Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
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AgNPs aquí fueron un regalo de C. M. Che en el Departamento de química, Universidad de Hong Kong. Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Nº 81600399), ciencia y tecnología proyecto de Guangzhou (No.201707010014).

Todos los protocolos experimentales de animales han sido aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité uso del Sun Yat-sensor del laboratorio Animal Centro Universitario (#IACUC-DB-16-0602).
1. establecer el modelo de ratón de Atresia biliar
<ol><li>Mantener embarazadas ratones BALB/c en un ambiente libre de patógenos específico en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 25 ° C, con acceso a autoclave chow ad libitum.</li>
	<li>Para preparar la cepa RRV MMU 18006, ampli...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs exhiben potentes propiedades antibacterianas de amplio espectro y una permeabilidad fuerte22; Además, se utilizan para producir una gama de productos médicos antibacteriano23. Sin embargo, AgNPs puede tomar mucho tiempo para borrar una vez que se acumulan en órganos, y esta persistencia puede conducir a efectos tóxicos24,25. Un estudio examinó la toxicidad aguda y genotoxicidad de AgNPs después de una in...

BA es una forma de colestasis caracterizada por ictericia persistente y tiene alta mortalidad en ausencia de trasplante hepático. Las infecciones virales están estrechamente asociadas con la patogénesis de BA. El citomegalovirus, reovirus y rotavirus se han sugerido como patógenos en BA1,2,3. Durante el período neonatal, la respuesta del sistema inmune inmaduro a una infección viral produce dysregulation inmune contra extra - e intrahepáticos biliares, conduce a la apoptosis de la célula epitelial biliar, infiltración de células inflamatorias en el portal área, obstrucción del conducto biliar intrahepático y extrahepático y por último, fibrosis hepática4,5,6.
El modelo animal utilizado para estudios de licenciatura implica la inoculación del ratón neonatal con el rotavirus de rhesus (RRV). El ratón normalmente desarrolla ictericia después de 5-6 días, mostrando un bajo peso corporal y heces acólicas. El papel de la respuesta inmune en el proceso de la enfermedad es fundamental, especialmente para las células naturales del asesinas (NK); el agotamiento de estas células con el anticuerpo anti-NKG2D reduce considerablemente el daño provocado por el BA7. Además, otras células, incluyendo CD4+ T células de CD8,+ T las células, las células dendríticas y células T reguladoras, han demostrado que desempeñan un papel en la enfermedad8,9,10,11. Todos los datos sugieren el carácter imprescindible del sistema inmune en el curso de BA.
Nanopartículas de plata (AgNPs) se han demostrado para tener efectos beneficiosos contra algunas enfermedades infecciosas, incluyendo infecciones bacterianas12 y las infecciones virales13,14,15. Sin embargo, que no sean de uso dermatológico, pocos estudios han utilizado AgNPs en un tratamiento clínico, sobre todo debido a su potencial toxicidad. En experimentos con animales, los investigadores generalmente han estudiado la eficacia de AgNPs administrado via oral16 o métodos intravenosos17. Sin embargo, otros investigadores no han estudiado la eficacia de AgNPs administrado mediante una inyección intraperitoneal (i.p.) en ratones neonatales experimentos, que es un método simple y rápido hacia un efecto más directo sobre el hígado y vías biliares mientras que la reducción de la toxicidad a otros sistemas, como el sistema inmunológico. AgNPs se han demostrado para afectar NK célula actividad18; por lo tanto, hemos probado los efectos terapéuticos de AgNPs administrado vía inyección i.p. en el modelo de ratón de BA.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Atresia biliar (BA) es un tipo grave de colangitis con alta mortalidad en los niños de que la etiología es todavía no comprendida. Las infecciones virales pueden ser una posible causa. El típico modelo animal utilizado para el estudio de BA se establece por inocular un ratón neonatal con un rotavirus de rhesus. Nanopartículas de plata se ha demostrado para ejercer efectos antibacterianos y antivirales; en este estudio se evaluó su función en el modelo de ratón de BA. Actualmente, en experimentos con animales BA, los métodos utilizados para mejorar los síntomas de los ratones de BA son tratamientos sintomáticos generalmente dada a través de alimentos o a otros medicamentos. El objetivo de este estudio es para demostrar un nuevo método para paliar el síndrome de BA en ratones por la inyección intraperitoneal de nanopartículas de plata y para proporcionar métodos detallados para la preparación de la formulación de gel de nanopartículas de plata. Este método es simple y ampliamente aplicable y se puede utilizar para investigar el mecanismo de BA, así como en tratamientos clínicos. Basado en el modelo de ratón de BA, cuando los ratones presentan ictericia, el gel de nanopartículas de plata preparada se inyecta por vía intraperitoneal a la superficie del hígado más bajo. Se observa el estado de supervivencia, y se examinan los indicadores bioquímicos y la histopatología hepática. Este método permite una comprensión más intuitiva de ambos el establecimiento del modelo de BA y nuevos tratamientos de BA.

Basado en el modelo de ratón BA establecido, los ratones neonatales infectados se administraron una inyección i.p. de la mezcla preparada de AgNP colágeno 2 x después de que la ictericia. Supervivencia del ratón fue revisada para diario, y se realizaron pruebas de función hepática, patología del hígado y citometría de flujo. En comparación con los ratones de control sin tratar BA, los ratones tratados con AgNP demostraron ictericia reducida y mantienen su peso corporal normal (...

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A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Forma de nanopartículas de plata para paliar el síndrome de Atresia biliar en ratones

Este artículo describe detalladamente un método basado en nanopartículas de plata para paliar el síndrome de atresia biliar en un modelo experimental de atresia biliar en ratones. Una sólida comprensión del proceso de preparación de reactivos y la técnica de inyección neonatal ratón ayudará a familiarizar a los investigadores con el método utilizado en estudios con ratones neonatales modelo.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas clave en la atresia biliar. De opiniones de BA sobre enfermedades, patogénesis y tratamiento. La principal ventaja de esta técnica es que la técnica de inyección de ratón neonatal ayudará a los investigadores a familiarizarse con el método para otros estudios de modelos de ratón neonatal.Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de BA como varias nanopartículas de importancia Aunque este método puede proporcionar información sobre el tratamiento de BA, también se puede aplicar a otros sistemas como modelos de ratón neonatal de la patogénesis de este Generalmente de la manera que esto a este método será porque el pequeño tamaño de los ratones neonatales puede resultar en la construcción del proceso de inyección. Para establecer la atresia biliar en un modelo de ratón, cargue el rotovirus rhesus en una jeringa de insulina de un mililitro equipada con una aguja de calibre 29, y entregue intraperitonealmente 1,2 veces 10 a las unidades de virus que forman placas en 20 microlitros del medio de águila modificada de Dulbecco a cada neonato dentro de las 24 horas posteriores al nacimiento. A continuación, devuelva los neonatos a su madre para el monitoreo y pesaje diarios.Cuando los animales neonatales comiencen a mostrar signos de ictericia, cargue una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 29 con 50 microlitros de solución de colágeno nanopartícula de plata recién preparada por animal y use el dedo anular para presionar la pierna de un animal de ictericia oblicuamente sobre el muslo derecho. Introducir lentamente la aguja en un ángulo de 15 grados en el peritoneo, y al llegar a la superficie del borde inferior del hígado, inyectar la mezcla de colágeno de nanopartícula de plata. Cuando se haya inyectado toda la mezcla, retire lentamente la aguja y deje que el animal descanse durante diez minutos para permitir que el colágeno se solidifique y para evitar que la madre lame el lugar de inyección.Luego devuelva los ratones a sus jaulas para su monitoreo diario. En el día nueve o doce después de la inoculación, esteriliza el abdomen superior e inferior con 75% de etanol e inmoviliza las extremidades de un ratón infectado. Abra la piel, el músculo y el peritoneo a lo largo de la línea media hasta el xyfoide, y utilice un hisopo de algodón estéril para eliminar el tracto gastrointestinal para exponer completamente el diafragma.Inserte la aguja de una jeringa de insulina descargada de un mililitro en el ventrículo izquierdo del corazón y retraiga lentamente el émbolo de la jeringa para obtener el volumen máximo de sangre. Transfiera la sangre a un tubo de 1,5 mililitros para una incubación de 30 minutos a temperatura ambiente y pelete los glóbulos rojos por centrifugación. Luego recoja el suero para su análisis posteriores.Para la colangiografía extrahepática, usa un hisopo de algodón para exponer completamente el hígado, la vesícula biliar y los conductos biliares extrahepáticos. Después de fotografiar la apariencia del hígado y los conductos biliares bajo un microscopio diseccionador, utilice fórceps oftálmicos para agarrar suavemente la parte inferior de la vesícula biliar e inserte lentamente la aguja de una jeringa de un mililitro cargada con solución azul de metileno en la cavidad de la vesícula biliar. Agarrar la aguja con los fórceps, infundir lentamente 10-20 microlitros de azul de metileno.Cuando el tinte pase a través de los conductos biliares extrahepáticos hasta el yeyuno, obtenga otra fotografía del tejido. Luego, para la tinción de hematoxilina y eosina, cosechar el hígado de cada animal para la fijación durante la noche en 10%formalina. A la mañana siguiente, incrustar las muestras en parafina para secación, seguido de la rehidratación de desenceración con una serie de etanol y tinción de hematoxilina y eosina de acuerdo con los protocolos estándar de análisis histopatológico.En comparación con los ratones con atresia biliar no tratada, los animales tratados con nanopartículas de plata demuestran una ictericia reducida y mantienen su peso corporal normal. Los niveles de metabolismo de la bilirrubina y transaminasas hepáticas caen a valores de control normales, lo que sugiere que las nanopartículas de plata mejoran en gran medida la función hepática. La coleniografía extrahepática con tinción azul de metileno confirma la paencia de los conductos biliares después del tratamiento de las nanopartículas de plata, y la tinción de H&E revela una disminución significativa de la infiltración de células inflamatorias en el área del portal hepático de ratones tratados con nanopartículas de plata en comparación con los controles.El sitio de flujo y el análisis métrico indican la presencia de células NK significativamente menos en los hígados de animales tratados con nanopartículas de plata en comparación con ratones infectados por rhesus rotavirus no tratados. Otras tinciones inmunohistoquímicas revelan una expresión sustancialmente reducida de tinción de marcador de células NK en la tríada portal de ratones tratados con nanopartículas de plata en comparación con los animales infectados por rhesus rotavirus. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que la práctica dará los mejores resultados.Siguiendo este procedimiento, como métodos como conjugar nanopartículas de plata con otras cosas se pueden realizar para responder preguntas adicionales sobre la actividad de las lesiones en los tratamientos de BA en modelos de ratón. es el desarrollo. Esta técnica proporcionó una manera para los investigadores en el campo de la gastroenterología a BA u otras enfermedades como la colestasis en el hígado.No olvide que trabajar con rotavirus de investigación puede ser extremadamente peligroso, por lo que siempre se deben tomar precauciones como el uso del equipo de protección personal adecuado al realizar este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Investigación

Inmunología e Infección

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Inferencia genotípica del VIH-1 tropismo utilizando la población basada en la secuencia de V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

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Luciferasa utilizando a las infecciones bacterianas de la imagen en ratones

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The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

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4D de imágenes multimodalidad<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Las infecciones en ratones

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Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer aislamiento de células de nanopartículas de Pruebas de Toxicidad

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Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Trombosis venosa profunda inducida por estasis en los ratones controlados por sonografía de alta frecuencia

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...