Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

AgNPs המשמש כאן היו מתנה צ'ה מ ג במחלקה לכימיה, אוניברסיטת הונג קונג. עבודה זו מומן על ידי את נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (מספר 81600399) ואת מדע וטכנולוגיה פרוייקט של גואנגזו (No.201707010014).

כל הפרוטוקולים ניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה של סון יאט-סן מעבדה חיה המרכז האוניברסיטאי (#IACUC-DB-16-0602).
1. יצירת המודל העכבר בהכנת בכיס המרה
<ol><li>לשמור על עכברים BALB/c בהריון סביבה נטולת פתוגן מסוים תחת מחזור כהה/אור 12 שעות ב- 25 ° C, עם גישה...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs שהפגינו אנטיבקטריאליות חזקות נגד בקטריה, חדירות חזקות22; בנוסף, הם משמשים כדי לייצר מגוון של מוצרים רפואיים אנטי בקטריאלי23. עם זאת, AgNPs יכול לקחת זמן רב כדי לנקות פעם הם נצברים באיברים, התמדה זה עלול להוביל ההשפעות הרעילות24,25. מחק?...

BA היא צורה של לחסימת מרה תוך כבדית מאופיין צהבת מתמשכת וכוללת תמותה גבוהה בהיעדרו של השתלת כבד. זיהומים נגיפיים קשורים קשר הדוק בפתוגנזה של בואנוס איירס. Cytomegalovirus, reovirus ו בנגיף כל שהוצעו פתוגנים BA1,2,3. במהלך תקופת neonatal, התגובה של המערכת החיסונית לא בשלה זיהום ויראלי תוצאות dysregulation מחוסן נגד צינורות המרה נוספת - ו intrahepatic, המוביל אפופטוזיס בכיס המרה תא אפיתל, חדירה לתא דלקתי בפורטל אזור, חסימת צינור המרה intrahepatic ו extrahepatic, ולבסוף, פיברוזיס בכבד-4,-5,-6.
המודל בעלי חיים הנפוצים ללימודי תואר ראשון מערב את חיסון של עכבר neonatal עם בנגיף רזוס (RRV). העכבר בדרך כלל מתפתחת צהבת אחרי 5-6 ימים, מציג משקל גוף נמוך ושרפרפים acholic. תפקידו של התגובה החיסונית של תהליך המחלה הוא קריטי, במיוחד עבור הרוצח הטבעיים (NK) תאים; דלדול של תאים אלה עם נוגדן anti-NKG2D מקטינה באופן משמעותי את הנזק BA-induced7. יתר על כן, לשני תאים, כולל CD4+ T תאים, התאים CD8+ T תאים תאים דנדריטים, תאי T רגולטוריים, כל הוכחו ממלאים תפקידים10,119,8,המחלה. כל הנתונים מראים הטבע הכרחית של המערכת החיסונית במהלך תואר ראשון.
סילבר חלקיקים (AgNPs) הוכחו להיות השפעות מועיל נגד מחלות זיהומיות מסוימות, כולל זיהומים חיידקיים12 וזיהומים וירליים13,14,15. עם זאת, מלבד השימוש דרמטולוגיים, מחקרים מעטים השתמשו AgNPs בטיפול קליני, בעיקר בגלל רעילות פוטנציאלית שלהם. בניסויים על בעלי חיים, החוקרים למדו בדרך כלל את היעילות של AgNPs ניתנת דרך הפה16 או שיטות תוך ורידי17. עם זאת, אין חוקרים אחרים למדו את היעילות של AgNPs מנוהל באמצעות זריקה בקרום הבטן (i.p.) neonatal עכבר ניסויים, מה שיטה פשוטה ומהירה שמוביל השפעה ישירה יותר על הכבד ועל צינורות המרה בזמן הפחתת רעילותם למערכות אחרות, כגון מערכת החיסון. AgNPs הוכחו להשפיע על פעילות תאי NK18; לכן, בדקנו את ההשפעות הטיפוליות של AgNPs מנוהל באמצעות הזרקת i.p. במודל עכבר BA.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

בהכנת בכיס המרה (BA) הוא סוג חמור של דרכי המרה עם תמותה גבוהה אצל ילדים אשר האטיולוגיה עדיין לא לגמרי מובן. זיהומים נגיפיים יכול להיות אחת הסיבות האפשריות. המודל בעלי חיים אופייני בשימוש ללמוד תואר ראשון נקבע לפי מזריקים עם בנגיף רזוס העכבר neonatal. סילבר חלקיקים הוכחו להפעיל אפקטים אנטי-בקטריאליים וויראליים; תפקידם במודל עכבר BA מוערך במחקר זה. כיום, בניסויים על בעלי חיים BA, האמצעים שננקטו כדי לשפר את הסימפטומים של BA עכברים הם טיפולים בדרך כלל סימפטומטי ניתן דרך מזון או תרופות אחרות. מטרת מחקר זה היא להפגין שיטה חדשה עבור ameliorating BA תסמונת בעכברים על ידי הזרקה בקרום הבטן של סילבר חלקיקים מספקים נתונים היסטוריים שיטות להכנת ננו-חלקיק כסף ניסוח ג'ל. שיטה זו פשוט וקל החלים נרחב והוא יכול לשמש כדי לחקור את המנגנון של בואנוס איירס, כמו גם טיפולים קליניים. בהתבסס על המודל העכבר BA, כאשר העכברים התערוכה צהבת, הג'ל ננו-חלקיק כסף מוכן מוזרק intraperitoneally אל פני השטח של הכבד נמוכה יותר. הוא ציין את מצב הישרדות, אינדיקטורים הביוכימי, histopathology כבד נבדקים. שיטה זו מאפשרת הבנה אינטואיטיבית יותר של שניהם על הקמת דגם BA וטיפולים חדשניים BA.

בהתבסס על המודל העכבר BA הוקמה, העכברים neonatal נגוע נוהלו זריקה i.p. של התערובת קולגן AgNP מוכן 2 x לאחר שהציגה צהבת. העכבר הישרדות היה ייבדק יומית, בוצעו בדיקות תפקודי כבד, כבד, מחלות cytometry זרימה. בהשוואה לעכברים BA שליטה ללא טיפול, העכברים שטופלו AgNP הראה צהבת מופחתת ומתוחזק משקל גו...

Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

שיטת ננו-חלקיק כסף Ameliorating בהכנת בכיס המרה תסמונת בעכברים

מאמר זה מתאר בפירוט שיטה המבוססת על סילבר חלקיקים עבור ameliorating בהכנת בכיס המרה תסמונת במודל עכבר ניסיוני בהכנת בכיס המרה. הבנה עמוקה של תהליך הכנה ריאגנט ואת טכניקת ההזרקה neonatal העכבר יסייע להכיר חוקרים השיטה שבה נעשה שימוש במחקרים דגם העכבר neonatal.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

שיטות אלה יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח ב atresia המרה. של BA תצוגות על מחלה, פתוגנזה וטיפול. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי טכניקת הזרקת עכבר יילודים יעזור לחוקרים להכיר את השיטה עבור מחקרים אחרים מודל עכבר יילודים.ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לכיוון הטיפול של BA כמו מספר חלקיקים של משמעות למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה לתוך הטיפול BA, זה יכול להיות מיושם גם על מערכות אחרות כגון מודלים עכבר יילודים של הפתוגנזה של זה בדרך כלל בדרך זו לשיטה זו יהיה כי גודל קטן של עכברים יילודים יכול לגרום לבניית תהליך ההזרקה. כדי להקים atresia המרה במודל העכבר, לטעון את rotovirus רזוס לתוך מזרק אינסולין מיליליטר אחד מצויד מחט 29-מד, ולספק תוך-עינית 1.2 פעמים 10 ליחידות 5 לוח להרכיב של וירוס ב 20 microliters של דולבקו שונה הנשר בינוני לכל ניאון בתוך 24 שעות של הלידה. ואז להחזיר את הנידון לאמא שלהם לניטור יומי ושיקול.כאשר חיות יילודים מתחילות להפגין סימנים של צהבת, לטעון מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט 29 מד עם 50 microliters של פתרון קולגן ננו חלקיקי כסף מוכן טרי לכל בעל חיים ולהשתמש באצבע הטבעת ללחוץ על רגלו של בעל חיים צהבהב אחד אלכסוני מעל הירך הימנית. לאט להציג את המחט בזווית של 15 מעלות לתוך הצמיטונום, ועל ידי הגעה לפני השטח של הקצה התחתון של הכבד, להזריק את תערובת קולגן חלקיקי כסף. כאשר כל התערובת הוזרקה, להסיר לאט את המחט ולאפשר את החיה לנוח במשך עשר דקות כדי לאפשר קולגן להתגבש ולמנוע את האם מלקק את אתר ההזרקה.ואז להחזיר את העכברים לכלובים שלהם לניטור יומי. ביום תשע או שתים עשרה לאחר החיסון, לחסן את הבטן העליונה והתחתון עם 75%אתנול, ולשתק את הגפיים של עכבר נגוע. פתח את העור, השריר ואת צפק לאורך קו האמצע כדי xyphoid, ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי להסיר את מערכת העיכול כדי לחשוף באופן מלא את הסרעפת.הכנס את המחט של מזרק אינסולין אחד מיליליטר לא טעון לתוך החדר השמאלי של הלב, ולאט לאט לסגת בוכנה מזרק כדי להשיג את נפח הדם המרבי. מעבירים את הדם לצינור 1.5 מיליליטר עבור דגירה של 30 דקות בטמפרטורת החדר ומעבירים את תאי הדם האדומים על ידי צנטריפוגה. ואז לאסוף את הנסיוב לניתוח מאוחר יותר.עבור cholangiography extrahepatic, להשתמש ספוגית כותנה לחשוף באופן מלא את הכבד, כיס המרה ותעלות מרה extrahepatic. לאחר צילום המראה של צינורות הכבד והמרה תחת מיקרוסקופ ניתוח, השתמש במטלות עיניים כדי לתפוס בעדינות את תחתית כיס המרה ולהכניס לאט את המחט של מזרק מיליליטר אחד טעון בתמיסה כחולה מתילן לחלל כיס המרה. אוחז את המחט עם המדפים, לאט להחדיר 10-20 microliters של כחול מתילן.כאשר הצבע עובר דרך צינורות המרה החוץ-פתגמית אל הג'ג'ונום, השג תמונה נוספת של הרקמה. לאחר מכן להמטוקסילין וכתמי אאוסין, לקצור את הכבד מכל בעל חיים עבור קיבעון לילה ב 10% פורמלין. למחרת בבוקר, להטמיע את הדגימות בפרפין עבור חתך, ואחריו דה שעווה לחות מחדש עם סדרת אתנול ו מכתים hematoxylin ו אאוסין על פי פרוטוקולי ניתוח היסטופתולוגי סטנדרטי.בהשוואה לעכברי אטרסיה מרה לא מטופלים, בעלי חיים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף מדגימים צהבת מופחתת ושומרים על משקל גופם הרגיל. רמות חילוף החומרים בילירובין ו transaminase הכבד לרדת לערכי שליטה נורמלית, מה שמרמז כי חלקיקי כסף לשפר מאוד את תפקוד הכבד. cholangiography extrahepatic עם כתמים כחולים מתילן מאשר רפיון צינור המרה לאחר טיפול ננו-חלקיקים כסף, וכתמים H&E מגלה ירידה משמעותית חדירת תאים דלקתיים באזור פורטל ההפטי של עכברים שטופלו חלקיקים כסף לעומת פקדים.אתר זרימה וניתוח מטרי מצביעים על נוכחותם של פחות תאי NK באופן משמעותי בכבדים של בעלי חיים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף בהשוואה לעכברים נגועים רזוס rotavirus מטופלים. כתמים אימונוהיסטוכימיים נוספים חושפים ביטוי מופחת באופן משמעותי של כתמי סמן תא NK בשלישיית הפורטל של עכברים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף בהשוואה לבעלי חיים נגועים רזוס rotavirus. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי התרגול ייתן את התוצאות הטובות ביותר.בעקבות הליך זה, כמו שיטות כמו העלאת חלקיקי כסף לדברים אחרים ניתן לבצע כדי לענות על שאלות נוספות על פעילות של נגעים בטיפולים של BA במודלים העכבר. היא התפתחות. טכניקה זו סיפקה דרך לחוקרים בתחום הגסטרואנטרולוגיה ל BA או מחלות אחרות כגון cholestasis בכבד.אל תשכח כי עבודה עם rotavirus מחקר יכול להיות מסוכן מאוד, ולכן אמצעי זהירות כגון לבישת ציוד מגן אישי המתאים תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

הסקה Genotypic של כמיהות HIV-1 שימוש אוכלוסייה מבוססת רצף של V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

שימוש בלוציפראז לזיהומים חיידקיים תמונה ב עכברים

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

שיטה תיוג vasculature ב עכברים עובריים

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

הדמיה של multimodality 4D<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; זיהומים בעכברים

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

בידוד תא Kupffer לNanoparticle בדיקת רעילות

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

אינדוקציה של שיתוק ופציעה מערכת הראייה אצל עכברים מאת T תאים ספציפיים עבור אופטיקה Neuromyelitis Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...