseIN</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AM2694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">60-24-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodiume acetate</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">127-09-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rnase T1</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">EN0541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylene cyanol</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">2650-17-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Equipment and Supplies</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Short glass plates (20-40 cm W x 40 cm L)</td>
			<td style="width:176px;">The Gel Company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Long glass plates (20-40 cm W x 40 cm L)</td>
			<td style="width:176px;">The Gel Company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vertical gel apparatus</td>
			<td style="width:176px;">The Gel Company</td>
			<td style="width:119px;">S2-3040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL disposable syringe</td>
			<td style="width:176px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-377-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stainless steel binder clips</td>
			<td style="width:176px;">Idea Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphoscreen</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">28-9564-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic wrap</td>
			<td style="width:176px;">(local grocery store)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro assay to detect trna-isopentenyl transferase activity

N6- isopentenyladenosine RNA 変更、機能的多様性と原核生物と真核生物の間で非常に節約されました。最も非常に節約された N6- isopentenyladenosine 変更の 1 つは、Trna のサブセットの A37 位置に発生します。この変更は、tRNA のリボソームの親和性を高めることによって翻訳の効率と忠実度を向上します。真核生物でこの変更に関わる酵素の突然変異は、ミトコンドリア機能障害やがんなどいくつかの病気の状態に関連付けられます。したがって、基質特異性とこれらの酵素の生化学的活性について常態と病態の真核生物の生物学の理解のために重要です。方法の多様な配列は、私6A の変更の特性評価に採用されています。ここは Mod5 によって isopentenylation の検出のための直接的なアプローチを説明します。このメソッドは、組換えイソペンテニル トランスフェラーゼ、続いて RNase T1 消化と私に6A の変更を検出する 1 二次元のゲルの電気泳動分析と Rna の孵化を利用しています。さらに、他の RNA 修飾酵素を特徴付けるこのプロトコルの潜在的な適応性を説明します。

Mod5 は、チロシンと培養された tRNA またはセリン DMAPP の有無で tRNA。以下の改質反応製品であった RNase T1 消化 3' グアノシン monophosphates (GMP)24 (図 1) を残してすべての guanosines の 3' 末端を切断します。Rna の完全消化は、ゲルの変化 20% ポリアクリルアミドゲルに解決されます radiolabeled フラグメント (図 2<st...

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An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

ここで、Mod5、酵母 RNA 修飾酵素の生化学的解析のためのプロトコルを記述し、このプロトコル可能性があります他の RNA 修飾酵素に適用する方法について説明。

TRNA イソペンテニル トランスフェラーゼ活性を検出する体外の試金

N6-isopentenyladenosine RNA modifications are functionally diverse and highly conserved among prokaryotes and eukaryotes. One of the most highly conserved ...

このプロトコルの全体的な目標は、インビトロでtRNA-イセペネテニルトランスファーゼ活性を生化学的に特徴付ける。この方法は、精製組換え酵素のtRNA-イソペンテニルトランスファーゼ活性のインビトロ検出および特性評価に有用である。この技術の主な利点は、共有結合RNA修飾を検出するために使用されるシンプルで直接的なアッセイである点です。この方法は、tRNA-イソペンテニルトランスレコーゼ活性に関する洞察を提供しますが、広い範囲またはRNA修飾酵素の生化学的特徴付けに適応可能である可能性があります。この手順の最初のステップは、ゲルの鋳造に使用されるガラスプレートを徹底的に洗浄することです。石鹸と水でプレートを洗い、脱イオン水でよく洗い流し、イソプロパノールと糸くずのない拭き取りでプレートをきれいにします。次に、プレートとスペーサーを組み立てます。以下の試薬を混合して、100ミリリットル20%アクリルアミド、7.5モル尿素、1x TBEゲルを作ります。80ミリリットルの尿素ゲル濃縮物、10ミリリットルの尿素ゲル希釈剤、及び10ミリリットルの尿素ゲルバッファー。40マイクロリットルのT-medと800マイクロリットルの新鮮な10%の過硫酸アンモニウムを混合物に加えます。ゲル溶液を大きなシリンジに引き上げ、ガラス板の間でゲル溶液を分配し、溶液を分配して泡の形成を防ぎます。ゲルを室温で30分間固めます。ゲルが固化した後、ゲルを垂直ゲル装置に植える。上側および下側のバッファーチャンバーに 1x TBE を充填します。ゲルをローディングする2時間前に、ゲルを20ミリアンペアで2時間事前に実行し、バッファー境界が最小のオリゴヌクレオチドを実行できるようにした。RNAの各反応を17マイクロリットルの最終体積で開きテニル化アッセイを準備します。各チューブに加え、50ミリモラーTris-HCl、pH 7.2、1.2ミリモルATP、5.8ミリモル塩化マグネシウム、0.2ミリモルDMAPP、10単位RNase阻害剤、40、000 CPM内部32P標識RNA、5.3ミクロモルモラーモッズ5、および1.2ミリモル2-メタノールエタノール。37°Cで1時間の反応をインキュベートします。1時間後、エタノールは2.5容量の100%エタノールと1/10容量の酢酸ナトリウムpH 5.5を使用してRNaseを沈殿させ、一晩で20°Cを負の20度に置きます。次に、RNAサンプルを15、400g's、摂氏4度で20分間遠心分離する。上清を慎重に取り除き、各RNAペレットを500マイクロリットルの70%エタノールで洗浄します。サンプルを15、400g、摂氏4度で5分間遠心分離します。慎重に上清を取り除き、RNAペレットを15分間、またはすべてのエタノールが蒸発するまで空気乾燥します。次に、各RNAペレットを8個の大臼歯の10マイクロリットルで再懸濁する。各サンプルにRNase T1の150単位を加え、一晩摂氏37度でインキュベートします。翌日、各サンプルに6倍の負荷バッファを2マイクロリットル加えます。各RNAサンプルの10マイクロリットルをプレラン、20%ポリアクリルアミド、7.5モル尿素ゲルにロードします。ゲルを25ミランペアで2時間実行します。2時間後、電気泳動を停止し、装置からゲルを取り出します。2枚のガラス板の間にシールを破り、どちらかのプレートに残ったゲルを持つガラス板の1つを慎重に取り除きます。ゲルの上にラップの層を置き、3時間リンスクリーンに露出します。このプロトコルは、S.cerevisiaeイソペンテニルトランフレーゼMod5によって修飾された正規および非カノニカルtRNA残基のイセキセニル化を確実に検出する。この例ではチロシンtRNAを32P-アデノシンで内部標識し、DMAPPの存在下または不在でRNaseとインキュベートしたMod5。RNAはRNase T1で消化され、変性ポリアクリルアミドゲルで分解された。Mod5は、DMAPPの存在下で予測残基を修飾し、シフトされた10ヌクレオチドによって示され、ヌクレオシド位置36〜38での三重アデノシン含有断片はチロシンtRNA中に断片を含む。修飾されたアデノシン37は、アスタリスクで示されています。同様にセリンtRNAがMod5およびDMAPPと共にインキュベートされると、ヌクレオシド位置36〜38での10ヌクレオチド三分アデノシン含有断片の完全なシフトが観察される。興味深いことに、ヌクレオシド36~38位に三重アデノシン含有断片を含まない7ヌクレオチドフラグメントの部分シフトが観察され、ヌクレオシド位置36~38配列の三重アデノシン含有断片および構造がMod5インビトロ活性に必要とされない可能性があることを示唆している。この技術を習得すると、適切に実行された場合、2、4〜6時間かかります。RNAの分解はRNA修飾に影響を与え、データ解釈を混乱させる可能性があるため、この手順をうまく試みることは、RNAの完全性を維持し、監視することが重要です。この手順に従って、目的の酵素を使用して、酵素活性に必要な特定の残基またはドメインを決定するために行うことができる。その開発後、この技術は、RNA生物学の分野の研究者が原核および真核生物酵素のtRNA-イサンプテニルトランスファーゼ活性を言う道を開いた。このビデオを見た後、関心のある酵素のイセパニルトランスレコーゼ活性の検出のためのプロトコルを実行する方法をよく理解する必要があります。放射能を扱うことは非常に危険であり、適切なPPEの着用、十分なシールドの使用、放射能の適切な処分などの予防措置は、常にこの手順を実行する際に行われるべきであることを忘れないでください。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

のpH依存性活性の検出<em&gt;エシェリヒア・コリ</em&gt;シャペロンHdeB<em&gt;インビトロ</em&gt;と<em&gt;インビボ</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

A Fluorescence-based Assay of Phospholipid Scramblase Activity

リン脂質スクランブラーゼ活性の蛍光ベースのアッセイ

Scramblases translocate phospholipids across the membrane bilayer bidirectionally in an ATP-independent manner. The first scramblase to be identified and ...

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

Identification of Cyclin-dependent Kinase 1 Specific Phosphorylation Sites by an In Vitro Kinase Assay

サイクリン依存性キナーゼ 1 の同定の in Vitroキナーゼによって特定のリン酸化のサイトの試金します。

Cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) is a master controller for the cell cycle in all eukaryotes and phosphorylates an estimated 8 - 13% of the proteome; ...

Quantification of Hypopigmentation Activity In Vitro

培養色素脱失活動の定量化

This study presents laboratory methods for the quantification of hypopigmentation activity in vitro. Melanin, the major pigment in melanocytes, is ...

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

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ショウジョウバエメラノガスターにおけるクエン酸シンターゼ活性の比色アッセイ

Mitochondria play the most prominent roles in cellular metabolism by producing ATP through oxidative phosphorylation and regulating a variety of ...

An In Vitro Single-Molecule Imaging Assay for the Analysis of Cap-Dependent Translation Kinetics

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キャップ依存翻訳キネティクス解析のための インビトロ 単分子イメージングアッセイ

Cap-dependent protein synthesis is the predominant translation pathway in eukaryotic cells. While various biochemical and genetic approaches have allowed ...

A High-Throughput Enzyme-Coupled Activity Assay to Probe Small Molecule Interaction with the dNTPase SAMHD1

Sterile alpha motif and HD domain-containing protein 1 (SAMHD1) is a pivotal regulator of intracellular deoxynucleoside triphosphate (dNTP) pools, as this ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

DNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤をスクリーニングするための連続蛍光ベースのエンドヌクレアーゼ共役DNAメチル化アッセイ(英語)

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...

DetectSyn: A Rapid, Unbiased Fluorescent Method to Detect Changes in Synapse Density

DetectSyn:シナプス密度の変化を検出するための迅速で偏りのない蛍光法

Synapses are the site of communication between neurons. Neuronal circuit strength is related to synaptic density, and the breakdown of synapses is ...

Measuring Caspase Activity Using a Fluorometric Assay or Flow Cytometry

蛍光アッセイまたはフローサイトメトリーを使用したカスパーゼ活性の測定

The activation of cysteine proteases, known as caspases, remains an important process in multiple forms of cell death. Caspases are critical initiators ...

TRNA イソペンテニル トランスフェラーゼ活性を検出する体外の試金

TRNA イソペンテニルトランスフェラーゼ活性を検出する体外の試金