Name: use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome
Uploaded: 2018-10-03T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de intramurale programma van het onderzoek van het National Cancer Institute, National Institutes of Health (verlenen nummers ZIA SC 010378 en BC 010983).

De dieren in dit artikel beschreven procedures door het National Cancer Institute in Bethesda Animal Care en gebruik Comité zijn goedgekeurd, en voldoen aan het beleid deel uitmaakt van het beleid op volksgezondheidsgebied Service op Humane zorg en gebruik van proefdieren, de Dierenwelzijn Act, en de gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren.
1. cel voorbereiding
<ol><li>Oogsten beenmerg genucleëerde cel (BMNC)<ol>
<li>Gebruik alleen steriele materialen. Herbruikbare instrumen...

<ol>
	<li>Corey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+the+complexity+of+stem-cell+diseases.">Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).</li><li>Garcia-Manero, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+2015+Update+on+diagnosis,+risk-stratification+and+management.">Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management.</a> American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).</li><li>Heaney, M. L., Golde, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplasia.">Myelodysplasia.</a> The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes.">Myelodysplastic syndromes.</a> Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).</li><li>Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+features+of+myelodysplastic+syndromes:+results+from+regional+cancer+surveys+and+hospital-based+statistics.">Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics.</a> International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).</li><li>Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+genetic+pathways+and+cooperating+genetic+abnormalities+in+the+pathogenesis+of+therapy-related+myelodysplasia+and+acute+myeloid+leukemia.">Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).</li><li>Uy, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+the+clonal+structure+of+MDS+and+AML+in+response+to+epigenetic+therapy.">Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy.</a> Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).</li><li>Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98+gene+fusions+and+hematopoietic+malignancies:+common+themes+and+new+biologic+insights.">NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights.</a> Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).</li><li>Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98-HOXD13+transgenic+mice+develop+a+highly+penetrant,+severe+myelodysplastic+syndrome+that+progresses+to+acute+leukemia.">NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia.</a> Blood. 106 (1), 287-295 (2005).</li><li>Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preleukemic+acute+human+leukemia.">Preleukemic acute human leukemia.</a> Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).</li><li>Thanopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+NOD/SCID-beta2+microglobulin+null+mice+with+multilineage+neoplastic+cells+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome.">Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome.</a> Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).</li><li>Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+distinct+clonal+MDS-derived+hematopoietic+precursors+in+NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient+mice+after+intramedullary+transplantation+of+hematopoietic+and+stromal+cells.">Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells.</a> Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).</li><li>Benito, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID+mice+transplanted+with+marrow+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome+(MDS)+show+long-term+propagation+of+normal+but+not+clonal+human+precursors.">NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors.</a> Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).</li><li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit.">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li><li>Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+a+myelodysplastic+syndrome+by+a+long-term+repopulating+hematopoietic+cell.">Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).</li><li>Pietras, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+Distinct+Subsets+of+Lineage-Biased+Multipotent+Progenitors+Control+Blood+Production+in+Normal+and+Regenerative+Conditions.">Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions.</a> Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloablative+hematopoietic+stem+cell+transplantation+improves+survival+but+is+not+curative+in+a+pre-clinical+model+of+myelodysplastic+syndrome.">Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome.</a> PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).</li></ol>

MDS weliswaar een stoornis klonale hematopoietische stamcellen, de MDS "stammen" of initiatiefnemende cellen, hebben nog niet gekenmerkt. Wij eerder aangetoond dat MDS kunt transplanteerbaar aan WT muizen met behulp van het beenmerg van NHD13 muizen door HSCT, gekenmerkt door macrocytische anemie, leukopenie, neutropenie en morfologische bewijs van dysplasie15. Bovendien, concurrerende herbevolking tests geïdentificeerd een voordeel van de groei van cellen uit het beenmerg van NHD13 MDS. Deze bev...

Myelodysplastic syndromes (MDS) vertegenwoordigen een gevarieerde set van klonen bloed stoornissen, gekenmerkt door ineffectieve Haematopoiese, morfologische bewijs van dysplasie en een neiging voor transformatie naar acute myeloïde leukemie (AML)1,2 ,3,4. Ineffectieve Haematopoiese is erkend als een arrestatie van de rijping in het beenmerg en resultaten in perifeer bloed cytopenias ondanks een hypercellular beenmerg1,3. De incidentie van MDS meermalen heeft geraamd als 2-12 gevallen per 100.000 personen per jaar in de Verenigde Staten, en de incidentie van MDS toeneemt met de leeftijd, waardoor dit een belangrijke voorwaarde om te begrijpen gezien de veroudering van de Amerikaanse bevolking3, 5. Hoewel de meeste gevallen van MDS geen duidelijke etiologie hebben, worden sommige gevallen van MDS verondersteld te wijten aan de blootstelling aan bekende genotoxische agentia, met inbegrip van oplosmiddelen, zoals benzeen, en kanker chemotherapie6.
MDS-patiënten kunnen mutaties in de MDS cellen7meestal hebben verworven. Hoewel relatief zeldzaam, hebben een aantal MDS-patiënten verworven evenwichtige chromosomale translocaties waarbij genen zoals NUP98, EVI1, RUNX1 en MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Ons laboratorium heeft een jarenlange interesse in chromosoom translocaties, waarbij de NUP98 gen8. Transgene muizen dat uitdrukkelijk een transgenic NUP98-HOXD13 (NHD13) geregeld door de promotor van de Vav1 en enhancer elementen alle van de belangrijkste functies van MDS, met inbegrip van perifeer bloed cytopenias, morfologische bewijs van dysplasie en transformatie naar AML9 tonen .
Hoewel MDS voor meer dan 60 jaar10zijn bekroond, en worden beschouwd als een stoornis van de cel van de stam van de klonen, inspanningen om de engraft van menselijke MDS cel in immunodeficiëntie muizen geweest grotendeels mislukte, omdat de MDS cellen slecht11, engraft 12,13,14 en de muizen niet klinische ziekte ontwikkelen. In een poging om te identificeren welke hematopoietische cellen kunnen overbrengen MDS, we wendde zich tot het NHD13-model, en toonde dat we MDS als een ziekte-entiteit die alle kardinaal functies van menselijke MDS engraft konden toonde, met inbegrip van perifeer bloed cytopenias, heupdysplasie, en transformatie naar AML15. In dit rapport presenteren we de technische details van deze experimenten, alsmede risicobeheersingsmethoden naar verdere fractionate van hematopoietische stamcellen en voorlopercellen (HSPC), in een poging om de MDS-initiëren cellen opsporen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-527F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45.2 antibody</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1800-15</td>
			<td>LOT# A077-T044O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>Monoject</td>
			<td>8881513934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>LOT# 5170418221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin antibodies</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-288</td>
			<td>LOT# 5171109046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>Excelint</td>
			<td>26027</td>
			<td>Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Lamp</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>E70001901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Cytec</td>
			<td>FACScan</td>
			<td>2 lasers, 5 color detectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS sorting instrument</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MOFLO ASTRIOS</td>
			<td>5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamma Irradiator</td>
			<td>Best Theratronics</td>
			<td>Gammacell 40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>RAM scientific</td>
			<td>76011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recipient mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>B6-LY5.1/Cr, CD45.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NUP98-HOXD13 mice</td>
			<td>n/a</td>
			<td>C57Bl/6, CD45.2</td>
			<td>Colony maintained at NIH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome

Myelodysplastic syndromes (MDS) zijn een diverse groep van hematopoietische stamcellen aandoeningen die zijn gedefinieerd door ineffectieve Haematopoiese, perifeer bloed cytopenias dysplasie en een neiging voor transformatie naar acute leukemie. NUP98-HOXD13 (NHD13)-transgene muizen recapituleren menselijke MDS in termen van perifeer bloed cytopenias, dysplasie en transformatie naar acute leukemie. Wij zijn het er eerder blijk gegeven dat MDS kunnen worden overgebracht van een genetisch gemanipuleerde muis met MDS naar wild-type ontvangers door het transplanteren van MDS nucleated beenmergcellen (BMNC). Om meer duidelijk te begrijpen de MDS-cel van oorsprong, hebben we benaderingen transplantatie specifieke, immunophenotypically gedefinieerd hematopoietische deelverzamelingen. In dit artikel beschrijven we het proces van isoleren en verplanten specifieke populaties van hematopoietische stamcellen en voorlopercellen. Na transplantatie beschrijven we benaderingen om de efficiëntie van transplantatie en persistentie van de cellen van de MDS donor te beoordelen.

Wij tonen de representatieve cijfers voor resultaten van verschillende experimenten. Figuur 1 toont een representatieve stroom cytometry sorteren experiment. Tijdens normale hematopoietische differentiatie, cellen naarmate zet zich in voor een specifieke hematopoietische bloedlijn, ze verwerven lineage-definiëren cel oppervlakte markeringen en verliezen van de mogelijkheden voor zelf-vernieuwing. Daarom, in wild-type muizen, zelf-vernieuwing van stamcellen i...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Gebruik van hematopoietische stamceltransplantatie te beoordelen van de oorsprong van myelodysplastisch syndroom

We beschrijven het gebruik van hematopoietische stamceltransplantatie (HSCT) te beoordelen van de kwaadaardige potentieel van genetisch gemanipuleerde hematopoietische cellen. HSCT is handig voor de evaluatie van verschillende kwaadaardige hematopoietische cellen in vivo , alsmede het genereren van een grote cohort van muizen met myelodysplastic syndromes (MDS) of leukemie ter evaluatie van nieuwe therapieën.

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van een paar vragen in de methode van maligniteit veld over karakterisering van een cel die een maligniteit initiëren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een basis biedt voor de functionele analyse van deze kankercellen. De implicaties van deze techniek gaan naar waar de therapie van myelodysplastische syndromen of MDS, omdat het kan helpen bij de identificatie van de ziekte initiërende cellen.Ter voorbereiding van de ontvangers op adoptieoverdracht, levert een week voor de transplantatie steriel water dat wordt aangevuld met 100 milligram per liter ciprofloxatine gedurende zeven dagen aan congene ontvangende DIEREN gedurende zeven dagen in een specifieke, ziekteverwekkervrije dierenvoorziening. Op de zevende dag, hebben een getrainde, gecertificeerde cesium 17 operator stel het cesium bron instrument om 70 centigrays van de totale body gamma bestraling per minuut te leveren. Plaats 10 muizen in een op maat ontworpen houder.Steek de houder in de bestralingskamer, lever 9 grijstinten totale lichaamstraling in 13 minuten. Breng de dieren dan terug naar hun kooien. De volgende ochtend, spray 70 procent ethanol over een hele twee tot zes mot oude C57 zwarte zes muis en gebruik schaar om de huid te verwijderen van het bekken naar de enkels.Gebruik tangen met de schaar om de femora en tibiae te verwijderen. Netjes trim de spieren van de botten. Snijd de proximale en distale uiteinden voor de tibiae en pak een scheenbeen met tangen.Steek een drie milliliter spuit uitgerust met een 27 gage naald in de beenmergholte en spoel het beenmerg in een 14 milliliter ronde bodembuis met 2,5 milliliter Hanks gebufferde zoutoplossing aangevuld met 2%foetale runderserum of HF2. Wanneer al het merg is verzameld, aspirate het weefsel meerdere malen door de 20 gage naald tip om de merg massa te verspreiden in een enkele suspensie voor het tellen. Om de beenmergkerncellen, of BMNC, te etiketteren voor het sorteren van de stroom, verzamelt u de cellen door centrifugalisatie en schorten u de pellet één keer tien tot de zevende BMNC per 90 microliter van HF2-concentratie op.Voeg vervolgens tien microliters van een biotinylated, anti-lijn antilichaam cocktail toe aan de celsuspensie gedurende 20 minuten incubatie bij 4 graden Celsius. Gevolgd door een centrifuge wassen in drie milliliter PBS. Stel de pellet opnieuw op in 100 microliter HF2 per een keer tien tot de zevende cellen.Ten tweede labelen de cellen met twee microliters van APC geconjugeerd anti biotine antilichaam. Na 20 minuets op vier graden Celsius, beschermd tegen licht, was de cellen in drie milliliter verse PBS. Stel de pellet in HF2 opnieuw op, aangevuld met 0,2 microgram per milliliter propidiumjodide op ijs.Kalibreer nu de stroomcytometriecelsorteerder met behulp van niet-gekleurde cellen om alle fotomultiplierbuizen, verstrooiings- en fluorescentieparameters binnen het lineaire bereik van elke detector te optimaliseren. Verkrijg drie monsters van 10.000 cellen voor de niet-gelabelde, PI-gelabelde en anti-lijn APC-gelabelde cellen. Analyseer aan het einde van het soort 1.000 cellen van elk monster om de zuiverheid en levensvatbaarheid van de gesorteerde cellen te bevestigen.Draai de monsters in de centrifuge. Dan opnieuw opschorten de pellets in 0,5 milliliter HF2 voor het tellen. Voor adoptieoverdracht van de gesorteerde cellen, meng 100 microliter van twee keer de naar de vijfde wilde-type BMNC van een con geniale ontvanger dier in steriele HF2.Met 100 microliter van twee tot vijf keer tien tot de vierde de gesorteerde donor BMNC van belang in steriele HF2 in een microcentrifuge buis per ontvanger dier. Laad een een milliliter spuit, uitgerust met een 28 gage per ontvanger met 200 microliter cellen. Plaats vervolgens de ontvangende muizen onder een warmtelamp om staartaderdilatatie te induceren.Lever de celmengsels aan elk dodelijk bestraald ontvangend dier via de staartader. Aangezien stamcel zelfvernieuwing is beperkt tot afstamming negatieve wild-type BMNC, afstamming negatieve, lage lijn positieve, en hoge lijn positieve cellen worden gesorteerd en getransplanteerd in wild-type ontvangers om de zelfvernieuwing capaciteit van elke cel populatie te bepalen. Adoptief getransplanteerde donortrans genetische BMNC van MDS modeldieren kunnen ex vivo onderscheiden door hun CD45.2 cel oppervlak marker expressie.Door 16 weken na transplantatie van afstamming negatieve BNMC, of ongesorteerde BMNC van transgene MDS donordieren, de transgene cellen uit concurreren met de wild-type cellen zoals blijkt uit een toenemend percentage van CD45.2 positieve donorcellen, waargenomen in het perifere bloed van de dodelijk bestraalde ontvangende dieren. Hier worden cellen van een leukemische transformatie van een muis die met transgene cellen MDS wordt getransplanteerd getoond. Let op de aanwezigheid van talrijke ontploffingen en onvolwassen vormen.Tijdens een poging tot de procedure, is het belangrijk om te onthouden om de tijd van ex vivo manipulatie te beperken, omdat het onnodige stress op de cellen kan plaatsen, wat resulteert in celdood of functioneel verlies. Na de ontwikkeling van deze techniek effent de weg voor de onderzoekers in het veld programma, voor het aanbrengen van maligniteit om de bron van de ziekte in genetisch gemanipuleerde muizen te verkennen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

Efficiënte Afleiding van retinale pigment epitheel cellen uit stamcellen

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

Een efficiënte methode om gededifferentieerde Fat cellen te verkrijgen

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Competitive Transplants to Evaluate Hematopoietic Stem Cell Fitness

Concurrerende Transplantaties om hematopoietische stamcellen Fitness Evalueer

The gold standard definition of a hematopoietic stem cell (HSC) is a cell that when transferred into an irradiated recipient will have the ability to ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Inductie van Acute Skeletal Muscle Regeneration door cardiotoxine Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

Een 5-m-dot-blot-analyse die het DNA-methyleringsniveau van chondrocytedifferentiatie quantificeert<em&gt; In Vitro</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Een nieuwe Mammary Fat Pad Transplantation Technique om de Vessel Generation van Vasculaire Endotheliale Stamcellen te visualiseren

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering van Humanized Botmarg Microenvironments in Mouse en hun visualisatie door Live Imaging

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Detection of Residual Donor Erythroid Progenitor Cells after Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Patients with Hemoglobinopathies

Detectie van residuele Donor Erythroid voorlopercellen na hematopoietische stamceltransplantatie voor patiënten met Hemoglobinopathieën

The presence of incomplete chimerism is noted in a large proportion of patients following bone marrow transplant for thalassemia major or sickle cell ...

Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

Klonen analyse van embryonale hematopoietische stamcellen precursoren met eencellige Index sorteren gecombineerd met Endothelial Niche co celkweek

The ability to study hematopoietic stem cell (HSC) genesis during embryonic development has been limited by the rarity of HSC precursors in the early ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Beoordeling van oxidatieve schade in de primaire muis oculaire oppervlaktecellen / stamcellen in reactie op Ultraviolet-C (UV-C) Schade

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...