Name: orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study pd-l1 expression
Uploaded: 2019-01-19T13:00:00
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लेखक ऊतक वर्गों की तैयारी के साथ उसकी मदद के लिए साफिया Zahma शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।

सभी प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के रूप में नीचे उल्लिखित नैतिक दिशा निर्देशों का पालन करें और ऑस्ट्रिया के संघीय विज्ञान, अनुसंधान और अर्थव्यवस्था के मंत्रालय द्वारा अनुमोदित किया गया ।
नोट:...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>Zappa, C., Mousa, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-small+cell+lung+cancer:+current+treatment+and+future+advances.">Non-small cell lung cancer: current treatment and future advances.</a> Translational Lung Cancer Research. 5 (3), 288-300 (2016).</li><li>Dolly, S. O., Collins, D. C., Sundar, R., Popat, S., Yap, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Development+of+Molecularly+Targeted+Agents+in+Non-Small-Cell+Lung.">Advances in the Development of Molecularly Targeted Agents in Non-Small-Cell Lung.</a> Drugs. 77 (8), 813-827 (2017).</li><li>Stinchcombe, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Therapies+for+Lung+Cancer.">Targeted Therapies for Lung Cancer.</a> Cancer Treatment Research. 170, 165-182 (2016).</li><li>Brody, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+expression+in+advanced+NSCLC:+Insights+into+risk+stratification+and+treatment+selection+from+a+systematic+literature+review.">PD-L1 expression in advanced NSCLC: Insights into risk stratification and treatment selection from a systematic literature review.</a> Lung Cancer. 112, 200-215 (2017).</li><li>Safari, R., Meuwissen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+use+of+advanced+mouse+models+for+lung+cancer.">Practical use of advanced mouse models for lung cancer.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 93-124 (2015).</li><li>DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mouse+lung+cancer+models+using+adenoviral+or+lentiviral+delivery+of+Cre+recombinase.">Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase.</a> Nature Protocols. 4 (7), 1064-1072 (2009).</li><li>Kwon, M. C., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+lung+cancer.">Mouse models for lung cancer.</a> Molecular Oncology. 7 (2), 165-177 (2013).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+lung+cancer+to+analyze+primary+and+metastatic+NSCLC+growth+in+integrin+alpha1-null+mice.">An orthotopic model of lung cancer to analyze primary and metastatic NSCLC growth in integrin alpha1-null mice.</a> Clinical &amp; Experiment Metastasis. 22 (2), 185-193 (2005).</li><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+orthotopic+transplantation+model+in+nude+mice+that+simulates+the+clinical+features+of+human+lung+cancer.">Development of an orthotopic transplantation model in nude mice that simulates the clinical features of human lung cancer.</a> Cancer Science. 97 (10), 996-1001 (2006).</li><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+of+human+lung+cancer+in+an+orthotopic+transplantation+mouse+model.">Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model.</a> Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).</li><li>Kuo, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+reconstitution+of+human+small-cell+lung+carcinoma+after+intravenous+transplantation+in+SCID+mice.">Orthotopic reconstitution of human small-cell lung carcinoma after intravenous transplantation in SCID mice.</a> Anticancer Research. 12 (5), 1407-1410 (1992).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+bioluminescence+orthotopic+mouse+model+for+advanced+lung+cancer.">A novel bioluminescence orthotopic mouse model for advanced lung cancer.</a> Radiation Research. 176 (4), 486-493 (2011).</li><li>Mase, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrabronchial+orthotopic+propagation+of+human+lung+adenocarcinoma--characterizations+of+tumorigenicity,+invasion+and+metastasis.">Intrabronchial orthotopic propagation of human lung adenocarcinoma--characterizations of tumorigenicity, invasion and metastasis.</a> Lung Cancer. 36 (3), 271-276 (2002).</li><li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+intrapulmonary+model+for+orthotopic+propagation+of+human+lung+cancers+in+athymic+nude+mice.">Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).</li><li>Tsai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MZF1/c-MYC+axis+mediates+lung+adenocarcinoma+progression+caused+by+wild-type+lkb1+loss.">The MZF1/c-MYC axis mediates lung adenocarcinoma progression caused by wild-type lkb1 loss.</a> Oncogene. 34 (13), 1641-1649 (2015).</li><li>Winslow, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lung+adenocarcinoma+progression+by+Nkx2-1.">Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1.</a> Nature. 473 (7345), 101-104 (2011).</li><li>Zou, Y., Fu, H., Ghosh, S., Farquhar, D., Klostergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+of+hydrophilic+Paclitaxel+copolymer+prodrug+using+locoregional+delivery+in+human+orthotopic+non-small+cell+lung+cancer+xenograft+models.">Antitumor activity of hydrophilic Paclitaxel copolymer prodrug using locoregional delivery in human orthotopic non-small cell lung cancer xenograft models.</a> Clinical Cancer Research. 10 (21), 7382-7391 (2004).</li><li>Buckle, T., van Leeuwen, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+intratracheal+instillation+of+lung+tumour+cells+in+mice+using+single+photon+emission+computed+tomography/computed+tomography+imaging.">Validation of intratracheal instillation of lung tumour cells in mice using single photon emission computed tomography/computed tomography imaging.</a> Lab Animal. 44 (1), 40-45 (2010).</li><li>Berry-Pusey, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semi-automated+vascular+access+system+for+preclinical+models.">A semi-automated vascular access system for preclinical models.</a> Physics in Medicine &amp; Biology. 58 (16), 5351-5362 (2013).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).</li><li>Singer, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-cytometric+method+for+simultaneous+analysis+of+mouse+lung+epithelial,+endothelial,+and+hematopoietic+lineage+cells.">Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), L796-L801 (2016).</li><li>Moll, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Afatinib+restrains+K-RAS-driven+lung+tumorigenesis.">Afatinib restrains K-RAS-driven lung tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 10 (446), (2018).</li><li>Campeau, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+viral+system+for+expression+and+depletion+of+proteins+in+mammalian+cells.">A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells.</a> PLoS One. 4 (8), e6529 (2009).</li><li>Gui, L., Qian, H., Rocco, K. A., Grecu, L., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+intratracheal+delivery+of+airway+epithelial+cells+in+mice+and+pigs.">Efficient intratracheal delivery of airway epithelial cells in mice and pigs.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 308 (2), L221-L228 (2015).</li><li>Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung.">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e1941 (2010).</li><li>Lin, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics/Pharmacodynamics+of+Pulmonary+Delivery+of+Colistin+against+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+Mouse+Lung+Infection+Model.">Pharmacokinetics/Pharmacodynamics of Pulmonary Delivery of Colistin against Pseudomonas aeruginosa in a Mouse Lung Infection Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (3), (2017).</li><li>Wegesser, T. C., Last, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+response+to+coarse+PM:+bioassay+in+mice.">Lung response to coarse PM: bioassay in mice.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 230 (2), 159-166 (2008).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-mediated+intratracheal+(IMIT)+instillation:+a+noninvasive,+lung-specific+delivery+system.">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li></ol>

फेफड़ों में शारीरिक और रोग की घटनाओं का अध्ययन करने के लिए, विभिन्न रिएजेंट के जगाकर के लिए आक्रामक और गैर इनवेसिव intratracheal इंटुबैषेण तरीकों व्यापक रूप से इस्तेमाल कर रहे हैं26,27,<su...

फेफड़ों के कैंसर अब तक का सबसे बड़ा कैंसर दोनों पुरुषों और महिलाओं में1से संबंधित हत्यारा है । दरअसल, अमेरिकन कैंसर सोसायटी के अनुसार, हर साल अधिक लोग स्तन, प्रोस्टेट की तुलना में फेफड़ों के कैंसर से मर जाते हैं, और एक साथ पेट के कैंसर1। हाल ही में जब तक, गैर से पीड़ित रोगियों के बहुमत छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (NSCLC), जो फेफड़ों के कैंसर का सबसे प्रचुर मात्रा में उपप्रकार है, प्लेटिनम के साथ इलाज किया गया एक पहली लाइन की स्थापना में कीमोथेरेपी आधारित, ज्यादातर angiogenesis के अलावा के साथ अवरोधों2. रोगियों का केवल एक सबसेट एपिडर्मल वृद्धि कारक रिसेप्टर में oncogenic उत्परिवर्तनों बंदरगाह (EGFR), anaplastic लिंफोमा कळेनासे में (ALK), या ROS1 में, और उपलब्ध लक्ष्यीकरण दवाओं के साथ इलाज किया जा सकता3,4. प्रतिरक्षा चौकी अवरोधकों के आगमन के साथ, फेफड़ों के कैंसर के रोगियों के लिए नई आशा पैदा हुई है, हालांकि अब तक, केवल 20-रोगियों के 40% प्रतिरक्षा चिकित्सा का जवाब5. इसलिए, आगे अनुसंधान ठीक ट्यूनिंग प्रतिरक्षा चौकी थेरेपी और combinatory उपचार के विकल्प की जांच द्वारा इस परिणाम में सुधार करने के लिए आवश्यक है ।
फेफड़ों के कैंसर का अध्ययन करने के लिए, नैदानिक मॉडल की एक विशाल सरणी सहज रसायनों और कैंसर और आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल (GEMM) द्वारा ट्रिगर मॉडल सहित उपलब्ध हैं, जहां autochthonous ट्यूमर के सशर्त सक्रियण के बाद पैदा oncogenes और/या ट्यूमर शमन करनेवाला जीन6,7,8की निष्क्रियता । ये मॉडल फेफड़ों के ट्यूमर के विकास में मौलिक प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए विशेष मूल्य के हैं, लेकिन वे भी व्यापक चूहों प्रजनन की आवश्यकता होती है, और प्रयोगों समय लेने वाले हैं. इसलिए, कई संभावित अवरोधकों का मूल्यांकन अध्ययन के चमड़े के नीचे (रोगी व्युत्पंन) xenograft मॉडल का लाभ ले जहां मानव फेफड़ों के कैंसर कोशिका लाइनों के चमड़े के नीचे immunodeficient9चूहों में इंजेक्ट कर रहे हैं ।
इन मॉडलों में, ट्यूमर के micromilieu के अनुसार प्रतिनिधित्व नहीं है; इसलिए, शोधकर्ताओं ने भी orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का उपयोग करें, जहां ट्यूमर कोशिकाओं नसों में इंजेक्ट कर रहे हैं, intrabronchially, या सीधे फेफड़ों में पैरेन्काइमा10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19,20. इन तरीकों में से कुछ तकनीकी रूप से, चुनौतीपूर्ण मुश्किल reproduced हो रहे हैं, और शोधकर्ताओं के गहन प्रशिक्षण की आवश्यकता है । 21 यहां हम एक गैर इनवेसिव orthotopic, असुरक्षित चूहों, जहां ट्यूमर 3-5 सप्ताह के भीतर विकसित करने और मानव ट्यूमर के लिए महत्वपूर्ण समानताएं प्रदर्शित करने में intratracheal ट्रांसप्लांटेशन विधि अनुकूलित, टी सेल की अभिव्यक्ति के लिए प्रेरित दमन क्रमादेशित मौत-ligand 1 (पीडी-L1) ट्यूमर कोशिकाओं पर । 11 , 12 , 20 माउस ट्यूमर कोशिकाओं GEMM मॉडल और syngeneic प्राप्तकर्ता चूहों से व्युत्पंन का उपयोग प्रतिरक्षा कोशिकाओं सहित ट्यूमर microenvironment के समुचित अध्ययन की अनुमति देता है । इसके अलावा, CRISPR/Cas9 प्रौद्योगिकी22 की तरह जीन संपादन उपकरण प्रत्यारोपण से पहले इन विट्रो में इस्तेमाल किया जा सकता है जो फेफड़ों tumorigenesis में आनुवंशिक कारकों के प्रभाव की जांच की सुविधा ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:663px;" width="664">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:255px;">mouse lung adenocarcinoma cell line</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">isolated in house</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:255px;">C57Bl/6 mice</td>
			<td rowspan="2" style="width:123px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks)</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:255px;">129S mice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11544446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11573397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin/Streptomycin Solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11548876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11539876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11560626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketasol (100 mg/ml Ketamine)</td>
			<td style="width:123px;">Ogris Pharma</td>
			<td style="width:119px;">8-00173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Xylasol (20 mg/ml Xylazine)</td>
			<td style="width:123px;">Ogris Pharma</td>
			<td style="width:119px;">8-00178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">BD Insyste (22GA 1.00 IN)</td>
			<td style="width:123px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">381223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Blunt forceps</td>
			<td style="width:123px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS8260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Leica CLS150 LED</td>
			<td style="width:123px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">30250004</td>
			<td>Fibre Light Illuminator</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Student Iris Scissors</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DNase I (RNase-Free)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0303S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Collagenase Type I</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td style="width:123px;">Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7</td>
			<td style="width:123px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">25-5982-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7</td>
			<td style="width:123px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">25-4321-82</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic transplantation of syngeneic lung adenocarcinoma cells to study pd-l1 expression

माउस मॉडलों का उपयोग विभिन्न रोगों के pathophysiology के अध्ययन के लिए अपरिहार्य है । फेफड़ों के कैंसर के संबंध में, कई मॉडल आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मॉडल के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रत्यारोपण मॉडल सहित उपलब्ध हैं । हालांकि, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल समय लेने वाली और महंगी हैं, जबकि कुछ orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल को पुन: पेश करने के लिए मुश्किल हैं । यहां, एक वैकल्पिक orthotopic प्रत्यारोपण मॉडल के रूप में फेफड़ों के ट्यूमर कोशिकाओं के एक गैर इनवेसिव intratracheal वितरण पद्धति का वर्णन किया गया है । माउस फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं और syngeneic भ्रष्टाचार प्राप्तकर्ताओं का उपयोग एक पूरी तरह से सक्रिय प्रतिरक्षा प्रणाली की उपस्थिति के तहत tumorigenesis का अध्ययन करने की अनुमति देता है । इसके अलावा, प्रत्यारोपण से पहले ट्यूमर कोशिकाओं के आनुवंशिक जोड़तोड़ इस मॉडल बनाता है एक आकर्षक समय की बचत दृष्टिकोण शारीरिक स्थितियों के तहत ट्यूमर विकास और ट्यूमर सेल जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल पर आनुवंशिक कारकों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए । इस मॉडल का प्रयोग, हम बताते है कि फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं टी सेल दमन क्रमादेशित मौत के स्तर में वृद्धि-ligand 1 (पीडी-L1) जब उनके प्राकृतिक पर्यावरण में हो के रूप में खेती की तुलना में इन विट्रो ।

हम ट्यूमर microenvironment पीडी-L1 अभिव्यक्ति को उत्तेजित करता है कि क्या परीक्षण करने के लिए intratracheal ट्यूमर सेल डिलीवरी के माध्यम से orthotopic प्रत्यारोपण मॉडल का इस्तेमाल किया । इसलिए, हम autochthonous केपी मॉडल (केप...

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Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression (Video) | JoVE 

पीडी-L1 एक्सप्रेशन का अध्ययन करने के लिए Syngeneic लंग ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं का Orthotopic ट्रांसप्लांटेशन

यहाँ हम एक समय के रूप में माउस फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं की एक न्यूनतम इनवेसिव syngeneic orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का वर्णन और लागत को कम करने के लिए गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर का अध्ययन मॉडल.

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

सिंजेनिक भ्रष्टाचार प्राप्तकर्ताओं में माउस फेफड़े एडेनोकार्सिनोमा कोशिकाओं का आर्थोटोपिक प्रत्यारोपण शारीरिक परिस्थितियों में पूरी तरह से सक्रिय प्रतिरक्षा प्रणाली की उपस्थिति में ट्यूमरजीनेसिस के अध्ययन की अनुमति देता है। बेशक, ट्यूमर एक इम्यूनोसेक क्षमता चूहों में विकसित होते हैं और यह बहुत अधिक शारीरिक है कि यदि आप इम्यूनोडिनेस चूहों में प्रत्यारोपण करते हैं। प्रत्यारोपण से पहले ट्यूमर कोशिकाओं के जीन संपादन इस मॉडल ट्यूमर विकास और जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल पर आनुवंशिक कारकों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक प्रत्यक्ष और समय की बचत दृष्टिकोण बनाता है ।अकांक्षित ऑटोचथनस फेफड़ों के ट्यूमर मॉडल की तुलना में, यह विधि चूहों के व्यापक प्रजनन से बचती है, और इसलिए पिछले फेफड़ों के कैंसर माउस मॉडल के शोधन का प्रतिनिधित्व करती है। प्रक्रिया शुरू करने से पहले, एक कैथेटर सुई के अंत को हटाने और सुई के अंत में कैथेटर को पूरी तरह से पुश करने के लिए कैंची का उपयोग करें। पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, एक संवेदनाहारी, तालमेल आठ से 12 सप्ताह पुराने माउस की आंखों पर मरहम लागू करें और सीवन के लिए लंबवत छाती के साथ एक इंटुबेशन मंच भर में एक सीवन स्ट्रिंग पर ऊपरी चीरों हुक ।छाती को रोशन करने के लिए सामने के अंगों के बीच एक फाइबर ऑप्टिक केबल रखें और जीभ निकालने के लिए कीटाणुरहित फ्लैट संदंश का उपयोग करके मुंह को ध्यान से खोलें। गला, एपिग्लोटिस, और आर्यटेनॉइड कार्टिलाज का पता लगाने के लिए सफेद प्रकाश के उत्सर्जन की तलाश करें। एक बार श्वासनली के उद्घाटन स्पष्ट रूप से दिखाई देता है, धीरे से श्वासनली में कैथेटर स्लाइड, अप करने के लिए, लेकिन विभाजन से परे नहीं, फेफड़ों के भीतर फेफड़ों adenocarcinoma कोशिकाओं के एक भी वितरण की गारंटी के लिए ।इस बात का ध्यान रखें कि कैथेटर का सम्मिलन बहुत चिकना हो। यदि आप किसी भी प्रतिरोध महसूस करते हैं, कैथेटर को हटा दें और माउस को घायल करने से बचने के लिए श्वासनली को फिर से बेनकाब करें। कैथेटर से सुई को जल्दी से हटा दें और जांच लें कि कैथेटर के माध्यम से सफेद प्रकाश को चमकते हुए देखा जा सकता है या नहीं।श्वासनली के भीतर कैथेटर के उचित प्लेसमेंट की पुष्टि करने के लिए, कैथेटर को पानी की एक मिलीलीटर सिरिंज संलग्न करें। सिरिंज में पानी सांस लेने के साथ समय में तेजी से ऊपर और नीचे की ओर बढ़ना चाहिए। सेल सस्पेंशन देने से पहले, कोशिकाओं को हाथ से गर्म करें और कैथेटर में कोशिकाओं के 50 माइक्रोलीटर लोड करें।जैसे ही निलंबन की भावना होती है, कैथेटर में एक खाली एक मिलीलीटर सिरिंज संलग्न करें और फेफड़ों के भीतर ट्यूमर कोशिकाओं का पूर्ण वितरण सुनिश्चित करने के लिए कैथेटर में हवा के 300 माइक्रोलीटर वितरित करें। फिर धीरे-धीरे कैथेटर को हटा दें और माउस को पूर्ण अनुष् के होने तक निगरानी के साथ एक हीट पैड पर रखें। उपयुक्त प्रयोगात्मक अंत बिंदु के बाद, शव को 70% इथेनॉल में भिगो दें और जानवर को विच्छेदन बोर्ड में सुरक्षित करें।एक वेंट्रल मिडलाइन चीरा बनाएं और छाती की दीवार की मांसपेशियों और पेट के अंगों को बेनकाब करने के लिए त्वचा को धीरे-धीरे उलटा करें। डायाफ्राम को पंचर करने और पसलियों को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें, छाती गुहा को उजागर करें। बाएं वेंट्रिकल में एक छोटे से उद्घाटन को काटें और 27 गेज सुई का उपयोग करने के लिए दाहिने वेंट्रिकल के माध्यम से तीन बार फेफड़ों को संक्रमित करने के लिए बर्फ ठंडे पीवीएस प्रति जलसेक के छह से आठ मिलीलीटर के साथ ।आखिरी परफ्यूजन के बाद, फेफड़ों को रक्त से पूरी तरह से स्पष्ट होना चाहिए और सफेद दिखाई देना चाहिए। कटाई के बाद, फेफड़ों के ऊतकों को छोटे टुकड़ों में कीमा बनाने के लिए कैंची का उपयोग करें। फेफड़ों के टुकड़ों को दो मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें जिसमें 30 से 60 मिनट के लिए फेफड़ों के पाचन बफर के 1.5 मिलीलीटर होते हैं, जो 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेशन करते हैं।पाचन के अंत में, सेल निलंबन को 70 माइक्रोन सेल छलनी के माध्यम से 50 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें और फिल्टर के माध्यम से किसी भी शेष ऊतकों के टुकड़ों को दबाने के लिए बाँझ 10-मिलीलीटर सिरिंज प्लंजर के अंत का उपयोग करें। पीवीएस के 15 मिलीलीटर के साथ छलनी कुल्ला, 2% FCS के साथ पूरक। और अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा करें।अमोनियम क्लोराइड पोटेशियम लाइसिस बफर के एक मिलीलीटर में गोली को फिर से निलंबित करें कमरे के तापमान पर पांच मिनट इनक्यूबेशन के लिए और कोशिकाओं को फिर से अपकेंद्रित्र करें। फिर पीवीएस के एक मिलीलीटर में सफेद रक्त कोशिका गोली को फिर से निलंबित करें 2% एफसीएस के साथ पूरक और प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के अनुसार प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को दाग दें। जैसा कि अपेक्षित था, प्राप्तकर्ता चूहों का अस्तित्व एनग्रफ्टेड कोशिकाओं की संख्या से सहसंबद्ध है।और मौत के समय काटा फेफड़ों lobes के सभी भर में ट्यूमर पिंड का एक भी वितरण प्रदर्शित करता है । जब फेफड़ों से वर्गों की तुलना में autochthonous ट्यूमर शरण, ट्यूमर के साथ ऑर्थोटोपिक रूप से प्रत्यारोपित फेफड़ों के ट्यूमर कोशिकाओं के बाद, कोई रूपात्मक मतभेद मनाया जाता है । फेफड़ों की कोशिकाओं के पीडी-एल1 अभिव्यक्ति का प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण इम्यूनोसंप्यूटेंट चूहों में ऑर्थोटोपिक ट्यूमर सेल प्रत्यारोपण के तीन सप्ताह बाद अलग हो गया, जैसा कि अभी प्रदर्शित किया गया है, इन-विट्रो सुसंस्कृत फेफड़ों के ट्यूमर कोशिकाओं की तुलना में पीडी-एल1 सेल सतह मार्कर अभिव्यक्ति में अप-विनियमन का पता चलता है।ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के बाद, अन्य विश्लेषणात्मक तरीकों को लागू किया जा सकता है, जिसमें इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण और अतिरिक्त प्रायोगिक प्रश्नों को संबोधित करने के लिए एमआरएनए प्रोफाइलिंग शामिल है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure (Video) | JoVE 

एक 2-कदम खुराक-वृद्धि प्रक्रिया के साथ फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं में इन विट्रो में EGFR-TKI और TKI से मुलाकात के लिए दोहरी प्रतिरोध की स्थापना

Drug resistance is a major challenge in cancer therapy. The generation of resistant sublines in vitro is necessary for discovering novel mechanisms to ...

Conditional Knockdown of Gene Expression in Cancer Cell Lines to Study the Recruitment of Monocytes/Macrophages to the Tumor Microenvironment

Conditional Knockdown of Gene Expression in Cancer Cell Lines to Study the Recruitment of Monocytes/Macrophages to the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

कैंसर कोशिका लाइनों में जीन अभिव्यक्ति की सशर्त पछाड़ना के लिए Monocytes/मैक्रोफेज की भर्ती का अध्ययन करने के लिए ट्यूमर Microenvironment

siRNA and shRNA-mediated knock down (KD) methods of regulating gene expression are invaluable tools for understanding gene and protein function. However, ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation (Video) | JoVE 

एक Syngeneic अग्नाशय के कैंसर माउस मॉडल अपरिवर्तनीय Electroporation के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer (Video) | JoVE 

एक Bioluminescent और फ्लोरोसेंट Orthotopic Syngeneic Murine मॉडल एण्ड्रोजन के आश्रित और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry (Video) | JoVE 

Immunophenotyping के Orthotopic Homograft (Syngeneic) के Murine प्राथमिक KPC अग्नाशय वाहिनीई ग्रंथिकर्कटता द्वारा प्रवाह Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients (Video) | JoVE 

22C3 विरोधी पीडी-L1 एंटीबॉडी का उपयोग गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर के रोगियों से बायोप्सी और Cytology नमूनों पर ध्यान केंद्रित

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions (Video) | JoVE 

Mesenchymal लुगदी ऊतक और सह कैंसर कोशिकाओं के साथ संस्कृति से कोशिका अलगाव स्टेम उनके बातचीत का अध्ययन करने के लिए

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence (Video) | JoVE 

इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर रोगियों से अर्द्ध-स्वचालित पीडी-एल 1 विशेषता और परिसंचरण ट्यूमर कोशिकाओं की गणना

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma (Video) | JoVE 

मैरिन अग्नाशय के डक्टल एडेनोकार्सिनोमा के अल्ट्रासाउंड-गाइडेड ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate (Video) | JoVE 

मेटास्टेसिस दर को नियंत्रित करने के लिए विच्छेदन के साथ एक सिंजेनिक ऑर्थोटोपिक ऑस्टियोसारकोमा स्प्राग डावले चूहा मॉडल

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...