Name: use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome
Uploaded: 2018-10-03T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

هذا العمل كان يدعمها برنامج البحوث الداخلية للمعهد الوطني للسرطان، "المعاهد الوطنية للصحة" (منح أرقام ضياء SC 010378 و 010983 قبل الميلاد).

الحيوان الإجراءات الموضحة في هذه المقالة قد أقرها المعهد الوطني للسرطان في بيثيسدا رعاية الحيوان واستخدام اللجنة، وتتوافق مع السياسات الواردة ضمن "السياسة خدمة الصحة العامة" في رعاية إنسانية واستخدام الحيوانات المختبرية، قانون الرفق بالحيوان، ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبري?...

<ol>
	<li>Corey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+the+complexity+of+stem-cell+diseases.">Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).</li><li>Garcia-Manero, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+2015+Update+on+diagnosis,+risk-stratification+and+management.">Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management.</a> American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).</li><li>Heaney, M. L., Golde, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplasia.">Myelodysplasia.</a> The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes.">Myelodysplastic syndromes.</a> Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).</li><li>Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+features+of+myelodysplastic+syndromes:+results+from+regional+cancer+surveys+and+hospital-based+statistics.">Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics.</a> International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).</li><li>Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+genetic+pathways+and+cooperating+genetic+abnormalities+in+the+pathogenesis+of+therapy-related+myelodysplasia+and+acute+myeloid+leukemia.">Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).</li><li>Uy, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+the+clonal+structure+of+MDS+and+AML+in+response+to+epigenetic+therapy.">Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy.</a> Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).</li><li>Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98+gene+fusions+and+hematopoietic+malignancies:+common+themes+and+new+biologic+insights.">NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights.</a> Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).</li><li>Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98-HOXD13+transgenic+mice+develop+a+highly+penetrant,+severe+myelodysplastic+syndrome+that+progresses+to+acute+leukemia.">NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia.</a> Blood. 106 (1), 287-295 (2005).</li><li>Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preleukemic+acute+human+leukemia.">Preleukemic acute human leukemia.</a> Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).</li><li>Thanopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+NOD/SCID-beta2+microglobulin+null+mice+with+multilineage+neoplastic+cells+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome.">Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome.</a> Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).</li><li>Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+distinct+clonal+MDS-derived+hematopoietic+precursors+in+NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient+mice+after+intramedullary+transplantation+of+hematopoietic+and+stromal+cells.">Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells.</a> Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).</li><li>Benito, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID+mice+transplanted+with+marrow+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome+(MDS)+show+long-term+propagation+of+normal+but+not+clonal+human+precursors.">NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors.</a> Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).</li><li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit.">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li><li>Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+a+myelodysplastic+syndrome+by+a+long-term+repopulating+hematopoietic+cell.">Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).</li><li>Pietras, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+Distinct+Subsets+of+Lineage-Biased+Multipotent+Progenitors+Control+Blood+Production+in+Normal+and+Regenerative+Conditions.">Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions.</a> Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloablative+hematopoietic+stem+cell+transplantation+improves+survival+but+is+not+curative+in+a+pre-clinical+model+of+myelodysplastic+syndrome.">Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome.</a> PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).</li></ol>

على الرغم من أن حركة الديمقراطيين الاشتراكيين اضطراب الاستنساخ خلايا الجذعية المكونة للدم، حركة الديمقراطيين الاشتراكيين "وقف"، أو خلايا المبادر، لا بعد تتسم. أظهرنا سابقا أن حركة الديمقراطيين الاشتراكيين يمكن أن تكون الأولى لوزن الفئران باستخدام نخاع العظام من الفئران NHD13 هسكت، تتسم ب?...

ميلوديسبلاستيك المتلازمات (حركة الديمقراطيين الاشتراكيين) تمثل مجموعة متنوعة من اضطرابات الدم الاستنساخ تميزت هيماتوبويسيس غير فعالة، وأدلة مورفولوجك من خلل التنسج، وميل للتحول إلى سرطان الدم النقوي الحاد (AML)1،2 ،،من34. هيماتوبويسيس غير فعالة يعترف اعتقال نضج في نخاع العظام، والنتائج في سيتوبينياس الدم المحيطي على الرغم من نخاع العظم هايبرسيلولار1،3. قدرت حالات الإصابة بحركة الديمقراطيين الاشتراكيين طرق مختلفة ك 2-12 حالة لكل 000 100 شخص سنوياً في الولايات المتحدة، وحدوث حركة الديمقراطيين الاشتراكيين يزيد مع التقدم في العمر، مما يجعل هذا شرطا هاما لفهم نظراً لشيخوخة السكان في الولايات المتحدة3، 5. على الرغم من أن معظم الحالات من حركة الديمقراطيين الاشتراكيين لا مسببات واضحة، وبعض الحالات من حركة الديمقراطيين الاشتراكيين يعتقد أن يكون بسبب التعرض لعوامل سمية جينية معروفة، بما في ذلك المذيبات مثل البنزين، والسرطان العلاج الكيميائي6.
حركة الديمقراطيين الاشتراكيين المرضى عادة اكتسبت الطفرات في خلايا حركة الديمقراطيين الاشتراكيين7. على الرغم من النادر نسبيا، وقد اكتسبت عددا من المرضى حركة الديمقراطيين الاشتراكيين المولدة الصبغية المتوازنة التي تشمل الجينات مثل NUP98، EVI1، RUNX1 و MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). لدينا مختبر مصلحة طويلة الأمد في كروموسوم المولدة، التي تنطوي على الجينات NUP988. الفئران المعدلة وراثيا أن صريح التحوير NUP98-HOXD13 (NHD13) وينظم المروج Vav1 ومحسن عناصر عرض كافة الميزات الرئيسية لحركة الديمقراطيين الاشتراكيين، بما في ذلك سيتوبينياس الدم المحيطي، وأدلة مورفولوجك الانزياح، والتحول إلى مكافحة غسل الأموال9 .
على الرغم من أن حركة الديمقراطيين الاشتراكيين قد تم الاعتراف بما يزيد على 60 سنة10، وتعتبر أن اضطراب خلايا الجذعية الاستنساخ، الجهود الرامية إلى انجرافت الخلايا البشرية حركة الديمقراطيين الاشتراكيين في الفئران العوز كانت ناجحة إلى حد كبير، لأن خلايا حركة الديمقراطيين الاشتراكيين انجرافت سيئة11، 12،،من1314 والفئران لا تتطور الأمراض السريرية. في محاولة لتحديد الخلايا المكونة للدم التي يمكن أن تنقل حركة الديمقراطيين الاشتراكيين، تحولت إلى نموذج NHD13، وأظهرت أننا يمكن أن انجرافت حركة الديمقراطيين الاشتراكيين ككيان مرض التي أظهرت كافة الميزات الأساسية لحركة الديمقراطيين الاشتراكيين البشرية، بما في ذلك سيتوبينياس الدم المحيطي، الانزياح، و التحول إلى مكافحة غسل الأموال15. وفي هذا التقرير، نقدم التفاصيل التقنية لهذه التجارب، فضلا عن نهج لزيادة يجزئ الجذعية المكونة للدم والخلايا السليفة (هسبك)، في محاولة لتحديد الخلايا الشروع في حركة الديمقراطيين الاشتراكيين.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-527F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45.2 antibody</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1800-15</td>
			<td>LOT# A077-T044O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>Monoject</td>
			<td>8881513934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>LOT# 5170418221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin antibodies</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-288</td>
			<td>LOT# 5171109046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>Excelint</td>
			<td>26027</td>
			<td>Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Lamp</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>E70001901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Cytec</td>
			<td>FACScan</td>
			<td>2 lasers, 5 color detectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS sorting instrument</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MOFLO ASTRIOS</td>
			<td>5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamma Irradiator</td>
			<td>Best Theratronics</td>
			<td>Gammacell 40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>RAM scientific</td>
			<td>76011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recipient mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>B6-LY5.1/Cr, CD45.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NUP98-HOXD13 mice</td>
			<td>n/a</td>
			<td>C57Bl/6, CD45.2</td>
			<td>Colony maintained at NIH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome

ميلوديسبلاستيك المتلازمات (حركة الديمقراطيين الاشتراكيين) هي مجموعة متنوعة من اضطرابات الخلايا الجذعية المكونة للدم التي يتم تعريفها بواسطة هيماتوبويسيس غير فعالة، سيتوبينياس الدم المحيطي، والانزياح، وميل للتحول إلى سرطان الدم الحاد. NUP98-HOXD13 (NHD13) الفئران المعدلة وراثيا الخص MDS البشرية من حيث سيتوبينياس الدم المحيطي والانزياح والتحول إلى اللوكيميا الحادة. أظهرنا سابقا أن حركة الديمقراطيين الاشتراكيين يمكن نقلها من ماوس المهندسة وراثيا بحركة الديمقراطيين الاشتراكيين إلى المستلمين البرية من نوع بزرع خلايا نخاع العظام المنبسطة حركة الديمقراطيين الاشتراكيين (بمنك). نفهم بوضوح أكثر خلية حركة الديمقراطيين الاشتراكيين في الأصل، قمنا بتطوير النهج زرع محددة، إيمونوفينوتيبيكالي تعريف المجموعات الفرعية المكونة للدم. في هذه المقالة، نحن تصف عملية عزل وزرع مجموعات سكانية محددة الجذعية المكونة للدم والخلايا السلف. وبعد زرع الأعضاء، يصف لنا نهج لتقييم كفاءة الزرع واستمرار وجود خلايا حركة الديمقراطيين الاشتراكيين المانحين.

نحن تظهر الأرقام التمثيلية لنتائج تجارب عدة. ويبين الشكل 1 الخلوي تدفق ممثل فرز التجربة. خلال التمايز المكونة للدم العادي، الخلايا أصبحت ملتزمة بنسب المكونة للدم محددة، أنهم الحصول على النسب وتحديد علامات خلية السطحية وتفقد القدرة على التجديد الذاتي. ول?...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

استخدام زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم لتقييم أصل متلازمة ميلوديسبلاستيك

يصف لنا استخدام زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم (هسكت) لتقييم إمكانات خبيثة من الخلايا المكونة للدم وراثيا. هسكت مفيد لتقييم الخلايا المكونة للدم الخبيثة المختلفة في فيفو ، فضلا عن توليد مجموعة كبيرة من الفئران مع المتلازمات ميلوديسبلاستيك (حركة الديمقراطيين الاشتراكيين) أو سرطان الدم تقييم العلاجات رواية.

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على بعض الأسئلة في طريقة حقل الأورام الخبيثة حول توصيف الخلية التي تبدأ في الخبيثة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر أساسًا للتحليل الوظيفي لهذه الخلايا الجذعية السرطانية. الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد إلى حيث العلاج من متلازمات النخاع أو MDS، كما أنها يمكن أن تساعد في تحديد الخلايا بدء المرض.لإعداد المتلقين لنقل بالتبني ، قبل أسبوع واحد من عملية الزرع توفير المياه المعقمة المكملة مع 100 ملليغرام لكل لتر من ciprofloxacin لخين الحيوانات المتلقية وراثيا لمدة سبعة أيام في منشأة حيوانية محددة خالية من مسببات الأمراض. في اليوم السابع، يكون مدربة، شهادة cesium 17 المشغل تعيين أداة مصدر سيزيوم لتقديم 70 درجة مئوية من إجمالي الجسم أشعة غاما في الدقيقة الواحدة. ضع 10 فئران في حامل مصمم خصيصًا.أدخل الحامل في غرفة الإشعاع، ووزّع 9 رماديات تشعيع الجسم الكلي في 13 دقيقة. ثم ارجع الحيوانات الى أقفاصها في صباح اليوم التالي، رش الإيثانول 70 في المئة على كامل اثنين إلى ستة العثة القديمة C57 ستة ماوس أسود واستخدام مقص لإزالة الجلد من الحوض إلى الكاحلين.استخدام ملقط مع مقص لإزالة femora و tibiae. تقليم العضلات نظيفة من العظام. قطع نهايات قريبة وقطة ل tibiae والتقاط واحد الساق مع ملقط.أدخل حقنة ثلاثية المليلتر مجهزة بإبرة 27 غيج في تجويف نخاع العظم واغسل نخاع العظم في أنبوب قاع دائري 14 ملليلتر يحتوي على 2.5 ملليلتر من محلول هانكس الملحي المخزن على الاحتياطية المكملة بمصل بوفين الجنين بنسبة 2٪ أو HF2. عندما تم جمع كل النخاع، pirate الأنسجة عدة مرات من خلال تلميح إبرة 20 غيج لتفريق كتلة النخاع في تعليق واحد للعد. لتسمية الخلايا النووية نخاع العظم، أو BMNC، لفرز التدفق، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في واحد مرات عشر إلى BMNC السابعة لكل 90 ميكرولترات من تركيز HF2.بعد ذلك، أضف عشرة ميكرولترات من كوكتيل الأجسام المضادة المضادة للانباتات الحيوية، المضادة للانساب إلى تعليق الخلية لمدة 20 دقيقة الحضانة في 4 درجات مئوية. تليها غسل بالطرد المركزي في ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني. إعادة تعليق بيليه في 100 ميكرولترات من HF2 لكل واحد × عشرة إلى الخلايا السابعة.تسمية بشكلثاني الخلايا مع اثنين من microliters من APC مترافق المضادة للأضداد الحيوية. بعد 20 minuets في أربع درجات مئوية، محمية من الضوء، وغسل الخلايا في ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد. إعادة تعليق بيليه في HF2 تستكمل مع 0.2 ميكروغرام لكل ملليلتر من يوديد بروبديسيوم على الجليد.الآن معايرة تدفق تدفق فرز الخلايا الخلوية باستخدام الخلايا غير المطوعة لتحسين جميع أنابيب الmultiplier الضوئية ، مبعثر ، والمعلمات fluorescence داخل نطاق خطي من كل كاشف. الحصول على ثلاث عينات من 10،000 الخلايا لخلايا، PI المسمى ومكافحة النسب APC الخلايا المسماة. في نهاية هذا النوع، تحليل 1،000 الخلايا من كل عينة لتأكيد نقاء وديموة الخلايا فرزها.تدور أسفل العينات في جهاز الطرد المركزي. ثم إعادة تعليق الكريات في 0.5 ملليلتر من HF2 للعد. لنقل بالتبني من الخلايا فرزها، مزيج 100 ميكرولترات من مرتين إلى BMNC من نوع البرية الخامسة من المتلقي يخدع في HF2 العقيمة.مع 100 ميكرولترات من 2-5 مرات عشرة إلى الرابع BMNC المانحة فرزها من الفائدة في HF2 العقيمة في أنبوب جهاز طرد مركزي صغير لكل المتلقي. تحميل حقنة واحدة ملليلتر، مجهزة 28 غيج لكل مستلم مع 200 ميكرولترات من الخلايا. ثم ضع الفئران المتلقي تحت مصباح الحرارة للحث على تمدد الوريد الذيل.تسليم خلائط الخلية إلى كل المتلقي المشعة القاتلة عن طريق الوريد الذيل. كما الخلايا الجذعية التجديد الذاتي يقتصر على النسب السلبية BMNC البرية من نوع، النسب السلبية، نسب منخفض الإيجابية، وارتفاع النسب الخلايا الإيجابية يتم فرز وزرعها في المتلقين من النوع البري لتحديد قدرة التجديد الذاتي لكل مجموعة الخلايا. بالتبني زرع المانحة عبر BMNC الجينية من الحيوانات نموذج MDS يمكن تمييز السابقين vivo من قبل CD45.2 خلية تعبير علامة سطح.قبل 16 أسبوعا بعد زرع النسب السلبية BNMC، أو BMNC غير فرزها من الحيوانات المانحة MDS المعدلة وراثيا، والخلايا المعدلة وراثيا من المنافسة خارج الخلايا من النوع البري كما يتضح من نسبة متزايدة من الخلايا المانحة إيجابية CD45.2، لوحظ في الدم المحيطي للحيوانات المتلقية المشعة القاتلة. هنا تظهر الخلايا من التحول الكريمي من الماوس المزروعة مع خلايا MDS المعدلة وراثيا. لاحظ وجود العديد من الانفجارات وأشكال غير ناضجة.أثناء محاولة الإجراء، من المهم أن نتذكر للحد من الوقت السابقين التلاعب الجسم الحي، كما أنه يمكن أن تضع الضغط لا مبرر له على الخلايا، مما أدى إلى وفاة الخلية أو فقدان وظيفي. بعد أن تطور هذه التقنية يمهد الطريق للباحثين في البرنامج الميداني ، لوضع خبيث لاستكشاف مصدر المرض في الفئران المعدلة وراثيا.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

اشتقاق كفاءة خلايا الظهارة الصبغية الشبكية من الخلايا الجذعية

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

وسيلة فعالة للحصول على خلايا Dedifferentiated الدهون

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Competitive Transplants to Evaluate Hematopoietic Stem Cell Fitness

زرع تنافسية لتقييم المكونة للدم للياقة الخلايا الجذعية

The gold standard definition of a hematopoietic stem cell (HSC) is a cell that when transferred into an irradiated recipient will have the ability to ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

تحريض الحاد الهيكل العظمي تجديد العضلات التي Cardiotoxin حقن

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-ماك دوت بلوت الفحص تحديد مستوى الحمض النووي ميثيلاتيون من تشوندروسيت التفرق<em&gt; في المختبر</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

تقنية زرع الثدي الثديية الرواية جديدة لتصور الجيل سفينة من الخلايا الجذعية البطانية الأوعية الدموية

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

الهندسة الحيوية من أنسنة نخاع العظام ميكرونفيرونمنتس في الماوس والتصور من خلال التصوير لايف

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Detection of Residual Donor Erythroid Progenitor Cells after Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Patients with Hemoglobinopathies

الكشف عن الخلايا السلف محمر المانحة المتبقية بعد زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم للمرضى الذين يعانون من هيموجلوبينوباثيس

The presence of incomplete chimerism is noted in a large proportion of patients following bone marrow transplant for thalassemia major or sickle cell ...

Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

تحليل الاستنساخ من سلائف الخلايا الجذعية الجنينية المكونة للدم باستخدام مؤشر وحيد الخلية الفرز جنبا إلى جنب مع الخلية البطانية مكانة ثقافة المشارك

The ability to study hematopoietic stem cell (HSC) genesis during embryonic development has been limited by the rarity of HSC precursors in the early ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

تقييم الضرر التأكسدي في الخلايا السطحية الرئيسية للفأرة /الخلايا الجذعية استجابة للأضرار فوق البنفسجية-C (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...