Name: a high-performance liquid chromatography measurement of kynurenine and kynurenic acid: relating biochemistry to cognition and sleep in rats
Uploaded: 2018-08-19T13:00:00
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Lo studio presente è stato in parte finanziato dal National Institutes of Health (R01 NS102209) e una donazione del Clare E. Forbes trust.

I nostri protocolli sperimentali sono stati approvati dal comitato di uso e cura degli animali istituzionale dell'Università del Maryland e seguito guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso di animali da laboratorio.
Nota: Ratti Wistar del maschio adulto (250 – 350 g) sono stati utilizzati in tutti gli esperimenti. Separata coorti di animali sono stati utilizzati per l'analisi biochimica, esperimenti comportamentali e registrazioni di sonno-veglia. Gli animali sono stati a...

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	<li>Leklem, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+aspects+of+tryptophan+metabolism+in+humans+and+other+species:+a+review.">Quantitative aspects of tryptophan metabolism in humans and other species: a review.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 24 (6), 659-672 (1971).</li><li>Pocivavsek, A., Notarangelo, F. M., Wu, H. Q., Bruno, J. P., Schwarcz, R., Pletnikov, M. V., Waddington, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+as+Pharmacological+Targets+in+the+Treatment+of+Schizophrenia:+Focus+on+Kynurenic+Acid.">Astrocytes as Pharmacological Targets in the Treatment of Schizophrenia: Focus on Kynurenic Acid.</a> Modeling the Psychophathological Dimensions of Schizophrenia - From Molecules to Behavior. , 423-443 (2016).</li><li>Hilmas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+metabolite+kynurenic+acid+inhibits+alpha7+nicotinic+receptor+activity+and+increases+non-alpha7+nicotinic+receptor+expression:+physiopathological+implications.">The brain metabolite kynurenic acid inhibits alpha7 nicotinic receptor activity and increases non-alpha7 nicotinic receptor expression: physiopathological implications.</a> Journal of Neuroscience. 21 (19), 7463-7473 (2001).</li><li>Perkins, M. N., Stone, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+iontophoretic+investigation+of+the+actions+of+convulsant+kynurenines+and+their+interaction+with+the+endogenous+excitant+quinolinic+acid.">An iontophoretic investigation of the actions of convulsant kynurenines and their interaction with the endogenous excitant quinolinic acid.</a> Brain Research. 247 (1), 184-187 (1982).</li><li>DiNatale, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kynurenic+acid+is+a+potent+endogenous+aryl+hydrocarbon+receptor+ligand+that+synergistically+induces+interleukin-6+in+the+presence+of+inflammatory+signaling.">Kynurenic acid is a potent endogenous aryl hydrocarbon receptor ligand that synergistically induces interleukin-6 in the presence of inflammatory signaling.</a> Toxicological Sciences. 115 (1), 89-97 (2010).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kynurenic+acid+as+a+ligand+for+orphan+G+protein-coupled+receptor+GPR35.">Kynurenic acid as a ligand for orphan G protein-coupled receptor GPR35.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (31), 22021-22028 (2006).</li><li>Alexander, K. S., Wu, H. Q., Schwarcz, R., Bruno, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+elevations+of+brain+kynurenic+acid+impair+cognitive+flexibility:+normalization+by+the+alpha7+positive+modulator+galantamine.">Acute elevations of brain kynurenic acid impair cognitive flexibility: normalization by the alpha7 positive modulator galantamine.</a> Psychopharmacology (Berlin). 220 (3), 627-637 (2012).</li><li>Chess, A. C., Landers, A. M., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-kynurenine+treatment+alters+contextual+fear+conditioning+and+context+discrimination+but+not+cue-specific+fear+conditioning.">L-kynurenine treatment alters contextual fear conditioning and context discrimination but not cue-specific fear conditioning.</a> Behavioural Brain Research. 201 (2), 325-331 (2009).</li><li>Chess, A. C., Simoni, M. K., Alling, T. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevations+of+endogenous+kynurenic+acid+produce+spatial+working+memory+deficits.">Elevations of endogenous kynurenic acid produce spatial working memory deficits.</a> Schizophrenia Bulletin. 33 (3), 797-804 (2007).</li><li>Pocivavsek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuations+in+endogenous+kynurenic+acid+control+hippocampal+glutamate+and+memory.">Fluctuations in endogenous kynurenic acid control hippocampal glutamate and memory.</a> Neuropsychopharmacology. 36 (11), 2357-2367 (2011).</li><li>Pocivavsek, A., Baratta, A. M., Mong, J. A., Viechweg, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Kynurenine+Challenge+Disrupts+Sleep-Wake+Architecture+and+Impairs+Contextual+Memory+in+Adult+Rats.">Acute Kynurenine Challenge Disrupts Sleep-Wake Architecture and Impairs Contextual Memory in Adult Rats.</a> Sleep. 40 (11), (2017).</li><li>Halassa, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytic+modulation+of+sleep+homeostasis+and+cognitive+consequences+of+sleep+loss.">Astrocytic modulation of sleep homeostasis and cognitive consequences of sleep loss.</a> Neuron. 61 (2), 213-219 (2009).</li><li>Erhardt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kynurenic+acid+levels+are+elevated+in+the+cerebrospinal+fluid+of+patients+with+schizophrenia.">Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia.</a> Neuroscience Letters. 313 (1-2), 96-98 (2001).</li><li>Linderholm, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+levels+of+kynurenine+and+kynurenic+acid+in+the+CSF+of+patients+with+schizophrenia.">Increased levels of kynurenine and kynurenic acid in the CSF of patients with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 38 (3), 426-432 (2012).</li><li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+kynurenine+pathway+metabolism+in+the+prefrontal+cortex+of+individuals+with+schizophrenia.">Impaired kynurenine pathway metabolism in the prefrontal cortex of individuals with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 37 (6), 1147-1156 (2011).</li><li>Schwarcz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cortical+kynurenate+content+in+schizophrenia.">Increased cortical kynurenate content in schizophrenia.</a> Biological Psychiatry. 50 (7), 521-530 (2001).</li><li>Pocivavsek, A., Rowland, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Neuroscience+Illuminates+Causal+Relationship+Between+Sleep+and+Memory:+Translating+to+Schizophrenia.">Basic Neuroscience Illuminates Causal Relationship Between Sleep and Memory: Translating to Schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 44 (1), 7-14 (2018).</li><li>Shibata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorimetric+micro-determination+of+kynurenic+acid,+an+endogenous+blocker+of+neurotoxicity,+by+high-performance+liquid+chromatography.">Fluorimetric micro-determination of kynurenic acid, an endogenous blocker of neurotoxicity, by high-performance liquid chromatography.</a> Journal of Chromatography. 430 (2), 376-380 (1988).</li><li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+consolidation+during+sleep:+a+neurophysiological+perspective.">Memory consolidation during sleep: a neurophysiological perspective.</a> Journal of Sleep Research. 7, 17-23 (1998).</li><li>Graves, L. A., Heller, E. A., Pack, A. I., Abel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+deprivation+selectively+impairs+memory+consolidation+for+contextual+fear+conditioning.">Sleep deprivation selectively impairs memory consolidation for contextual fear conditioning.</a> Learning &amp; Memory. 10 (3), 168-176 (2003).</li><li>Yamashita, M., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tryptophan+circuit+in+fatigue:+From+blood+to+brain+and+cognition.">Tryptophan circuit in fatigue: From blood to brain and cognition.</a> Brain Research. 1675, 116-126 (2017).</li></ol>

Per una valutazione affidabile di KYNA nel cervello dopo somministrazione periferica chinurenina, è fondamentale per combinare e interpretare esperimenti biochimici e funzionali. Qui, presentiamo un protocollo dettagliato che permette nuovi utenti a stabilire efficaci metodi per misurare il plasma chinurenina e cervello KYNA dei ratti. La misura della chinurenina nel plasma ha confermato l'iniezione esatta e la misurazione del metabolita KYNA conferma la sintesi de novo nel cervello. Ci sono diversi vantaggi de...

Il protocollo di Kyoto è responsabile di degradante quasi il 95% del triptofano aminoacido essenziale1. Nel cervello di mammifero, chinurenina presa in astrocytes è metabolizzata in neuroattivi piccola molecola KYNA principalmente dall'enzima chinurenina aminotransferasi (KAT) II2. KYNA agisce come un antagonista dei recettori NMDA e α7nACh in cervello2,3,4, e anche obiettivi recettori inclusi il ricevitore arilico dell'idrocarburo (AHR) e la G-proteina di segnalazione accoppiato recettore 35 (GPR35)5 ,6. In animali da esperimento, le elevazioni in cervello KYNA sono state indicate per alterare la loro prestazione conoscitiva in una matrice di analisi comportamentale2,7,8,9,10 . Un'ipotesi emergente suggerisce che KYNA svolge un ruolo integrale nella modulazione delle funzioni cognitive di un impatto di comportamento di sonno-veglia11, sostenendo così ulteriormente il ruolo di molecole derivate da astrociti nella modulazione della neurobiologia del sonno e cognizione12.
Clinicamente, le elevazioni in KYNA sono state trovate nel liquido cerebrospinale e tessuto cerebrale post mortem da pazienti con schizofrenia13,14,15,16, un debilitante disturbo psichiatrico caratterizzata da disturbi cognitivi. I pazienti con schizofrenia sono anche spesso afflitti da disturbi del sonno che possono esacerbare la malattia17. Comprensione del ruolo del metabolismo di KP e KYNA nella modulazione di una relazione tra il sonno e cognizione, in particolare tra apprendimento e la memoria, può condurre allo sviluppo di nuove terapie per il trattamento di questi scarsi risultati nella schizofrenia e altro malattie psichiatriche.
Un metodo affidabile e coerenza per la misurazione dei metaboliti di KP è importante assicurare che le ricerche emergenti da varie istituzioni possono essere integrata nella comprensione scientifica della biologia di KP. Attualmente, descriviamo la metodologia per misurare chinurenina nel plasma del ratto e KYNA nel cervello del ratto mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). Il presente protocollo, che fa uso di una rilevazione fluorimetrica in presenza di Zn2 +, in primo luogo è stato sviluppato da Shibata18 e più recentemente adattato e ottimizzato per derivatizzare con 500 millimetri di acetato di zinco come il reagente post-colonna, consentendo la rilevazione di endogeno, quantità nanomolari di KYNA nel cervello11.
Per stimolare la produzione endogena di KYNA de novo come descritto nel presente protocollo, la chinurenina bioprecursor diretto viene iniettata intraperitonealmente (i.p.) in ratti. In combinazione con le valutazioni biochimiche per determinare il grado di produzione di KYNA, gli impatti di un chinurenina sfidano sulla memoria hippocampal-dipendente (paradigma di evitare passivo) e l'architettura di sonno-veglia (segnali EEG ed EMG) è anche indagate11. Una combinazione di queste tecniche consente lo studio dell'impatto biochimico e funzionale di un chinurenina sfida in vivo nei ratti.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Wistar rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td></td>
			<td>adult male, 250-350 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-kynurenine sulfate</td>
			<td>Sai Advantium</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReproSil-Pur C18 column (4 x 150 mm)</td>
			<td>Dr. Maisch GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ Clips</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>59022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting materials screws</td>
			<td>PlasticsOne</td>
			<td>00-96 X 1/16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonabsorbable Sutures</td>
			<td>MedRep Express</td>
			<td>699B</td>
			<td>CP Medical Monomid Black Nylon Sutures, 4-0, P-3, 18&#34;, BOX of 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J310H</td>
			<td>4-0 Coated Vicryl Violet 1X27&#39;&#39; SH-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental Cement</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>51458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill Bit</td>
			<td>Stoelting Co.</td>
			<td>514551</td>
			<td>0.45 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alliance HPLC system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2695 separation module</td>
			<td>Waters</td>
			<td>176269503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2475 fluorescence detector</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186247500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>post-column reagent manager</td>
			<td>Waters</td>
			<td>725000556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenovo computer</td>
			<td>Waters</td>
			<td>668000249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empower software</td>
			<td>Waters</td>
			<td>176706100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Passive avoidance box for rat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra tall MDF sound attenuating cubicle</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-018MD</td>
			<td>Interior: 22&#34;W x 22&#34;H x 16&#34;D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Center channel modulator shuttle box chamber</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-010MC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel grid floor for rat</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-010MB-GF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Auto guillotine door</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-010B-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quick disconnect shuttle grid floor harness for rat</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-010MB-QD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus light, 1&#34; white lens, mounted on modular panel</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-221M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonalert module with volume control for rat chamber</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-223AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmartCtrl 8 input/16 output package</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>DIG-716P2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 Channel IR control for shuttle boxes</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-253C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared source and dectector array strips</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletop interface cabinet, 120 V 60 Hz</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SG-6080C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual range constant current aversive stimulation module</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-410B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid state grid floor scrambler module</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual A/B shock control module</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>ENV-415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2&#39; 3-Pin mini-molex extension</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SG-216A-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#39; Shock output cable, DB-9 M/F</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SG-219G-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shuttle shock control cable 15&#39;, 6</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SG-219SA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small tabletop cabinet and power supply, 120 V 60 Hz</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SG-6080D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCI interface package</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>DIG-700P2-R2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shuttle box avoidance utility package</td>
			<td>MedAssociates</td>
			<td>SOF-700RA-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sleep-Wake Monitoring Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponehmah software</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>PNP-P3P-610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX2 8 Source Acquisition interface</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>PNM-P3P-MX204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dell computer, Optiplex 7020, Windows 7, 64 bit</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>271-0112-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dell 19&#34; computer monitor</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>271-0113-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Receivers for plastic cages, 8x</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>272-6001-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisco RV130 VPN router</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>RV130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix 2.0</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>271-0119-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Network switch</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>SG200-08P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neuroscore software</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>271-0171-CFG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two biopotential channels transmitter, model TL11M2-F40-EET</td>
			<td>Data Sciences International (DSI)</td>
			<td>270-0134-001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-performance liquid chromatography measurement of kynurenine and kynurenic acid: relating biochemistry to cognition and sleep in rats

La via della chinurenina (KP) di degradazione del triptofano è stata implicata nei disturbi psichiatrici. In particolare, l'Astrocita-derivati metabolita acido chinurenico (KYNA), un antagonista sia N-metilico-d-aspartato (NMDA) e α7 recettori nicotinici per l'acetilcolina (α7nACh), è stato implicato nei processi cognitivi nella salute e nella malattia. Come i livelli di KYNA sono elevati nei cervelli dei pazienti con schizofrenia, un malfunzionamento al glutamatergic e recettori colinergici è creduto per essere causalmente a disfunzione conoscitiva, un dominio di nucleo della psicopatologia della malattia. KYNA può svolgere un ruolo patofisiologico significativo in individui con la schizofrenia. È possibile elevare endogeno KYNA nel cervello del roditore di trattare gli animali con la chinurenina diretto bioprecursor e studi preclinici in ratti hanno dimostrato che le altezze acute in KYNA possono influenzare i processi di apprendimento e memoria. L'attuale protocollo descrive questo approccio sperimentale in dettaglio e combina un) un'analisi biochimica della chinurenina nel sangue e cervello formazione KYNA (mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni), b) comportamentali test per sondare la memoria contestuale hippocampal-dipendente (paradigma di evitare passivo) e c) una valutazione del comportamento di sonno-veglia [telemetriche registrazioni che unisce l'elettroencefalogramma (EEG) e segnali di elettromiografia (EMG)] in ratti. Presi insieme, una relazione tra elevati KYNA, sonno e cognizione è studiata, e questo protocollo viene descritto in dettaglio un approccio sperimentale alla comprensione dei risultati di funzione di elevazione chinurenina e KYNA formazione in vivo nei ratti. Risultati ottenuti attraverso le variazioni di questo protocollo metterà alla prova l'ipotesi che il KP e KYNA servono ruoli chiave nella modulazione del sonno e la cognizione negli Stati di salute e malattia.

Per convalidare l'uso di un'iniezione intraperitoneale chinurenina come metodo per elevare il cervello KYNA, è stata eseguita un'analisi HPLC del tessuto. Le curve standard (Figura 1) sono state costruite utilizzando il software associato e permesso per la quantificazione dei campioni di tessuto. Cromatogrammi rappresentativi per chinurenina e KYNA sono presentati nella Figura 2. Chinurenina è stata osservata in un periodo di c...

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A High-performance Liquid Chromatography Measurement of Kynurenine and Kynurenic Acid: Relating Biochemistry to Cognition and Sleep in Rats

Una misura di cromatografia liquida ad alte prestazioni della chinurenina e acido chinurenico: materia biochimica di cognizione e di sonno in ratti

Alterazioni in metaboliti neuroattivi kynurenine pathway (KP) sono implicate nelle malattie psichiatriche. Indagando i risultati funzionali di un alterato kynurenine pathway metabolismo in vivo nei roditori può contribuire a delucidare approcci terapeutici innovativi. L'attuale protocollo combina approcci biochimici e comportamentali per studiare l'impatto di una sfida di chinurenina acuta nei ratti.

The kynurenine pathway (KP) of tryptophan degradation has been implicated in psychiatric disorders. Specifically, the astrocyte-derived metabolite ...

Research

JoVE Journal

Behavior

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A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats

Un nuovo metodo per indurre un comportamento depressione-come in ratti

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is ...

Noninvasive, High-throughput Determination of Sleep Duration in Rodents

Determinazione non invasiva, High-throughput di durata di sonno in roditori

Traditionally, sleep is monitored by an electroencephalogram (EEG). EEG studies in rodents require surgical implantation of the electrodes followed by a ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Un protocollo di Conditioned Place Preference per l'incubazione di Craving nei ratti di misura

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...