Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

De AgNPs die hier gebruikt waren een geschenk van C. M. Che in het departement chemie, de Universiteit van Hongkong. Dit werk werd gefinancierd door het National Natural Science Foundation of China (nr. 81600399) en de wetenschap en de technologie Project van Guangzhou (No.201707010014).

Alle dierlijke experimentele protocollen zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik van het Comité van de zon Yat-Sen University Laboratory Animal Center (#IACUC-DB-16-0602).
1. vaststelling van de muismodel biliaire atresie
<ol><li>Zwangere BALB/c muizen in een specifieke pathogenen vrije omgeving onder een 12u donker/licht cyclus bij 25 ° C, met toegang tot gesteriliseerde met autoclaaf chow ad libitumhandhaven.</li>
	<li>Ter voorbereiding van de RVV-stam MMU...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs Exposeren krachtige breed-spectrum antibacteriële eigenschappen en een sterke permeabiliteit22; Daarnaast worden ze gebruikt voor de productie van een scala van antibacteriële geneesmiddelen23. Echter kan AgNPs lang duren om te wissen zodra ze in organen accumuleren, en deze volharding tot toxische effecten24,25 leiden kan. Een eerdere studie onderzocht de acute toxiciteit en genotoxiciteit van AgNPs na een ...

BA is een vorm van cholestase gekenmerkt door aanhoudende geelzucht en heeft hoge mortaliteit bij gebrek aan lever transplantatie. Virale infecties zijn nauw verbonden met de pathogenese van BA. Het cytomegalovirus, reovirus en rotavirus hebben al gesuggereerd als pathogenen in BA1,2,3. In de neonatale periode, de reactie van de onrijpe immuunsysteem op een virale infectie resulteert in immuun disregulatie tegen extra- en Intrahepatische galwegen, wat leidt tot biliaire epitheliale cellen apoptosis, inflammatoire cel infiltratie in de portal gebied, Intrahepatische en extrahepatic gal duct obstructie, en ten slotte leverfibrose4,5,6.
De gebruikte diermodel voor BA studies betreft het enten van een neonatale muis met de rhesus rotavirus (RVV). De muis ontwikkelt meestal geelzucht na 5-6 dagen, met een laag lichaamsgewicht en acholic ontlasting. De rol van de immuunrespons bij het ziekteproces is kritisch zijn, vooral voor natural killer (NK) cellen; de uitputting van deze cellen met anti-NKG2D antistof vermindert sterk schade BA-geïnduceerde7. Bovendien andere cellen, met inbegrip van CD4+ T cellen, CD8+ T cellen, dendritische cellen en regulatoire T-cellen, al is aangetoond dat ze spelen een rol in de ziekte8,9,10,11. Alle gegevens suggereren de onmisbare aard van het immuunsysteem in de loop van BA.
Zilveren nanodeeltjes (AgNPs) hebben aangetoond dat hebben gunstige effecten tegen sommige besmettelijke ziekten, waaronder bacteriële infecties12 en virale infecties13,14,15. Echter dan dermatologische gebruik, hebben weinig studies gebruikt AgNPs in een klinische behandeling, vooral vanwege hun mogelijke toxiciteit. In dierproeven, hebben onderzoekers in het algemeen de werkzaamheid van AgNPs toegediend via mondelinge16 of intraveneuze methoden17bestudeerd. Echter hebben geen andere onderzoekers onderzocht de doeltreffendheid van de AgNPs toegediend via een injectie intraperitoneaal (i.p.) in neonatale muis experimenten, die een eenvoudige en snelle methode leidt tot een meer direct effect op de lever en galwegen terwijl vermindering van de toxiciteit voor andere systemen, zoals het immuunsysteem. AgNPs is gebleken dat bij NK cel activiteit18; dus we getest de therapeutische effecten van AgNPs toegediend via i.p. injectie in de BA-muismodel.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Biliaire atresie (BA) is een ernstige vorm van Acute cholangitis met hoge mortaliteit bij kinderen waarvan de etiologie is nog steeds niet volledig begrepen. Virale infecties kunnen een mogelijke oorzaak zijn. De typische diermodel gebruikt voor het bestuderen van BA is opgericht door het enten van een neonatale muis met een rhesus-rotavirus. Zilveren nanodeeltjes hebben aangetoond dat de antibacteriële en antivirale werking; hun functie in de BA-muismodel wordt geëvalueerd in deze studie. Momenteel zijn de methoden die worden gebruikt ter verbetering van de symptomen van BA muizen in BA dierproeven, meestal symptomatische behandelingen gegeven via voedsel of andere drugs. Het doel van deze studie is om aan te tonen van een nieuwe methode voor de verbetering van BA syndroom in muizen door de intraperitoneale injectie van zilveren nanodeeltjes en om te voorzien in gedetailleerde methoden voor het voorbereiden van de zilveren nanoparticle gel formulering. Deze methode is eenvoudig en breed inzetbaar en kan worden gebruikt voor het onderzoek van het mechanisme van BA, evenals in klinische behandelingen. Gebaseerd op het model van de muis BA, wanneer de muizen geelzucht vertonen, wordt de bereid zilveren nanoparticle gel geïnjecteerd intraperitoneally op het oppervlak van de lagere lever. De status van de overleving is waargenomen, en biochemische indicatoren en lever histopathologisch onderzoek worden onderzocht. Met deze methode kunt een meer intuïtieve inzicht van zowel de inrichting van de BA-model en de roman BA behandelingen.

Op basis van de gevestigde muismodel van BA, de geïnfecteerde pasgeborenen muizen werden toegediend een i.p. injectie van het bereide AgNP collageen mengsel 2 x na het tentoonstellen van geelzucht. Muis overleven dagelijks werd gecontroleerd en leverfunctie testen, lever pathologie en stroom cytometry werden uitgevoerd. In vergelijking met de onbehandelde BA muizen, de AgNP behandelde muizen toonde verminderde geelzucht en onderhouden van hun normale lichaamsgewicht (<strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Een zilveren Nanoparticle methode voor verbetering van biliaire atresie syndroom in muizen

Dit artikel beschrijft in detail een methode gebaseerd op zilveren nanodeeltjes voor verbetering van biliaire atresie syndroom in een experimentele biliaire atresie muismodel. Een solide begrip van het voorbereidingsproces reagens en de injectietechniek neonatale muis zal helpen onderzoekers vertrouwd met de methode gebruikt bij neonatale muis model studies.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Deze methoden kunnen helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in biliaire atresie. Van BA opvattingen over ziekte, pathogenese en behandeling. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de neonatale muis injectie techniek zal onderzoekers helpen om vertrouwd te raken met de methode voor andere neonatale muis model studies.De implicaties van deze techniek uit te breiden tot de therapie van BA als verschillende nanodeeltjes van betekenis Hoewel deze methode inzicht kan geven in BA behandeling, het kan ook worden toegepast op andere systemen, zoals neonatale muis modellen van de pathogenese van deze Over het algemeen op de manier waarop deze methode zal omdat de kleine omvang van neonatale muizen kan resulteren in de bouw van injectieproces. Om galia in een muismodel vast te stellen, laadt u het rhesus rotovirus in een insulinespuit van één milliliter die is uitgerust met een naald van 29 meter en levert intraperitoneally 1,2 keer 10 aan de 5e plaquevormende viruseenheden in 20 microliter van Dulbecco's Modified Eagle Medium tot elk neonaat binnen 24 uur na de geboorte. Breng de neonaten vervolgens terug naar hun moeder voor dagelijkse controle en weging.Wanneer de neonatale dieren tekenen van geelzucht beginnen te vertonen, laad een een milliliter spuit uitgerust met een 29-gauge naald met 50 microliters van vers bereide zilveren nanodeeltjes collageen oplossing per dier en gebruik de ringvinger om het been van een geelzucht dier schuin over de rechter dij te drukken. Langzaam introduceren van de naald onder een hoek van 15 graden in het buikvlies, en bij het bereiken van het oppervlak van de onderste rand van de lever, injecteren van de zilveren nanodeeltjes collageen mengsel. Wanneer al het mengsel is geïnjecteerd, verwijder dan langzaam de naald en laat het dier tien minuten rusten om het collageen te laten stollen en om te voorkomen dat de moeder de injectieplaats likt.Breng de muizen vervolgens terug naar hun kooien voor dagelijkse controle. Op dag negen of twaalf na inenting, steriliseren de boven-en onderbuik met 75%ethanol, en immobiliseren de ledematen van een geïnfecteerde muis. Open de huid, spier en buikvlies langs de middellijn naar de xyphoid, en gebruik een steriel wattenstaafje om het maag-darmkanaal te verwijderen om het middenrif volledig bloot te leggen.Steek de naald van een geloste een milliliter insulinespuit in de linker ventrikel van het hart, en trek langzaam de spuit zuiger om het maximale bloedvolume te verkrijgen. Breng het bloed naar een 1,5 milliliter buis voor een 30 minuten incubatie bij kamertemperatuur en pellet de rode bloedcellen door centrifugatie. Verzamel dan het serum voor latere analyse.Voor extrahepatische cholangiografie, gebruik een wattenstaafje om volledig bloot de lever, galblaas en extrahepatische galwegen. Na het fotograferen van het verschijnen van de lever en galwegen onder een ontledenmicroscoop, gebruik oogheelkundig tangen om de onderkant van de galblaas voorzichtig te grijpen en langzaam de naald van een een milliliter spuit geladen met methyleenblauwe oplossing in de galblaasholte te steken. Grijpen de naald met de tangen, langzaam infuus 10-20 microliter van methyleen blauw.Wanneer de kleurstof door de extrahepatische galwegen naar het jejunum gaat, krijgt u een andere foto van het weefsel. Dan voor hematoxyline en eosine vlekken, oogst de lever van elk dier voor 's nachts fixatie in 10% formaline. De volgende ochtend, insluiten de monsters in paraffine voor sectioning, gevolgd door de-waxing re-hydratatie met een ethanol serie en hematoxylin en eosine vlekken volgens de standaard histopathologische analyse protocollen.Vergeleken met onbehandelde galatresiemuizen vertonen zilvernanodeeltjes behandelde dieren verminderde geelzucht en behouden hun normale lichaamsgewicht. De niveaus van bilirubine metabolisme en levertransaminase dalen tot normale controlewaarden, wat suggereert dat de zilveren nanodeeltjes de leverfunctie sterk verbeteren. Extrahepatische cholangiografie met methyleenblauwe vlekken bevestigt galkanaalfasency na zilveren nanodeeltjesbehandeling, en H&E-vlekken onthullen een significante afname van ontstekingscelinfiltratie in het leverportaalgebied van muizen die met zilveren nanodeeltjes worden behandeld in vergelijking met controles.Flow site en metrische analyse geeft de aanwezigheid van aanzienlijk minder NK cellen in de levers van zilver nanodeeltje behandelde dieren in vergelijking met onbehandelde rhesus rotavirus geïnfecteerde muizen. Verdere immunohistochemische kleuring onthult een aanzienlijk verminderde expressie van NK celmarkering in het portaal triade van zilver nanodeeltjes behandelde muizen in vergelijking met rhesus rotavirus geïnfecteerde dieren. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden dat de praktijk de beste resultaten zal geven.Na deze procedure, als methoden zoals het conjugating van zilveren nanodeeltjes aan andere dingen kan worden uitgevoerd om aanvullende vragen over de activiteit van laesies in de behandelingen van BA in muismodellen te beantwoorden. is ontwikkeling. Deze techniek bood een manier voor onderzoekers op het gebied van gastro-enterologie aan BA of andere ziekten zoals cholestasis in de lever.Vergeet niet dat het werken met onderzoek rotavirus kan zeer gevaarlijk zijn, en dus voorzorgsmaatregelen zoals het dragen van de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen moet altijd worden genomen bij het uitvoeren van deze procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Met behulp van Bioluminescent Imaging naar Synergie Onderzoek Between Streptococcus pneumoniae En influenza A-virus bij jonge muizen

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Genotypische Inferentie van HIV-1 tropisme de populatie-gebaseerde Sequencing van V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Met behulp van Luciferase naar Afbeelding bacteriële infecties in Muizen

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

Een methode voor het labelen van bloedvaten in Embryonic Muizen

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D multimodale beeldvorming van<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infecties in Muizen

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer Cell Isolatie Nanoparticle toxiciteit testen

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Een niet-invasieve en Technisch Niet-intensieve methode voor Inductie en fenotypering van experimentele bacteriële longontsteking in Muizen

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Inductie van verlamming en visuele systeem schade in muizen door T cellen specifiek voor Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...