Name: live-cell imaging assays to study glioblastoma brain tumor stem cell migration and invasion
Uploaded: 2018-08-29T13:30:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion at JoVE.com

Авторы благодарят Розина Хассам и Оршойя Чех за их техническую поддержку. Этот исследовательский проект частично поддержали гранты от Фонда Канады для инноваций (H. Artee Luchman и Самуэль Вайс) и стволовых клеток сети Канады (также ч. Artee Luchman и Самуэль Weiss).

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Holland, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+multiforme:+the+terminator.">Glioblastoma multiforme: the terminator.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (12), 6242-6244 (2000).</li><li>Heddleston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cell+maintenance:+the+role+of+the+microenvironment.">Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment.</a> Current Pharmaceutical Design. 17 (23), 2386-2401 (2011).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li><li>Galli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Tumorigenic,+Stem-like+Neural+Precursors+from+Human+Glioblastoma.">Isolation and Characterization of Tumorigenic, Stem-like Neural Precursors from Human Glioblastoma.</a> Cancer Research. 64 (19), 1-12 (2004).</li><li>Kelly, J. J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+of+Human+Glioblastoma+Stem+Cells+Occurs+Independently+of+Exogenous+Mitogens.">Proliferation of Human Glioblastoma Stem Cells Occurs Independently of Exogenous Mitogens.</a> STEM CELLS. 27 (8), 1722-1733 (2009).</li><li>Cusulin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precursor+States+of+Brain+Tumor+Initiating+Cell+Lines+Are+Predictive+of+Survival+in+Xenografts+and+Associated+with+Glioblastoma+Subtypes.">Precursor States of Brain Tumor Initiating Cell Lines Are Predictive of Survival in Xenografts and Associated with Glioblastoma Subtypes.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 1-9 (2015).</li><li>Luchman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+mTORC1/2+Blockade+Inhibits+Glioblastoma+Brain+Tumor+Initiating+Cells+In+Vitro+and+In+Vivo+and+Synergizes+with+Temozolomide+to+Increase+Orthotopic+Xenograft+Survival.">Dual mTORC1/2 Blockade Inhibits Glioblastoma Brain Tumor Initiating Cells In Vitro and In Vivo and Synergizes with Temozolomide to Increase Orthotopic Xenograft Survival.</a> Clinical Cancer Research. 20 (22), 5756-5767 (2014).</li><li>Jensen, K. V., Cseh, O., Aman, A., Weiss, S., Luchman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+JAK2/STAT3+inhibitor+pacritinib+effectively+inhibits+patient-derived+GBM+brain+tumor+initiating+cells+in+vitro+and+when+used+in+combination+with+temozolomide+increases+survival+in+an+orthotopic+xenograft+model.">The JAK2/STAT3 inhibitor pacritinib effectively inhibits patient-derived GBM brain tumor initiating cells in vitro and when used in combination with temozolomide increases survival in an orthotopic xenograft model.</a> PLoS ONE. 12 (12), e0189670 (2017).</li><li>Nguyen, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+MSH6+Mutations+in+Treatment-Naive+Glioblastoma+and+Anaplastic+Oligodendroglioma+Contribute+to+Temozolomide+Resistance+Independently+of+MGMT+Promoter+Methylation.">Novel MSH6 Mutations in Treatment-Naive Glioblastoma and Anaplastic Oligodendroglioma Contribute to Temozolomide Resistance Independently of MGMT Promoter Methylation.</a> Clinical Cancer Research. 20 (18), 4894-4903 (2014).</li><li>Hemmati, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancerous+stem+cells+can+arise+from+pediatric+brain+tumors.">Cancerous stem cells can arise from pediatric brain tumors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100 (25), 15178-15183 (2003).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines.">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li><li>Menyh&#225;rt, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+selection+of+functional+assays+to+evaluate+the+hallmarks+of+cancer.">Guidelines for the selection of functional assays to evaluate the hallmarks of cancer.</a> BBA - Reviews on Cancer. 1866 (2), 300-319 (2016).</li><li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Rapid+in+Vitro+Assay+for+Quantitating+the+Invasive+Potential+of+Tumor+Cells.">A Rapid in Vitro Assay for Quantitating the Invasive Potential of Tumor Cells.</a> Cancer Research. 47 (12), 3239-3245 (1987).</li><li>Liang, C. -. C., Park, A. Y., Guan, J. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).</li><li>Naber, H. P., Wiercinska, E., Ten Dijke, P., van Laar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid+Assay+to+Measure+TGF-&#946;-induced+Invasion.">Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), (2011).</li></ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Учитывая, что раковые клетки активно пролиферирующих, это создает потенциальные техническую проблему для изучения миграции клеток. Для assay переноса, описанных здесь BTSCs покрыты без факторы роста, который ограничивает распространение, и градиент хемотаксического хемотаксис пластины не полностью сбалансировать более 72 часов. Кроме того как клетки находятся под наблюдением с помощью клеток изображений с течением времени, клетки можно визуально контролировать обеспечить широкое разделение клетки не происходит. Для успеха assay переноса важно отделить neurospheres полностью в отдельные ячейки и точно подсчитать число клеток до покрытия. Покрытие сферах или покрытие слишком много клеток, что приводит слипания, можно предотвратить клетки мигрируют через малые поры (Рисунок 4A и 4B). Важно также избежать создания пузыри, когда покрытие клетки в пластину хемотаксис миграции или размещение вставки мембраны на дно водоема. Пузыри могут изменить плоскость фокуса и предотвратить точной количественной (рис. 4 c). Вся плита должна быть покрыты тонким слоем коллагена, потому что это дает клетки поверхность для перехода на поры в пластине, как этот assay требует клетки придерживаться и затем мигрируют по биологически отношение поверхности к хемотаксического.
Протокол миграции BTSC, описанный здесь позволяет для кинетической оценки миграции отдельных клеток, требующие меньше клеток для лечения различных условиях по сравнению с существующими протоколами испытаний. Это имеет важное значение для культуры, которые растут очень медленно, как это может быть трудно собрать большое количество клеток для экспериментов. Низкая поры плотность плиты хемотаксис миграции позволяет медленнее уравновешивания хемотаксического градиента, больше чем 72 часа и более эффективно имитирует процесс биологического эозинофилов миграции в течение более длительного периода времени. Протокол был оптимизирован для имеют очень тонкий слой коллагена покрытия на пластину миграции хемотаксис чтобы пробирного меры миграции и не вторжения. Она также облегчает изображений и количественная оценка одиночных клеток, как они придерживаться покрытие мембраны пластины коллагеновой матрицы. Однако, одно ограничение техники, что количественная оценка миграции через несколько скважин со временем значительно упрощенной и ускоренной с использованием коммерческого программного обеспечения (см. Таблицу материалы). Заметным преимуществом assay переноса как описано здесь является широкий адаптируемость протокола к другие типы клеток. Это будет особенно полезно для количественной оценки эозинофилов миграции клеточных линий, которые либо медленно растут, трудно присоединиться, или мигрировать медленно.
Для обеспечения успеха пробирного вторжения BTSC, необходимо собрать neurospheres, прежде чем они станут больше, чем 200 µm. крупных сфер плоскости фокуса, который является слишком большим, чтобы последовательно изображения и количественно (рис. 5 c). Кроме того neurospheres может начать комок и объединять с другими neurospheres. Это влияет на получение точных и согласованных данных. Кроме того важно, что neurospheres могут осесть на дно колодца в то время как коллагена находится все еще на льду, чтобы neurospheres к записи образа в одной плоскости фокуса (рис. 5 d). Аналогичным образом важно, чтобы коллагена полностью установить без перемещения пластины, как это может нарушить формирования даже матрицу, которая может отрицательно сказаться на качестве изображения (рис. 5 d). Для assay вторжения BTSC, описанных здесь одним из основных преимуществ является, что BTSCs культивировали как neurospheres можно оценить для вторжения напрямую, без необходимости быть выращено adherently. Кроме того BTSC neurospheres может быть встроен в любой внеклеточного матрикса, либо с помощью отдельных компонентов внеклеточного матрикса из конкретной ткани или смесью коммерчески доступных базальной мембраны. Указание внеклеточная матрица может помочь идентифицировать или тестирования конкретных механизмов вторжения. Например этот протокол, можно оценить эффект ориентации на отдельных членов семьи metallopeptidase матрица генов, которые известны к разложению матрицы конкретных компонентов. Кроме того хотя этот протокол для BTSC neurospheres, аналогичным образом может использоваться любой клетки, выращивается как сферы. Примеры включают груди раковые клетки культивировали как mammospheres или первичной колоректальные раковые клетки культивировали как tumorspheres; Однако это ограничивает технику для типов клеток, которые могут расти как сферы культуры. Другие преимущества миграции и вторжения анализов, что они легко настроить, они работают в формате 96-луночных, и данные количественной оценке с течением времени.
В целом в целях предотвращения повторения GBM после лечения, важно для разработки методологий, способствующих расследование BTSC миграции и вторжения. Протокол миграции, описанных здесь предлагает много преимуществ по сравнению с ранее установленным миграции анализов, особенно для изучения GBM BTSCs. Этот протокол улучшение миграции включает в себя отделения BTSCs культивировали нейросферы условиях и покрытие одной клетки в 96-луночных коллаген покрытием хемотаксис миграции пластине. С помощью тепловизионной системы клеток, миграция BTSCs может контролироваться и количественно со временем. Assay вторжения, описанные здесь позволяет для мониторинга BTSC вторжений из neurospheres в матрицу. Этот assay предполагает встраивание neurospheres в коллагеновой матрицы, или другой богатых белком внеклеточного матрикса, в 96-луночных пластине. Изображения пластины с покадровой изображений системы клеток позволяет для анализа BTSC вторжений в условиях различных лечения со временем. Эти анализы, следовательно, обеспечивают ценный инструмент для ученых, надеясь, чтобы лучше понять механизмы, лежащие в основе миграции BTSC и вторжения.

Глиобластома (GBM) является наиболее распространенным и агрессивной формой рака мозга и, несмотря на текущие терапии с участием хирургическая резекция следуют радиационной и химиотерапии, медиана выживаемости больных является всего лишь 15 месяцев1. GBM инвазивных, высокой лекарственной устойчивостью, и в конечном счете, неизлечимая болезнь, которая требует продолжал исследования в его имманентной биологии с целью выявления новых терапевтических направлений. Высокой смертности больных GBM в первую очередь вызвано большой сотовой вторжение в прилегающих нормальной ткани мозга и миграции вдоль кровеносных сосудов, что приводит к рецидива заболевания после лечения2,3 . Подмножество ячеек, называемых стволовых клеток (BTSCs), опухоли мозга, которые медленно Велоспорт и терапевтически устойчивы, было предположить, чтобы привести к повторению болезни. GBM BTSCs отображения свойств колониеобразования самообновлению, multipotency и опухоль инициирование потенциальных4,-5,6. BTSCs также сохранить генетический, молекулярной и фенотипические неоднородности их родительского GBM опухоли7,8,9,10. Эти свойства делают BTSCs систему чрезвычайно полезной моделью для изучения GBM и для изучения роман терапевтических стратегий. В естественных условиях, эти клетки стволовые как способны опухоли формирования, роста и вторжения, когда имплантированные в мозги новорожденных крыс11 и -ожирением диабетом/тяжелой комбинированный иммунодефицит (NOD/SCID) мышах4. BTSCs возможность неоднократно формы инвазивной опухоли в естественных условиях , пилки сотовой и гистологической характеристики их оригинальный опухолей сильно поддерживает их роль как инициирование опухоли клетки12.
Новые терапевтические подходы к целевому объекту BTSCs в настоящее время разрабатываются и помочь улучшить отдаленные исходы для пациентов GBM. В настоящее время существует ограниченное понимание клеточных процессов миграции и вторжения, которые связаны с терапевтической сопротивления и повторения. Миграция и вторжения являются различные явления; миграция — это процесс, лежащий в основе направленного движения клеток и включает в себя реорганизацию цитоскелета, молекулы адгезии и сборки/разборки координационных контактных пунктов, тогда как вторжения требует также физическое уничтожение барьеров Например, внеклеточная матрица13. Общепринятой методологии изучения миграции клеток и вторжение является Бойден палате пробирного14,15. Для этой техники двойной камеры наполнен СМИ, с СМИ в нижней камере дополнена хемотаксического. Хемотаксис инициируется с помощью конкретных факторов роста и цитокинов или плода бычьим сывороточным как неспецифический хемотаксического. После градиент хемотаксического клетки мигрируют через пористые мембраны. В конечной точке перенесенных клетки могут быть визуализирована и количественно в нижней части мембраны путем пятнать с цитологическим или флуоресцентными красителями. Бойден, пробирного миграции может быть изменено до вторжения assay путем покрытия пористых фильтр с компоненты внеклеточного матрикса, такие как тип я коллагена или базальной мембраны как матрица. Инвазивные клетки деградируют матрица, перемещаться к нижней части пористого фильтра и может быть определена количественно аналогичным образом для assay переноса. Другие часто используемые миграции анализы включают нуля раны и зоны отчуждения клеток assays13. Царапинам рану генотипирования царапин разрыв в клеточном монослоя и наблюдения миграции клеток от края раны изображений на регулярной основе до тех пор, пока закрыт нуля. В assay клетки исключения физический барьер используется для создания зоны, свободной от ячейки, до заполнения ячеек. Барьер удалены раз клетки вырожденная и миграции клеток в зону, свободную ячейку imaged регулярно16.
Эти ранее установлено, что анализы часто используются для изучения миграции или вторжения сторонником и однородной клеточных популяций, но создают значительные недостатки при изучении GBM BTSCs или других клеточных популяций гетерогенной рака. Можно создавать только Пробирная палата Бойден конечной точки измерения против кинетической оценки клеточного движения. Наблюдение с течением времени имеет большое значение для измерения миграции BTSC, учитывая, что клетки из разных культур часто мигрируют по различным ставкам. Таким образом условий и сроков анализа должны быть оптимизированы для каждого типа культуры и требует время интенсивного труда адекватной выборки и количественной оценки. Нуля и ячейки изоляции, которую анализов, не подходят для BTSC культур, как, даже когда BTSCs культивировали в условиях монослоя на пластины с покрытием Ламинин, мы заметили, что BTSCs, как представляется, противостоять движения в открытый космос и предпочитают оставаться в тесном близость к другим ячейкам. Кроме того они установлены, анализов миграции не позволяют для визуализации и мониторинга отдельных клеток на протяжении всего эксперимента. Мониторинг отдельных ячеек со временем ценной для оценки миграции в гетерогенных клеточных популяций, такие как BTSCs. Дополнительные недостатки Бойден камеры, нуля и клеток изоляции зоны анализов BTSC культур, что они требуют относительно числа высокой клеток, может занять много времени для установки, и либо быстро макроэкономическую или не имеют хемотаксического градиент. Таким образом эти анализы не являются идеальными для использования для редких или медленно растущих клеточных популяций или для скрининга наркотиков. Кроме того эти анализы не подходят для измерения вторжение в формате трехмерных (3D), что особенно важно для BTSCs, выращенных в условиях нейросферы.
Здесь мы описываем анализов, специально модифицированные для наблюдения и количественной оценки миграции для индивидуальных BTSCs и для вторжения GBM BTSCs культивировали как neurospheres. Первая проба описывает адаптация Пробирной палаты Бойден, используя клеток промежуток времени обработки изображений и хемотаксис миграции пластины для измерения эозинофилов клеток миграции13. Жить клеточной изображения в формате несколькими хорошо позволяет для визуализации и количественной оценки миграции клеток при нескольких условиях лечения. Вторая проба, описанные здесь является сфероида вторжения пробирного13,17, какие меры инвазивные свойства BTSCs культивировали нейросферы условиях и встроен в 3D внеклеточного матрикса под различные лечения условий. В целом эти анализы являются гораздо более совместимыми, чем ранее описанные методики изучения мигрирующих и инвазивные свойства гетерогенных BTSC культур. Они также предлагают более широкие возможности для расследования новых терапевтических стратегий миграции и вторжения, которые значительно способствуют рецидива и летальность.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Rat Collagen I</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>3440-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH3247-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>AX0073-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30730119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 Nunc EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>156367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15ml conical tube</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte ClearView 96-Well Chemotaxis plate</td>
			<td>Essen Bioscience</td>
			<td>4582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte Zoom Live-Cell Analysis System</td>
			<td>Essen Bioscience</td>
			<td>4545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte Zoom Live-Cell Analysis Software</td>
			<td>Essen Bioscience</td>
			<td>2016A Rev1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accumax cell detachment solution</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AM105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin, streptomycin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture grade water</td>
			<td>Lonza BioWhittaker</td>
			<td>17-724Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12483-020</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging assays to study glioblastoma brain tumor stem cell migration and invasion

Глиобластома (GBM) является агрессивным опухоль, которая плохо контролируется с имеющихся в настоящее время лечения. Основные особенности GBMs включают быстрое распространение и всепроникающей вторжения в нормальный мозг. Считается, что повторения в результате присутствия радио - и химиотерапии стойкие мозга опухоль стволовых клеток (BTSCs), которые вторгаются от первоначальных раковых массы и, таким образом, избежать хирургической резекции. Следовательно методы лечения, которые целевые BTSCs и их инвазивных способности может улучшить противном случае плохой прогноз заболевания. Наша группа и другие успешно установили и характеризуется BTSC культур от GBM пациентов образцов. Эти культуры BTSC продемонстрировать основные Рак стволовых клеток свойства, такие как колониеобразования самообновления, мульти линии дифференциации и опухоль начала иммунного дефицита мышей. Для того, чтобы улучшить текущий терапевтических подходов для GBM, необходимо лучше понять механизмы миграции BTSC и вторжения. В GBM изучения миграции и вторжения ограничен, отчасти, из-за ограничений существующих методов, которые не полностью в vitro роста характеристик BTSCs, выращивается как neurospheres. Здесь мы описываем быстрых и качественных клеток изображений анализов для изучения миграции и вторжения свойства BTSCs. Первый метод, описанный является пробирного миграции BTSC, который измеряет миграции к хемотаксического градиент. Второй метод, описанный является BTSC вторжения assay который изображения и количественно сотовой вторжения из neurospheres в матрицу. Анализы, описанные здесь используются для количественной оценки миграции BTSC и вторжения с течением времени и в условиях различных лечения.

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion at JoVE.com

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Здесь мы описываем методы визуализации клеток количественно измерить миграции и вторжения стволовых клеток глиобластомы мозга опухоль со временем и при нескольких условиях лечения.

Assays клеток опухоли стволовых клеток глиобластомы мозга исследования миграции и вторжения

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Сокультивирования Анализы по изучению макрофагами и микроглии стимуляции глиобластомы вторжения

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Радионуклида флуоресценции Репортер ген Imaging для отслеживания опухолевой прогрессии в моделях грызунов опухоли

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Long-term Live-cell Imaging to Assess Cell Fate in Response to Paclitaxel

Долгосрочный клеток изображений для оценки судьбу клеток в ответ на паклитаксел

Live-cell imaging is a powerful technique that can be used to directly visualize biological phenomena in single cells over extended periods of time. Over ...

The Clinical Application of Tumor Treating Fields Therapy in Glioblastoma

Клиническое применение лечения глиобластома поля терапии опухоли

Glioblastoma is the most common and lethal form of brain cancer, with a median survival of 15 months after diagnosis and a 5 year survival rate of only 5% ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Простая миграция/вторжения рабочий процесс, с помощью автоматизированных Imager клеток

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Продольная интравитальная визуализация поведения опухолевых клеток головного мозга в ответ на инвазивную хирургическую биопсию

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Impedance основе в режиме реального времени Измерения миграции раковых клеток и вторжения

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Кокультура стволовых клеток глиобластомы на узорчатых нейронах для изучения миграции и клеточных взаимодействий

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

Модель среза мозга Ex Vivo для изучения и нацеливания на метастатический рост опухоли головного мозга рака молочной железы

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical ...

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

Трехмерная культура склепков толстой кишки мышей для изучения функции стволовых клеток кишечника Ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...