Name: isolation and fluorescence imaging for single-particle reconstruction of chlamydomonas centrioles
Uploaded: 2018-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 38 s
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हम इकोले पॉलीटेक्निक Fédérale de लौसने (EPFL), लौसने, स्विट्जरलैंड, जहां centrioles के सिम छवियों को प्राप्त किया गया था पर पियरे Gönczy और ' इमेजिंग और प्रकाशिकी मंच (BIOP) धंयवाद । निकलाय Klena और दाऊद Gambarotto यूरोपीय अनुसंधान परिषद (ईआरसी) शुरू अनुदान (StG) ७१५२८९ (एक्सेंट) और Maeva Le Guennec, पॉल Guichard, और वर्जीनी Hamel स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (SNSF) PP00P3_157517 द्वारा समर्थित हैं । सुसैन Borgers जिनेवा विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित है ।

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	<li>Bornens, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+centrosome+in+cells+and+organisms.">The centrosome in cells and organisms.</a> Science. 335 (6067), 422-426 (2012).</li><li>Nigg, E. A., Holland, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Once+and+only+once:+mechanisms+of+centriole+duplication+and+their+deregulation+in+disease.">Once and only once: mechanisms of centriole duplication and their deregulation in disease.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (5), 297-312 (2018).</li><li>Nigg, E. A., Raff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrioles,+centrosomes,+and+cilia+in+health+and+disease.">Centrioles, centrosomes, and cilia in health and disease.</a> Cell. 139 (4), 663-678 (2009).</li><li>G&#246;nczy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+molecular+architecture+of+centriole+assembly.">Towards a molecular architecture of centriole assembly.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 13 (7), 425-435 (2012).</li><li>Paintrand, M., Moudjou, M., Delacroix, H., Bornens, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosome+organization+and+centriole+architecture:+their+sensitivity+to+divalent+cations.">Centrosome organization and centriole architecture: their sensitivity to divalent cations.</a> Journal of Structural Biology. 108 (2), 107-128 (1992).</li><li>Winey, M., O'Toole, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centriole+structure.">Centriole structure.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 369 (1650), (2014).</li><li>Dippell, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+basal+bodies+in+paramecium.">The development of basal bodies in paramecium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 61 (2), 461 (1968).</li><li>Allen, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogenesis+of+basal+bodies+and+accessory+structures+of+the+cortex+of+the+ciliated+protozoan+Tetrahymena+pyriformis.">The morphogenesis of basal bodies and accessory structures of the cortex of the ciliated protozoan Tetrahymena pyriformis.</a> The Journal of Cell Biology. 40 (3), 716-733 (1969).</li><li>Li, S., Fernandez, J. -. J., Marshall, W. F., Agard, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+structure+of+basal+body+triplet+revealed+by+electron+cryo-tomography.">Three-dimensional structure of basal body triplet revealed by electron cryo-tomography.</a> The EMBO Journal. 31 (3), 552-562 (2012).</li><li>Guichard, P., Chr&#233;tien, D., Marco, S., Tassin, A. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procentriole+assembly+revealed+by+cryo-electron+tomography.">Procentriole assembly revealed by cryo-electron tomography.</a> The EMBO Journal. 29 (9), 1565-1572 (2010).</li><li>Guichard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+architecture+of+the+centriole+proximal+region+reveals+features+underlying+its+9-fold+radial+symmetry.">Native architecture of the centriole proximal region reveals features underlying its 9-fold radial symmetry.</a> Current Biology. 23 (17), 1620-1628 (2013).</li><li>Hirono, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cartwheel+assembly.">Cartwheel assembly.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 369 (1650), (2014).</li><li>Bornens, M., Paintrand, M., Berges, J., Marty, M. C., Karsenti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+chemical+characterization+of+isolated+centrosomes.">Structural and chemical characterization of isolated centrosomes.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 8 (3), 238-249 (1987).</li><li>Keller, L. C., Romijn, E. P., Zamora, I., Yates, J. R., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+isolated+chlamydomonas+centrioles+reveals+orthologs+of+ciliary-disease+genes.">Proteomic analysis of isolated chlamydomonas centrioles reveals orthologs of ciliary-disease genes.</a> Current Biology. 15 (12), 1090-1098 (2005).</li><li>Kilburn, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Tetrahymena+basal+body+protein+components+identify+basal+body+domain+structure.">New Tetrahymena basal body protein components identify basal body domain structure.</a> The Journal of Cell Biology. 178 (6), 905-912 (2007).</li><li>Bauer, M., Cubizolles, F., Schmidt, A., Nigg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Quantitative+analysis+of+human+centrosome+architecture+by+targeted+proteomics+and+fluorescence+imaging.">A Quantitative analysis of human centrosome architecture by targeted proteomics and fluorescence imaging.</a> The EMBO Journal. 35 (19), 1-15 (2016).</li><li>Hamel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Chlamydomonas+Central+Core+Centriolar+Proteins+Reveals+a+Role+for+Human+WDR90+in+Ciliogenesis.">Identification of Chlamydomonas Central Core Centriolar Proteins Reveals a Role for Human WDR90 in Ciliogenesis.</a> Current Biology. 27 (16), 2486-2498 (2017).</li><li>Cavalier-Smith, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=basal+body+and+flagellar+development+during+the+vegetative+cell+cycle+and+the+sexual+cycle+of+Chlamydomonas+reinhardii.">basal body and flagellar development during the vegetative cell cycle and the sexual cycle of Chlamydomonas reinhardii.</a> Journal of Cell Science. 16 (3), 529 (1974).</li><li>Geimer, S., Melkonian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ultrastructure+of+the+Chlamydomonas+reinhardtii+basal+apparatus:+identification+of+an+early+marker+of+radial+asymmetry+inherent+in+the+basal+body.">The ultrastructure of the Chlamydomonas reinhardtii basal apparatus: identification of an early marker of radial asymmetry inherent in the basal body.</a> Journal of Cell Science. 117, 2663-2674 (2004).</li><li>Nakazawa, Y., Hiraki, M., Kamiya, R., Hirono, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SAS-6+is+a+cartwheel+protein+that+establishes+the+9-fold+symmetry+of+the+centriole.">SAS-6 is a cartwheel protein that establishes the 9-fold symmetry of the centriole.</a> Current Biology. 17 (24), 2169-2174 (2007).</li><li>Hamel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlative+multicolor+3D+SIM+and+STORM+microscopy.">Correlative multicolor 3D SIM and STORM microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 5 (10), 3326 (2014).</li><li>Guichard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+reconstitution+reveals+centriole+cartwheel+assembly+mechanisms.">Cell-free reconstitution reveals centriole cartwheel assembly mechanisms.</a> Nature Communications. 8, 14813 (2017).</li><li>Hiraki, M., Nakazawa, Y., Kamiya, R., Hirono, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bld10p+constitutes+the+cartwheel-spoke+tip+and+stabilizes+the+9-fold+symmetry+of+the+centriole.">Bld10p constitutes the cartwheel-spoke tip and stabilizes the 9-fold symmetry of the centriole.</a> Current Biology. 17 (20), 1778-1783 (2007).</li><li>Sahl, S. J., Hell, S. W., Jakobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+nanoscopy+in+cell+biology.">Fluorescence nanoscopy in cell biology.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 18 (11), 685-701 (2017).</li><li>Hutner, S. H., Provasoli, L., Schatz, A., Haskins, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+Approaches+to+the+Study+of+the+Role+of+Metals+in+the+Metabolism+of+Microorganisms.">Some Approaches to the Study of the Role of Metals in the Metabolism of Microorganisms.</a> Proceedings of the American Philosophical Society. 94 (2), 152-170 (1950).</li><li>Keller, L. C., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+proteomic+analysis+of+chlamydomonas+centrioles.">Isolation and proteomic analysis of chlamydomonas centrioles.</a> Methods in Molecular Biology. 432 (1), 289-300 (2008).</li><li>Borlinghaus, R. T., Kappel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HyVolution-the+smart+path+to+confocal+super-resolution.">HyVolution-the smart path to confocal super-resolution.</a> Nature Methods. 13 (3), (2016).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li><li>de la Rosa-Trev&#237;n, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scipion:+A+software+framework+toward+integration,+reproducibility+and+validation+in+3D+electron+microscopy.">Scipion: A software framework toward integration, reproducibility and validation in 3D electron microscopy.</a> Journal of Structural Biology. 195 (1), 93-99 (2016).</li><li>Gartenmann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+3D-SIM/SMLM+approach+allows+centriole+proteins+to+be+localized+with+a+precision+of+&#8764;4-5+nm.">A combined 3D-SIM/SMLM approach allows centriole proteins to be localized with a precision of &#8764;4-5 nm.</a> Current Biology. 27 (19), 1054-1055 (2017).</li><li>Jaenicke, L., Kuhne, W., Spessert, R., Wahle, U., Waffenschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-wall+lytic+enzymes+(autolysins)+of+Chlamydomonas+reinhardtii+are+(hydroxy)proline-specific+proteases.">Cell-wall lytic enzymes (autolysins) of Chlamydomonas reinhardtii are (hydroxy)proline-specific proteases.</a> European Journal of Biochemistry. 170 (1-2), 485-491 (1987).</li><li>Salas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angular+reconstitution-based+3D+reconstructions+of+nanomolecular+structures+from+superresolution+light-microscopy+images.">Angular reconstitution-based 3D reconstructions of nanomolecular structures from superresolution light-microscopy images.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (35), 9273-9278 (2017).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

जीव विज्ञान में चुनौतियों में से एक एक वास्तु संदर्भ में प्रोटीन की सटीक स्थानीयकरण को समझने के लिए है । centriole एक आदर्श संरचना है इन तरीकों को लागू करने के लिए, के रूप में अपनी वास्तुकला क्रायो-इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी का उपयोग कर अध्ययन किया गया है, अपनी लंबाई के साथ दिलचस्प ultrastructural सुविधाओं का खुलासा । हालांकि, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी में संकल्प सीमा के करीब अपने आयामों के कारण, यह ठीक से पारंपरिक सूक्ष्मदर्शी30का उपयोग कर centriole के एक संरचनात्मक उप-क्षेत्र के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा एक प्रोटीन स्थानीयकृत करने के लिए मुश्किल है ।
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी में संकल्प प्रकाश की विवर्तन है कि देता है, मोटे तौर पर, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी24में २०० एनएम के एक पार्श्व अधिकतम संकल्प द्वारा सीमित है । हालांकि, इस सीमा से किया गया है-ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप में पिछले 20 वर्षों के प्रमुख सफलताओं में से एक द्वारा पारित: सुपर संकल्प तरीकों का आविष्कार । इन तरीकों अलग संकल्प पर विवर्तन सीमा से परे छवि कर सकते हैं: सिम के लिए १२० एनएम, प्रेरित उत्सर्जन कम करने के लिए के बारे में ५० एनएम (STED), और 20-एकल अणु स्थानीयकरण माइक्रोस्कोपी (SMLM)24के लिए 40 एनएम । सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी के इन नए घटनाक्रम के साथ, centriole के संरचनात्मक उप क्षेत्रों प्राप्य हैं । हालांकि, व्यवहार में, यह अभी भी सही मुख्य कारण है कि परिपक्व centrioles कक्ष प्रति केवल 2 प्रतियों में मौजूद है और यादृच्छिक झुकाव है, जो की व्याख्या करता है के लिए एक संरचनात्मक तत्व के लिए एक प्रोटीन के स्थानीयकरण निर्धारित करना मुश्किल है स्थानीयकरण वाटतो. इस कारण से, एक प्रोटोकॉल की स्थापना की है कि सुपर संकल्प द्वारा छवि के लिए शोधकर्ताओं centrioles की एक बड़ी संख्या की अनुमति देता है, के लिए गैर देखने का मौका अस्पष्ट झुकाव बढ़ रही थी । महत्वपूर्ण बात, इस विधि के रूप में पृथक centrioles के उपयोग पर निर्भर करता है, हम एक विधि प्रदान कर रहे है बरकरार C. reinhardtii centrioles कि परिपक्व centrioles और procentrioles शामिल शुद्ध ।
अंत में, centriole झुकाव है कि इस प्रोटोकॉल के साथ imaged किया जा सकता की सीमा के कारण, एकल कण विश्लेषण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सॉफ्टवेयर का उपयोग कर लागू किया जा सकता है । यह एक विशेष अभिविंयास में centrioles की औसत वर्गों की पीढ़ी में परिणाम है । महत्वपूर्ण बात, इन परिणामस्वरूप 2-डी छवियों तो centriole साथ एक विशिष्ट प्रोटीन के स्थानीयकरण का आकलन किया जा सकता है । वास्तव में, इस विधि दोहरे रंग सुपर संकल्प छवियों को लागू किया जा सकता है, और एक रंग के लिए centriole कंकाल प्रकट किया जा सकता है (जैसे, tubulin), जबकि अंय रंग एक विशिष्ट centriolar प्रोटीन के लिए जिंमेदार ठहराया जा सकता है । एक रंग या दो रंगों के साथ प्राप्त औसत घटाकर, यह centriole (समीपस्थ, मध्य, या बाहर) के साथ एक प्रोटीन रजिस्टर करने के लिए आसान हो जाता है । ध्यान दें कि दोनों चैनलों को किसी भी भ्रामक व्याख्या को रोकने के लिए सही ढंग से संरेखित होना चाहिए । इसके अलावा, शीर्ष विचारों का औसत समझने में मदद मिलेगी अगर एक प्रोटीन centriolar लुमेन के अंदर स्थानीयकरण, microtubule दीवार के साथ, या centriole के बाहर ।
इस विधि के लिए विशिष्ट प्रोटीन है कि अंयथा विषम लेबलिंग के कारण स्थानीयकरण मुश्किल हो सकता है की स्थानीयकरण का पता लगाने के लिए लाभ है । ध्यान दें कि अंय तरीकों centrioles के भीतर प्रोटीन नक्शा करने के लिए correlative 3 में वर्णित किया गया है डी सिम/SMLM के साथ, उदाहरण के लिए, एक के आसपास एक टोरस्र्स बनाने मार्कर के अंडाकार प्रोफ़ाइल का निर्धारण करके centrioles के विशिष्ट झुकाव का आकलन सिम इमेजिंग द्वारा centriole । इस पैरामीटर का प्रयोग, यह प्रोटीन की एक परिशुद्धता के साथ करने के लिए संभव है 4 – 5 एनएम30. ध्यान दें भी कि विधि यहां वर्णित बरकरार procentrioles, एक संकेत है कि centriole वास्तुकला सबसे अधिक संभावना काफी हद तक संरक्षित है के साथ पृथक centrioles का उपयोग करता है । हालांकि, हम बाहर नहीं कर सकते कि कुछ वास्तु सुविधाओं शुद्धि के दौरान परेशान कर रहे हैं, जैसे centriole व्यास divalent cations की एकाग्रता के साथ बदलती के रूप में मानव centrosome5के अलगाव के साथ परिवर्धित ।
यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण चरणों में से एक अलग झुकाव में पर्याप्त रूप से केंद्रित पृथक centrioles प्राप्त करने के लिए Fluo-स्पा के लिए उत्तरदाई है । ऐसा करने के लिए, सबसे पहले शुद्धता और centriole आइसोलेशन प्रक्रिया की दक्षता सुनिश्चित करें । अलग centrioles की एक कम एकाग्रता उचित इमेजिंग और आगे छवि प्रसंस्करण को रोकने जाएगा । इस प्रयोजन के लिए, हम एक विधि को देखने के क्षेत्र के प्रति centrioles की संख्या को समृद्ध प्रदान कर रहे हैं । उपयोग किए गए अंश में centrioles की संख्या के आधार पर, २५० µ l की अधिकतम मात्रा के साथ, ध्यानकर्ता में लोड की गई वॉल्यूम समायोजित की जानी चाहिए.
महत्वपूर्ण बात, इस विधि एक सेल दीवार शूंय से cw15-C. reinhardtii कोशिकाओं के लिए विकसित किया गया है । इस तनाव में, कोशिका दीवार की कमजोरी कोशिकाओं की एक उचित lysis के लिए अनुमति देता है और, इस प्रकार, अपनी सामग्री की मुक्ति । इस प्रोटोकॉल जंगली प्रकार सी. reinhardtii कोशिकाओं के लिए कुशल नहीं है, के रूप में सेल दीवार एक उचित lysis रोकता है । ऐसे sonication के रूप में वैकल्पिक रणनीतियों या autolysin, एक एंजाइम है कि सेल की दीवार31नीचा कर सकते है के साथ कोशिकाओं की एक पूर्व-मशीन, जगह में डाल करने के लिए सेल की दीवार को बदलने के लिए यहां प्रस्तुत अलगाव प्रोटोकॉल लागू करने से पहले होगा ।
इस सेट अप सूक्ष्मदर्शी के विभिंन प्रकारों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है, पारंपरिक फोकल सूक्ष्मदर्शी से उच्च सुपर संकल्प सूक्ष्मदर्शी समर्पित प्रवाह को लेकर । ध्यान दें कि जब SMLM कर रही है, एक विशेष बफर उचित इमेजिंग के लिए आवश्यक है और, इस प्रकार, एक चैंबर coverslip के शीर्ष पर बफर के साथ एक 12 मिमी coverslip के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए । बाद इमेजिंग औंधा सूक्ष्मदर्शी के साथ प्रदर्शन किया जाएगा । यदि माइक्रोस्कोप सेट अप एक 12 मिमी coverslip की अनुमति नहीं है, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक 30 मिलीलीटर गोल नीचे ट्यूब और एक संशोधित अनुकूलक और ध्यानी का उपयोग कर coverslips 18 मिमी करने के लिए लागू किया जा सकता है । यह भी ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि SMLM में अंतिम पुनर्निर्माण की गुणवत्ता के दाग और प्राथमिक एंटीबॉडी इस्तेमाल की गुणवत्ता पर निर्भर करेगा, साथ ही साथ निर्धारण की विधि है ।
संक्षेप में, हम एक तरीका है कि कई Fluo-स्पा कि विभिंन झुकाव में centrioles के औसत उत्पंन करेगा द्वारा पीछा किया centrioles छवि को लागू कर रहे हैं, इस प्रकार परिशुद्धता के साथ centriolar प्रोटीन स्थानीयकृत मदद प्रदान कर रहे हैं । महत्वपूर्ण रूप से, इस विधि और अधिक आम तौर पर अंय प्रजातियों से अलग centrioles, अंय organelles के लिए, या बड़े macromolecular विधानसभाओं के लिए लागू किया जा सकता है । अंत में, नमूना तैयारी दृष्टिकोण यहां प्रस्तुत है, एकल-फ्लोरोसेंट SMLM डेटा३२के कण विश्लेषण के लिए हाल ही में एल्गोरिथ्म विकास के साथ संयुक्त, बड़े macromolecular के आणविक नक्शानवीसी में आगे सुधार खोल सकता है विधानसभाओं.

centriole एक evolutionarily संरक्षित organelle है कि पशु कोशिकाओं में centrosome के मूल में निहित है और एक बेसल शरीर के रूप में कार्य कर सकते है (इसके बाद centrioles के रूप में संदर्भित) के लिए कई cilia1,2में कशाभिका या eukaryotes खाके । जैसे, centrioles बुनियादी कोशिका जैविक धुरी विधानसभा से सेल सिग्नलिंग को लेकर प्रक्रियाओं के लिए महत्वपूर्ण हैं । इसलिए, centriole विधानसभा या समारोह में दोष ciliopathies और3कैंसर सहित कई मानव विकृतियों के साथ संबद्ध किया गया है ।
Centrioles नौ गुना कर रहे हैं, सममित, microtubule triplet आधारित बेलनाकार संरचनाओं कि कर रहे हैं, आमतौर पर, ~ ४५० एनएम लंबी और ~ २५० एनएम वाइड4,5,6,7। विभिंन प्रजातियों से centrioles के पारंपरिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और क्रायो-इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी से पता चला है कि centrioles तीन अलग क्षेत्रों के साथ अपनी लंबी धुरी के साथ ध्रुवीकरण कर रहे हैं: एक समीपस्थ क्षेत्र, एक केंद्रीय कोर, और एक बाहर का क्षेत्र5 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. महत्वपूर्ण बात, इन क्षेत्रों में से प्रत्येक विशिष्ट संरचनात्मक सुविधाओं को प्रदर्शित करता है । सबसे पहले, १०० एनएम के लुमेन लंबे समीपस्थ क्षेत्र सिरा तत्व12के माध्यम से microtubule triplet से जुड़े गाड़ी का पहिया संरचना शामिल हैं । दूसरा, 300-400 एनएम लंबी मध्य क्षेत्र microtubules के भीतरी चेहरे के साथ लुमेन और संरचनात्मक सुविधाओं में रेशेदार घनत्व शामिल हैं: वाई के आकार का लिंकर, सी-tubule पूंछ, और एक-tubule डिटेल9. अंत में, 50-100 एनएम बाहर क्षेत्र प्रदर्शन उप बाहर और बाहर उपांग कि centriole5,13के बाहर का हिस्सा चारों ओर ।
पिछले दो दशकों centriolar प्रोटीन की एक बढ़ती हुई संख्या की खोज के द्वारा चिह्नित किया गया है, के बारे में १०० विशिष्ट प्रोटीन का एक मौजूदा आकलन करने के लिए अग्रणी centriole14,15,16का हिस्सा जा रहा है, 17. इन अग्रिमों के बावजूद, centriole के भीतर इन प्रोटीन का सटीक स्थानीयकरण, विशेष रूप से संरचनात्मक उप-क्षेत्रों के भीतर मायावी रहता है । महत्वपूर्ण बात, centriole के संरचनात्मक क्षेत्रों के लिए एक सटीक स्थानीयकरण निर्दिष्ट उनके समारोह की एक बेहतर समझ के लिए महत्वपूर्ण है । इस संबंध में, सी reinhardtii centrioles पहले सिलेंडर9,18,19है, जो फिर अनुमति के साथ विभिंन संरचनात्मक सुविधाओं delimitating द्वारा दोनों पहलुओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है शोधकर्ताओं ने एक उप संरचनात्मक क्षेत्र के लिए फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग प्रोटीन का एक सबसेट के स्थानीयकरण सहसंबंधी बनाना । यह शामिल है, उदाहरण के लिए, प्रोटीन Bld12p और Bld10p, जो समीपस्थ क्षेत्र में स्थानीयकरण, और गाड़ी का पहिया संरचना में विशेष रूप से20,21,22,23. उपसंरचना स्थानीयकृत प्रोटीन की सूची भी POB15 और POC16, दो उपंयास प्रोटीन मास स्पेक्ट्रोमेट्री कि सी reinhardtii centrioles17के भीतरी केंद्रीय कोर क्षेत्र को सजाने द्वारा की पहचान शामिल है ।
यह कागज बाद में सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी और एकल कण औसत के लिए अलग और छवि C. reinhardtii centrioles के लिए विकसित विधि का एक पूरा विवरण प्रदान करता है । इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए जरूरी है कि उन तकनीकी सीमाओं को चित्रित जाए, जिन्हें दूर करने की जरूरत है । सबसे पहले, centriole शुद्धि समग्र वास्तुकला को प्रभावित कर सकते हैं, गाड़ी का पहिया संरचना के साथ अक्सर9अलगाव के विभिंन चरणों के दौरान खो दिया जा रहा है । दूसरे, centriole के आयाम ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी में विवर्तन सीमा के बहुत करीब हैं । दरअसल, पार्श्व संकल्प है कि फोकल माइक्रोस्कोपी में प्राप्त किया जा सकता है के आसपास २०० एनएम24, centriole के व्यास के समान है, और जेडमें संकल्प-अक्ष के बारे में है 2-3x कम, एक अनिसोट्रोपिक मात्रा में अग्रणी । तीसरे, एंटीबॉडी लेबलिंग और centriole अभिविंयास के विविधता एक विशिष्ट centriolar उप क्षेत्र में एक प्रोटीन स्थानीयकरण की जरूरत व्याख्या सीमा सकता है । अंत में, centrioles सेल प्रति केवल दो प्रतियां में मौजूद हैं, यह मुश्किल छवियों की एक बड़ी संख्या में प्राप्त करने के लिए और एक अस्पष्ट centriole उंमुखीकरण खोजने के लिए बना । इन तकनीकी मुद्दों को दरकिनार, हम एक तरीका है कि अलग centrioles कि विभिंन झुकाव अपनाने की बड़ी संख्या पर सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी लागू करने पर निर्भर करता है विकसित की है । हम पहले सी reinhardtii centrioles कि संरचनात्मक रूप से बरकरार centrioles और procentrioles युक्त गाड़ी का पहिया की शुद्धि को सक्षम बनाता है शुद्ध करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे । फिर, हम एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए coverslips पर centrioles पारंपरिक या सुपर संकल्प फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा इमेजिंग के लिए ध्यान केंद्रित करेंगे । यह महत्वपूर्ण कदम कई झुकाव में छवि centrioles की संख्या बढ़ाने के लिए अनुमति देता है । अंत में, हम एक प्रक्रिया का वर्णन करने के लिए एकल कण फ्लोरोसेंट सूक्ष्मदर्शी कि विभिंन झुकाव में centrioles का पता लगाने की सुविधा पर अधिग्रहीत आंकड़ों पर औसत प्रदर्शन करेंगे । कुल मिलाकर, इस विधि विभिंन प्रजातियों या अंय बड़े macromolecular विधानसभाओं से छवि centrioles के लिए लागू किया जा सकता है ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:964px;" width="962">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Mouse monoclonal anti-apha tubulin (clone DM1A)</td>
			<td style="width:155px;">Abcam</td>
			<td style="width:171px;">ab7291&#160;</td>
			<td style="width:313px;">dilution 1:300</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNaseI</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">12 mm coverslips</td>
			<td>Roth</td>
			<td>YX03.1</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">18 mm coverslips</td>
			<td>Roth</td>
			<td>LH23.1</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">K2HPO4</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>60355</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">KH2PO4</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>60230</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tris base</td>
			<td>Biosolve Chimie SARL</td>
			<td>0020092391BS</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">acetic acid</td>
			<td>Carlo Erba Reagents</td>
			<td>524520</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NH4Cl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-4514</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C-7902</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63140-500G-F</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">steritop filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGPT05RE</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7903-1KG</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HEPES</td>
			<td>AppliChem PanReac</td>
			<td>A3724,0250</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PIPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6757-500G</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgCl2</td>
			<td>ACROS ORGANICS</td>
			<td>197530010</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NP-40</td>
			<td>AppliChem PanReac</td>
			<td>A1694,0250</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Round-bottom (Kimble) tubes 15 mL</td>
			<td>Fisherscientific</td>
			<td>09-500-34</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Round-bottom (Kimble) tubes 35 mL</td>
			<td>Fisherscientific</td>
			<td>09-500-37</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cover glass staining rack</td>
			<td>Thomas scientific</td>
			<td>8542E40</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">crystal polystyrene transmission lab box</td>
			<td>FISHERS</td>
			<td>11712944</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20864.32</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton X100</td>
			<td>Roth</td>
			<td>3051.3</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">goat anti-mouse coupled to Alexa 488&#160;</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td style="width:313px;">dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">goat anti-rabbit coupled to Alexa 568</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A11036</td>
			<td style="width:313px;">dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">mounting medium</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab188804</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tube, thinwall polypropylene</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>326823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Poly-D-Lysine 1 mg/mL</td>
			<td>SIGMA&#160;</td>
			<td>A-003-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse monoclonal anti-Polyglutamylation modification mAb (GT335)</td>
			<td>Adipogen</td>
			<td>AG-20B-0020</td>
			<td>dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">glycerol mounting medium with DAPI and DABCO</td>
			<td style="width:155px;">Abcam</td>
			<td style="width:171px;">ab188804</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">50 mL conical tubes</td>
			<td style="width:155px;">Falcon</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Eppendorf 5810R centrifuge</td>
			<td style="width:155px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:171px;">5811000622</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Beckman JS-13.1 swinging bucket rotor</td>
			<td style="width:155px;">Beckman Coulter</td>
			<td>346963</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Beckman SW 32Ti rotor</td>
			<td style="width:155px;">Beckman Coulter</td>
			<td>369694</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">parafilm</td>
			<td style="width:155px;">Bemis&#160;</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Leica TCS SP8 with Hyvolution mode</td>
			<td style="width:155px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">OSRAM L18W/954 LUMILUX&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Luxe Daylight/ OSRAM</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Whatman filter paper</td>
			<td style="width:155px;">Sigma&#160;</td>
			<td>WHA1001325</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">CrSAS-6/Bld12 antibody</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:313px;">dilution 1:300 (Hamel el al, 2014)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">Scipion</td>
			<td style="width:155px;">http://scipion.i2pc.es/</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:325px;">EM CCD camera (Andor iXON DU897)</td>
			<td style="width:155px;">Andor</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and fluorescence imaging for single-particle reconstruction of chlamydomonas centrioles

Centrioles बड़े macromolecular विधानसभाओं जैसे कोशिका विभाजन, सेल गतिशीलता, या सेल संकेतन के रूप में मौलिक कोशिका जैविक प्रक्रियाओं के समुचित निष्पादन के लिए महत्वपूर्ण हैं । हरी शैवाल Chlamydomonas reinhardtii centriole वास्तुकला, समारोह के अध्ययन में एक व्यावहारिक मॉडल साबित हो गया है, और प्रोटीन संरचना । centriolar वास्तुकला को समझने की ओर महान प्रगति के बावजूद, मौजूदा चुनौतियों में से एक के लिए centriole के संरचनात्मक क्षेत्रों के भीतर centriolar घटकों के सटीक स्थानीयकरण का निर्धारण करने में बेहतर अपनी भूमिका को समझने के लिए है centriole उत्पत्ति । एक प्रमुख सीमा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी, जो विवर्तन सीमा के करीब आयामों के साथ इस organelle में प्रोटीन स्थानीयकरण की व्याख्या पेचीदा के संकल्प में निहित है । इस सवाल से निपटने के लिए, हम एक विधि प्रदान कर रहे है के लिए एक शुद्ध और छवि reinhardtii centrioles की एक बड़ी संख्या में अलग झुकाव सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर के साथ । इस तकनीक की अनुमति देता है और फ्लोरोसेंट एकल कण औसत के माध्यम से डेटा के प्रसंस्करण (Fluo-SPA) centrioles की बड़ी संख्या के कारण अधिग्रहण कर लिया । Fluo-स्पा अलग झुकाव में दाग सी reinhardtii centrioles के औसत उत्पंन करता है, इस प्रकार centriolar उप क्षेत्रों में विशिष्ट प्रोटीन के स्थानीयकरण की सुविधा । महत्वपूर्ण बात यह विधि अन्य प्रजातियों या अन्य बड़े macromolecular सभाओं से इमेज centrioles पर लागू की जा सकती है ।

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Isolation and Fluorescence Imaging for Single-particle Reconstruction of Chlamydomonas Centrioles

अलगाव और Chlamydomonas Centrioles के एकल कण पुनर्निर्माण के लिए प्रतिदीप्ति इमेजिंग

हम एक रणनीति को शुद्ध और अलग झुकाव सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी और एकल कण औसत के लिए उत्तरदाई में centrioles की एक बड़ी संख्या में छवि विकसित की है ।

Centrioles are large macromolecular assemblies important for the proper execution of fundamental cell biological processes such as cell division, cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Fluorescence Imaging for Single-particle Reconstruction of Chlamydomonas Centrioles

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

और संभोग के Tetrad पृथक्करण Chlamydomonas reinhardtii जेनेटिक विश्लेषण के लिए

The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii (Chlamydomonas) has become a popular organism for research in diverse areas of cell biology and ...

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