Name: an in vivo mouse model to measure na&#239;ve cd4 t cell activation, proliferation and th1 differentiation induced by bone marrow-derived dendritic cells
Uploaded: 2018-08-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÂ¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells at JoVE

Agradecemos o Dr. Simon Bartlett para edição inglesa. Este estudo foi suportado por concessões do Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) (PI14/00526; PI17/01395; CP11/00145; CPII16/00022), o programa de Miguel Servet e Fundación Ramón Areces; com o co-financiamento do Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER). A CNIC é suportado pelo Ministério da economia, da indústria e competitividade (MEIC) e Fundação Pro CNIC e é um Severo Ochoa centro de excelência (SEV-2015-0505). RTF é fundada pela Fundación Ramón Areces e CNIC, VZG por ISCIII, BHF pelo Instituto de Investigación Sanitaria Hospital 12 de Octubre (imas12) e JMG-G pelo ISCIII Miguel Servet programa e imas12.

Procedimentos experimentais foram aprovados pela Fundación Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC) e da Comunidad Autónoma de Madrid, em conformidade com diretrizes de espanhol e europeus. Os ratos foram criados em condições (SPF) livre de patógeno específico e foram sacrificados por inalação de dióxido de carbono (CO2).
1. isolamento de células de medula óssea de rato de tíbias e fêmures
Nota: A cepa de rato C57BL...

<ol>
	<li>Zhu, J., Yamane, H., Paul, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+effector+CD4+T+cell+populations+(*).">Differentiation of effector CD4 T cell populations (*).</a> Annual Review of Immunology. 28, 445-489 (2010).</li><li>Bustos-Moran, E., Blas-Rus, N., Martin-Cofreces, N. B., Sanchez-Madrid, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orchestrating+Lymphocyte+Polarity+in+Cognate+Immune+Cell-Cell+Interactions.">Orchestrating Lymphocyte Polarity in Cognate Immune Cell-Cell Interactions.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 327, 195-261 (2016).</li><li>Gonzalez-Granado, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+envelope+lamin-A+couples+actin+dynamics+with+immunological+synapse+architecture+and+T+cell+activation.">Nuclear envelope lamin-A couples actin dynamics with immunological synapse architecture and T cell activation.</a> Science Signaling. 7 (322), ra37 (2014).</li><li>Rocha-Perugini, V., Gonzalez-Granado, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+envelope+lamin-A+as+a+coordinator+of+T+cell+activation.">Nuclear envelope lamin-A as a coordinator of T cell activation.</a> Nucleus. 5 (5), 396-401 (2014).</li><li>Rocha-Perugini, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD9+Regulates+Major+Histocompatibility+Complex+Class+II+Trafficking+in+Monocyte-Derived+Dendritic+Cells.">CD9 Regulates Major Histocompatibility Complex Class II Trafficking in Monocyte-Derived Dendritic Cells.</a> Molecular and Cellular Biology. 37 (15), (2017).</li><li>Kaech, S. M., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+and+memory+T-cell+differentiation:+implications+for+vaccine+development.">Effector and memory T-cell differentiation: implications for vaccine development.</a> Nature Reviews Immunology. 2 (4), 251-262 (2002).</li><li>Iborra, S., Gonzalez-Granado, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Differentiation+of+Naive+CD4(+)+T+Cells:+A+Tool+for+Understanding+the+Development+of+Atherosclerosis.">In Vitro Differentiation of Naive CD4(+) T Cells: A Tool for Understanding the Development of Atherosclerosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1339, 177-189 (2015).</li><li>Toribio-Fernandez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamin+A/C+augments+Th1+differentiation+and+response+against+vaccinia+virus+and+Leishmania+major.">Lamin A/C augments Th1 differentiation and response against vaccinia virus and Leishmania major.</a> Cell Death &amp; Disease. 9 (1), 9 (2018).</li><li>Lee, T., Shevchenko, I., Sprouse, M. L., Bettini, M., Bettini, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retroviral+Transduction+of+Bone+Marrow+Progenitor+Cells+to+Generate+T-cell+Receptor+Retrogenic+Mice.">Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), (2016).</li><li>Cruz-Adalia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conventional+CD4(+)+T+cells+present+bacterial+antigens+to+induce+cytotoxic+and+memory+CD8(+)+T+cell+responses.">Conventional CD4(+) T cells present bacterial antigens to induce cytotoxic and memory CD8(+) T cell responses.</a> Nature Communications. 8 (1), 1591 (2017).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+fluorescent+target+arrays+for+assessment+of+T+cell+responses+in+vivo.">The use of fluorescent target arrays for assessment of T cell responses in vivo.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51627 (2014).</li><li>Cruz-Adalia, A., Ramirez-Santiago, G., Torres-Torresano, M., Garcia-Ferreras, R., Veiga Chacon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+Cells+Capture+Bacteria+by+Transinfection+from+Dendritic+Cells.">T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (107), e52976 (2016).</li><li>Cossarizza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+flow+cytometry+and+cell+sorting+in+immunological+studies.">Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies.</a> European Journal of Immunology. 47 (10), 1584-1797 (2017).</li><li>Quah, B. J., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+methods+for+measuring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+using+CFSE-like+fluorescent+dyes.">New and improved methods for measuring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo using CFSE-like fluorescent dyes.</a> Journal of Immunological Methods. 379 (1-2), 1-14 (2012).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animals (NY). 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Warth, S. C., Heissmeyer, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+transduction+of+naive+CD4+T+cells+to+study+Treg+differentiation.">Adenoviral transduction of naive CD4 T cells to study Treg differentiation.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).</li><li>Liou, H. L., Myers, J. T., Barkauskas, D. S., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+the+mouse+popliteal+lymph+node.">Intravital imaging of the mouse popliteal lymph node.</a> Journal of Visualized Experiments. (60), (2012).</li></ol>

Este protocolo permite a caracterização da capacidade de DCs BM-derivado de modular a ativação, proliferação e diferenciação das células T CD4 de ingênuo. Além disso, ele pode também ser usado para avaliar a suscetibilidade de células T CD4 a modulação por DCs BM-derivado. Com este protocolo, mudanças nestes eventos podem ser medidos em vivo.
Dependendo da hipótese sob investigação, várias combinações de células T e DCs podem ser usadas. Por exemplo, um pode ana...

Células T CD4 e apresentadoras de antígenos (APCs) de células como DCs são necessários mediadores da imunidade a patógenos microbianos1,2. Nos órgãos linfoides secundários, as células T CD4 são ativadas mediante reconhecimento de antígenos específicos apresentados por APCs3,4,5. Células CD4 T ativadas proliferaram e diferenciarem em células de Th effector específicos distintos que são necessárias para o desenvolvimento de uma correta resposta imune adaptativa6,7. Controle desses processos é fundamental para produzir uma defesa adequada adaptável que mata o patógeno sem produzir dano de tecido prejudicial8. Células th são definidas de acordo com a expressão ou a produção de moléculas de superfície, fatores de transcrição e citocinas efetoras e executam funções essenciais e precisas em resposta a agentes patogénicos1. Células do subconjunto de células Th1 expressam o fator de transcrição T-aposta e a citocinas interferon γ (relato) e participarem na defesa do hospedeiro contra patógenos intracelulares1. Quantificação da ativação de células T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de células Th1 é um meio útil de avaliar a T células dramatização em uma resposta imune.
Este protocolo permite que vivo em análise da capacidade de in vitro -gerado DCs BM-derivado de modular o ativação, proliferação e diferenciação de Th1 de células T CD4 de ingênuo. O protocolo também serve para avaliar a capacidade das células T CD4 de ingênuo para ser ativado, induzidas a proliferar e Th1 diferenciadas (Figura 1). Este protocolo versátil contorna a incapacidade especificamente manipular ou selecione população celular estudados em puramente na vivo protocolos. Os efeitos de diversas moléculas e tratamentos em controladores de domínio podem ser estudados usando BM de camundongos geneticamente modificados5 ou tratar ou manipular geneticamente isolados de células BM9. Da mesma forma, respostas de células T podem ser exploradas através da obtenção de células T para transferência adotiva de diferentes fontes ou após várias manipulações3,8,10.
As principais vantagens do presente protocolo são dupla. Ativação de célula t, proliferação e diferenciação de células Th1 são analisados com uma abordagem de citometria de fluxo; e isto é combinado com estudos em vivo , evitando, assim, alterações que podem ocorrer em vitro , incluindo tipos de células e outros fatores encontrados somente em órgãos intactos11.
O uso de corantes vitais é uma técnica amplamente utilizada para controlar a proliferação celular, evitando o uso da radioactividade. A medida da proliferação com estes reagentes baseia-se na diluição do corante após a divisão celular. Além disso, esses corantes podem ser detectados em vários comprimentos de onda e são facilmente analisadas por citometria de fluxo em combinação com vários anticorpos fluorescentes ou marcadores. Destacamos a utilidade do presente protocolo, mostrando como a ativação de célula T, proliferação e diferenciação de células Th1 podem ser analisados por citometria de fluxo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20,824,365</td>
			<td>5 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td>
			<td>11000-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td>
			<td>10020-00</td>
			<td>Box of 100 blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>DE17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>21875-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25-gauge needle</td>
			<td>BD Microlance 3</td>
			<td>300600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe</td>
			<td>Novico</td>
			<td>N15663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml conical tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m nylon web filter</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood lysis buffer</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>R7757</td>
			<td>100 Ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>ED2SS-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A7906</td>
			<td>100 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>302643-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture-plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Cambrex</td>
			<td>BE17-737E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8-05740-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>BE13-115E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>LONZA</td>
			<td>BE17-605E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant murine Granulocyte Macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)</td>
			<td>Prepotech</td>
			<td>315-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipopolysaccharide (LPS)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>L2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well-plate</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>v450 anti-mouse CD11b antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560455</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-mouse CD64 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>139303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-mouse CD115 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>135505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-mouse CD11c antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>117305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-mouse MHCII antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>125507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD86 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>105011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD80 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>104713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometry tubes</td>
			<td>Zelian</td>
			<td>300800-1</td>
			<td>PS 12X75 5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OTII Ovoalbumine peptide</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>323-339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD8&#945; antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0081-U500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated IgM antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>406503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated B220 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0452-U500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD19 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0193-U500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated MHCII (I-Ab) antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>115302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD11b antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0112-U500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD11c antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>117303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD44 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated CD25 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>30-0251-U100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse biotinylated DX5 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptavidin-coated magnetic microbeads</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-048-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic cell separator</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-976</td>
			<td>QuadroMACS Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Separation columns</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-mouse CD4 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD3 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-mouse CD8 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0081-U025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Violet Tracer</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C34557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD25 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>20-0251-U100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa647 anti-mouse CD69 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>104518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCPCY5.5 anti-mouse CD45.1 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>65-0453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD45.1 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>20-0453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECY7 anti-mouse CD45.1 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>60-0453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-mouse CD45.2 antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>I0634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol 12 Myristate 13 Acetate (PMA)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A (BD GolgiPlug)</td>
			<td>BD</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>8-18715-02100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intracellular permeabilization buffer</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse IFNg antibody</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>20-7311-U100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc-block (anti-mouse CD16/CD32)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-U100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.SJL CD45.1 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>002014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSRFortessa&#8482; Cell Analyzer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>649225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo mouse model to measure na&#239;ve cd4 t cell activation, proliferation and th1 differentiation induced by bone marrow-derived dendritic cells

Quantificação da ativação de células T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de T helper 1 (Th1) células é uma maneira útil para avaliar o papel desempenhado pelas células T em uma resposta imune. Este protocolo descreve a diferenciação em vitro dos progenitores da medula óssea (BM) para obter granulócitos macrófagos colônia-estimulando factor (GM-CSF) derivado-células dendríticas (DCs). O protocolo descreve também a transferência adotiva de peptídeos ovalbumina (OVAp)-carregado DCs GM-CSF-derivados e as células T CD4 do ingênuo de ratos transgénicos OTII a fim de analisar na vivo ativação, proliferação e diferenciação de células Th1 do transferidas as células T CD4. Este protocolo contorna a limitação de puramente na vivo métodos impostas pela incapacidade de manipular ou selecione população celular estudado especificamente. Além disso, este protocolo permite que estudos em um ambiente em vivo , evitando assim alterações funcionais fatores que podem ocorrer em vitro e inclusive a influência dos tipos de células e outros fatores encontrados somente em órgãos intactos. O protocolo é uma ferramenta útil para gerar mudanças em DCs e T células que modificar adaptáveis respostas imunes, potencialmente, fornecendo resultados importantes para compreender a origem ou o desenvolvimento de inúmeras doenças associadas imunes.

A Figura 1 ilustra as etapas descritas neste protocolo. A Figura 2 ilustra o isolamento e a cultura de células de rato BM. A adição de GM-CSF e LPS para essas culturas permite a geração em vitro e maturação de DCs. a Figura 3 ilustra a análise de citometria de fluxo da diferenciação e maturação de obtidos DCs DCs. OVAp-carregado derivado de GM-CSF BM e célula vital isolado rastr...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÂ¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells at JoVE

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Aqui, apresentamos um protocolo para a determinação na vivo da ativação de células (células T) de T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pela medula óssea de GM-CSF (BM)-derivado de células dendríticas (DCs). Além disso, este protocolo descreve isolamento BM e células T, geração de DC e DC e células T transferência adotiva.

Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pelas células dendríticas derivadas de medula óssea

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transdução retroviral de receptor de células T no rato células T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Imunologia e Infecção

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Geração e Rotulagem de murino derivadas da medula óssea Células Dendríticas com Nanocristais Qdot de Estudos de rastreamento

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Transdução de adenovírus Naive CD4 células T para estudar a diferenciação Treg

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

Isolamento e Th17 Diferenciação de Linfócitos T CD4 Naïve

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Medula Óssea derivadas de macrófagos Produção

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Avaliando a inata Sensing de HIV-1 CD4 Infected<sup&gt; +</sup&gt; As células T por células dendríticas plasmocitóides Usando um<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-cultura do sistema.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Isolamento e injecção intravenosa de Murino de Medula Óssea Derivado monócitos

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Rato Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento de células T e<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciação em subpopulações de células T

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

As células T Capturar Bactérias por Transinfection das dendríticas

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...