Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

AgNPs bruges her var en gave fra C. M. Che i Department of Chemistry, University of Hong Kong. Dette arbejde blev finansieret af National Natural Science Foundation of China (nr. 81600399), videnskab og teknologi projekt i Guangzhou (No.201707010014).

Alle dyr eksperimentelle protokoller er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Sun Yat-Sen Universitet Laboratory Animal Center (#IACUC-DB-16-0602).
1. etablering af biliær atresi musen Model
<ol><li>Vedligeholde gravid BALB/c mus i et specifikt patogenfrie miljø under et 12t mørk/lys cyklus på 25 ° C, med adgang til autoklaveres chow ad libitum.</li>
	<li>For at forberede RRV stamme MMU 18006, forstærke virus i MA104 celler og måle de virale titer...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs udstiller potent bredspektret antibakterielle egenskaber og en stærk permeabilitet22; Derudover er de brugt til at producere en række antibakterielle lægemidler23. AgNPs kan dog tage lang tid at rydde når de ophobes i organer, og denne stædighed kan føre til toksiske virkninger24,25. En tidligere undersøgelse undersøgte akut toksicitet og genotoksicitet af AgNPs efter en enkelt i.v. injektion i en rott...

BA er en form for kolestase karakteriseret ved vedvarende gulsot og har høj dødelighed i mangel af levertransplantation. Virusinfektioner er tæt knyttet til patogenesen af BA. Cytomegalovirus, reovirus og rotavirus er alle blevet foreslået som patogener i BA1,2,3. I det neonatale periode, den umodne immunsystem reaktion på en virusinfektion resulterer i immun dysregulering mod ekstra- og intrahepatisk galdegangene, fører til biliær epitelcelle apoptose, inflammatoriske celle infiltration i portalen område, intrahepatisk og ekstrahepatisk galdegang obstruktion, og endelig leverfibrose4,5,6.
De almindeligt anvendte dyremodel for BA undersøgelser omfatter podning af en neonatal mus med rhesus rotavirus (RRV). Musen typisk udvikler gulsot efter 5-6 dage, viser en lav kropsvægt og acholic afføring. Immunrespons i sygdomsprocessen rolle er afgørende, især for natural killer (NK) celler; nedbrydningen af disse celler med anti-NKG2D antistof reducerer BA-induceret skade7. Derudover andre celler, herunder CD4+ T-celler, CD8+ T celler, dendritiske celler og regulerende T-celler, har alle vist sig at spille en rolle i sygdom8,9,10,11. Alle data tyder den uundværlige karakter af immunsystemet i løbet af BA.
Sølv nanopartikler (AgNPs) har vist sig for at have gavnlige virkninger mod visse smitsomme sygdomme, herunder bakterielle infektioner12 og virusinfektioner13,14,15. Men bortset fra Dermatologisk brug, få undersøgelser har brugt AgNPs i en klinisk behandling, mest på grund af deres potentielle toksicitet. I dyreforsøg, har forskere generelt undersøgt effekten af AgNPs administreres via mundtlige16 eller intravenøs metoder17. Men ingen andre forskere har undersøgt effekten af AgNPs administreres via en intraperitoneal (i.p.) indsprøjtning i neonatal mus eksperimenter, som er en enkel og hurtig metode fører til en mere direkte effekt på leveren og galdeveje mens at reducere toksiciteten for andre systemer, såsom immunsystemet. AgNPs har vist sig at påvirke NK celle aktivitet18; Derfor, vi testede de terapeutiske virkninger af AgNPs administreres via i.p. injektion i BA musemodel.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Biliær atresi (BA) er en svær form af cholangitis med høj dødelighed hos børn af som ætiologi er stadig ikke fuldt forstået. Virale infektioner kan være en mulig årsag. Den typiske dyremodel bruges til at studere BA er etableret ved at vaccinere en neonatal mus med et rhesus rotavirus. Sølv nanopartikler har vist sig at udøve antibakteriel og antiviral virkninger; deres funktion i BA musen model er vurderet i denne undersøgelse. I øjeblikket, i BA dyreforsøg er metoder til at forbedre symptomerne på BA mus generelt symptomatisk behandlinger givet via fødevarer eller andre stoffer. Formålet med denne undersøgelse er at demonstrere en ny metode til mildne BA syndrom i mus af intraperitoneal injektion af sølv nanopartikler og give detaljerede metoder for at forberede sølv nanopartikler gel formulering. Denne metode er simpel og bredt anvendelig og kan bruges til forskning mekanisme af BA, såvel som i kliniske behandlinger. Baseret på musemodel BA når musene udstille gulsot, sprøjtes rede sølv nanopartikler gel intraperitoneal til overfladen af lavere leveren. Overlevelse status er observeret, og biokemiske indikatorer og leveren histopatologi undersøges. Denne metode giver mulighed for en mere intuitiv forståelse af både etablering af BA model og roman BA behandlinger.

Baseret på den etablerede BA musemodel, de inficerede neonatal mus blev administreret en i.p. indsprøjtning af den forberedte AgNP kollagen blanding 2 x efter udstiller gulsot. Mus overlevelse blev kontrolleret for dagligt, og leverfunktion test, leveren patologi og flowcytometri blev udført. Sammenlignet med ubehandlet kontrol BA mus, AgNP-behandlede mus viste reduceret gulsot og opretholdt deres normale kropsvægt (figur 3). Niveauer af bilirubin metabol...

Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

En sølv nanopartikler metode til mildne biliær atresi syndrom i mus

Denne artikel beskriver i detaljer en metode baseret på sølv nanopartikler til mildne biliær atresi syndrom i en eksperimentel biliær atresi musemodel. En solid forståelse af reagens forberedelsesprocessen og neonatal mus injektionsteknik hjælper stifte forskere med metoden anvendt i neonatal musen model undersøgelser.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Disse metoder kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i galdeatresi. Af BA synspunkter om sygdom, patogenese og behandling. Den største fordel ved denne teknik er, at neonatal mus injektion teknik vil hjælpe forskerne til at blive fortrolig med metoden for andre neonatal mus model undersøgelser.Konsekvenserne af denne teknik strækker sig mod behandling af BA som flere nanopartikler af betydning Selvom denne metode kan give indsigt i BA-behandling, kan det også anvendes på andre systemer såsom neonatal musemodeller af patogenesen af denne Generelt på den måde, dette til denne metode vil, fordi den lille størrelse af neonatal mus kan resultere i opbygningen af injektion proces. For at etablere galdeatresi i en musemodel, skal resus rotovirus indlæses i en 1 milliliter insulinsprøjte udstyret med en 29-gauge nål, og intraperitoneally levere 1,2 gange 10 til 5th plaque-dannende enheder af virus i 20 mikroliters af Dulbecco's Modified Eagle Medium til hver nyfødte inden for 24 timer efter fødslen. Derefter returnere nyfødte til deres mor til daglig overvågning og vejning.Når neonatal dyr begynder at udstille tegn på gulsot, belastning en en milliliter sprøjte udstyret med en 29-gauge nål med 50 mikroliter frisklavet sølv nanopartikel kollagen løsning per dyr og bruge ringfingeren til at trykke benet af en gulsot dyr skråt over højre lår. Langsomt indføre nålen i en 15 graders vinkel i bughinden, og ved at nå overfladen af den nederste kant af leveren, injicere sølv nanopartikel kollagen blanding. Når hele blandingen er blevet injiceret, langsomt fjerne nålen og lad dyret hvile i ti minutter for at tillade kollagen til at størkne og for at forhindre moderen i at slikke injektionsstedet.Derefter returnere musene til deres bure til daglig overvågning. På dag ni eller tolv efter vaccination, sterilisere øvre og nedre del af maven med 75% ethanol, og immobilisere lemmer af en inficeret mus. Åbn huden, musklen og bughinden langs midterlinjen til xyphoid, og brug en steril vatpind til at fjerne mave-tarmkanalen til fuldt ud at eksponere mellemgulvet.Stik nålen på en milliliter insulinsprøjt i hjertets venstre hjertekammer, og træk langsomt sprøjtestemplet tilbage for at opnå det maksimale blodvolumen. Overfør blodet til et 1,5 milliliterrør i en 30 minutters inkubation ved stuetemperatur og pellet de røde blodlegemer ved centrifugering. Derefter indsamles serum til senere analyse.For ekstrahepatisk cholangiografi, bruge en vatpind til fuldt ud at eksponere leveren, galdeblæren og ekstrahepatiske galdegangene. Efter at have fotograferet udseendet af leveren og galdegangene under et dissekerende mikroskop, skal du bruge oftalmologiske kraftvipper til forsigtigt at gribe fat i bunden af galdeblæren og langsomt indsætte nålen på en en milliliter sprøjte lastet med methylenblå opløsning i galdeblærehulen. Gribe nålen med snævler, langsomt indgyde 10-20 mikroliter af methylenblåt.Når farvestoffet passerer gennem ekstrahepatiske galdegange til jejunum, få et andet fotografi af vævet. Derefter for hæmatoxylin og eosin farvning, høste leveren fra hvert dyr til natten fiksering i 10% formalin. Næste morgen, indlejre prøverne i paraffin til trækning, efterfulgt af de-voksning re-hydrering med en ethanol serie og hæmoxylin og eosin farvning i henhold til standard histopatologiske analyseprotokoller.Sammenlignet med ubehandlede galdeatresi mus, sølv nanopartikel behandlede dyr demonstrere reduceret gulsot og opretholde deres normale kropsvægt. Niveauerne af bilirubin metabolisme og hepatisk transaminase falde til normale kontrolværdier, hvilket tyder på, at sølv nanopartikler i høj grad forbedre leverfunktionen. Ekstrahepatisk cholangiografi med methylenblå farvning bekræfter galdegang patency efter sølv nanopartikel behandling, og H & E farvning afslører et betydeligt fald i inflammatorisk celle infiltration i leverportal område af mus behandlet med sølv nanopartikler i forhold til kontrol.Flow site og metrisk analyse viser tilstedeværelsen af betydeligt færre NK celler i leveren af sølv nanopartikel behandlede dyr sammenlignet med ubehandlede rhesus rotavirus inficerede mus. Yderligere immunhisemisk farvning afslører et væsentligt reduceret udtryk for NK cellemarkør farvning i portalen triade af sølv nanopartikel behandlede mus i forhold til rhesus rotavirus inficerede dyr. Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at huske, at praksis vil give de bedste resultater.Efter denne procedure, som metoder som konjugering sølv nanopartikler til andre ting kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om aktiviteten af læsioner i behandlinger af BA i musemodeller. er udvikling. Denne teknik gav en måde for forskere inden for gastroenterologi til BA eller andre sygdomme såsom kolestase i leveren.Glem ikke, at arbejde med forskning rotavirus kan være yderst farligt, og dermed forholdsregler såsom at bære passende personlige værnemidler bør altid tages, når du udfører denne procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging af<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner i mus

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer Cell Isolation for Nanopartikel Toksicitet Testing

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En ikke-invasiv og Teknisk Ikke-intensive Metode til induktion og fænotype for Eksperimentel bakteriel lungebetændelse i mus

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion af lammelse og visuelle System skade i mus af T celler specifik for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metode til måling af spytkirtel funktion i mus

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Dyb venøs trombose induceret af Stasis i mus overvåges af høj frekvens ultralyd

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...