Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
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Il AgNPs usato qui erano un regalo da C. M. Che il dipartimento di chimica, Università di Hong Kong. Questo lavoro è stato finanziato dal National Natural Science Foundation of China (No. 81600399), la scienza e la tecnologia progetto di Guangzhou (No.201707010014).

Tutti i protocolli sperimentali animali sono stati approvati dal comitato di uso del Sun Yat-Sen University laboratorio animale centro (#IACUC-DB-16-0602) e istituzionali Animal Care.
1. che stabilisce il modello del Mouse di Atresia biliare
<ol><li>Mantenere incinto topi BALB/c in un ambiente privo di agente patogeno specifico nell'ambito di un ciclo di buio/luce 12 h a 25 ° C, con accesso a chow in autoclave ad libitum.</li>
	<li>Per preparare il ceppo RRV MMU 18006, amplificare ...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs Mostre potenti proprietà antibatteriche ad ampio spettro e un forte permeabilità22; Inoltre, essi vengono utilizzati per produrre una gamma di prodotti medicali antibatterico23. Tuttavia, AgNPs può richiedere molto tempo per cancellare una volta che si accumulano negli organi, e questa persistenza può portare a effetti tossici24,25. Un precedente studio ha esaminato la tossicità acuta e la genotossicità ...

BA è una forma di colestasi caratterizzata da ittero persistente e ha elevata mortalità in assenza di trapianto del fegato. Le infezioni virali sono strettamente associate con la patogenesi di BA. Il citomegalovirus, reovirus e rotavirus sono stati suggeriti come agenti patogeni in BA1,2,3. Durante il periodo neonatale, la risposta del sistema immunitario immaturo ad un'infezione virale provoca dysregulation immune contro dotti biliari extra - e intraepatiche, che portano all'apoptosi delle cellule epiteliali biliari, infiltrazione infiammatoria delle cellule nel portale zona, ostruzione dei dotti biliari intraepatici ed extrahepatic e infine, fibrosi del fegato4,5,6.
Il modello animale comunemente usato per gli studi di BA coinvolge l'inoculazione di un mouse neonatale con i rotavirus rhesus (RRV). Il mouse si sviluppa tipicamente ittero dopo 5-6 giorni, mostrando un basso peso corporeo e feci acoliche. Il ruolo della risposta immunitaria nel processo di malattia è fondamentale, soprattutto per le cellule natural killer (NK); l'esaurimento di queste cellule con l'anticorpo anti-NKG2D riduce notevolmente i danni indotti su BA7. Inoltre, altre cellule, compreso CD4+ T cellule, CD8+ T cellule, cellule dendritiche e cellule di T regolarici, sono state indicate per svolgere i ruoli nella malattia8,9,10,11. Tutti i dati suggeriscono il carattere indispensabile del sistema immunitario nel corso della BA.
Nanoparticelle d'argento (AgNPs) sono state dimostrate per avere effetti benefici contro alcune malattie infettive, tra cui infezioni batteriche12 e infezioni virali13,14,15. Tuttavia, diverso da quello d'uso dermatologico, pochi studi hanno utilizzato AgNPs in un trattamento clinico, soprattutto a causa della loro potenziale tossicità. Negli esperimenti sugli animali, i ricercatori hanno studiato in generale l'efficacia di AgNPs somministrato via orale16 o endovenosa metodi17. Tuttavia, nessun altri ricercatori hanno studiato l'efficacia di AgNPs somministrato tramite un'iniezione intraperitoneale (i.p.) nel topo neonatale esperimenti, che è un metodo semplice e veloce che conduce ad un effetto più diretto sul fegato e vie biliari mentre riducendo la tossicità di altri sistemi, quali il sistema immunitario. AgNPs hanno dimostrato di influenzare l' attività delle cellule NK18; di conseguenza, abbiamo testato gli effetti terapeutici di AgNPs somministrato tramite iniezione i.p. nel modello del topo di BA.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Atresia biliare (BA) è un tipo severo di colangite con alto tasso di mortalità nei bambini di cui l'eziologia ancora completamente non è capita. Le infezioni virali possono essere una causa possibile. Il tipico modello animale utilizzato per lo studio di BA è stabilito inoculando un mouse neonatale con un rotavirus rhesus. Nanoparticelle d'argento sono state indicate per esercitare gli effetti antivirali e antibatterici; la loro funzione nel modello del topo di BA viene valutata in questo studio. Attualmente, negli esperimenti sugli animali BA, i metodi utilizzati per migliorare i sintomi dei topi BA sono generalmente sintomatici trattamenti somministrati tramite cibo o altri farmaci. Lo scopo di questo studio è di dimostrare un nuovo metodo per il miglioramento di sindrome di BA in topi tramite l'iniezione intraperitoneale di nanoparticelle d'argento e di fornire metodi dettagliati per preparare la formulazione in gel di nanoparticelle d'argento. Questo metodo è semplice e ampiamente applicabile e può essere utilizzato per ricercare il meccanismo di BA, così come nei trattamenti clinici. Basato su modello del topo di BA, quando i topi presentano ittero, il gel preparati delle nanoparticelle d'argento è iniettato intraperitonealmente alla superficie del fegato inferiore. Si osserva lo stato di sopravvivenza, e gli indicatori biochimici e l'istopatologia del fegato sono esaminati. Questo metodo consente una comprensione più intuitiva di entrambi l'istituzione del modello BA e trattamenti novelli BA.

Basato su modello del topo di BA stabilito, i topi infetti neonatali sono stati amministrati un'iniezione i.p. di al preparato di collagene AgNP 2 x dopo aver esposto l'ittero. Sopravvivenza del mouse è stato controllato per tutti i giorni, e sono stati eseguiti test di funzionalità epatica, patologia del fegato e citometria a flusso. Rispetto ai topi non trattati di controllo BA, i topi AgNP-trattati ha mostrato ridotta ittero e mantenuto la loro peso corporeo normale (<strong class="x...

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A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Un metodo delle nanoparticelle d'argento per il miglioramento di sindrome di Atresia biliare nei topi

Questo articolo viene descritto in dettaglio un metodo basato su nanoparticelle d'argento per il miglioramento di sindrome di atresia biliare in un modello murino di atresia biliare sperimentale. Una solida comprensione del processo di preparazione del reagente e la tecnica di iniezione neonatale del mouse vi aiuterà a familiarizzare i ricercatori con il metodo utilizzato in studi di modello del mouse neonatale.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Questi metodi possono aiutare a rispondere a domande chiave in atresia biliare. Di opinioni BA su malattia, patogenesi e trattamento. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la tecnica di iniezione neonatale del topo aiuterà i ricercatori a familiarizzare con il metodo per altri studi sul modello di topo neonatale.Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia di BA come diverse nanoparticelle di significato Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul trattamento BA, può anche essere applicato ad altri sistemi come i modelli di topo neonatale della patogenesi di questo Generalmente nel modo in cui questo metodo lo farà perché le piccole dimensioni dei topi neonatale possono portare alla costruzione di un processo di iniezione. Per stabilire l'atresia biliare in un modello di topo, caricare il rotovirus rhesus in una siringa per insulina millilitro dotata di un ago calibro 29 e esettare per via intraperitoneale 1,2 volte 10 alle unità di formatura della 5a placca del virus in 20 microlitri del Modified Eagle Medium di Dulbecco per ogni neonato entro 24 ore dalla nascita. Quindi restituire i neonati alla madre per il monitoraggio quotidiano e la pesatura.Quando gli animali neonatale iniziano a mostrare segni di ittero, caricare una siringa da un millilitro dotata di un ago calibro 29 con 50 microlitri di soluzione di collagene di nanoparticelle d'argento appena preparata per animale e utilizzare l'anulare per premere la gamba di un animale ittero obliquamente sulla coscia destra. Introdurre lentamente l'ago con un angolo di 15 gradi nel peritoneo e, una volta raggiunta la superficie del bordo inferiore del fegato, iniettare la miscela di collagene della nanoparticella d'argento. Quando tutta la miscela è stata iniettata, rimuovere lentamente l'ago e lasciare riposare l'animale per dieci minuti per consentire al collagene di solidificarsi e per impedire alla madre di leccare il sito di iniezione.Quindi riportare i topi nelle loro gabbie per il monitoraggio quotidiano. Il giorno nove o dodici dopo l'inoculazione, sterilizzare l'addome superiore e inferiore con il 75% di etanolo e immobilizzare gli arti di un topo infetto. Aprire la pelle, il muscolo e il peritoneo lungo la linea mediana allo xifoide e utilizzare un batuffolo di cotone sterile per rimuovere il tratto gastrointestinale per esporre completamente il diaframma.Inserire l'ago di una siringa per insulina da millilitro scaricata nel ventricolo sinistro del cuore e ritrarre lentamente lo stantuffo della siringa per ottenere il massimo volume di sangue. Trasferire il sangue in un tubo da 1,5 millilitri per un'incubazione di 30 minuti a temperatura ambiente e pelletare i globuli rossi mediante centrifugazione. Quindi raccogliere il siero per un'analisi successiva.Per la colangiografia extraepatica, utilizzare un batuffolo di cotone per esporre completamente il fegato, la cistifellea e i dotti biliari extraepatici. Dopo aver fotografato la comparsa del fegato e dei dotti biliari al microscopio sezionante, utilizzare pinzole oftalmiche per afferrare delicatamente il fondo della cistifellea e inserire lentamente l'ago di una siringa millilitro carica di soluzione blu di metilene nella cavità della cistifellea. Afferrando l'ago con le pini, infondere lentamente 10-20 microlitri di blu di metilene.Quando il colorante passa attraverso i dotti biliari extraepatici al giunone, ottenere un'altra fotografia del tessuto. Quindi, per la colorazione dell'ematossilina e dell'eosina, raccogliere il fegato da ogni animale per la fissazione notturna in formalina al 10%. La mattina seguente, incorporare i campioni in paraffina per la sessificazione, seguiti da reidratazione de-ceretta con serie di etanolo e colorazione ematossilina ed eosina secondo protocolli di analisi istopologica standard.Rispetto ai topi di atresia biliari non trattati, gli animali trattati con nanoparticelle d'argento dimostrano una ridotta ittero e mantengono il loro normale peso corporeo. I livelli di metabolismo della bilirubina e transaminasi epatica scendono ai normali valori di controllo, suggerendo che le nanoparticelle d'argento migliorano notevolmente la funzione epatica. La colangiografia extraepatica con colorazione blu metilene conferma la pervietà del condotto biliare dopo il trattamento con nanoparticelle d'argento, e la colorazione H&E rivela una significativa diminuzione dell'infiltrazione cellulare infiammatoria nell'area del portale epatico dei topi trattati con nanoparticelle d'argento rispetto ai controlli.Il sito di flusso e l'analisi metrica indicano la presenza di un numero significativamente inferiore di cellule NK nel fegato di animali trattati con nanoparticelle d'argento rispetto ai topi infetti da rhesus rotavirus non trattati. Un'ulteriore colorazione immunoistochimica rivela un'espressione sostanzialmente ridotta della colorazione del marcatore cellulare NK nella triade portale dei topi trattati con nanoparticelle d'argento rispetto agli animali infetti da rotavirus rhesus. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che la pratica darà i migliori risultati.Seguendo questa procedura, come metodi come coniugare nanoparticelle d'argento ad altre cose possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive sull'attività delle lesioni nei trattamenti di BA nei modelli di topo. è lo sviluppo. Questa tecnica ha fornito un modo per i ricercatori nel campo della gastroenterologia di BA o altre malattie come la colestasi nel fegato.Non dimenticare che lavorare con il rotavirus di ricerca può essere estremamente pericoloso, e quindi precauzioni come indossare i dispositivi di protezione individuale appropriati dovrebbero sempre essere prese quando si esegue questa procedura.

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Un metodo non invasivo e tecnicamente non intensiva per l&#39;induzione e Fenotipizzazione Sperimentale polmonite batterica nei topi

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induzione di paralisi e di lesioni del sistema visivo in topi da specifiche cellule T per neuromielite ottica Autoantigen acquaporina-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Un metodo per la misurazione della funzione della ghiandola salivaria in topi

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Trombosi venosa profonda indotta dalla stasi in topi monitorati dall'ecografia ad alta frequenza

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...