Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

Die hier verwendeten AgNPs waren ein Geschenk von C. M. Che im Department of Chemistry, University of Hong Kong. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Nr. 81600399) und der Wissenschaft und Technologie-Projekt von Guangzhou (No.201707010014) finanziert.

Alle tierischen experimentelle Protokolle wurden von der institutionellen Animal Care und Nutzung von Sun Yat-Sen University Laboratory Animal Center (#IACUC-DB-16-0602) genehmigt.
1. Festlegung der biliären Atresie-Maus-Modell
<ol><li>Pflegen Sie schwanger BALB/c Mäuse in einem bestimmten Pathogen-freies Umfeld unter einem 12 h Hell/Dunkel-Zyklus bei 25 ° C, mit Zugang zum autoklaviert Chow Ad Libitum.</li>
	<li>Um die RRV Belastung MMU 18006 vorzubereiten, verstärken Sie das V...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs zeigen starke Breitspektrum antibakterielle Eigenschaften und eine starke Durchlässigkeit22; Darüber hinaus dienen sie verschiedenste antibakterielle medizinische Produkte23zu produzieren. Jedoch kann AgNPs dauern eine lange Zeit zu löschen, sobald sie reichern sich in den Organen, und diese Beharrlichkeit zu toxischen Wirkungen24,25führen kann. Eine frühere Studie untersuchte die akute Toxizität und Gen...

BA ist eine Form der Cholestase gekennzeichnet durch anhaltende Gelbsucht und hat hohe Sterblichkeitsrate in Ermangelung einer Lebertransplantation. Virale Infektionen sind eng verbunden mit der Pathogenese der BA. Das Zytomegalievirus wirtseigenen und Rotaviren sind alle als Krankheitserreger in BA1,2,3vorgeschlagen worden. In der Neugeborenenperiode ergibt sich die Antwort des unreifen Immunsystems auf eine virale Infektion immun Dysregulation gegen extra- und intrahepatischen Gallenwege, führt zur biliären Epithelzelle Apoptose, entzündliche Zelle eindringen in das portal Bereich, intrahepatischen und extrahepatische Gallenwege Obstruktion, und zu guter Letzt Leberfibrose4,5,6.
Die häufigsten verwendete Tiermodell für BA Studium beinhaltet die Impfung von Neugeborenen Maus mit Rhesus-Rotaviren (RRV). Die Maus entwickelt in der Regel Gelbsucht nach 5-6 Tagen zeigt ein niedriges Körpergewicht und acholic Hocker. Die Rolle der Immunantwort im Krankheitsprozess ist kritisch, vor allem für natürliche killer (NK)-Zellen; der Abbau dieser Zellen mit Anti-NKG2D Antikörper reduziert BA-induzierten Schäden7. Darüber hinaus andere Zellen, einschließlich CD4+ T-Zellen, CD8+ T Zellen, Dendritische Zellen und regulatorische T-Zellen wurden alle Rollen in der Krankheit8,9,10,11spielen gezeigt. Alle Daten deuten darauf hin das unverzichtbare Natur des Immunsystems im Zuge der BA.
Silber-Nanopartikel (AgNPs) wurden nachgewiesen, um wohltuende Wirkung gegen einige Infektionskrankheiten, einschließlich bakterieller Infektionen12 und Virusinfektionen13,14,15zu haben. Jedoch haben außer dermatologischen Nutzung nur wenige Studien AgNPs in eine klinische Behandlung, vor allem wegen ihrer potenziellen Toxizität verwendet. Im Tierversuch untersuchten Forscher in der Regel die Wirksamkeit von AgNPs verwaltet über mündliche16 oder intravenöse Methoden17. Jedoch haben keine andere Forscher untersuchten die Wirksamkeit der AgNPs verwaltet über eine intraperitoneale (i.p.) Injektion bei Neugeborenen Maus experimentiert, die eine einfache und schnelle Methode um eine direktere Wirkung auf die Leber und Gallenwege während führt reduziert die Toxizität zu anderen Systemen, wie das Immunsystem. AgNPs haben gezeigt, dass NK Zelle Aktivität18beeinflussen; Daher haben wir die therapeutische Wirkung von AgNPs verwaltet über i.p.-Injektion in den BA-Maus-Modell getestet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Biliären Atresie (BA) ist eine schwere Form der Cholangitis mit einer hohen Mortalität bei Kindern, von denen die Ätiologie noch nicht vollständig verstanden wird. Virale Infektionen können eine mögliche Ursache sein. Die typische Tiermodell verwendet für das Studium BA wird von einer Neugeborenen Maus mit einem Rhesus-Rotaviren impfen gegründet. Silber-Nanopartikel sind gezeigt worden, um antibakterielle und antivirale Wirkung auszuüben; Ihre Funktion in der BA-Maus-Modell wird in dieser Studie ausgewertet. Derzeit im Tierversuch BA die Methoden verwendet, um die Symptome von BA Mäusen zu verbessern in der Regel symptomatische Behandlungen über Lebensmittel oder andere Medikamente gegeben. Das Ziel dieser Studie ist eine neue Methode zur bessernde BA-Syndrom bei Mäusen durch die intraperitoneale Injektion von Silber-Nanopartikeln zu demonstrieren und detaillierte Verfahren zur Herstellung von Silber-Nanopartikel Gel-Formulierung zur Verfügung zu stellen. Diese Methode ist einfach und vielseitig einsetzbar und kann verwendet werden, um den Mechanismus der BA sowie in klinischen Behandlungen zu erforschen. Basierend auf der BA-Maus-Modell, wenn die Mäuse Gelbsucht aufweisen, wird das vorbereitete Silber Nanopartikel Gel intraperitoneal an die Oberfläche der unteren Leber gespritzt. Der Überlebens-Status wird beobachtet, und biochemische Indikatoren und Leber Histopathologie geprüft. Diese Methode ermöglicht ein intuitiveres Verständnis für die Einrichtung das BA-Modell und die neue BA-Behandlungen.

Basierend auf den etablierten BA-Maus-Modell, die infizierten Neugeborenen Mäusen verabreicht wurden eine i.p.-Injektion von vorbereitete Psychopharmakologie Kollagen Mischung 2 X nach Ausstellung Gelbsucht. Maus überleben wurde für den täglichen überprüft, und Leberfunktion Tests, Leber Pathologie und Durchflusszytometrie wurden durchgeführt. Im Vergleich zu den unbehandelten Kontrolle BA Mäusen, Psychopharmakologie-behandelten Mäusen zeigte reduzierte Gelbsucht und gepflegt ihr...

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A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Eine Silber Nanopartikel-Methode für bessernde biliären Atresie-Syndrom bei Mäusen

Dieser Artikel beschreibt ausführlich eine Methode basierend auf Silber-Nanopartikel für bessernde biliären Atresie-Syndrom in einem Mausmodell der experimentellen biliären Atresie. Ein solides Verständnis der Vorbereitungsprozess Reagenz und die Neugeborenen Maus Injektionstechnik hilft Forschern mit der Methode in Studien an Neugeborenen Mäusen Modell vertraut zu machen.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Diese Methoden können helfen, schlüsselhafte Fragen in Gallenatresie zu beantworten. Von BA Ansichten über Krankheit, Pathogenese und Behandlung. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die neonatale Maus-Injektionstechnik Forschern helfen wird, sich mit der Methode für andere neonatale Mausmodellstudien vertraut zu machen.Die Implikationen dieser Technik reichen auf die Therapie von BA als mehrere Nanopartikel von Bedeutung Obwohl diese Methode Einblick in die BA-Behandlung bieten kann, kann es auch auf andere Systeme wie neonatale Mausmodelle der Pathogenese dieser allgemein in der Weise angewendet werden, wie dies zu dieser Methode wird, weil die geringe Größe von neonatalen Mäusen in den Aufbau eines Injektionsprozesses führen kann. Um die Gallenatresie in einem Mausmodell zu etablieren, laden Sie das Rhesus-Rotovirus in eine einMilliliter-Insulinspritze, die mit einer 29-Spur-Nadel ausgestattet ist, und liefern Sie innerhalb von 24 Stunden nach der Geburt 1,2 mal 10 bis 10. Plaque-bildende Viruseinheiten in 20 Mikroliter n.G. Dulbeccos Modifiziertem Adlermedium zu jedem Neugeborenen. Dann geben Sie die Neonate an ihre Mutter für die tägliche Überwachung und Wiegen.Wenn die neugeborenen Tiere beginnen, Anzeichen von Gelbsucht zu zeigen, laden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 29-Spur-Nadel mit 50 Mikroliter frisch zubereiteten Silber Nanopartikel Kollagen Lösung pro Tier ausgestattet und verwenden Sie den Ringfinger, um das Bein eines verblendeten Tieres schräg über den rechten Oberschenkel drücken. Führen Sie die Nadel langsam in einem 15-Grad-Winkel in das Peritoneum ein und injizieren Sie beim Erreichen der Oberfläche des unteren Leberrandes die Silber-Nanopartikel-Kollagenmischung. Wenn die gesamte Mischung injiziert wurde, entfernen Sie langsam die Nadel und lassen Sie das Tier für zehn Minuten ruhen, damit das Kollagen verfestigt werden und um zu verhindern, dass die Mutter die Injektionsstelle lecken.Dann bringen Sie die Mäuse zur täglichen Überwachung in ihre Käfige zurück. Am neunten oder zwölften Tag nach der Impfung den Ober- und Unterbauch mit 75% Ethanol sterilisieren und die Gliedmaßen einer infizierten Maus immobilisieren. Öffnen Sie die Haut, den Muskel und das Peritoneum entlang der Mittellinie zum Xyphoiid und verwenden Sie einen sterilen Wattestäbchen, um den Magen-Darm-Trakt zu entfernen, um das Zwerchfell vollständig freizulegen.Setzen Sie die Nadel einer entladenen Ein-Milliliter-Insulinspritze in den linken Herzschlitz ein und ziehen Sie den Spritzenkolben langsam zurück, um das maximale Blutvolumen zu erhalten. Übertragen Sie das Blut in eine 1,5 Milliliter-Röhre für eine 30-minütige Inkubation bei Raumtemperatur und pellet die roten Blutkörperchen durch Zentrifugation. Dann sammeln Sie das Serum für die spätere Analyse.Für die extrahepatische Cholangiographie verwenden Sie einen Wattestäbchen, um die Leber, Gallenblase und extrahepatische Gallengänge vollständig freizulegen. Nachdem Sie das Auftreten der Leber- und Gallengänge unter einem Sezierendes Mikroskop fotografiert haben, verwenden Sie die ophthalmologische Zange, um den Boden der Gallenblase sanft zu erfassen und langsam die Nadel einer ein Milliliter-Spritze, die mit Methylenblau-Lösung beladen ist, in die Gallenblase einzufügen. Greifen Sie die Nadel mit den Zangen, langsam infundieren 10-20 Mikroliter Methylenblau.Wenn der Farbstoff durch die extrahepatischen Gallengänge zum Jejunum gelangt, erhalten Sie ein weiteres Foto des Gewebes. Dann für Hämatoxylin und Eosin Färbung, ernten Sie die Leber von jedem Tier für die über Nacht Fixierung in 10%formalin. Am nächsten Morgen, einbetten sie die Proben in Paraffin für die Schnittung, gefolgt von der Entwachsung der Rehydratation mit einer Ethanol-Serie und Hämatoxylin- und Eosinfärbung nach standardhistopathologischen Analyseprotokollen.Im Vergleich zu unbehandelten Gallenatresie-Mäusen zeigen silbernanopartikelbehandelte Tiere eine reduzierte Gelbsucht und halten ihr normales Körpergewicht aufrecht. Die Konzentrationen des Bilirubin-Stoffwechsels und der Lebertransaminase sinken auf normale Kontrollwerte, was darauf hindeutet, dass die Silber-Nanopartikel die Leberfunktion stark verbessern. Die extrahepatische Cholangiographie mit Methylenblaufärbung bestätigt die Gallengangsdurchgängigkeit nach der Behandlung von Silber-Nanopartikeln, und die H&E-Färbung zeigt eine signifikante Abnahme der entzündlichen Zellinfiltration im Leberportalbereich von Mäusen, die mit Silber-Nanopartikeln behandelt wurden, im Vergleich zu Kontrollen.Flow Site und metrische Analyse zeigen das Vorhandensein von deutlich weniger NK-Zellen in den Lebern von Silber Nanopartikel behandelt enthäuten Tieren im Vergleich zu unbehandelten Rhesus-Rotavirus infizierten Mäusen. Weitere immunhistochemische Färbung zeigt eine wesentlich reduzierte Expression von NK-Zellmarker-Färbung in der Portal-Triade von Silber-Nanopartikel behandelt Mäuse im Vergleich zu Rhesus rotavirus infizierten Tieren. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Praxis die besten Ergebnisse liefert.Im Anschluss an dieses Verfahren können Methoden wie das Konjugieren von Silber-Nanopartikeln zu anderen Dingen durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über die Aktivität von Läsionen bei der Behandlung von BA in Mausmodellen zu beantworten. ist Entwicklung. Diese Technik bot Forschern auf dem Gebiet der Gastroenterologie eine Möglichkeit, BA oder andere Krankheiten wie Cholestase in der Leber.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Forschung Rotavirus extrem gefährlich sein kann, und daher Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen der entsprechenden persönlichen Schutzausrüstung sollte immer bei der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Mit Bioluminescent Imaging, um Synergie von Untersuchen Streptococcus pneumoniae Und Influenza A Virus in Infant Mäuse

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Genotypische Inference von HIV-1 Tropismus mit Populations-basierte Sequenzierung von V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Mit Luciferase to Image Bakterielle Infektionen bei Mäusen

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

Ein Verfahren zur Markierung Gefäßsystem in embryonalen Mäuse

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Imaging von Multimodalität<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektionen bei Mäusen

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer Zelle Isolierung für die Toxizität von Nanopartikeln Testing

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Ein Nicht-invasive und in technischer Hinsicht nicht intensive Verfahren zur Induktion und Phänotypisierung für experimentelle bakterielle Pneumonie bei Mäusen

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion von Lähmung und visuelles System Verletzungen bei Mäusen durch T-Zellen spezifisch für Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Eine Methode zur Messung der Speicheldrüse Funktion bei Mäusen

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Tiefe Venenthrombose, induziert durch Stauung in den Mäusen durch Hochfrequenz-Sonographie überwacht

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...