Name: a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice
Uploaded: 2018-10-13T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

De AgNPs används här var en gåva från C. M. Che i Institutionen för kemi, University of Hong Kong. Detta arbete finansierades av den nationella naturvetenskap Foundation i Kina (nr. 81600399) och vetenskap och teknik projekt i Guangzhou (No.201707010014).

Alla djur experimentella protokoll har godkänts av den institutionella djur vård och användning kommittén för Sun Yat-Sen University laboratorium djur Center (#IACUC-DB-16-0602).
1. upprätta biliär atresi musmodell
<ol><li>Upprätthålla gravid BALB/c-möss i ett specifikt patogenfria miljö under en 12 h mörk/ljus cykel vid 25 ° C, med tillgång till Ånghärdad chow ad libitum.</li>
	<li>För att förbereda RRV stammen MMU 18006, förstärker viruset i MA104 celler och m?...

<ol>
	<li>Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+reovirus+type+3+infection+in+an+established+murine+model+for+biliary+atresia.">The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia.</a> European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).</li><li>Coots, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotavirus+infection+of+human+cholangiocytes+parallels+the+murine+model+of+biliary+atresia.">Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia.</a> Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).</li><li>Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+with+cytomegalovirus.">Biliary atresia with cytomegalovirus.</a> Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).</li><li>Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clues+to+the+Etiology+of+Bile+Duct+Injuryin+Biliary+Atresia.">Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia.</a> Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).</li><li>Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia:+a+new+immunological+insight+into+etiopathogenesis.">Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis.</a> Expert Review of Gastroenterology &amp; Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).</li><li>Sokol, R. J., Mack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiopathogenesis+of+Biliary+Artesia.">Etiopathogenesis of Biliary Artesia.</a> Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).</li><li>Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+NK+cells+target+the+mouse+duct+epithelium+via+Nkg2d+and+drive+tissue-specific+injury+in+experimental+biliary+atresia.">Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).</li><li>Mack, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligoclonal+expansions+of+CD4++and+CD8++T-cells+in+the+target+organ+of+patients+with+biliary+atresia.">Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).</li><li>Shivakumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effector+Role+of+Neonatal+Hepatic+CD8+++Lymphocytes+in+Epithelial+Injury+and+Autoimmunity+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia.</a> Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Cells+Regulate+Natural+Killer+Cell+Activation+and+Epithelial+Injury+in+Experimental+Biliary+Atresia.">Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia.</a> Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).</li><li>Miethke, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-natal+paucity+of+regulatory+T+cells+and+control+of+NK+cell+activation+in+experimental+biliary+atresia.">Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia.</a> Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+delivery+of+silver+nanoparticles+promotes+wound+healing.">Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing.</a> ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).</li><li>Lu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+inhibit+hepatitis+B+virus+replication.">Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication.</a> Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).</li><li>Xiang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+A/Human/Hubei/3/2005+(H3N2)+influenza+virus+infection+by+silver+nanoparticles+in+vitro+and+in+vivo.">Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.</a> International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).</li><li>Elechiguerra, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).</li><li>Nallanthighal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+silver+nanoparticles+on+DNA+damage+and+DNA+repair+gene+expression+in+Ogg1-deficient+and+wild+type+mice.">Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice.</a> Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).</li><li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+toxicity+and+genotoxicity+of+silver+nanoparticle+in+rats.">Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats.</a> PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticle+treatment+ameliorates+biliary+atresia+syndrome+in+rhesus+rotavirus+inoculated+mice.">Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice.</a> Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).</li><li>Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing,+Storage,+and+Quantification+of+Rotaviruses.">Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2009).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+mediate+differential+responses+in+keratinocytes+and+fibroblasts+during+skin+wound+healing.">Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.</a> ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+promote+osteogenesis+of+mesenchymal+stem+cells+and+improve+bone+fracture+healing+in+osteogenesis+mechanism+mouse+model.">Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model.</a> Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).</li><li>Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+nanostructured+hydrogel+webs+containing+silver.">Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver.</a> Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).</li><li>Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+and+molecular+response+of+silver+nanoparticle+(NP)-based+hydrogel.">Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel.</a> Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).</li><li>Dobrzy&#324;ska, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+silver+and+titanium+dioxide+nanoparticles+in+bone+marrow+cells+of+rats+in+vivo.">Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo.</a> Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).</li><li>Mohamed, H. R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+TiO+2+nanoparticle-induced+genotoxicity+persistence+and+possible+chronic+gastritis-induction+in+mice.">Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice.</a> Food &amp; Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).</li></ol>

AgNPs uppvisar potent solskyddskrämen antibakteriella egenskaper och en stark genomtränglighet22. Dessutom används de för att producera en rad antibakteriella läkemedel23. AgNPs kan dock ta lång tid att rensa när de ackumuleras i organ, och denna envishet kan leda till toxiska effekter24,25. En tidigare studie undersökte akut toxicitet och genotoxicitet AgNPs efter en enda intravenös injektion i en råtta e...

BA är en form av kolestas som kännetecknas av ihållande gulsot och har hög dödlighet i avsaknad av levertransplantation. Virusinfektioner är nära kopplad till patogenesen av BA. Den cytomegalovirus, reovirus och rotavirus har alla föreslagits som patogener i BA1,2,3. Under nyföddhetsperioden, omogna immunsystemets svar på en virusinfektion resulterar i immun dysreglering mot extra- och intrahepatisk gallgångarna, vilket leder till biliär epitelial cell apoptos, infiltration av inflammatoriska celler i portalen område, intrahepatisk och extrahepatiska gallgången obstruktion, och slutligen leverfibros4,5,6.
Den vanligaste djurmodell för BA studier innebär inympning av en neonatal mus med den rhesus rotavirus (RRV). Musen vanligtvis utvecklar gulsot efter 5-6 dagar, visar en låg kroppsvikt och acholic avföring. Rollen av immunsvaret i sjukdomsprocessen är kritisk, särskilt för natural killer (NK) celler; utarmning av dessa celler med anti-NKG2D antikropp minskar avsevärt BA-inducerad skada7. Dessutom andra celler, inklusive CD4+ T-celler, CD8+ T celler, dendritiska celler och regulatoriska T-celler, har alla visat att spela roller i sjukdom8,9,10,11. Alla data tyder den oumbärliga karaktären immunförsvaret under BA.
Silvernanopartiklar (AgNPs) har visat sig ha positiva effekter mot vissa smittsamma sjukdomar, inklusive bakterieinfektioner12 och virusinfektioner13,14,15. Men än dermatologiska användning, har några studier använt AgNPs i en klinisk behandling, främst på grund av deras potentiella giftighet. Forskare har i djurförsök, allmänt studerat effekten av AgNPs administreras via muntliga16 eller intravenös metoder17. Dock har inga andra forskare studerat effekten av AgNPs administreras via som en intraperitoneal (IP) injektion i neonatal musen experiment, som är en enkel och snabb metod leder till en mer direkt effekt på levern och gallgångarna medan att minska toxicitet för andra system, såsom immunsystemet. AgNPs har visats påverka NK cell aktivitet18; Därför testade vi de terapeutiska effekterna av AgNPs administreras via i.p.-injektion i BA musmodell.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BALB/c mouse</td>
			<td>Guangdong Medical Experimental Animal Center</td>
			<td>SYXK2017-0174</td>
			<td>Animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhesus rotavirus (RRV)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;VR-1739</td>
			<td>Establish biliary atresia mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA104 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#160;CRL-2378.1</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10569010</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10099141</td>
			<td>Mammalian Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen Type I</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>354236</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td>For washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>Adjust the PH value</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgNP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Antibacterial 
			Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with integrated needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>9161635S</td>
			<td>For medical use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mL Microcentrifuge Tube</td>
			<td>GEB</td>
			<td>CT0200-B-N</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE-Ci</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting/Intravital microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ 1000</td>
			<td>For laboratory use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse NKp46 FITC</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-3351</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>15-0041</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>20001673</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NKG2D</td>
			<td>RD</td>
			<td>MAB1547</td>
			<td>For research use only</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FACS Canto Plus</td>
			<td>For laboratory use only</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silver nanoparticle method for ameliorating biliary atresia syndrome in mice

Biliär atresi (BA) är en allvarlig typ av kolangit med hög dödlighet hos barn som etiologi är fortfarande inte helt klarlagt. Virusinfektioner kan vara en möjlig orsak. Den typiska djura modell som används för att studera BA etableras genom att vaccinera en neonatal mus med en Rhesusapa rotavirus. Silvernanopartiklar har visat att utöva antibakteriella och antivirala effekter; deras funktion i BA musmodell utvärderas i denna studie. I BA djurförsök, de metoder som används för att förbättra symtomen på BA möss för närvarande allmänt symtomatisk behandling som ges via mat eller andra droger. Syftet med denna studie är att demonstrera en ny metod för ameliorating BA syndrom hos möss av intraperitoneal injektion av Silvernanopartiklar och ge detaljerade metoder för att förbereda silver nanopartiklar gel formulering. Denna metod är enkel och allmänt tillämpliga och kan användas till forskning mekanismen av BA, liksom i kliniska behandlingar. Baserat på BA musmodell, när möss uppvisar gulsot, injiceras beredda silver nanopartiklar gelen intraperitonealt på ytan av lägre levern. Överlevnad status observeras och biokemiska indikatorer och levern histopatologi undersöks. Denna metod tillåter en mer intuitiv förståelse av både inrättandet av BA modell och nya BA behandlingar.

Baserat på etablerade BA musmodell, infekterade neonatala möss administrerades en i.p.-injektion av beredda AgNP kollagen blandningen 2 x efter uppvisar gulsot. Mus överlevnad kontrollerades för dagliga och leverfunktionen testning, lever patologi och flödescytometri utfördes. Jämfört med obehandlad kontroll BA möss, AgNP-behandlade möss visade minskad gulsot och vidhöll sin normala kroppsvikt (figur 3). Nivåerna av bilirubin metabolism och levert...

Watch this Scientific Journal Video about A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice at JoVE.com

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

En Silver nanopartiklar metod för Ameliorating biliär atresi syndrom hos möss

Denna artikel beskriver i detalj en metod baserad på Silvernanopartiklar för ameliorating biliär atresi syndrom i en experimentell biliär atresi musmodell. En solid förståelse av reagens förberedelseprocessen och neonatal mus injektionsteknik hjälper bekanta forskare med den metod som används i neonatal mus modell studier.

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Dessa metoder kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i gallans atresia. Av BA åsikter om sjukdom, patogenes och behandling. Den största fördelen med denna teknik är att den neonatala musen injektion teknik kommer att hjälpa forskare att bli bekant med metoden för andra neonatal mus modell studier.Konsekvenserna av denna teknik sträcker sig mot terapi av BA som flera nanopartiklar av betydelse Även om denna metod kan ge insikt i BA behandling, det kan också tillämpas på andra system såsom neonatal mus modeller av patogenesen vid detta Generellt på det sätt som detta till denna metod kommer eftersom den lilla storleken på neonatal möss kan resultera i att bygga av injektionsprocessen. För att etablera gallans atresia i en musmodell, ladda rhesus rotovirus i en milliliter insulinspruta utrustad med en 29-gauge nål, och intraperitoneally leverera 1,2 gånger 10 till den 5: e plack-enheter av virus i 20 mikroliter av Dulbeccos Modified Eagle Medium till varje neonat inom 24 timmar efter födseln. Sedan tillbaka nyfödda till sin mor för daglig övervakning och vägning.När neonataldjuren börjar uppvisa tecken på gulsot, ladda en milliliterspruta utrustad med en nål med 29 gauge med 50 mikroliter av nyberedda silver nanopartikelkolelösning per djur och använd ringfingret för att trycka benet på ett gulsotiskt djur snett över högra låret. Långsamt införa nålen i en 15 graders vinkel i bukhinnan, och vid nå ytan av den nedre kanten av levern, injicera silver nanopartikel kollagen blandningen. När hela blandningen har injicerats, ta långsamt bort nålen och låt djuret vila i tio minuter så att kollagenet att stelna och för att förhindra att mamman slickar injektionsstället.Sedan returnera mössen till sina burar för daglig övervakning. På dag nio eller tolv efter inokulering, sterilisera övre och nedre delen av buken med 75%etanol, och immobilisera lemmarna i en infekterad mus. Öppna huden, muskel och bukhinnan längs mittlinjen till xyphoid, och använda en steril bomullspinne för att ta bort mag-tarmkanalen för att helt exponera membranet.Stick in nålen på en obelastad en milliliter insulinspruta i hjärtats vänstra kammare, och dra långsamt tillbaka sprutkolven för att få den maximala blodvolymen. Överför blodet till ett 1,5 milliliterrör för en 30 minuters inkubation vid rumstemperatur och pellet de röda blodkropparna genom centrifugeringen. Samla sedan in serumet för senare analys.För extrahepatic cholangiography, använd en bomullspinne för att fullt exponera levern, gallblåsan och extrahepatic gallgångarna. Efter fotografering utseendet på levern och gallgångarna under en dissekera mikroskop, använd oftalmiska forceps att försiktigt greppa botten av gallblåsan och långsamt sätt in nålen på en milliliter spruta laddad med metylenblått lösning i gallblåsan hålighet. Gripa nålen med tlymporna, långsamt ingjuta 10-20 mikroliter metylenblått.När färgämnet passerar genom de extrahepatiska gallgångarna till jejunum, få ett annat fotografi av vävnaden. Sedan för hematoxylin och eosin färgning, skörda levern från varje djur för övernattning fixering i 10%formalin. Nästa morgon, bädda in proverna i paraffin för snittning, följt av de-vaxning åter hydrering med en etanol serie och hematoxylin och eosin färgning enligt standard protokoll histopatologisk analys.Jämfört med obehandlade gallans atresiamöss uppvisar silvernanopartikelbehandlade djur minskad gulsot och bibehåller sin normala kroppsvikt. Nivåerna av bilirubin metabolism och levertransaminas sjunka till normal kontroll värden, vilket tyder på att silver nanopartiklarna förbättrar leverfunktionen kraftigt. Extrahepatic cholangiography med metylenblått färgning bekräftar gallgången patency efter silver nanopartikel behandling, och H&E färgning avslöjar en betydande minskning av inflammatoriska cell infiltration i hepatic portal området möss som behandlats med silver nanopartiklar jämfört med kontroller.Flödesställe och metrisk analys indikerar förekomst av betydligt färre NK-celler i levern hos silvernanopartikelbehandlade djur jämfört med obehandlade rhesus rotavirusinfekterade möss. Ytterligare immunohistochemical färgning avslöjar ett väsentligt reducerat uttryck för NK cell markör färgning i portalen triad av silver nanopartikel behandlade möss jämfört med rhesus rotavirus infekterade djur. Medan du försöker denna procedur, Det är viktigt att komma ihåg att praxis kommer att ge bästa resultat.Efter detta förfarande, som metoder som conjugating silver nanopartiklar till andra saker kan utföras för att svara på ytterligare frågor om aktiviteten av skador i behandlingar av BA i musmodeller. är utveckling. Denna teknik gav ett sätt för forskare inom området gastroenterologi till BA eller andra sjukdomar såsom kolestas i levern.Glöm inte att arbeta med forskning rotavirus kan vara extremt farligt, och därmed försiktighetsåtgärder såsom bär lämplig personlig skyddsutrustning bör alltid vidtas när du utför detta förfarande.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Använda Bioluminescent Imaging för att undersöka synergi mellan Streptococcus pneumoniae Och influensa A-virus i modersmjölksersättning Möss

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Genotypisk Inferens av HIV-1 Tropism Använda Befolkning-sekvensering av V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Använda luciferas till bild bakteriella infektioner hos möss

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

En metod för märkning vaskulatur i embryonala möss

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner hos möss

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Kupffer Cell Isolation för Nanoparticle kemikalieprövning

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En icke-invasiv och tekniskt icke intensiva metod för induktion och fenotypning av experimentell bakteriell lunginflammation hos möss

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion av förlamning och visuella systemet skada hos möss av T celler specifika för Neuromyelitis Optica Autoantigen akvaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metod för mätning av Saliv-körtel funktion hos möss

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Djup ventrombos som induceras av Stasis hos möss som övervakas av högfrekvent ultraljud

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...