Name: choice and no-choice bioassays to study the pupation preference and emergence success of ectropis grisescens
Uploaded: 2018-10-30T13:00:00
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Ringraziamo Yuzhen Wen, Shiping Liang, Shengzhe Jian e Li Yanjun (College of Forestry e architettura del paesaggio, South China Agricultural University) per il loro aiuto nel insetto allevamento e set-up sperimentale. Questo lavoro è stato finanziato dal National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31600516), la Fondazione di scienze naturali di Guangdong (Grant No. 2016A030310445) e la scienza e tecnologia pianificazione progetto della provincia di Guangdong (Grant No. 2015A020208010) .

1. umidità-scelta le analisi biologiche per determinare impupamento preferenza di E. grisescens
<ol><li>
Come ottenere mature ultimo-instar larve di E. grisescens
	<ol>
<li>Tagliare i germogli freschi (30-40 cm di lunghezza) di piante di tè (Camellia sinensis L.). Inserire 25-30 germogli in un matraccio da triangolare a 250 mL. Riempire il pallone con acqua del rubinetto. Mettere 3-4 boccette (con germogli di tè) in una bacinella di plastica (lato superiore: 51 cm di diame...

<ol>
	<li>Dimou, I., Koutsikopoulos, C., Economopoulos, A. P., Lykakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depth+of+pupation+of+the+wild+olive+fruit+fly,+Bactrocera+(Dacus)+oleae+(Gmel.)+(Dipt.,+Tephritidae),+as+affected+by+soil+abiotic+factors.">Depth of pupation of the wild olive fruit fly, Bactrocera (Dacus) oleae (Gmel.) (Dipt., Tephritidae), as affected by soil abiotic factors.</a> Journal of Applied Entomology. 127 (1), 12-17 (2003).</li><li>Chen, M., Shelton, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+soil+type,+moisture,+and+depth+on+swede+midge+(Diptera:+Cecidomyiidae)+pupation+and+emergence.">Impact of soil type, moisture, and depth on swede midge (Diptera: Cecidomyiidae) pupation and emergence.</a> Environmental Entomology. 36 (6), 1349-1355 (2007).</li><li>Holmes, L. A., Vanlaerhoven, S. L., Tomberlin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+effects+on+pupation+and+adult+emergence+of+Hermetia+illucens+(Diptera:+Stratiomyidae).">Substrate effects on pupation and adult emergence of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae).</a> Environmental Entomology. 42 (2), 370-374 (2013).</li><li>Renkema, J. M., Cutler, G. C., Lynch, D. H., MacKenzie, K., Walde, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mulch+type+and+moisture+level+affect+pupation+depth+of+Rhagoletis+mendax+Curran+(Diptera:+Tephritidae)+in+the+laboratory.">Mulch type and moisture level affect pupation depth of Rhagoletis mendax Curran (Diptera: Tephritidae) in the laboratory.</a> Journal of Pest Science. 84 (3), 281 (2011).</li><li>Ellis, J. D., Hepburn, R., Luckman, B., Elzen, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+soil+type,+moisture,+and+density+on+pupation+success+of+Aethina+tumida+(Coleoptera:+Nitidulidae).">Effects of soil type, moisture, and density on pupation success of Aethina tumida (Coleoptera: Nitidulidae).</a> Environmental Entomology. 33 (4), 794-798 (2004).</li><li>Pietrantuono, A. L., Enriquez, A. S., Fern&#225;ndez-Arhex, V., Bruzzone, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrates+preference+for+pupation+on+sawfly+Notofenusa+surosa+(Hymenoptera:+Tenthredinidae).">Substrates preference for pupation on sawfly Notofenusa surosa (Hymenoptera: Tenthredinidae).</a> Journal of Insect Behavior. 28 (3), 257-267 (2015).</li><li>Buitenhuis, R., Shipp, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+plant+species+and+plant+growth+stage+on+Frankliniella+occidentalis+pupation+behaviour+in+greenhouse+ornamentals.">Influence of plant species and plant growth stage on Frankliniella occidentalis pupation behaviour in greenhouse ornamentals.</a> Journal of Applied Entomology. 132 (1), 86-88 (2008).</li><li>Zheng, X. L., Cong, X. P., Wang, X. P., Lei, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupation+behaviour,+depth,+and+site+of+Spodoptera+exigua.">Pupation behaviour, depth, and site of Spodoptera exigua.</a> Bulletin of Insectology. 64 (2), 209-214 (2011).</li><li>Wen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+substrate+type+and+moisture+on+pupation+and+emergence+of+Heortia+vitessoides+(Lepidoptera:+Crambidae):+choice+and+no-choice+studies.">Effect of substrate type and moisture on pupation and emergence of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae): choice and no-choice studies.</a> Journal of Insect Behavior. 29 (4), 473-489 (2016).</li><li>Wen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soil+moisture+effects+on+pupation+behavior,+physiology,+and+morphology+of+Heortia+vitessoides+(Lepidoptera:+Crambidae).">Soil moisture effects on pupation behavior, physiology, and morphology of Heortia vitessoides (Lepidoptera: Crambidae).</a> Journal of Entomological Science. 52 (3), 229-238 (2017).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupation+behaviors+and+emergence+successes+of+Ectropis+grisescens+(Lepidoptera:+Geometridae)+in+response+to+different+substrate+types+and+moisture+contents.">Pupation behaviors and emergence successes of Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) in response to different substrate types and moisture contents.</a> Environmental Entomology. 46 (6), 1365-1373 (2017).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No-substrate+and+low-moisture+conditions+during+pupating+adversely+affect+Ectropis+grisescens+(Lepidoptera:+Geometridae)+adults.">No-substrate and low-moisture conditions during pupating adversely affect Ectropis grisescens (Lepidoptera: Geometridae) adults.</a> Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (2), 657-662 (2018).</li><li>Ge, C. M., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+characteristics+of+Ectropis+grisescens+Warren.">Biological characteristics of Ectropis grisescens Warren.</a> Acta Agriculturae Zhejiangensis. 28 (3), 464-468 (2016).</li><li>Xi, Y., Yin, K. S., Tang, M. J., Xiao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+populations+of+the+tea+geometrid,+Ectropis+obliqua+(Lepidoptera:+Geometridae)+in+Zhejiang,+eastern+China+have+differentiated+into+different+species.">Geographic populations of the tea geometrid, Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae) in Zhejiang, eastern China have differentiated into different species.</a> Acta Entomologica Sinica. 57, 1117-1122 (2014).</li><li>Zhang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+deep+divergence+in+seventeen+populations+of+tea+geometrid+(Ectropis+obliqua+Prout)+in+China+by+COI+mtDNA+and+cross-breeding.">Detecting deep divergence in seventeen populations of tea geometrid (Ectropis obliqua Prout) in China by COI mtDNA and cross-breeding.</a> PloS One. 9 (6), e99373 (2014).</li><li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+tea+geometrid+(Ectropis+grisescens)+pheromone+gland+extracts+using+GC-EAD+and+GC&#215;+GC/TOFMS.">Analysis of tea geometrid (Ectropis grisescens) pheromone gland extracts using GC-EAD and GC&#215; GC/TOFMS.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (16), 3161-3166 (2016).</li><li>Zhang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetrical+reproductive+interference+between+two+sibling+species+of+tea+looper:+Ectropis+grisescens+and+Ectropis+obliqua.">Asymmetrical reproductive interference between two sibling species of tea looper: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua.</a> Bulletin of Entomological Research. , (2016).</li><li>Luo, Z. X., Li, Z. Q., Cai, X. M., Bian, L., Chen, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+premating+isolation+between+two+sibling+moths:+Ectropis+grisescens+and+Ectropis+obliqua+(Lepidoptera:+Geometridae).">Evidence of premating isolation between two sibling moths: Ectropis grisescens and Ectropis obliqua (Lepidoptera: Geometridae).</a> Journal of Economic Entomology. 110 (6), 2364-2370 (2017).</li><li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensory+gene+families+in+Ectropis+grisescens+and+candidates+for+detection+of+Type-II+sex+pheromones.">Chemosensory gene families in Ectropis grisescens and candidates for detection of Type-II sex pheromones.</a> Frontiers in Physiology. 8, (2017).</li><li>Chen, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+structure+of+soil+particle+by+hydrometer+method.">Research on structure of soil particle by hydrometer method.</a> Environmental Science Survey. 29 (4), 97-99 (2010).</li><li>Kucera, M., Malmgren, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Logratio+transformation+of+compositional+data:+a+resolution+of+the+constant+sum+constraint.">Logratio transformation of compositional data: a resolution of the constant sum constraint.</a> Marine Micropaleontology. 34 (1-2), 117-120 (1998).</li><li>Hulthen, A. D., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+soil+type+and+moisture+on+pupal+survival+of+Bactrocera+tryoni+(Froggatt)+(Diptera:+Tephritidae).">The influence of soil type and moisture on pupal survival of Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae).</a> Australian Journal of Entomology. 45 (1), 16-19 (2006).</li><li>Alyokhin, A. V., Mille, C., Messing, R. H., Duan, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+pupation+habitats+by+oriental+fruit+fly+larvae+in+the+laboratory.">Selection of pupation habitats by oriental fruit fly larvae in the laboratory.</a> Journal of Insect Behavior. 14 (1), 57-67 (2001).</li><li>Torres-Muros, L., H&#243;dar, J. A., Zamora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+habitat+type+and+soil+moisture+on+pupal+stage+of+a+Mediterranean+forest+pest+(Thaumetopoea+pityocampa).">Effect of habitat type and soil moisture on pupal stage of a Mediterranean forest pest (Thaumetopoea pityocampa).</a> Agricultural and Forest Entomology. 19 (2), 130-138 (2017).</li></ol>

Preferenze di impupamento rispondendo alle variabili differenti del terreno sono state studiate in pochi parassiti6,9,22,23. Ad esempio, per studiare la preferenza delle larve mature di Bactrocera tryoni (Froggatt) (Diptera: Tephritidae) tra condizioni di umidità del terreno, Hulthen e Clarke22 set contenente 9 contenitori riempiti con un design del latino-Piaz...

Rispetto agli stadi larvali e adulti di insetti, stadio pupale è altamente vulnerabile a causa della limitata capacità mobile delle pupe, che non possono sfuggire rapidamente da situazioni pericolose. Pupating sotto la terra è una strategia comune utilizzata da diversi gruppi di insetti (ad es., negli ordini Diptera1,2,3,4,5di coleotteri, imenotteri6, Tisanotteri7e lepidotteri8,9,10,11,12) per proteggerli dai predatori fuoriterra e pericoli per l'ambiente. Molti di loro sono gravi agricolo e forestale parassiti1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12. Le larve mature di questi insetti del suolo-pupating solitamente lasciano loro padroni di casa, cadono a terra, vagano per trovare un sito idoneo, traforare il suolo e costruire una camera di pupal per pupating8,10.
Il looper di tè, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae), è uno dei più significativi defogliatore parassiti del tè pianta Camellia sinensis L.13. Anche se questa specie venne descritta nel 1894, è stato erroneamente identificato come Ectropis obliqua Prout (Lepidoptera: Geometridae) in passato decenni14,15. Le differenze nella morfologia, biologia e distribuzione geografica tra le due specie di pari livello sono stati descritti in alcuni recenti studi14,15,16. Per esempio, Zhang et al. 15 riferito che obliquo E. si è verificato principalmente ai confini di tre province (Anhui, Jiangsu e Zhejiang) della Cina, mentre E. grisescens ha una distribuzione molto più ampia rispetto ai obliquo E.. Pertanto, le perdite economiche causate da E. grisescens sono in gran parte trascurate, e la conoscenza di questo parassita deve essere ampiamente rivista e rinnovata16,17,18,19 . Nostri studi precedenti hanno mostrato che E. grisescens preferiscono pupate all'interno del terreno, ma potrebbe anche pupate quando il terreno non è disponibile (no-impupamento-substrato condizioni)11,12.
Questo documento fornisce una procedura dettagliata per (1) determinare la preferenza di impupamento di E. grisescens in risposta a fattori quali il tipo di substrato e umidità contenuti utilizzando analisi biologiche a scelta multipla e (2) determinare l'impatto dei fattori abiotici sui comportamenti di impupamento e successo di emersione di E. grisescens utilizzando analisi biologiche no-scelta. Tutte queste analisi biologiche sono condotte in condizioni di laboratorio ben controllato. Inoltre, queste analisi biologiche sono adattate per valutare l'influenza di altri fattori sui comportamenti impupamento e la sopravvivenza di diversi insetti del suolo-pupating.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Triangular flask</td>
			<td>Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD</td>
			<td>99</td>
			<td>250 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic basin</td>
			<td>Chahua, Fuzhou, China</td>
			<td>100</td>
			<td>upper side: 51 cm in diameter; bottom side: 40 cm in diameter; height: 16 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zip lock bags</td>
			<td>Glad, Guangzhou, China</td>
			<td>126/133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene containers</td>
			<td>Youyou Plastic Factory, Taian, China</td>
			<td>139/155/160/161/190</td>
			<td>upper side: 20.0 cm [L] &#215; 13.5 cm [W], bottom side: 17.0 cm [L] &#215; 10.0 cm [W], height: 6.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof polyviny chloride sheet</td>
			<td>Yidimei, Shanghai, China</td>
			<td>141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>V-tech, Guangzhou, China</td>
			<td>VT-710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven drier</td>
			<td>Kexi, Shanghai, China</td>
			<td>KXH-202-3A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental chamber</td>
			<td>Life Apparatus, Ningbo, China</td>
			<td>PSX-280H</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

choice and no-choice bioassays to study the pupation preference and emergence success of ectropis grisescens

Molti insetti vivono sopra la terra come larve e adulti e come pupate sotto terra. Rispetto alle fasi sopra-terra dei loro cicli di vita, meno attenzione su influenza di fattori ambientali come questi insetti quando si impupano all'interno del suolo. Il looper di tè, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae), è una grave peste di piante da tè e ha causato le perdite economiche enormi in Cina del sud. I protocolli descritti qui proponiamo di indagare, attraverso analisi biologiche a scelta multipla, se maturo ultimo-instar E. grisescens larve possono discriminare variabili del suolo come il contenuto di tipo e l'umidità del substrato e determinare, attraverso no-scelta le analisi biologiche, l'impatto del contenuto substrato tipo e umidità sui comportamenti impupamento e il successo di emersione del E. grisescens. I risultati sarebbero migliorare la comprensione dell'ecologia impupamento di E. grisescens e possono portare intuizioni tattiche di gestione del suolo per la soppressione E. grisescens popolazioni. Inoltre, queste analisi biologiche possono essere modificate per studiare le influenze di vari fattori sui comportamenti impupamento e sopravvivenza dei parassiti del terreno-pupating.

Le analisi biologiche di umidità-scelta ha mostrato che significativamente più individui E. grisescens popolate su o entro il 5% e 35% umidità sabbia rispetto alla sabbia umidità del 80% (Figura 2a). Tuttavia, significativamente più individui preferiscono pupate su o all'interno del suolo (terriccio sabbioso 1 e 2 e del terriccio limo) che aveva un contenuto di umidità intermedia (figure 2b - 2d).
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Choice and No-Choice Bioassays to Study the Pupation Preference and Emergence Success of Ectropis grisescens

Scelta e analisi biologiche No-scelta per studiare l'impupamento preferenza e il successo di emersione di Ectropis grisescens

Qui, presentiamo un protocollo per studiare la preferenza di impupamento delle larve mature di Ectropis grisescens in risposta a fattori di terreno (ad es., substrato tipo e contenuto di umidità) utilizzando analisi biologiche scelta. Presentiamo anche un protocollo di analisi biologiche no-scelta per determinare i fattori che influenzano i comportamenti di impupamento e sopravvivenza di E. grisescens.

Many insects live above the ground as larvae and adults and as pupate below the ground. Compared to the above-ground stages of their life cycles, less ...

Questo metodo può fornire importanti informazioni relative all'ecologia della pupa dei bruchi delle foglie di tè, Ectropis grisescens, come i loro comportamenti di pupa e la sopravvissuta alle pupe in risposta a diversi fattori ambientali. Il principale vantaggio di questa tecnica, ti consente di utilizzare un metodo semplice come misurare la preferenza di pupa e il successo di emergenza di Ectropis grisescens. Per iniziare, tagliare germogli freschi dalle piante da tè.Quindi riempire un pallone triangolare da 250 millilitri con acqua del rubinetto e posizionare i germogli nel pallone. Trasferire da tre a quattro contenitori in un bacino di plastica. Quindi, rilascia da 1.000 a 2.000 larve da una colonia di laboratorio di E.grisescens sulle foglie dei germogli di tè.Mantenere le larve in condizioni di laboratorio controllate. Ottieni le larve mature dell'ultimo instar che cadono dalle foglie dei germogli e vagano attivamente lungo il fondo del bacino. Sterilizzare il terreno e la sabbia in un essiccatore da forno di 80 gradi Celsius per tre giorni.Quindi asciugare sia il terreno che la sabbia a 50 gradi Celsius per diverse settimane. I campioni di substrato sono sufficientemente asciugati quando il peso non cambia nel tempo. Utilizzare un pestello di legno e malta per macinare il terreno essiccato.Quindi setacciare la sabbia e il terreno attraverso un setaccio di tre millimetri. Aggiungere la quantità richiesta di acqua distillata ai sacchetti sigillati contenenti i substrati e mescolare accuratamente. Successivamente, utilizzare fogli di PVC per dividere i contenitori in polipropilene in sei camere uguali.Fissare i fogli di PVC e sigillare le fessure con colla a caldo. Quindi, riempire le sei camere con lo stesso tipo di substrato con diversi contenuti di umidità. Utilizzare piccoli pezzi di nastro adesivo per incollare da quattro a sei pezzi di foglie fresche sulla superficie interna del coperchio del contenitore in polipropilene.Quindi, rilasciare 30 larve mature last-instar sulle foglie incollate al coperchio del contenitore camerato. Capovolta con cura il coperchio e copri il contenitore. Mantenere l'arena di bioassay in una camera ambientale con un fotoperiodo chiaro / scuro da 14 a 10 a 26 gradi Celsius.Il quinto giorno, contare il numero di pupe sulla superficie del substrato in ogni camera. Smontare il saggio biologico e contare il numero di pupe. In primo luogo, utilizzare fogli di PVC per dividere i contenitori in polipropilene in quattro camere.Quindi, fissare e sigillare i fogli di PVC con colla a caldo. Riempire le camere del contenitore con quattro tipi di substrato con lo stesso contenuto di umidità e ordini assegnati casualmente. Quindi, utilizzare il nastro adesivo per incollare foglie di tè fresco sul coperchio prima di capovolgerlo sul contenitore.Successivamente, trasferire le larve alle foglie e registrare e analizzare i dati come delineato nel protocollo di testo. Dopo aver preparato i 12 trattamenti del contenuto di umidità del substrato, aggiungere il substrato ai contenitori di plastica. Quindi rilascia 15 larve mature dell'ultimo instar nel substrato di ogni arena.Mantenere ciascuna delle arene di bioassay in una camera ambientale con un fotoperiodo chiaro / scuro da 14 a 10 a 26 gradi Celsius. Il terzo giorno, conta il numero di pupe e eventuali larve morte sulla superficie del substrato di ogni arena. Infine, registra il numero di adulti emergenti ogni giorno fino a quando non emergono nuovi adulti per 15 giorni.In questo protocollo, i biosatti di scelta dell'umidità e del substrato sono stati utilizzati per studiare la preferenza di pupa di E.grisescens. I test sulla scelta dell'umidità hanno mostrato che più individui si sono impanati sulla sabbia idratata del 5% o all'interno del 5% e del 35% rispetto alla sabbia idratata dell'80%. Tuttavia, molti più individui hanno preferito impuparsi sul terreno o all'interno di esso con contenuto intermedio di umidità.I biosatti di scelta del substrato hanno rivelato che la sabbia era più preferita da E.grisescens in condizioni di umidità del 20% e in condizioni di umidità dell'80%. Tuttavia, non è stata trovata alcuna preferenza di pupa tra i quattro substrati in condizioni di umidità del 50%. Dopo lo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel campo dell'entomologia per esplorare l'ecologia della pupa di molti insetti cucciolati di suolo.

Research

JoVE Journal

Environment

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MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...