Name: use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome
Uploaded: 2018-10-03T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מגזר תוכנית המחקר של המכון הלאומי לסרטן, מכון הבריאות הלאומי (מענק המספרים זיא SC 010378 ו לפנה ס 010983).

בעלי חיים בהליכים המתוארים במאמר זה אושרו על-ידי המכון הלאומי לסרטן ב Bethesda חיה אכפת והוועדה שימוש ולאחר לציית למדיניות הנכלל מדיניות שירות בריאות הציבור על טיפול אנושי, שימוש של חיות מעבדה, חוק צער בעלי חיים, המדריך עבור טיפול והשתמש של חיות מעבדה.
1. תא הכנה
<ol><li>מח עצם האיס?...

<ol>
	<li>Corey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+the+complexity+of+stem-cell+diseases.">Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).</li><li>Garcia-Manero, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+2015+Update+on+diagnosis,+risk-stratification+and+management.">Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management.</a> American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).</li><li>Heaney, M. L., Golde, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplasia.">Myelodysplasia.</a> The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).</li><li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes.">Myelodysplastic syndromes.</a> Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).</li><li>Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+features+of+myelodysplastic+syndromes:+results+from+regional+cancer+surveys+and+hospital-based+statistics.">Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics.</a> International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).</li><li>Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+genetic+pathways+and+cooperating+genetic+abnormalities+in+the+pathogenesis+of+therapy-related+myelodysplasia+and+acute+myeloid+leukemia.">Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).</li><li>Uy, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+the+clonal+structure+of+MDS+and+AML+in+response+to+epigenetic+therapy.">Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy.</a> Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).</li><li>Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98+gene+fusions+and+hematopoietic+malignancies:+common+themes+and+new+biologic+insights.">NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights.</a> Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).</li><li>Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NUP98-HOXD13+transgenic+mice+develop+a+highly+penetrant,+severe+myelodysplastic+syndrome+that+progresses+to+acute+leukemia.">NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia.</a> Blood. 106 (1), 287-295 (2005).</li><li>Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preleukemic+acute+human+leukemia.">Preleukemic acute human leukemia.</a> Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).</li><li>Thanopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+NOD/SCID-beta2+microglobulin+null+mice+with+multilineage+neoplastic+cells+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome.">Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome.</a> Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).</li><li>Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+distinct+clonal+MDS-derived+hematopoietic+precursors+in+NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient+mice+after+intramedullary+transplantation+of+hematopoietic+and+stromal+cells.">Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells.</a> Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).</li><li>Benito, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID+mice+transplanted+with+marrow+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome+(MDS)+show+long-term+propagation+of+normal+but+not+clonal+human+precursors.">NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors.</a> Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).</li><li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit.">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li><li>Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+a+myelodysplastic+syndrome+by+a+long-term+repopulating+hematopoietic+cell.">Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).</li><li>Pietras, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+Distinct+Subsets+of+Lineage-Biased+Multipotent+Progenitors+Control+Blood+Production+in+Normal+and+Regenerative+Conditions.">Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions.</a> Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloablative+hematopoietic+stem+cell+transplantation+improves+survival+but+is+not+curative+in+a+pre-clinical+model+of+myelodysplastic+syndrome.">Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome.</a> PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).</li></ol>

למרות MDS הפרעה בתאי גזע hematopoietic המשובטים, MDS "גזע", או תאים ייזום, לא עוד היה שאפיינו. אנחנו הפגינו בעבר כי MDS ניתן שיפותחו לעכברים WT באמצעות מח העצם של עכברים NHD13 מאת HSCT, המאופיין האנמיה, לויקופניה, נויטרופניה, ראיות מורפולוגיות של דיספלזיה15. בנוסף, מבחני איכלוס תחרותי מזוהה יתרון ...

תסמונות Myelodysplastic (MDS) מייצגים קבוצה מגוונת של הפרעות במחזור הדם המשובטים מאופיין hematopoiesis לא יעילה, ראיות מורפולוגיות של דיספלסיה, נטייה לשינוי לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML)1,2 3, ,4. Hematopoiesis לא יעיל מזוהה כמספר מעצר ההבשלה במח העצם, ותוצאות דם היקפיים cytopenias למרות במקרי מח עצם1,3. השכיחות של MDS הוערך בדרכים שונות כמו 2-12 מקרים לכל 100,000 אנשים מדי שנה בארצות הברית, השכיחות של MDS עולה עם הגיל, שהופך את תנאי חשוב להבין לאור הזדקנות האוכלוסייה בארה ב3, 5. למרות ברוב המקרים של MDS אין אטיולוגיה ברורה, בחלק מהמקרים MDS הם חשבו להיות עקב חשיפה לסוכנים genotoxic ידועים, לרבות ממיסים כמו בנזן, כימותרפיה לסרטן6.
בדרך כלל חולי MDS שרכשו מוטציות בגן התאים MDS7. למרות נדיר יחסית, מספר חולי MDS שרכשו translocations כרומוזומלית מאוזנת המערבים גנים כגון NUP98, EVI1, RUNX1 ו- MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). המעבדה שלנו יש עניין ארוכת שנים translocations כרומוזום, שכרוכים ג'ין NUP988. העכברים הטרנסגניים כך מפורשת transgene NUP98-HOXD13 (NHD13) מוסדר על ידי האמרגן Vav1, משפר אלמנטים להציג את כל התכונות העיקריות של MDS, כולל cytopenias דם היקפיים, ראיות מורפולוגיות של דיספלסיה, וטרנספורמציה ל AML9 .
למרות MDS זוהו למעלה מ-60 שנה10, נחשבים הפרעה בתאי גזע המשובטים, מאמצים engraft התא האנושי MDS בעכברים immunodeficient לא הצליחו במידה רבה, כי התאים MDS engraft גרוע11, 12,13,14 ו העכברים אינם מפתחים מחלה קלינית. במאמץ לזהות אילו תאים hematopoietic יכול לשדר MDS, אנחנו הפך למודל NHD13, והראה כי אנחנו יכולים engraft MDS כישות המחלה הראה את כל התכונות קרדינל של MDS האנושי, כולל cytopenias דם היקפיים, דיספלסיה, ו טרנספורמציה AML15. בדו ח זה, אנו מציגים את הפרטים הטכניים של ניסויים אלה, כמו גם גישות נוספות fractionate hematopoietic גזע ותאים קודמן (HSPC), בניסיון לזהות תאים ייזום-MDS.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-527F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45.2 antibody</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1800-15</td>
			<td>LOT# A077-T044O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>Monoject</td>
			<td>8881513934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>LOT# 5170418221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin antibodies</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-288</td>
			<td>LOT# 5171109046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>Excelint</td>
			<td>26027</td>
			<td>Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Lamp</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>E70001901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Cytec</td>
			<td>FACScan</td>
			<td>2 lasers, 5 color detectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS sorting instrument</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MOFLO ASTRIOS</td>
			<td>5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamma Irradiator</td>
			<td>Best Theratronics</td>
			<td>Gammacell 40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>RAM scientific</td>
			<td>76011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recipient mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>B6-LY5.1/Cr, CD45.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NUP98-HOXD13 mice</td>
			<td>n/a</td>
			<td>C57Bl/6, CD45.2</td>
			<td>Colony maintained at NIH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome

תסמונות Myelodysplastic (MDS) הם קבוצה מגוונת של תא גזע hematopoietic הפרעות המוגדרות על-ידי hematopoiesis לא יעילה, cytopenias דם היקפיים, דיספלסיה, נטייה לשינוי כדי לוקמיה חריפה. העכברים הטרנסגניים NUP98-HOXD13 (NHD13) מסכם את הדברים MDS האנושי במונחים של דם היקפיים cytopenias דיספלזיה, טרנספורמציה כדי לוקמיה חריפה. אנחנו בעבר הראו כי MDS יכול להיות מועבר מן עכבר מהונדסים עם MDS פראי-סוג הנמענים על-ידי משתילים MDS תאים במח העצם nucleated (BMNC). יותר מבין בבירור את התא MDS ממוצא, פותחו גישות להשתיל ספציפי, immunophenotypically מוגדרת hematopoietic קבוצות משנה. במאמר זה, אנו מתארים את תהליך בידוד משתילים אוכלוסיות ספציפיות של גזע hematopoietic, ובתאים. בעקבות ההשתלה, נתאר גישות כדי להעריך את היעילות של השתלת ויכולת ההתמדה של התאים MDS התורם.

אנו מראים דמויות נציג עבור התוצאות של מספר ניסויים. איור 1 מראה של cytometry זרימה נציג מיון הניסוי. במהלך התמיינות hematopoietic נורמלי, כמו התאים להיות מחויבים שושלת hematopoietic ספציפיים, הם רוכשים מגדיר-שושלת היוחסין סמני פני שטח התא, לאבד את פוטנציאל התחדשות עצמית. לכ...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome at JoVE.com

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

השימוש השתלת תא גזע Hematopoietic להעריך את מקורם של התסמונת המיאלודיספלסטית

אנו מתארים את השימוש השתלת תא גזע hematopoietic (HSCT) כדי להעריך את פוטנציאל ממאיר של תאים מהונדסים גנטית hematopoietic. HSCT שימושית לצורך הערכת שונים תאים ממאירים hematopoietic ויוו , כמו גם יצירת קבוצה גדולה של עכברים עם תסמונות myelodysplastic (MDS) או לוקמיה להעריך טיפולים חדשניים.

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על כמה שאלות בשיטה של שדה ממאירות על אפיון של תא ליזום ממאירות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מספקת בסיס לניתוח תפקודי של תאי גזע סרטניים אלה. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב למקום שבו הטיפול של תסמונות myelodysplastic או MDS, כפי שהוא יכול לסייע בזיהוי של המחלה יוזם תאים.כדי להכין את הנמענים להעברה מאמצת, שבוע לפני ההשתלה לספק מים סטריליים בתוספת 100 מיליגרם לליטר של ציפרופלוקסאצין כדי con genic הנמען בעלי חיים במשך שבעה ימים במתקן מסוים, ללא פתוגן בעלי חיים. ביום השביעי, יש מאומן, מוסמך צסיום 17 מפעיל להגדיר את מכשיר מקור צסיום לספק 70 centigrayS של הקרנה גמא הגוף הכולל לדקה. מניחים 10 עכברים במחזיק מעוצב בהתאמה אישית.הכנס את המחזיק לתא ההקרנה, לספק 9 אפורים הכולל הקרנה הגוף ב 13 דקות. ואז להחזיר את החיות לכלובים שלהם. למחרת בבוקר, לרסס 70 אחוז אתנול על כל שניים עד שישה עש ישן C57 שחור שישה עכבר ולהשתמש מספריים כדי להסיר את העור מהאגן לקרסוליים.השתמש מדפים עם המספריים כדי להסיר את הירך ואת השוקה. חותכים בצורה נקייה את השרירים מהעצמות. חותכים את הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים עבור השוקה ומרים השוקה אחת עם מלקעות.הכנס מזרק שלושה מיליליטר מצויד מחט 27 gage לתוך חלל מח העצם לשטוף את מח העצם לתוך צינור תחתון עגול 14 מיליליטר המכיל 2.5מיליליטרS של הנקס חיץ תמיסת מלח בתוספת 2% נסיוב חזיר עוברי או HF2. כאשר כל מח העצם נאסף, שאפו את הרקמה מספר פעמים דרך קצה מחט 20 gage כדי לפזר את מסת מח העצם לתוך השעיה אחת לספירה. כדי לתייג את תאי מח העצם הגרעינים, או BMNC, למיון זרימה, לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגליזציה ולהשעות מחדש את גלולה באחת פעמים עשרה עד BMNC השביעי לכל 90 microliters של ריכוז HF2.לאחר מכן, מוסיפים עשרה מיקרוליטרים של קוקטייל נוגדנים ביוטיניילציה נגד שושלת להשעיית התא למשך 20 דקות דגירה ב-4 מעלות צלזיוס. ואחריו שטיפת צנטריפוגה בשלושה מיליליטר של PBS. להשעות מחדש את גלולה ב 100 microliters של HF2 לכל אחד פעמים עשר עד התאים השביעי.שנית, תייג את התאים עם שני מיקרוליטרים של נוגדן אנטי ביוטין גדיד APC. לאחר 20 מינואים בארבע מעלות צלזיוס, מוגנים מפני אור, לשטוף את התאים בשלושה מיליליטר של PBS טרי. להשעות מחדש את גלולה HF2 בתוספת 0.2 מיקרוגרם למיליליטר של יודיד פרופידיום על קרח.עכשיו לכייל את סדרן תא cytometry זרימה באמצעות תאים נגועים כדי למטב את כל צינורות photomultiplier, פיזור, ופרמטרים פלואורסצנטיים בתוך הטווח ליניארי של כל גלאי. לרכוש שלוש דגימות של 10, 000 תאים עבור תאים APC ללא תווית, PI שכותרתו ואנטי שושלת APC שכותרתו. בסוף המיון, לנתח 1, 000 תאים מכל מדגם כדי לאשר את הטוהר ואת הכדאיות של התאים ממוינים.תסובב את הדגימות בצנטריפוגה. ואז להשעות את כדורי ב 0.5 מיליליטר של HF2 לספירה. להעברה מאמצת של התאים הממוינים, יש לערבב 100 מיקרוליטרים של פי שניים מ-BMNC מסוג הבר החמישי מבעל חיים בעל קון ג'יני ב-HF2 סטרילי.עם 100 מיקרוליטרים של פעמיים עד חמש פעמים עשר עד הרביעי התורם הממוין BMNC של עניין HF2 סטרילי בצינור מיקרו צנטריפוגה לכל בעל חיים הנמען. טען מזרק אחד מיליליטר, מצויד 28 gage לכל נמען עם 200 microliters של תאים. לאחר מכן, מניחים את העכברים המטופל תחת מנורת חום כדי לגרום וריד הזנב תפוגה.מעבירים את תערובות התאים לכל חיה נמענת מוקרנת קטלנית דרך וריד הזנב. כאשר התחדשות עצמית של תאי גזע מוגבלת לשושלת BMNC שלילית מסוג פראי, שושלת שלילית, שושלת שלילית, חיובית שושלת נמוכה ותאים חיוביים שושלת גבוהה ממוינים ומושתלים לנמענים מסוג פראי כדי לקבוע את יכולת ההתחדשות העצמית של כל אוכלוסיית תא. BMNC טרנס טרנס מושתל מאמץ מבעלי חיים מודל MDS ניתן להבדיל ex vivo על ידי ביטוי סמן משטח התא CD45.2 שלהם.על ידי 16 שבועות לאחר השתלת שושלת שלילית BNMC, או BMNC ממוין מבעלי חיים תורמים MDS מהודק, התאים מהודק החוצה להתחרות בתאים מסוג הבר כפי שמוצג על ידי אחוז גדל והולך של CD45.2 תאים תורמים חיוביים, נצפה בדם ההיקפי של בעלי חיים הנמען מוקרן קטלנית. כאן מוצגים תאים מטרנספורמציה לויקמית מעכבר המושתל בתאי MDS מהודרים. שים לב לנוכחותם של פיצוצים רבים וצורות לא בוגרות.בעת ניסיון ההליך, חשוב לזכור להגביל את הזמן של מניפולציה ex vivo, כפי שהוא יכול לשים מתח מופרז על התאים, וכתוצאה מכך מוות תאי או אובדן תפקודי. לאחר התפתחותה טכניקה זו סוללת את הדרך עבור החוקרים בתוכנית השדה, לשים ממאירות לחקור את מקור המחלה בעכברים מהונדסים גנטית.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

גזירה יעילה של תאי הרשתית פיגמנט האפיתל מתאי גזע

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

שיטה יעילה להשיג תאי Dedifferentiated שומן

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Competitive Transplants to Evaluate Hematopoietic Stem Cell Fitness

השתלות תחרותיות להערכת כושר תאי גזע Hematopoietic

The gold standard definition of a hematopoietic stem cell (HSC) is a cell that when transferred into an irradiated recipient will have the ability to ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

אינדוקציה של התחדשות שריר שלד החריף ידי Cardiotoxin הזרקה

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

5-mc נקודה כתם Assay לכמת את מתילציה DNA רמת Chondrocyte Dedifiationiation<em&gt; במבחנה</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

רומן חדש פאט שומן טכניקת השתלת לדמיין את כלי השיט הדור של כלי הדם בתאי גזע אנדותל

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

הנדסת ביו-הנדסה של Microenvironments מוח העצם של עכבר ויזואליזציה שלהם על ידי הדמיה חיה

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Detection of Residual Donor Erythroid Progenitor Cells after Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Patients with Hemoglobinopathies

זיהוי של התורם שיורית Erythroid ובתאים לאחר השתלת תא גזע Hematopoietic עבור חולים עם פתולוגיות של המוגלובין

The presence of incomplete chimerism is noted in a large proportion of patients following bone marrow transplant for thalassemia major or sickle cell ...

Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

ניתוח המשובטים של תא גזע Hematopoietic מבשרי באמצעות אינדקס תא בודד מיון משולב עם תאי אנדותל נישה תרבות משותפת

The ability to study hematopoietic stem cell (HSC) genesis during embryonic development has been limited by the rarity of HSC precursors in the early ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

הערכה של נזק חמצוני בעכבר הראשי פני השטח העינית/תאים גזע בתגובה אולטרה סגול (UV-C) נזק

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...