Name: use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome
Uploaded: 2018-10-03T14:30:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt durch intramurale Research Program des National Cancer Institute, National Institutes of Health (Zuschuss Zahlen ZIA SC 010378 und v. 010983).

Die Tieren in diesem Artikel beschriebenen Verfahren wurde vom National Cancer Institute in Bethesda Animal Care und Use Committee genehmigt, und entsprechen den Richtlinien enthaltenen The Public Health Service Policy auf Humane Pflege und Verwendung von Labortieren, die Tierschutzgesetz und die Anleitung für die Pflege und Verwendung von Labortieren.
1. Zelle-Vorbereitung
<ol><li>Ernte des Knochenmarks kernhaltigen Zelle (BMNC)<ol>
<li>Verwenden Sie nur sterile Materialien. Sterilisieren ...

<ol>
	<li>Corey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+the+complexity+of+stem-cell+diseases.">Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).</li><li>Garcia-Manero, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+2015+Update+on+diagnosis,+risk-stratification+and+management.">Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management.</a> American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).</li><li>Heaney, M. L., Golde, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplasia.">Myelodysplasia.</a> The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes.">Myelodysplastic syndromes.</a> Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).</li><li>Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+features+of+myelodysplastic+syndromes:+results+from+regional+cancer+surveys+and+hospital-based+statistics.">Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics.</a> International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).</li><li>Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+genetic+pathways+and+cooperating+genetic+abnormalities+in+the+pathogenesis+of+therapy-related+myelodysplasia+and+acute+myeloid+leukemia.">Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).</li><li>Uy, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+the+clonal+structure+of+MDS+and+AML+in+response+to+epigenetic+therapy.">Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy.</a> Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).</li><li>Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98+gene+fusions+and+hematopoietic+malignancies:+common+themes+and+new+biologic+insights.">NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights.</a> Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).</li><li>Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98-HOXD13+transgenic+mice+develop+a+highly+penetrant,+severe+myelodysplastic+syndrome+that+progresses+to+acute+leukemia.">NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia.</a> Blood. 106 (1), 287-295 (2005).</li><li>Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preleukemic+acute+human+leukemia.">Preleukemic acute human leukemia.</a> Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).</li><li>Thanopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+NOD/SCID-beta2+microglobulin+null+mice+with+multilineage+neoplastic+cells+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome.">Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome.</a> Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).</li><li>Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+distinct+clonal+MDS-derived+hematopoietic+precursors+in+NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient+mice+after+intramedullary+transplantation+of+hematopoietic+and+stromal+cells.">Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells.</a> Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).</li><li>Benito, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID+mice+transplanted+with+marrow+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome+(MDS)+show+long-term+propagation+of+normal+but+not+clonal+human+precursors.">NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors.</a> Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).</li><li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit.">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li><li>Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+a+myelodysplastic+syndrome+by+a+long-term+repopulating+hematopoietic+cell.">Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).</li><li>Pietras, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+Distinct+Subsets+of+Lineage-Biased+Multipotent+Progenitors+Control+Blood+Production+in+Normal+and+Regenerative+Conditions.">Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions.</a> Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloablative+hematopoietic+stem+cell+transplantation+improves+survival+but+is+not+curative+in+a+pre-clinical+model+of+myelodysplastic+syndrome.">Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome.</a> PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).</li></ol>

Zwar MDS eine klonale hämatopoetische Stammzell-Störung, mdb "Stamm", oder initiierende Zellen wurden noch nicht charakterisiert. Wir zuvor nachweislich MDS transplantierbaren WT-Mäusen mit dem Knochenmark aus NHD13 Mäusen durch HSZT, gekennzeichnet durch macrocytic Anämie, Leukopenie, Neutropenie und morphologische Nachweis der Dysplasie15sein können. Darüber hinaus identifiziert wettbewerbsfähige Wiederbesiedlung Assays einen Vorteil Wachstum von Zellen aus dem Knochenmark NHD13 MDS. Zus...

Myelodysplastischen Syndromen (MDS) repräsentieren eine vielfältige Reihe von klonalen Blutkrankheiten, gekennzeichnet durch ineffektive Hämatopoese, morphologische Nachweis der Dysplasie und einer Neigung für die Transformation auf akute myeloische Leukämie (AML)1,2 ,3,4. Ineffektive Hämatopoese ist anerkannt als eine Verhaftung Reifung im Knochenmark und Ergebnisse im peripheren Blut zytopenien trotz hyperzelluläres Knochenmark1,3. Die Inzidenz von MDS wurde verschiedentlich als 2-12 Fälle pro 100.000 Personen pro Jahr in den Vereinigten Staaten geschätzt, und die Inzidenz von MDS steigt mit dem Alter, so dass dies eine wichtige Voraussetzung, angesichts der alternden Bevölkerung US3zu verstehen, 5. Obwohl die meisten Fälle von MDS keine klare Ursache haben, sind einige Fälle von MDS vermutlich aufgrund der Exposition gegenüber bekannten genotoxischen Agenzien, einschließlich Lösungsmittel wie Benzol und Krebs-Chemotherapie-6.
MDS-Patienten haben in der Regel Mutationen in der MDS Zellen7erworben. Obwohl relativ selten, haben eine Reihe von MDS-Patienten ausgewogenere chromosomale Translokationen Gene z. B. EVI1, NUP98, RUNX1 und MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman) erworben. Unser Labor hat ein langjähriges Interesse an Chromosom Translokationen, die NUP98 gen8beinhalten. Transgene Mäuse, express, ein NUP98-HOXD13 (NHD13)-Transgen geregelt durch den Projektträger Vav1 und Enhancer-Elemente zeigt alle Schlüsselfunktionen der MDS, einschließlich der peripheren Blut Leukopenie, morphologische Nachweis der Dysplasie und Transformation zu AML9 .
Obwohl MDS für mehr als 60 Jahren10anerkannt wurden und gelten als eine klonale Stammzell-Störung, wurden Bemühungen zur menschlichen MDS-Zelle in immungeschwächte Mäuse weiterhin weitgehend erfolglos, weil die MDS-Zellen schlecht11weiterhin, 12,13,14 und die Mäuse entwickeln keine klinischen Erkrankung. In einer Bemühung zu identifizieren, welche hämatopoetischen Zellen MDS übertragen können, wir wandte sich an das NHD13-Modell, und zeigte, dass wir MDS als Krankheit Einheit, die alle Merkmale der Kardinal menschlichen MDS weiterhin könnte, einschließlich der peripheren Blut zytopenien zeigten Dysplasie, und Transformation, AML15. In diesem Bericht stellen wir die technischen Details dieser Experimente sowie Ansätze für weitere fraktionieren Hämatopoetischen Stammzellen und Vorläuferzellen (HSPC), in einer Bemühung, MDS-initiierenden Zellen zu identifizieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-527F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45.2 antibody</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1800-15</td>
			<td>LOT# A077-T044O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>Monoject</td>
			<td>8881513934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>LOT# 5170418221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin antibodies</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-288</td>
			<td>LOT# 5171109046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>Excelint</td>
			<td>26027</td>
			<td>Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Lamp</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>E70001901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Cytec</td>
			<td>FACScan</td>
			<td>2 lasers, 5 color detectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS sorting instrument</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MOFLO ASTRIOS</td>
			<td>5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamma Irradiator</td>
			<td>Best Theratronics</td>
			<td>Gammacell 40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>RAM scientific</td>
			<td>76011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recipient mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>B6-LY5.1/Cr, CD45.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NUP98-HOXD13 mice</td>
			<td>n/a</td>
			<td>C57Bl/6, CD45.2</td>
			<td>Colony maintained at NIH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome

Myelodysplastischen Syndromen (MDS) sind eine heterogene Gruppe von Hämatopoetischen Stammzellen-Störungen, die durch ineffektive Hämatopoese, peripherem Blut Leukopenie, Dysplasie und eine Neigung für die Transformation zu akuter Leukämie definiert sind. NUP98-HOXD13 (NHD13) Transgene Mäuse rekapitulieren menschlichen MDS in Bezug auf die peripheren Blut Leukopenie, Dysplasie und Transformation zu akuter Leukämie. Wir zeigten bisher, dass MDS von gentechnisch hergestellten Maus mit MDS an Wildtyp Empfänger übertragen werden könnte, durch die Transplantation von MDS Knochenmark kernhaltigen Zellen (BMNC). Mehr die MDS-Zelle Herkunft klar zu verstehen, haben wir Konzepte für spezifische verpflanzen, immunophenotypisch definiert hämatopoetische Teilmengen. In diesem Artikel beschreiben wir den Prozess der Isolierung und Transplantation bestimmte Populationen von Hämatopoetischen Stammzellen und Vorläuferzellen. Nach Transplantation beschreiben wir Ansätze zur Beurteilung der Effizienz der Transplantation und Persistenz der MDS Spenderzellen.

Wir zeigen repräsentative Zahlen für Ergebnisse mehrerer Experimente. Abbildung 1 zeigt eine repräsentative Durchflusszytometrie Sortierung Experiment. Während normaler Hämatopoetischer Differenzierung wie Zellen mit einer bestimmten hämatopoetischen Linie engagieren sie erwerben Linie definieren Zelle oberflächenmarker und das Potenzial für Selbsterneuerung zu verlieren. Daher ist in Wildtyp Mäusen, Stammzell-Selbsterneuerung auf Linie-Negative BMNC...

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Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Einsatz von hämatopoetischen Stammzelltransplantation zu beurteilen, den Ursprung des myelodysplastischen Syndroms

Wir beschreiben die Verwendung von hämatopoetischen Stammzelltransplantation (HSCT) Das maligne Potential der gentechnisch veränderten blutbildenden Zellen zu beurteilen. HSCT ist nützlich für die Bewertung der verschiedenen malignen hämatopoetischen Zellen in Vivo sowie die Generierung einer großen Kohorte von Mäusen mit myelodysplastischen Syndromen (MDS) oder Leukämie um neue Therapien zu bewerten.

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

Diese Methode kann helfen, einige Fragen in der Methode der Bösartigkeit Feld über die Charakterisierung einer Zelle, die eine Malignität initiieren zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie eine Grundlage für die funktionelle Analyse dieser Krebsstammzellen bietet. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf den Ort, an dem die Therapie von myelodysplastischen Syndromen oder MDS hilft, da sie bei der Identifizierung der Krankheit helfen kann, die Zellen ausihrittiert.Um die Empfänger auf den Adoptivtransfer vorzubereiten, stellen Sie eine Woche vor der Transplantation steriles Wasser zur Verfügung, das mit 100 Milligramm pro Liter Ciprofloxacin ergänzt wird, um den Empfänger ANIMALS für sieben Tage in einer bestimmten, pathogenfreien Tieranlage zu erhalten. Am siebten Tag haben sie einen geschulten, zertifizierten Cäsium-17-Operator eingestellt, der das Cäsium-Quellinstrument so eingestellt hat, dass 70 CentigrayS der gesamten Körpergamma-Bestrahlung pro Minute bereitgestellt werden. Platz 10 Mäuse in einem maßgeschneiderten Halter.Setzen Sie den Halter in die Bestrahlungskammer ein, liefern Sie 9 Graustufen gesamtkörperbestrahlung in 13 Minuten. Dann bringen Sie die Tiere in ihre Käfige zurück. Am nächsten Morgen sprühen Sie 70 Prozent Ethanol über ganze zwei bis sechs Motten alte C57 schwarze Sechsmaus und verwenden Sie eine Schere, um die Haut aus dem Becken zu den Knöcheln zu entfernen.Verwenden Sie Zangen mit der Schere, um die Femora und Tibiae zu entfernen. Schneiden Sie die Muskeln sauber von den Knochen. Schneiden Sie die proximalen und distalen Enden für die Tibiae und nehmen Sie eine Tibia mit Zange.Legen Sie eine Drei-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gage-Nadel in die Knochenmarkhöhle ein und spülen Sie das Knochenmark in ein 14 Milliliter rundes Unterrohr mit 2,5 Millilitern Hanks gepufferter Salinelösung, ergänzt mit 2%fetalem Rinderserum oder HF2. Wenn das gesamte Mark gesammelt wurde, saugen Sie das Gewebe mehrmals durch die 20-Gage-Nadelspitze, um die Markmasse in eine einzige Suspension zum Zählen zu zerstreuen. Um die Knochenmarkkernzellen (BMNC) für die Durchflusssortierung zu kennzeichnen, sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugalisierung und setzen Sie das Pellet um ein mal zehn bis siebtes BMNC pro 90 Mikroliter HF2-Konzentration wieder auf.Als nächstes fügen Sie zehn Mikroliter eines biotinylierten Anti-Lineage-Antikörpercocktails für eine 20-minütige Inkubation bei 4 Grad Celsius in die Zellsuspension. Gefolgt von einer Zentrifuge waschen in drei Milliliter PBS. Das Pellet in 100 Mikroliter HF2 pro zehn mal bis zur siebten Zelle aussetzen.Etikettieren Sie die Zellen sekundär mit zwei Mikrolitern konjugierten Antibiotin-Antikörpers. Nach 20 Minuets bei vier Grad Celsius, vor Licht geschützt, waschen Sie die Zellen in drei Milliliter nfrischem PBS. Das Pellet in HF2, ergänzt um 0,2 Mikrogramm pro Milliliter Propidiumjodid auf Eis, wird wieder ausgesetzt.Kalibrieren Sie nun den Flow-Zytometrie-Zellsortierer mit ungefärbten Zellen, um alle Photomultiplier-Röhren, Streu- und Fluoreszenzparameter innerhalb des linearen Bereichs jedes Detektors zu optimieren. Erwerben Sie drei Proben von 10.000 Zellen für die nicht beschrifteten, PI-beschrifteten und Anti-Lineage-APC-markierten Zellen. Analysieren Sie am Ende der Sortierung 1 000 Zellen aus jeder Probe, um die Reinheit und Lebensfähigkeit der sortierten Zellen zu bestätigen.Drehen Sie die Proben in der Zentrifuge nach unten. Dann die Pellets in 0,5 Milliliter HF2 zum Zählen wieder aussetzen. Für die Adoptivübertragung der sortierten Zellen 100 Mikroliter des zweifachen bis fünften Wildtyp-BMNC von einem kongenen Empfängertier in sterilem HF2 mischen.Mit 100 Mikrolitern von zwei bis fünf Mal zehn bis vier interessierte sich der sortierte Spender BMNC für steriles HF2 in einem Mikrozentrifugenrohr pro Empfängertier. Laden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze, ausgestattet mit einem 28-gage pro Empfänger mit 200 Mikroliter Zellen. Legen Sie dann die Empfängermäuse unter eine Wärmelampe, um eine Schwanzvenendilatation zu induzieren.Liefern Sie die Zellmischungen über die Schwanzvene an jedes tödlich bestrahlte Empfängertier. Da die Stammzell-Selbsterneuerung auf Linien negative Sendeart BMNC beschränkt ist, werden Liniennegativ, niedrige Abstammung positive und hohe Abstammung positive Zellen sortiert und in Wildtyp-Empfänger transplantiert, um die Selbsterneuerungskapazität jeder Zellpopulation zu bestimmen. Adoptiert transplantierte Spender transgenetische BMNC von MDS-Modelltieren kann ex vivo durch ihre CD45.2-Zell-Oberflächenmarker-Expression unterschieden werden.16 Wochen nach der Transplantation von leinennegativem BNMC oder unsortiertem BMNC von transgenen MDS-Spendertieren konkurrieren die transgenen Zellen mit den Wildtypzellen, wie ein zunehmender Prozentsatz von CD45.2-positiven Spenderzellen zeigt, die im peripheren Blut der tödlich bestrahlten Empfängertiere beobachtet werden. Hier werden Zellen aus einer leukämischen Transformation einer Maus gezeigt, die mit transgenen MDS-Zellen transplantiert wurde. Beachten Sie das Vorhandensein zahlreicher Explosionen und unreifer Formen.Beim Versuch des Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, die Zeit der Ex-vivo-Manipulation zu begrenzen, da es übermäßige Belastung der Zellen setzen kann, was zu Zelltod oder Funktionsverlust führt. Nach der Entwicklung ebnet diese Technik den Weg für die Forscher im Feldprogramm, für die Anwendung von Malignität, um die Quelle der Krankheit bei gentechnisch veränderten Mäusen zu erforschen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

Effiziente Ableitung von Retinapigmentepithel-Zellen aus Stammzellen

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

Eine effiziente Methode erhalten Sie Dedifferenzierte Fettzellen

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Competitive Transplants to Evaluate Hematopoietic Stem Cell Fitness

Competitive Transplantationen Blutstammzell-Fitness zur Bewertung

The gold standard definition of a hematopoietic stem cell (HSC) is a cell that when transferred into an irradiated recipient will have the ability to ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Die Induktion von Akute Skelettmuskelregeneration durch Cardio Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

Ein 5-mC-Dot-Blot-Assay, der den DNA-Methylierungsgrad der Chondrozyten-Dedifferenzierung quantifiziert<em&gt; In vitro</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Eine neuartige Mamma-Fat-Pad-Transplantationstechnik zur Visualisierung der Gefäßerzeugung von vaskulären endothelialen Stammzellen

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering von humanisierten Knochenmark-Mikroumgebungen in der Maus und ihre Visualisierung durch Live Imaging

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Detection of Residual Donor Erythroid Progenitor Cells after Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Patients with Hemoglobinopathies

Erkennung von passives Spender erythroiden Vorläuferzellen nach hämatopoetische Stammzell-Transplantation bei Patienten mit Hämoglobinopathien

The presence of incomplete chimerism is noted in a large proportion of patients following bone marrow transplant for thalassemia major or sickle cell ...

Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

Klonale Analyse der embryonalen Hämatopoetischen Stammzellen Vorstufen mit einzelligen Index sortieren kombiniert mit Endothelzellen Nischenkultur Co

The ability to study hematopoietic stem cell (HSC) genesis during embryonic development has been limited by the rarity of HSC precursors in the early ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Bewertung von oxidativen Schäden in den primären Maus-Augen-Oberflächenzellen/Stammzellen als Reaktion auf Uv-C-Schäden (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...