Name: orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study pd-l1 expression
Uploaded: 2019-01-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression at JoVE.com

المؤلف يود أن يشكر زاما صفية لمساعدتها بإعداد أقسام الأنسجة.

أقرت الوزارة الاتحادية النمساوية للعلوم والأبحاث والاقتصاد جميع البروتوكولات التجريبية المبينة أدناه واتبع المبادئ التوجيهية الأخلاقية.
ملاحظة: ويصف البروتوكول هنا نموذج أورثوتوبيك زرع خلايا غدية الرئة الماوس إلى المستلمين سينجينيك. قد تكون الخلايا المعزولة م...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>Zappa, C., Mousa, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-small+cell+lung+cancer:+current+treatment+and+future+advances.">Non-small cell lung cancer: current treatment and future advances.</a> Translational Lung Cancer Research. 5 (3), 288-300 (2016).</li><li>Dolly, S. O., Collins, D. C., Sundar, R., Popat, S., Yap, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Development+of+Molecularly+Targeted+Agents+in+Non-Small-Cell+Lung.">Advances in the Development of Molecularly Targeted Agents in Non-Small-Cell Lung.</a> Drugs. 77 (8), 813-827 (2017).</li><li>Stinchcombe, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Therapies+for+Lung+Cancer.">Targeted Therapies for Lung Cancer.</a> Cancer Treatment Research. 170, 165-182 (2016).</li><li>Brody, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+advanced+NSCLC:+Insights+into+risk+stratification+and+treatment+selection+from+a+systematic+literature+review.">PD-L1 expression in advanced NSCLC: Insights into risk stratification and treatment selection from a systematic literature review.</a> Lung Cancer. 112, 200-215 (2017).</li><li>Safari, R., Meuwissen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+use+of+advanced+mouse+models+for+lung+cancer.">Practical use of advanced mouse models for lung cancer.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 93-124 (2015).</li><li>DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mouse+lung+cancer+models+using+adenoviral+or+lentiviral+delivery+of+Cre+recombinase.">Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase.</a> Nature Protocols. 4 (7), 1064-1072 (2009).</li><li>Kwon, M. C., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+lung+cancer.">Mouse models for lung cancer.</a> Molecular Oncology. 7 (2), 165-177 (2013).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+lung+cancer+to+analyze+primary+and+metastatic+NSCLC+growth+in+integrin+alpha1-null+mice.">An orthotopic model of lung cancer to analyze primary and metastatic NSCLC growth in integrin alpha1-null mice.</a> Clinical &amp; Experiment Metastasis. 22 (2), 185-193 (2005).</li><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+orthotopic+transplantation+model+in+nude+mice+that+simulates+the+clinical+features+of+human+lung+cancer.">Development of an orthotopic transplantation model in nude mice that simulates the clinical features of human lung cancer.</a> Cancer Science. 97 (10), 996-1001 (2006).</li><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+of+human+lung+cancer+in+an+orthotopic+transplantation+mouse+model.">Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model.</a> Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).</li><li>Kuo, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+reconstitution+of+human+small-cell+lung+carcinoma+after+intravenous+transplantation+in+SCID+mice.">Orthotopic reconstitution of human small-cell lung carcinoma after intravenous transplantation in SCID mice.</a> Anticancer Research. 12 (5), 1407-1410 (1992).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+bioluminescence+orthotopic+mouse+model+for+advanced+lung+cancer.">A novel bioluminescence orthotopic mouse model for advanced lung cancer.</a> Radiation Research. 176 (4), 486-493 (2011).</li><li>Mase, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrabronchial+orthotopic+propagation+of+human+lung+adenocarcinoma--characterizations+of+tumorigenicity,+invasion+and+metastasis.">Intrabronchial orthotopic propagation of human lung adenocarcinoma--characterizations of tumorigenicity, invasion and metastasis.</a> Lung Cancer. 36 (3), 271-276 (2002).</li><li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+intrapulmonary+model+for+orthotopic+propagation+of+human+lung+cancers+in+athymic+nude+mice.">Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).</li><li>Tsai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MZF1/c-MYC+axis+mediates+lung+adenocarcinoma+progression+caused+by+wild-type+lkb1+loss.">The MZF1/c-MYC axis mediates lung adenocarcinoma progression caused by wild-type lkb1 loss.</a> Oncogene. 34 (13), 1641-1649 (2015).</li><li>Winslow, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lung+adenocarcinoma+progression+by+Nkx2-1.">Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1.</a> Nature. 473 (7345), 101-104 (2011).</li><li>Zou, Y., Fu, H., Ghosh, S., Farquhar, D., Klostergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+hydrophilic+Paclitaxel+copolymer+prodrug+using+locoregional+delivery+in+human+orthotopic+non-small+cell+lung+cancer+xenograft+models.">Antitumor activity of hydrophilic Paclitaxel copolymer prodrug using locoregional delivery in human orthotopic non-small cell lung cancer xenograft models.</a> Clinical Cancer Research. 10 (21), 7382-7391 (2004).</li><li>Buckle, T., van Leeuwen, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+intratracheal+instillation+of+lung+tumour+cells+in+mice+using+single+photon+emission+computed+tomography/computed+tomography+imaging.">Validation of intratracheal instillation of lung tumour cells in mice using single photon emission computed tomography/computed tomography imaging.</a> Lab Animal. 44 (1), 40-45 (2010).</li><li>Berry-Pusey, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semi-automated+vascular+access+system+for+preclinical+models.">A semi-automated vascular access system for preclinical models.</a> Physics in Medicine &amp; Biology. 58 (16), 5351-5362 (2013).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).</li><li>Singer, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-cytometric+method+for+simultaneous+analysis+of+mouse+lung+epithelial,+endothelial,+and+hematopoietic+lineage+cells.">Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), L796-L801 (2016).</li><li>Moll, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Afatinib+restrains+K-RAS-driven+lung+tumorigenesis.">Afatinib restrains K-RAS-driven lung tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 10 (446), (2018).</li><li>Campeau, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+viral+system+for+expression+and+depletion+of+proteins+in+mammalian+cells.">A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells.</a> PLoS One. 4 (8), e6529 (2009).</li><li>Gui, L., Qian, H., Rocco, K. A., Grecu, L., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+intratracheal+delivery+of+airway+epithelial+cells+in+mice+and+pigs.">Efficient intratracheal delivery of airway epithelial cells in mice and pigs.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 308 (2), L221-L228 (2015).</li><li>Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung.">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e1941 (2010).</li><li>Lin, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics/Pharmacodynamics+of+Pulmonary+Delivery+of+Colistin+against+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+Mouse+Lung+Infection+Model.">Pharmacokinetics/Pharmacodynamics of Pulmonary Delivery of Colistin against Pseudomonas aeruginosa in a Mouse Lung Infection Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (3), (2017).</li><li>Wegesser, T. C., Last, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+response+to+coarse+PM:+bioassay+in+mice.">Lung response to coarse PM: bioassay in mice.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 230 (2), 159-166 (2008).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-mediated+intratracheal+(IMIT)+instillation:+a+noninvasive,+lung-specific+delivery+system.">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li></ol>

دراسة الأحداث الرئة الفسيولوجية ومرضية في الرئة وهي أساليب تنبيب إعطاء الغازية وغير الغازية لتقطير الكواشف المختلفة المستخدمة على نطاق واسع26،،من2728،29 ،30،،من3132</su...

سرطان الرئة هو لا تزال حتى الآن أكبر قاتل المتصلة بالسرطان في كل من الرجال والنساء1. وفي الواقع، وفقا "جمعية السرطان الأمريكية"، كل سنة أكثر الناس يموتون بسبب سرطان الرئة من الثدي والبروستاتا، والقولون السرطان معا1. وحتى وقت قريب، أغلبية المرضى الذين يعانون من سرطان الرئة الخلية غير الصغيرة (NSCLC)، وهو النوع الأكثر وفرة من سرطان الرئة، تعامل مع العلاج الكيميائي على أساس البلاتين في السطر الأول، معظمها بالإضافة إلى الأوعية مثبطات2. مجموعة فرعية فقط من المرضى المرافئ النمطان الطفرات في مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR)، في الأورام اللمفاوية المتحولة كيناز (ALK)، أو في ROS1، ويمكن التعامل مع3،المخدرات تستهدف المتاحة4. مع ظهور مثبطات الحاجز المناعي، نشأ أمل جديد لمرضى سرطان الرئة، على الرغم من أن حتى الآن، سوى 20 – 40% مرضى تستجيب للعلاج المناعي5. ومن ثم يلزم البحث كذلك تحسين هذه النتيجة بالضبط الدقيق للعلاج المناعي نقطة تفتيش وتحقق من خيارات العلاج كومبيناتوري.
دراسة سرطان الرئة، مجموعة واسعة من النماذج السريرية المتاحة، بما في ذلك نماذج عفوية الناجمة عن المواد الكيميائية والمواد المسببة للسرطان والماوس المهندسة وراثيا نماذج (جيم) حيث تنشأ الأورام أصلي عقب تفعيل الشرطي المسرطنة و/أو المنظمة من ورم المكثف الجينات6،،من78. هذه النماذج ذات قيمة خاصة للتحقيق في العمليات الأساسية في التنمية ورم في الرئة، ولكن يحتاجون أيضا إلى الفئران واسعة تربية، والتجارب مضيعة للوقت. ولذلك، العديد من دراسات تقييم احتمال مثبطات الاستفادة من نماذج إكسينوجرافت تحت الجلد (المستمدة من المريض) حيث يتم حقن خطوط خلايا سرطان الرئة البشرية تحت الجلد في الفئران العوز9.
في هذه النماذج، لم يتم تمثيل ميكروميليو الأورام تبعاً لذلك؛ ومن ثم، الباحثون أيضا استخدام نماذج زرع أورثوتوبيك، حيث يتم حقن الخلايا السرطانية عن طريق الوريد، إينترابرونتشيالي، أو مباشرة في الرئة حمة10،11،،من1213، 14،15،16،،من1718،،من1920. بعض هذه الطرق صعبة من الناحية الفنية، من الصعب على استنساخ، وتتطلب تدريبا مكثفا للباحثين. 21 هنا يمكننا تكييفه أورثوتوبيك غير الغازية، تحسن أسلوب زرع في الفئران الأشخاص، حيث وضع في غضون 3-5 أسابيع الأورام ويحمل التشابه الكبير للأورام البشرية، للحث على التعبير عن تي-الخلية القامع المبرمجة الموت-يجند 1 (PD-L1) في الخلايا السرطانية. 11 , 12 , 20 استخدام الماوس ورم الخلايا المستمدة من نماذج جيمم والفئران المستفيدة سينجينيك يتيح دراسة سليمة لورم المكروية بما في ذلك الخلايا المناعية. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام الجينات أدوات التحرير مثل كريسبر/Cas9 التكنولوجيا22 في المختبر قبل الزرع الذي يسهل التحقيق في تأثير العوامل الوراثية في الرئة توموريجينيسيس.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:663px;" width="664">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:255px;">mouse lung adenocarcinoma cell line</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">isolated in house</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:255px;">C57Bl/6 mice</td>
			<td rowspan="2" style="width:123px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks)</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:255px;">129S mice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11544446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11573397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin/Streptomycin Solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11548876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11539876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11560626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketasol (100 mg/ml Ketamine)</td>
			<td style="width:123px;">Ogris Pharma</td>
			<td style="width:119px;">8-00173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Xylasol (20 mg/ml Xylazine)</td>
			<td style="width:123px;">Ogris Pharma</td>
			<td style="width:119px;">8-00178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">BD Insyste (22GA 1.00 IN)</td>
			<td style="width:123px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">381223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Blunt forceps</td>
			<td style="width:123px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS8260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Leica CLS150 LED</td>
			<td style="width:123px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">30250004</td>
			<td>Fibre Light Illuminator</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Student Iris Scissors</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DNase I (RNase-Free)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0303S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Collagenase Type I</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td style="width:123px;">Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7</td>
			<td style="width:123px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">25-5982-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7</td>
			<td style="width:123px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">25-4321-82</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study pd-l1 expression

استخدام نماذج الماوس لا غنى عنه لدراسة الفسيولوجيا المرضية للأمراض المختلفة. فيما يتعلق بسرطان الرئة، والعديد من النماذج المتاحة، وراثيا بما في ذلك تصميم النماذج، فضلا عن نماذج الزرع. نماذج الماوس المهندسة وراثيا غير مضيعة للوقت وباهظة التكاليف، بينما بعض نماذج زرع أورثوتوبيك يصعب إعادة إنتاجها. هنا، يوصف بأسلوب توصيل تحسن غير الغازية للرئة ورم الخلايا كنموذج لزرع أورثوتوبيك بديلة. يسمح استخدام الماوس الرئة خلايا غدية والمتلقين الاختلاس سينجينيك دراسة tumorigenesis تحت وجود نظام المناعة نشط بشكل كامل. وعلاوة على ذلك، التلاعبات الجينية لورم الخلايا قبل الزرع يجعل ملامح هذا النموذج نهج توفير الوقت جذابة لدراسة أثر العوامل الوراثية على نمو الورم والتعبير الجيني في خلايا الورم تحت الظروف الفسيولوجية. باستخدام هذا النموذج، نعرض هذه الرئة خلايا غدية المبرمجة صريح زيادة مستويات القامع تي خلية الموت-يجند 1 (PD-L1) عندما نمت في بيئتها الطبيعية بالمقارنة مع زراعة في المختبر.

أننا باستخدام طراز زرع أورثوتوبيك عن طريق إعطاء إيصال خلية الورم لاختبار ما إذا كان ورم المكروية يحفز التعبير PD-L1. ولذلك، نحن عزل خلايا الرئة AC الماوس من طراز KP أصلي (KP الخلايا)، 10 أسابيع عقب التعريفي الورم عن طريق لجنة المساواة العرقية-ريكومبيناسي-وإذ يعرب عن تسليم إتش (Ad....

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression at JoVE.com

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

أورثوتوبيك زرع الخلايا غدية الرئة سينجينيك لدراسة التعبير PD-L1

هنا يصف لنا نموذج أورثوتوبيك سينجينيك مينيملي زرع خلايا غدية الرئة الماوس كنموذج تخفيض وقت وتكلفة لدراسة الخلية غير الصغيرة سرطان الرئة.

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

زرع العظام من خلايا سرطان الرئة الماوس في المتلقين الكسب غير المشروع syngeneic يسمح لدراسة ورمريجنيسيس في وجود نظام المناعة النشطة تماما في ظل الظروف الفسيولوجية. وبطبيعة الحال، تتطور الأورام إلى الفئران عدم الكفاءة المناعية وهذا هو أكثر من ذلك بكثير الفسيولوجية التي إذا قمت بإجراء عملية زرع في الفئران المناعية. يجعل تحرير الجينات للخلايا السرطانية قبل زرع هذا النموذج نهجًا مباشرًا وموفرًا للوقت لدراسة تأثير العوامل الوراثية على نمو الورم وملامح التعبير الجيني.بالمقارنة مع نماذج ورم الرئة autochthonous غير قابل للتكون، هذه الطريقة تتجنب تكاثر واسع النطاق من الفئران، وبالتالي يمثل صقلاً لنماذج الماوس سرطان الرئة السابقة. قبل البدء في الإجراء، استخدم المقص لإزالة نهاية إبرة القسطرة ودفع القسطرة تمامًا فوق نهاية الإبرة. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم ، ضع مرهمًا على عيون فأر مخدر ، مكنّب من العمر من ثمانية إلى 12 أسبوعًا وربط الفواصل العلوية عبر سلسلة خياطة عبر منصة الاحتضان مع عمودي الصدر على الغرز.ضع كابل ألياف بصرية بين الأطراف الأمامية لإلقاء الضوء على الصدر وفتح الفم بعناية باستخدام ملقط مسطحة مطهرة لاستخراج اللسان. ابحث عن انبعاث الضوء الأبيض لتحديد موقع الحنجرة، epiglottis، والغضاريف الارتدائي. بمجرد أن يكون فتح القصبة الهوائية مرئيًا بوضوح ، حرك القسطرة بلطف إلى القصبة الهوائية ، حتى لا يتجاوز التشعب ، لضمان توزيع زوجي لخلايا سرطان الرئة داخل الرئتين.الحرص على أن إدراج القسطرة على نحو سلس جدا. إذا كنت تشعر بأي مقاومة، قم بإزالة القسطرة وفضح القصبة الهوائية مرة أخرى لتجنب إصابة الماوس. قم بإزالة الإبرة بسرعة من القسطرة وتحقق مما إذا كان الضوء الأبيض يمكن ملاحظته ساطعًا من خلال القسطرة.لتأكيد وضع القسطرة بشكل سليم داخل القصبة الهوائية، قم بتوصيل حقنة من الماء بالميليلتر إلى القسطرة. يجب أن تتحرك المياه في الحقنة بسرعة صعودا وهبوطا في الوقت المناسب مع التنفس. قبل تسليم تعليق الخلية، تدفئة الخلايا باليد وتحميل 50 ميكرولترات من الخلايا في القسطرة.بمجرد أن يستنشق التعليق ، قم بإرفاق حقنة فارغة من المليلتر بالقسطرة وصرف 300 ميكرولترات من الهواء إلى القسطرة لضمان التوزيع الكامل للخلايا السرطانية داخل الرئتين. ثم قم بإزالة القسطرة بلطف ووضع الماوس على وسادة الحرارة مع المراقبة حتى إعادة شغل الوظائف بالكامل. بعد نقطة النهاية التجريبية المناسبة، نقع الذبيحة في الإيثانول 70٪ وتأمين الحيوان إلى لوحة تشريح.جعل شق منتصف البطن وعكس بلطف الجلد لفضح عضلات جدار الصدر والأعضاء البطنية. استخدام مقص لثقب الحجاب الحاجز وقطع الأضلاع، وفضح تجويف الصدر. قطع فتحة صغيرة في البطين الأيسر واستخدام إبرة قياس 27 لضخ الرئة ثلاث مرات من خلال البطين الأيمن مع ستة إلى ثمانية ملليلتر من الجليد البارد PVS لكل ضخ.بعد التسريب الأخير، يجب أن تكون الرئتين واضحة تماما من الدم وتظهر بيضاء. بعد الحصاد، واستخدام مقص ل mince أنسجة الرئة إلى قطع صغيرة. نقل شظايا الرئة في أنبوب microcentuge ملليلتر اثنين تحتوي على 1.5 ملليلتر من عازلة هضم الرئة لاحتضان 30 إلى 60 دقيقة في 37 درجة مئوية، مع اهتزاز.في نهاية عملية الهضم، نقل تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرون في أنبوب 50 ملليلتر واستخدام نهاية معقمة 10 ملليلتر المكبس حقنة للضغط على أي شظايا الأنسجة المتبقية من خلال مرشح. شطف المصفاة مع 15 ملليلتر من PVS، تستكمل مع 2٪ FCS. وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.إعادة تعليق بيليه في ملليلتر واحد من كلوريد الأمونيوم تحلل البوتاسيوم العازلة لمدة خمس دقائق حضانة في درجة حرارة الغرفة والطرد المركزي الخلايا مرة أخرى. ثم إعادة تعليق بيليه خلايا الدم البيضاء في ملليلتر واحد من PVS تستكمل مع 2٪ FCS وصمة عار الخلايا لتحليل تدفق الخلايا وفقا للبروتوكول التجريبي. كما هو متوقع، يرتبط بقاء الفئران المتلقية بعدد الخلايا المُنقّتة.والرئتين التي تم حصادها في وقت الوفاة تظهر توزيعاً متكافئاً للعقيدات السرطانية في جميع الفصوص. عند مقارنة أقسام من الرئتين التي تأوي أورامًا تلقائية ، مع الأورام التالية لخلايا ورم الرئة المزروعة بشكل متعازمي ، لا تلاحظ أي اختلافات مورفولوجية. تحليل تدفق الخلايا من التعبير PD-L1 من خلايا الرئة معزولة بعد ثلاثة أسابيع من زرع الخلايا السرطانية التقويمية في الفئران ذات المناعة, كما ثبت للتو, يكشف عن ما يصل التنظيم في PD-L1 تعبير علامة سطح الخلية, بالمقارنة مع الخلايا السرطانية في المختبرية زرع الرئة.بعد زرع العظام، يمكن تطبيق أساليب تحليلية أخرى، بما في ذلك التحليل المناعي الكيميائي، وتحديد الحمض النووي الريبي (MRNA) لمعالجة أسئلة تجريبية إضافية.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Conditional Knockdown of Gene Expression in Cancer Cell Lines to Study the Recruitment of Monocytes/Macrophages to the Tumor Microenvironment

الشرطي ضربة قاضية للتعبير الجيني في خطوط خلايا السرطان لدراسة توظيف حيدات/الضامة إلى ورم المكروية

siRNA and shRNA-mediated knock down (KD) methods of regulating gene expression are invaluable tools for understanding gene and protein function. However, ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

نموذج سرطان البنكرياس سينجينيك ماوس دراسة آثار انهانسر لا رجعة فيه

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

إيمونوفينوتيبينج من أورثوتوبيك هوموجرافت (سينجينيك) من الفيلق الابتدائي موريني البنكرياس الأقنية غدية بالتدفق الخلوي

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

3 22 باستخدام الأجسام المضادة-PD-L1 تركز على خزعة وعينات عنق من مرضى سرطان الرئة من الخلايا غير الصغيرة

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

شبه التلقائي PD-L1 توصيف وتعداد الخلايا السرطانية المتداولة من غير الصغيرة خلية سرطان الرئة المرضى عن طريق الفلورة المناعية

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

الموجات فوق الصوتية غرس العظام البنكرياس الاقنيه اللحمية

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

A Syngeneic العظام العظام سبراغ داولي نموذج الفئران مع بتر للسيطرة على معدل الانبثاث

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Subculture and Cryopreservation of Esophageal Adenocarcinoma Organoids: Pros and Cons for Single Cell Digestion

الزراعة الفرعية والحفظ بالتبريد للسرطان الغدي المريئي العضوي: إيجابيات وسلبيات لهضم الخلية الواحدة

The lack of suitable translational research models reflecting primary disease to explore tumorigenesis and therapeutic strategies is a major obstacle in ...