Name: a proximal culture method to study paracrine signaling between cells
Uploaded: 2018-08-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells at JoVE.com

Vi står i skuld till patienter för deras deltagande i samlingen vävnad för dessa experiment. En DoD OCRP ovariell Cancer Academy Award (W81XWH-15-0253) och en pilot award från Colleen's Dream Foundation till Anirban K. Mitra stöds denna forskning.

Protokollet följer riktlinjerna i institutionella regelverk Indiana universitetets styrelse.
1. cell förberedelse
<ol><li>
Isolering och kultur av mänskliga primära mesothelial celler
	<ol>
<li>Isolera mänskliga primära mesothelial celler (HPMCs) från mänskliga omentum som beskrivs tidigare17,18 och odla dem i slutföra odlingsmedium [Dulbeccos modifierade örnens Medium (DMEM) innehållande 10% fetalt bovint...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessories+to+the+crime:+functions+of+cells+recruited+to+the+tumor+microenvironment.">Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment.</a> Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).</li><li>Cupedo, T., Mebius, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+interactions+in+lymph+node+development.">Cellular interactions in lymph node development.</a> The Journal of Immunology. 174 (1), 21-25 (2005).</li><li>Suvas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Substance+P+Neuropeptide+in+Inflammation,+Wound+Healing,+and+Tissue+Homeostasis.">Role of Substance P Neuropeptide in Inflammation, Wound Healing, and Tissue Homeostasis.</a> The Journal of Immunology. 199 (5), 1543-1552 (2017).</li><li>Gnecchi, M., Danieli, P., Malpasso, G., Ciuffreda, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+Mechanisms+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Tissue+Repair.">Paracrine Mechanisms of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Repair.</a> Methods in Molecular Biology. , 123-146 (2016).</li><li>Lionetti, V., Bianchi, G., Recchia, F. A., Ventura, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+autocrine+and+paracrine+myocardial+signals:+an+emerging+therapeutic+strategy+in+heart+failure.">Control of autocrine and paracrine myocardial signals: an emerging therapeutic strategy in heart failure.</a> Heart Failure Reviews. 15 (6), 531-542 (2010).</li><li>Nicosia, R. F., Zorzi, P., Ligresti, G., Morishita, A., Aplin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+regulation+of+angiogenesis+by+different+cell+types+in+the+aorta+ring+model.">Paracrine regulation of angiogenesis by different cell types in the aorta ring model.</a> International Journal of Developmental Biology. 55 (4-5), 447-453 (2011).</li><li>Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+the+cancer+stem+cells+-+what+challenges+do+they+pose.">Tackling the cancer stem cells - what challenges do they pose.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 13 (7), 497-512 (2014).</li><li>Plaks, V., Kong, N., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer+stem+cell+niche:+how+essential+is+the+niche+in+regulating+stemness+of+tumor+cells.">The cancer stem cell niche: how essential is the niche in regulating stemness of tumor cells.</a> Cell Stem Cell. 16 (3), 225-238 (2015).</li><li>Elenbaas, B., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotypic+signaling+between+epithelial+tumor+cells+and+fibroblasts+in+carcinoma+formation.">Heterotypic signaling between epithelial tumor cells and fibroblasts in carcinoma formation.</a> Experimental Cell Research. 264 (1), 169-184 (2001).</li><li>Wilson, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+ligands+exhibit+functional+differences+in+models+of+paracrine+and+autocrine+signaling.">EGFR ligands exhibit functional differences in models of paracrine and autocrine signaling.</a> Growth Factors. 30 (2), 107-116 (2012).</li><li>Kopan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling.">Notch signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 4 (10), (2012).</li><li>Singh, A. B., Sugimoto, K., Harris, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Juxtacrine+activation+of+epidermal+growth+factor+(EGF)+receptor+by+membrane-anchored+heparin-binding+EGF-like+growth+factor+protects+epithelial+cells+from+anoikis+while+maintaining+an+epithelial+phenotype.">Juxtacrine activation of epidermal growth factor (EGF) receptor by membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor protects epithelial cells from anoikis while maintaining an epithelial phenotype.</a> Journal of Biological Chemistry. 282 (45), 32890-32901 (2007).</li><li>Swartz, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+complexity:+emerging+roles+in+cancer+therapy.">Tumor microenvironment complexity: emerging roles in cancer therapy.</a> Cancer Research. 72 (10), 2473-2480 (2012).</li><li>Mitra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+reprogram+normal+fibroblasts+into+cancer-associated+fibroblasts+in+ovarian+cancer.">MicroRNAs reprogram normal fibroblasts into cancer-associated fibroblasts in ovarian cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (12), 1100-1108 (2012).</li><li>Nieman, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+promote+ovarian+cancer+metastasis+and+provide+energy+for+rapid+tumor+growth.">Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth.</a> Nature Medicine. 17 (11), 1498-1503 (2011).</li><li>Salimian Rizi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+mediates+metabolic+coupling+of+omentum-derived+adipose+stroma+to+ovarian+and+endometrial+cancer+cells.">Nitric oxide mediates metabolic coupling of omentum-derived adipose stroma to ovarian and endometrial cancer cells.</a> Cancer Research. 75 (2), 456-471 (2015).</li><li>Mitra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironment-induced+downregulation+of+miR-193b+drives+ovarian+cancer+metastasis.">Microenvironment-induced downregulation of miR-193b drives ovarian cancer metastasis.</a> Oncogene. 34 (48), 5923-5932 (2015).</li><li>Tomar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETS1+induction+by+the+microenvironment+promotes+ovarian+cancer+metastasis+through+focal+adhesion+kinase.">ETS1 induction by the microenvironment promotes ovarian cancer metastasis through focal adhesion kinase.</a> Cancer Letters. 414, 190-204 (2018).</li><li>Ovarian Cancer Metastasis: A Unique Mechanism of Dissemination. Tumor Metastasis Available from: <a target="_blank" href="https://www.intechopen.com/books/tumor-metastasis/ovarian-cancer-metastasis-a-unique-mechanism-of-dissemination">https://www.intechopen.com/books/tumor-metastasis/ovarian-cancer-metastasis-a-unique-mechanism-of-dissemination</a> (2016)</li><li>Iwanicki, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+spheroids+use+myosin-generated+force+to+clear+the+mesothelium.">Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium.</a> Cancer Discovery. 1 (2), 144-157 (2011).</li><li>Kenny, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesothelial+cells+promote+early+ovarian+cancer+metastasis+through+fibronectin+secretion.">Mesothelial cells promote early ovarian cancer metastasis through fibronectin secretion.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (10), 4614-4628 (2014).</li><li>Boelens, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+transfer+from+stromal+to+breast+cancer+cells+regulates+therapy+resistance+pathways.">Exosome transfer from stromal to breast cancer cells regulates therapy resistance pathways.</a> Cell. 159 (3), 499-513 (2014).</li><li>Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+function+of+exosomes+in+cancer.">The biology and function of exosomes in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (4), 1208-1215 (2016).</li><li>Kohlhapp, F. J., Mitra, A. K., Lengyel, E., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+as+mediators+and+communicators+between+cancer+cells+and+the+tumor+microenvironment.">MicroRNAs as mediators and communicators between cancer cells and the tumor microenvironment.</a> Oncogene. 34 (48), 5857-5868 (2015).</li></ol>

Förstå mekanismen av parakrin och juxtacrine signalering mellan celler är nödvändig för att få bättre kunskap om normal vävnad homeostas och sjukdom villkor7,8. De flesta parakrin signalering studier utförs genom att samla luftkonditionerade medium från en celltyp och använda den för att behandla de andra celltypen. Denna metod har en fördel i dess inneboende enkelhet. Dock det inte korrekt sammanfatta lokaliserade koncentrationerna av de utsöndrad...

Rollen av produktiva ömsesidiga växelverkan mellan cancerceller och den tumör närmiljön i tumör progression etablerad väl och har blivit ett stort fokus på forskning inom cancer biologi1. Liknande instanser av dubbelriktad signalering är avgörande under sårläkning, immunsvar, angiogenes, stamceller nischer, och under utveckling2,3,4,5,6 , 7 , 8. ett vanligt tema i alla dessa biologiska processer är att cellerna svarar på olika sätt till extracellulära signaler från sin mikromiljö som avgör cell öde, vävnad fysiologi och sjukdomsprogression. Därför har fokus alltmer vände mot utveckla en bättre förståelse för mekanismerna som är involverade i sådan cell-cell kommunikation. En majoritet av sådana interaktioner innebära parakrin eller juxtacrine signalering mellan celler. Parakrin signalering involverar utsöndringen av särskilda signalering faktorer en cell som uppfattas av motsvarande receptorer på en annan cell i närheten, utlöser ett svar i det9,10, medan juxtacrine signalering kräver direktkontakt mellan cellulära komponenter av två celler inblandade11,12.
Sådan signalering är en avgörande komponent i vävnad homeostas, liksom i den tumör mikromiljö. Cancercellerna nytta parakrin och juxtacrine faktorer från celler i tumör stroma, inklusive cancer-associerade fibroblaster (CAFs), immunceller och adipocyter13,14,15,16. Den parakrin signalering kan medlas av tillväxtfaktorer, cytokiner, chemokiner, etc., medan den juxtacrine signalering innebär bredvid ligander och receptorer som i Notch signalering eller interaktioner mellan integriner och deras respektive extracellulära matrix proteiner. Vi har visat betydelsen av ömsesidiga interaktioner mellan äggstockscancer celler och CAFs i tumör progression och metastasering14. Likaså reglera interaktioner av metastaserande äggstockscancer celler med mesothelial celler som täcker platsen för metastaser nyckel mikroRNA och transkriptionsfaktorer i cancercellerna som främjar metastaserande colonization17, 18.
De flesta studier på parakrin signalering innebär användning av en betingad medium samlas in från en celltyp att behandla den andra celltypen med. Medan detta tillvägagångssätt har använts i stor utsträckning, replikerar det effektivt inte de lokaliserade hög-halter av utsöndrade faktorn i närmiljön i den mottagande cellen. Det också misslyckas att reproducera kineticsen av ett kontinuerligt flöde av utsöndrade faktor som produceras av en cell och tas emot av den intilliggande cellen. Parakrin signalering är effektiv över korta avstånd som de utsöndrade faktorerna är vid koncentrationerna som krävs endast i närheten av cellen källa och tenderar att diffus och späd ut när avståndet ökar. Detta lokaliserade hög koncentration av utsöndrade faktorn är viktigt att utlösa en reaktion i cellen receptor. Dessutom är svaret i de mottagande cellerna också beroende av saldot av nyligen utsöndrade faktorer och deras kontinuerliga utarmning genom nedbrytning, bindande och internalisering i mottagarens celler och diffusion från cellen källa. Konditionerat medium kan vara koncentrerad till konto för de högre lokaliserade koncentrationerna som är närvarande i närmiljön, men som inte kan exakt replikera de exakta koncentrationerna. Dessutom kan inte det efterliknar naturliga kineticsen av produktion och utarmning av faktorn som är inblandade. För att mer exakt replikera parakrin signalering och skilja det från juxtacrine signalering mekanismer, har vi utarbetat en roman proximala kultur metod, som innebär växande de två celltyper på antingen ytan av ett poröst membran. Porerna är tillräckligt små för att förhindra juxtacrine interaktioner och ändå tillåta utbyte av utsöndrade faktorer vid lokaliserade höga koncentrationer. På så sätt behåller detta system kineticsen av produktion och utarmning av de parakrin faktorerna.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 mm Transwell permeable support with 0.4 &#181;m Pore Polycarbonate Membrane Insert</td>
			<td>Corning (Costar)</td>
			<td>3412</td>
			<td>&#8226; 10 &#181;m thick translucent polycarbonate membrane 
			&#8226; Treated for optimal cell attachment 
			&#8226; Packaged 6 inserts in a 6 well plate, 4 plates per case 
			&#8226; Membrane must be stained for cell visibility 
			&#8226; Sterilized by gamma radiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Corning (Falcon)</td>
			<td>353046</td>
			<td>Flat Bottom, TC-treated, sterile, with Lid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 cm culture dish</td>
			<td>Corning (Falcon)</td>
			<td>353025</td>
			<td>Sterile, TC-treated Cell Culture Dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning (Cellgro)</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Nonessential amino acids</td>
			<td>Corning (Cellgro)</td>
			<td>25-025-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Vitamins</td>
			<td>Corning (Cellgro)</td>
			<td>25-020-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin, 2.21 mM EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any make is fine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any make is fine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety level II cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any make is fine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FN1 TaqMan Gene Expression Assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Hs01549976_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGFB1 TaqMan Gene Expression Assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Hs00998133_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CDH1 TaqMan Gene Expression Assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Hs01023895_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH TaqMan Gene Expression Assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Hs99999905_m1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy mini RNA isolation Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>43-688-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeyA8 ovarian cancer cells</td>
			<td>Obtained from Ernst Lengyel Lab, University of Chicago</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF&#946; Neutralizing Antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB1835-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a proximal culture method to study paracrine signaling between cells

Intercellulära interaktioner har en viktig roll i många biologiska processer, inklusive tumör progression, immunsvar, angiogenes och utveckling. Parakrin eller juxtacrine signalering förmedlar sådana interaktioner. Användning av en betingad medium och coculture studier är de vanligaste metoderna att diskriminera mellan dessa två typer av interaktioner. Dock effekten av lokaliserade höga koncentrationer av utsöndrade faktorer i mikromiljö under parakrin interaktioner är inte korrekt återgetts av konditionerat medium och, således, kan leda till otydliga slutsatser. För att lösa detta problem, har vi utarbetat en proximal kultur metod för att studera parakrin signalering. De två celltyper odlas på ytorna av en 10 µm tjockt polykarbonat membran med 0,4 µm porer. Porerna möjliggör utbyte av utsöndrade faktorer och, samtidigt, hämmar juxtacrine signalering. Cellerna kan samlas och lyserat på slutpunkten att avgöra effekterna av den parakrin signalering. Förutom att ge för lokaliserade koncentration övertoningar utsöndrade faktorer, är denna metod mottagliga för experiment med längre perioder av kultur, liksom användningen av hämmare. Medan vi använder denna metod för att studera interaktioner mellan äggstockscancer och de mesothelial celler som de stöter på platsen för metastaser, kan det anpassas till eventuella två vidhäftande celltyper för forskare att studera parakrin signalering i olika områden, inklusive tumör mikromiljö, immunologi och utveckling.

Metastaserande äggstockscancer celler stöta mesothelial celler på platsen av metastasering i bukhålan19. Produktiva parakrin och juxtacrine interaktioner med mesothelial celler hjälp för att framkalla adaptiv svaren i äggstockscancer celler, som möjliggör framgångsrika metastaser17,18,20,21 . För att testa effektiviteten av met...

Watch this Scientific Journal Video about A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells at JoVE.com

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

Parakrin och juxtacrine cellulära interaktioner har en viktig roll i många biologiska processer, inklusive tumör progression, immunsvar, angiogenes och utveckling. Här, en proximal kultur metoden används för att studera parakrin signalering där lokaliserade koncentrationerna av de utsöndrade faktorerna upprätthålls samtidigt förhindra cellulära direktkontakt.

En Proximal kultur metod att studera parakrin signalering mellan celler

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testa Visual Känsligheten för hastighet och rörelseriktning i Ödlor

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

En hög genomströmning metod för att globalt studera organell morfologi i S. cerevisiae

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Hi-C: En metod för att studera den tredimensionella arkitektur för ledare.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Ett system för odling Iris Pigment epitelceller att studera Lens Regenerering vid Newt

Salamanders like newt and axolotl possess the ability to regenerate many of its lost body parts such as limbs, the tail with spinal cord, eye, brain, ...

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

En PCR-baserad Genotypning för att skilja mellan vildtyp och prydnadsväxter Variationer av Imperata cylindrica</em

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualisering av Vascular Ca 2 + Signalering Triggade av parakrina Härledda ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

En hög halt Imaging arbetsflöde för att studera Grb2 signalering komplex genom expressionskloning

Signal  transduction by growth factor receptors is essential for cells to maintain  proliferation and differentiation and requires tight control. Signal  ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metod för embryonala Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...