Name: use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome
Uploaded: 2018-10-03T14:30:00
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이 작품은 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 건강의 국가 학회 (ZIA SC 010378와 BC 010983 번호 부여).

이 문서에서 설명 하는 동물 절차 베 데스 다 동물 관리 및 사용 위원회, 국립 암 연구소에 의해 승인 했다 그리고 인간적 관심과 실험실 동물의 사용에는 공중 보건 서비스 정책에 포함 된 정책 준수는 동물 복지 행위, 그리고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드.
1. 세포 준비
<ol><li>수확 골 nucleated 세포 (BMNC)<ol>
<li>메 마른 재료만을 사용 합니다. 소독 증기 압력솥을 사?...

<ol>
	<li>Corey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+the+complexity+of+stem-cell+diseases.">Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).</li><li>Garcia-Manero, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+syndromes:+2015+Update+on+diagnosis,+risk-stratification+and+management.">Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management.</a> American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).</li><li>Heaney, M. L., Golde, D. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preleukemic+acute+human+leukemia.">Preleukemic acute human leukemia.</a> Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).</li><li>Thanopoulou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+NOD/SCID-beta2+microglobulin+null+mice+with+multilineage+neoplastic+cells+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome.">Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome.</a> Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).</li><li>Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. 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I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID+mice+transplanted+with+marrow+from+patients+with+myelodysplastic+syndrome+(MDS)+show+long-term+propagation+of+normal+but+not+clonal+human+precursors.">NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors.</a> Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).</li><li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit.">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li><li>Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+a+myelodysplastic+syndrome+by+a+long-term+repopulating+hematopoietic+cell.">Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).</li><li>Pietras, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+Distinct+Subsets+of+Lineage-Biased+Multipotent+Progenitors+Control+Blood+Production+in+Normal+and+Regenerative+Conditions.">Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions.</a> Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li><li>Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloablative+hematopoietic+stem+cell+transplantation+improves+survival+but+is+not+curative+in+a+pre-clinical+model+of+myelodysplastic+syndrome.">Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome.</a> PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).</li></ol>

MDS는 클론 조 혈 줄기 세포 장애, MDS "줄기", 또는 시작 셀 특징 되었습니다 아직 없습니다. 우리는 이전 MDS transplantable WT 쥐 HSCT, macrocytic 빈혈증, leukopenia, 호 중구 감소 증, 그리고 발육 이상15의 morphologic 증거 특징에 의해 NHD13 쥐에서 골 수를 사용 하 여 될 수 있는 시연 했다. 또한, 경쟁력 있는 repopulation 분석 NHD13 MDS 골 수에서 세포의 성장 우위를 확인. 함께 찍은, 이러한 결과 MDS...

형성 증후군 (MDS) 대표 클론 혈액 장애 효과 조, 발육 이상의 morphologic 증거 및 급성 골수성 백혈병 (AML)1,2로 변환에 대 한 성향 특징의 다양 한 세트 ,,34. 효과 조 골 수에서 성숙 체포 및 hypercellular 골1,3에 불구 하 고 주변 혈액 cytopenias 결과 인식 됩니다. MDS의 발병 률 각종 2-12의 경우는 미국에서 매년 100, 000 명 당으로 추정 하 고 MDS의 발병 률 증가 나이, 노화 미국 인구3, 주어진 이해 하는 중요 한 조건 만들기 5. MDS의 대부분의 경우는 더 명확한 병 인, MDS의 경우 벤젠, 그리고 암 화학요법6같은 용 매를 포함 하 여 알려진된 차적인 에이전트에 노출 때문에 생각 된다.
MDS 환자 일반적으로 MDS 셀7에 돌연변이 인수 했습니다. 비록 상대적으로 드문, MDS 환자 수 유전자 NUP98, EVI1, RUNX1, MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman) 등을 포함 하는 균형된 염색체 translocations를 인수 했습니다. 우리 연구소는 염색체 translocations, NUP98 유전자8을 포함에 대 한 오랜 관심 있습니다. 유전자 변형 마우스 NUP98-HOXD13 (NHD13) transgene Vav1 발기인에 의해 규제 및 증강 요소 표시의 모든 MDS, 주변 혈액 cytopenias, 발육 이상, 및 AML9 변환 형태 론 적 증거를 포함 하 여 주요 기능을 표현 .
MDS는 60 년10에 대 한 인정을 받고 있다 고 클론 줄기 세포 장애로 간주 됩니다, engraft 인적 MDS 셀 immunodeficient 마우스에 노력 하지 크게 성공 했습니다, MDS 셀 engraft 저조한11, 때문에 12,,1314 및 쥐 임상 질병을 개발 하지 않습니다. 조 혈 모 세포는 MDS를 전송할 수 있습니다 식별 하는 노력에서 우리 NHD13 모델 그리고 모든 주변 혈액 cytopenias를 포함 하 여 인적 MDS의 기본적인 기능을 보여준 질병 엔터티로 MDS를 engraft 수 있는 우리가 나타났다 발육 이상, 그리고 AML15변환입니다. 이 보고서에서 우리는 MDS 시작 셀을 식별 하기 위해에서 이러한 실험, 뿐만 아니라 조 혈 줄기와 선구자 세포 (HSPC), 더 이상 충분치 접근의 기술적인 세부 사항 제시.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-527F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD45.2 antibody</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1800-15</td>
			<td>LOT# A077-T044O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>Monoject</td>
			<td>8881513934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20-G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>LOT# 5170418221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin antibodies</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-288</td>
			<td>LOT# 5171109046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>Excelint</td>
			<td>26027</td>
			<td>Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Lamp</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>E70001901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Cytec</td>
			<td>FACScan</td>
			<td>2 lasers, 5 color detectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS sorting instrument</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MOFLO ASTRIOS</td>
			<td>5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gamma Irradiator</td>
			<td>Best Theratronics</td>
			<td>Gammacell 40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tube</td>
			<td>RAM scientific</td>
			<td>76011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recipient mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>B6-LY5.1/Cr, CD45.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NUP98-HOXD13 mice</td>
			<td>n/a</td>
			<td>C57Bl/6, CD45.2</td>
			<td>Colony maintained at NIH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of hematopoietic stem cell transplantation to assess the origin of myelodysplastic syndrome

형성 증후군 (MDS) 효과 조, 말 초 혈액 cytopenias, 발육 이상, 급성 백혈병에 변환에 대 한 성향에 의해 정의 되는 조 혈 줄기 세포 장애의 다양 한 그룹입니다. NUP98-HOXD13 (NHD13) 유전자 변형 마우스 주변 혈액 cytopenias, 발육 이상, 및 급성 백혈병 변환 인적 MDS 정리. 우리는 이전는 MDS 옮겨질 수 있었다 MDS와 유전자 조작된 마우스에서 야생-타입 받는 사람에 게 이식 MDS 골 nucleated 세포 (BMNC)에 의해 설명 했다. 더 명확 하 게 근원의 MDS 셀 이해, 특정 이식 하는 방법을 개발 했습니다, 그리고 immunophenotypically 조 혈 하위 집합을 정의 합니다. 이 문서에서 우리는 분리 하 고 조 혈 줄기와 조상 세포의 특정 인구를 이식 하는 과정을 설명 합니다. 따라 이식, 이식의 효율성 및 기증자 MDS 셀의 지 속성을 평가 하는 방법 설명 합니다.

우리는 몇 가지 실험의 결과 대 한 대표적인 수치를 보여줍니다. 그림 1 실험 정렬 대표 cytometry를 보여준다. 정상적인 조 혈 차별화, 동안 세포가 특정 조 혈 혈통에 최선을 다하고 그들은 혈통 정의 세포 표면 마커를 확보 고 자기 갱신에 대 한 가능성을 잃게. 따라서, 야생-타입 마우스, 줄기 세포 자체-갱신은 혈통 부정적인 BMNC에 국한. 이 실험에서 ?...

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Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

조 혈 줄기 세포 이식 Myelodysplastic 증후군의 평가에 사용

우리는 유전자 조작된 조 혈 모 세포의 악성 잠재력을 평가 하기 위해 조 혈 모 세포 이식 (HSCT)의 사용을 설명 합니다. HSCT 소설 치료를 평가 하 형성 증후군 (MDS) 또는 백혈병 생쥐의 대형 코 호트 생성 뿐만 아니라 다양 한 악성 조 혈 모 세포에 vivo에서 평가 대 한 유용 합니다.

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

이 방법은 악성 종양을 시작하는 세포의 특성화에 대한 악성 필드의 방법에있는 몇 가지 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 이러한 암 줄기 세포의 기능적 분석을 위한 기초를 제공한다는 것입니다. 이 기술의 의미는 밀로이드 플라스틱 증후군 또는 MDS의 치료가 세포를 시행성화하는 질병의 식별에 도움이 될 수 있기 때문에 확장됩니다.입양 이송을 위해 수령인을 준비하기 위해 이식 1주일 전에 시프로플로사신 리터당 100밀리그램을 보충하여 특정 병원체 가없는 동물 시설에서 7일 동안 genic 받는 사람 동물을 속입니다. 일곱 째 날, 훈련된 공인 세슘 17 운영자가 분당 총 신체 감마 조사 70센티미터를 전달하기 위해 세슘 소스 장비를 설정했습니다. 사용자 정의 설계 홀더에 10 마우스를 배치합니다.홀더를 조사실에 삽입하고 13분 만에 9개의 회색 총 신체 조사를 제공합니다. 그런 다음 동물을 새장에 반환합니다. 다음 아침, 전체 2 ~ 6 나방 오래된 C57 검은 여섯 마우스에 70 %의 에탄올을 스프레이하고 발목에 골반에서 피부를 제거하기 위해 가위를 사용합니다.가위와 함께 집게를 사용하여 페모라와 경골을 제거하십시오. 뼈에서 근육을 깨끗하게 다듬습니다. 경골에 대 한 근위 및 말단 끝을 잘라 하 고 집게와 하나의 경골을 선택.골수 구멍에 27 게이지 바늘을 장착 한 3 밀리리터 주사기를 삽입하고 2 %의 태아 소 혈청 또는 HF2로 보충 된 행크스의 2.5 밀리리터S를 포함하는 14 밀리리터 둥근 바닥 튜브로 골수를 플러시하십시오. 모든 골수가 수집되면, 20 게이지 바늘 끝을 통해 조직을 여러 번 흡인하여 골수 질량을 하나의 현탁액으로 분산시다. 골수 핵세포 또는 BMNC를 유량 선별에 라벨을 부착하기 위해, 심방화에 의해 세포를 수집하고 HF2 농도의 90 마이크로리터 당 10~7번째 BMNC로 10회에서 펠릿을 다시 중단한다.다음으로, 생체 화, 안티 리니지 항체 칵테일의 10 마이크로 리터를 세포 현탁액에 섭씨 4도에서 20 분 동안 배양하십시오. 그 다음에 는 PBS의 3 밀리리터에서 원심분리기 세척이 진행됩니다. 7세포에 1회 1회 당 HF2의 100 마이크로리터에서 펠릿을 다시 중단한다.이체는 APC의 2개의 마이크로리터로 세포를 라벨로 분류하여 항비오틴 항체를 공주한다. 빛으로부터 보호되는 섭씨 4도에서 20개의 미네에트 후, 신선한 PBS의 3밀리리터로 세포를 씻으십시오. 다시 HF2에서 펠릿을 일시 중단 하여 0.2 얼음에 프로피듐 요오드의 밀리 리터 당 마이크로 그램보충.이제 스테인드 된 세포를 사용하여 유동 세포 분석 셀 선별기를 보정하여 각 검출기의 선형 범위 내에서 모든 광증 증식 관, 산란 및 형광 파라미터를 모두 최적화합니다. 표지되지 않은 PI 표지및 안티 리니지 APC 표지셀에 대해 10, 000 셀의 3개의 샘플을 획득한다. 정렬의 끝에서, 정렬 된 세포의 순도 및 생존가능성을 확인하기 위해 각 샘플에서 1, 000 세포를 분석한다.원심분리기의 샘플을 회전시. 그런 다음 계산을 위해 HF2의 0.5 밀리리터에서 펠릿을 다시 중단합니다. 선별된 세포의 양용 전달을 위해, 멸균 HF2에서 원조양동물로부터 제5 야생형 BMNC에 2배의 마이크로리터 100개를 혼합한다.100 마이크로리터를 10~5회 10회 10회 10회 까지, 수령인 동물당 마이크로 원심분리기 튜브에서 멸균 HF2에 대한 관심있는 선별된 기증자 BMNC. 200 마이크로리터의 셀을 받는 사람당 28개의 게이지를 장착한 밀리리터 주사기 1개를 적재합니다. 이어서, 수신자 마우스를 열램프 아래에 놓으면 꼬리 정맥 팽창을 유도한다.꼬리 정맥을 통해 각 치명적으로 조사 받는 사람 동물에 세포 혼합물을 전달합니다. 줄기세포자가재생은 계보 음성야생형 BMNC에 국한됨에 따라, 리니지 네거티브, 낮은 계보 양성, 및 고계 양성 세포는 각 세포 집단의 자기 재생 능력을 결정하기 위해 야생형 수령인으로 분류및 이식된다. MDS 모델 동물로부터 의학적으로 이식된 기증자 트랜스 유전 BMNC는 CD45.2 세포 표면 마커 발현에 의해 전 생체를 구별할 수 있다.혈통 의 이식 후 16 주 부정적인 BNMC, 또는 형질형 MDS 기증자 동물에서 분류되지 않은 BMNC, 트랜스 제닉 세포 밖으로 CD45.2 양성 기증자 세포의 증가 비율에 의해 입증된 바와 같이 야생 형 세포경쟁, 치명적인 조사 받는 동물의 말초 혈액에서 관찰. 여기서 형질전환 MDS 세포로 이식된 마우스로부터의 백혈병 변환으로부터의 세포가 나타난다. 수많은 폭발과 미숙한 형태의 존재를 유의하십시오.절차를 시도하는 동안, 세포에 과도한 스트레스를 배치 할 수 있기 때문에 전 생체 조작의 시간을 제한하는 것이 중요합니다, 세포 죽음 또는 기능적 손실의 결과로. 개발 후이 기술은 유전 으로 조작 된 마우스에서 질병의 근원을 탐구하기 위해 악성 종양에 넣어 현장 프로그램에 있는 연구원을 위한 길을 포장합니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

줄기 세포에서 망막 색소 상피 세포의 효율적인 유도

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

연구

발생학

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

효율적인 방법은 탈분화 지방 세포를 얻는 방법

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Competitive Transplants to Evaluate Hematopoietic Stem Cell Fitness

경쟁 이식은 조혈 줄기 세포의 체력을 평가하는

The gold standard definition of a hematopoietic stem cell (HSC) is a cell that when transferred into an irradiated recipient will have the ability to ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Cardiotoxin 주입에 의한 급성 골격 근육 재생 유도

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

연골 세포 분열 분열의 DNA 메틸화 수준을 정량화하는 5-mC Dot Blot Assay<em&gt; 체외에서</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

마우스의 인간 골수 미세 환경의 생체 공학 및 실시간 영상화에 의한 시각화

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Detection of Residual Donor Erythroid Progenitor Cells after Hematopoietic Stem Cell Transplantation for Patients with Hemoglobinopathies

Hemoglobinopathies 환자에 대 한 조 혈 줄기 세포 이식 후 잔여 기증자 Erythroid 조상 세포의 검출

The presence of incomplete chimerism is noted in a large proportion of patients following bone marrow transplant for thalassemia major or sickle cell ...

Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

단일 셀 인덱스 정렬 내 피 세포 틈새 공동 문화 결합을 사용 하 여 배아 조 혈 줄기 세포 선구자의 클론 분석

The ability to study hematopoietic stem cell (HSC) genesis during embryonic development has been limited by the rarity of HSC precursors in the early ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

자외선-C (UV-C) 손상에 응하여 1 차 마우스 안구 표면 세포/줄기 세포에 있는 산화 손상의 평가

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...