Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

AgNPs brukt her var en gave fra C. M. Che Institutt for kjemi, Universitetet i Hongkong. Dette arbeidet ble finansiert av National Natural Science Foundation av Kina (nr. 81600399) og vitenskap og teknologi prosjektet Guangzhou (No.201707010014).

Alle dyr eksperimentelle protokoller har blitt godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen av Sun Yat-Sen universitetet Laboratorium dyr Center (#IACUC-DB-16-0602).
1. etablere biliær Atresia musemodell
<ol><li>Opprettholde gravid BALB/c mus i en bestemt patogen-fritt miljø under en 12t mørke/lys syklus ved 25 ° C, med tilgang til autoklaveres chow annonsen libitum.</li>
	<li>For å forberede RRV belastningen MMU 18006, forsterke viruset i MA104 celler og måle de v...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs utstilling potent bredspektret antibakterielle egenskaper og en sterk permeabilitet22; i tillegg brukes de til å produsere en rekke antibakterielle legemiddelverket23. Men kan AgNPs ta lang tid å fjerne når de akkumuleres i organer, og denne utholdenhet kan føre til toksiske effekter24,25. En tidligere studie undersøkte Akutt toksisitet og gentoksisitet av AgNPs etter en enkelt IV injeksjon i en rotte eks...

BA er en form for cholestasis preget av vedvarende gulsott og har høy dødelighet i fravær av leveren transplantasjon. Virusinfeksjoner er nært forbundet med patogenesen av BA. Cytomegalovirus, reovirus og rotavirus har alle blitt foreslått som patogener i BA1,2,3. I nyfødte perioden, responsen av umodne immunsystemet til en virusinfeksjon resulterer i immune feilregulering mot ekstra- og intrahepatic galle kanaler, fører til biliær epithelial celle apoptose, inflammatorisk celle infiltrasjon i portal området, intrahepatic og extrahepatic galle duct obstruksjon, og til slutt, leveren fibrosis4,5,6.
Brukte animalske modell for BA studier innebærer inoculation neonatal museklikk med rhesus rotavirus (RRV). Musen utvikler vanligvis gulsott etter 5-6 dager, viser liten kroppsvekt og acholic avføring. Rollen av immunrespons i sykdommen prosessen er viktig, spesielt for naturlig killer (NK) celler. uttømming av disse cellene med anti-NKG2D antistoff reduserer BA-indusert skade7. Videre andre celler, inkludert CD4+ T celler, CD8+ T celler, dendrittiske celler og regulatoriske T-celler, har alle vist å spille roller i sykdom8,9,10,11. Alle data tyder uunnværlig natur immunsystemet i BA.
Silver nanopartikler (AgNPs) har vist for å ha gunstige effekter mot noen smittsomme sykdommer, inkludert bakterieinfeksjoner12 og virusinfeksjoner13,14,15. Men enn dermatologisk behandling, har noen studier brukt AgNPs en klinisk behandling, hovedsakelig på grunn av deres potensielle toksisitet. I dyreforsøk, har forskere generelt studert effekten av AgNPs administreres via muntlig16 eller intravenøs metoder17. Men har ingen andre forskere studert effekten av AgNPs administreres via en intraperitoneal (IP)-injeksjon i neonatal musen eksperimenter, som en enkel og rask metode fører til mer direkte innvirkning på leveren og galle kanaler samtidig redusere giftighet til andre systemer, for eksempel immunsystemet. AgNPs har blitt vist å påvirke NK celle aktivitet18; Derfor testet vi terapeutiske effekter av AgNPs administreres via IP injeksjon i BA musemodell.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Biliær atresia (BA) er en alvorlig kolangitt med høy dødelighet hos barn som etiologien er fortsatt ikke fullt ut forstått. Virusinfeksjoner kan være en mulig årsak. Den typiske dyr modellen som brukes for å studere BA er etablert av vaksinere neonatal mus med en rhesus rotavirus. Silver nanopartikler har vist seg å utøve antibakterielle og antiviral effekter; funksjoner i BA musemodell vurderes i denne studien. Foreløpig i BA dyreforsøk er metodene som brukes til å forbedre symptomer på BA mus generelt symptomatisk behandlinger gitt via mat eller andre rusmidler. Målet med denne studien er å demonstrere en ny metode for ameliorating BA syndrom i mus ved intraperitoneal injeksjon av silver nanopartikler og gi detaljert metoder for å forberede sølv hydrogenion gel formulering. Denne metoden er enkel og allment gjeldende og kan brukes til forskning mekanismen av BA og kliniske behandlinger. Basert på BA musemodell, når mus viser gulsott, injiseres forberedt sølv hydrogenion gel intraperitoneally på overflaten av lavere leveren. Den overlevelse statusen er observert, og biokjemiske indikatorer og leveren histopatologi er undersøkt. Denne metoden gir en mer intuitiv forståelse av både etablering av BA modellen og romanen BA behandlinger.

Basert på etablerte BA musemodell, infiserte neonatal mus ble gitt IP injeksjon av forberedt AgNP kollagen blandingen 2 x etter viser gulsott. Musen overlevelse ble sjekket for daglig, og leveren funksjonstesting, lever patologi og flowcytometri ble utført. Sammenlignet med ubehandlet kontroll BA mus, mus AgNP-behandlet viste redusert gulsott og vedlikeholdes normal kroppsvekt (Figur 3). Nivåene av bilirubin metabolisme og hepatisk transaminase falt til no...

Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

En sølv Nanoparticle metode for Ameliorating biliær Atresia syndrom i mus

Denne artikkelen beskriver i detalj en metode basert på silver nanopartikler for ameliorating biliær atresia syndrom i en eksperimentell biliær atresia musemodell. En solid forståelse av forberedelsesprosessen reagens og neonatal musen injeksjon teknikken vil hjelpe bli forskere med metoden som brukes i neonatal mus modell studier.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Disse metodene kan bidra til å besvare viktige spørsmål i galle atresi. Av BA synspunkter om sykdom, patogenese og behandling. Den største fordelen med denne teknikken er at neonatal mus injeksjon teknikk vil hjelpe forskere til å bli kjent med metoden for andre neonatal mus modell studier.Implikasjonene av denne teknikken strekker seg mot behandling av BA som flere nanopartikler av betydning Selv om denne metoden kan gi innsikt i BA-behandling, kan den også brukes på andre systemer som neonatal musemodeller av patogenesen av dette Generelt på den måten denne metoden vil fordi den lille størrelsen på neonatale mus kan resultere i bygging av injeksjonsprosessen. For å etablere biliær atresi i en musemodell, last rhesus rotovirus i en en en milliliter insulinsprøyte utstyrt med en 29-gauge nål, og intraperitoneally levere 1,2 ganger 10 til femte plakkdannende enheter av virus i 20 mikroliter av Dulbecco's Modified Eagle Medium til hver nyfødte innen 24 timer etter fødselen. Deretter returnerer nyfødte til sin mor for daglig overvåking og veiing.Når neonatal dyrene begynner å vise tegn på gulsott, last en en milliliter sprøyte utstyrt med en 29-gauge nål med 50 mikroliter av nylaget sølv nanopartikkel kollagen løsning per dyr og bruke ringfingeren til å trykke benet på en gulsott dyr skråt over høyre lår. Sakte introdusere nålen i en 15 graders vinkel i bukhinnen, og ved å nå overflaten av den nedre kanten av leveren, injisere sølv nanopartikkel kollagen blandingen. Når hele blandingen er injisert, fjern nålen langsomt og la dyret hvile i ti minutter for å la kollagen stivne og for å hindre at moren slikker injeksjonsstedet.Deretter returnerer musene til burene sine for daglig overvåking. På dag ni eller tolv etter inokulasjon steriliser du øvre og nedre del av magen med 75% etanol, og immobiliserer lemmer av en infisert mus. Åpne huden, muskelen og bukhinnen langs midtlinjen til xyphoid, og bruk en steril bomullspinne for å fjerne mage-tarmkanalen for å fullstendig eksponere membranen.Sett nålen på en losset en milliliter insulinsprøyte inn i hjertets venstre ventrikkel, og trekk sprøytestempelet langsomt tilbake for å oppnå maksimalt blodvolum. Overfør blodet til et 1,5 milliliter rør i en 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur og pellet de røde blodcellene ved sentrifugering. Deretter samler serumet for senere analyse.For ekstrahepatisk kolangiografi, bruk en bomullspinne for å fullt ut utsette leveren, galleblæren og ekstrahepatiske gallekanaler. Etter å ha fotografert utseendet på lever- og gallekanalene under et dissekerende mikroskop, bruk oftalmiske pinsett for å forsiktig gripe bunnen av galleblæren og sakte sette nålen til en en milliliter sprøyte lastet med metylenblå oppløsning inn i galleblæren hulrom. Gripe nålen med tang, sakte infuse 10-20 mikroliter metylen blå.Når fargestoffet passerer gjennom de ekstrahepatiske gallekanalene til jejunum, få et annet bilde av vevet. Deretter for hematoksylin og eosinfarging, høst leveren fra hvert dyr for overnattingfiksering i 10% formalin. Neste morgen, bygge inn prøvene i parafin for snitting, etterfulgt av de-voksing re-hydrering med en etanol serie og hematoksylin og eosin farging i henhold til standard histopatologiske analyseprotokoller.Sammenlignet med ubehandlede galle atresi mus, sølv nanopartikkel behandlet dyr demonstrere redusert gulsott og opprettholde sin normale kroppsvekt. Nivåene av bilirubinmetabolisme og levertransaminase faller til normale kontrollverdier, noe som tyder på at sølvnanopartikler forbedrer leverfunksjonen betydelig. Ekstrahepatisk kolangiografi med metylenblå farging bekrefter gallegangspatency etter sølv nanopartikkelbehandling, og H&E farging avslører en betydelig reduksjon i inflammatorisk celleinfiltrasjon i leverportalområdet til mus behandlet med sølvnanopartikler sammenlignet med kontroller.Flytstedet og beregningsanalyse indikerer tilstedeværelsen av betydelig færre NK-celler i leverene til sølvnanopartikkelbehandlede dyr sammenlignet med ubehandlede rhesus rotavirusinfiserte mus. Ytterligere immunohistokjemisk farging avslører et betydelig redusert uttrykk for NK cellemarkørfarging i portaltriaden av sølvnanopartikler behandlet mus sammenlignet med rhesus rotavirus infiserte dyr. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske at praksis vil gi beste resultater.Etter denne prosedyren, som metoder som konjugating sølv nanopartikler til andre ting kan utføres for å svare på flere spørsmål om aktiviteten til lesjoner i behandlinger av BA i musemodeller. er utvikling. Denne teknikken ga en måte for forskere innen gastroenterologi til BA eller andre sykdommer som kolestase i leveren.Ikke glem at arbeid med forskning rotavirus kan være ekstremt farlig, og dermed forholdsregler som bruk av riktig personlig verneutstyr bør alltid tas når du utfører denne prosedyren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infeksjoner i Mus

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer Cell Isolasjon for Nanopartikkel Toxicity Testing

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En ikke-invasiv og Teknisk Non-intensiv metode for induksjon og fenotyping of Experimental bakteriell lungebetennelse hos mus

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induksjon av lammelse og visuelle systemet skade i mus ved T-celler spesifikke for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metode for måling av Salivary kjortelen funksjon i mus

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Dyp venetrombose indusert av Stasis i mus overvåket av høyfrekvente Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...