Name: derivation and differentiation of canine ovarian mesenchymal stem cells
Uploaded: 2018-12-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Forfatterne anerkender canine sterilisation programmet på UNESP-FCAV for venligst at give æggestokkene. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra FAPESP (proces no. 2013/14293-0) og KAPPER.

Dette eksperiment blev udført med æggestokkene af fire køter kvindelige hunde doneret efter elektiv kirurgi på en canine sterilisation program. Dette eksperiment blev godkendt af den etiske komité om brugen af dyr af UNESP-FCAV (protokol nr. 026991/13).
1. eksperimentel forberedelse
<ol><li>Forberede eller købe 500 mL sterilt Dulbecco fosfatbufferet saltopløsning (DPBS) uden calcium eller magnesium.</li>
	<li>Forberede en collagenase jeg lagerfører løsning ved at blande 40 µg enzym...

<ol>
	<li>Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells.">Mesenchymal stem cells.</a> Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).</li><li>Zipori, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+of+stem+cells:+state+rather+than+entity.">The nature of stem cells: state rather than entity.</a> Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).</li><li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium:+biology,+endocrinology,+and+pathology.">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).</li><li>Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+interconversions+in+normal+ovarian+surface+epithelium+and+ovarian+carcinomas:+an+exception+to+the+norm.">Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm.</a> Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).</li><li>Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+in+cultures+derived+from+adult+human+ovaries.">Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).</li><li>Gong, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell-like+cells+established+by+culture+of+adult+ovarian+cells+in+mice.">Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice.</a> Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).</li><li>Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+stem+cells+and+follicular+renewal+in+the+postnatal+mammalian+ovary.">Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary.</a> Nature. 428 (6979), 145 (2004).</li><li>Deans, R. J., Moseley, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+biology+and+potential+clinical+uses.">Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses.</a> Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).</li><li>Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal-like+stem+cells+in+canine+ovary+show+high+differentiation+potential.">Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential.</a> Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).</li><li>Dominici, M. L. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).</li><li>Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenesis+in+transplants+of+bone+marrow+cells.">Osteogenesis in transplants of bone marrow cells.</a> Development. 16 (3), 381-390 (1966).</li><li>Kuznetsov, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-colony+derived+strains+of+human+marrow+stromal+fibroblasts+form+bone+after+transplantation+in+vivo.">Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).</li></ol>

Heri dokumentere vi at MSC'er kan isoleres fra canine æggestokkene væv, der betragtes som biologisk affald efter ovariectomy. At mange celletyper kan findes i æggestokken, foreslog vi en protokol for at vælge MSCs baseret på deres hurtige overholdelse af plast, som med held har valgt celler, der voksede i en éncellelag med en fibroblast-lignende morfologi.
Den første rapport af afledning af MSC fra knoglemarven var baseret på plast vedhæftning kapacitet af MSCs i løbet af de første ...

Antallet af offentliggjorte undersøgelser, at fokus på stamceller er steget betydeligt i det sidste årti, en forskningsindsats, der har fået næring af det kollektive mål for at opdage kraftfulde regenerativ medicin behandlinger. Stamceller har to primære definerende markører: self - renovering og differentiering. Mesenkymale stamceller er ansvarlige for regelmæssig væv omsætning og har en mere begrænset kapacitet på differentiering i forhold til embryonale stamceller1. For nylig, mange undersøgelser har vist en bred vifte af differentiering af MSC'er, og et emne under diskussionen er om forskelle mellem embryonale og voksne stamceller findes på alle2.
Ovarium overflade epitel er en uforpligtede lag af celler, relativt mindre differentierede, som udtrykker både epitel og mesenchymale markører3, bevarer evnen til at skelne i forskellige typer af celler som reaktion på miljømæssige signaler4. Den nøjagtige placering af stamceller i æggestokken er ikke kendt; Det er blevet foreslået, at bipotential ophav i tunica albuginea giver anledning til kønsceller5. Immunologiske undersøgelser har den hypotese, at disse celler har en stromale oprindelse6 eller er placeret i eller proksimalt for æggestokken overflade7. Da mesenkymale stamceller express talrige receptorer, der spiller en vigtig rolle i celle vedhæftning8, var et eksperiment designet til at teste hypotesen om, at du vælger en befolkning af celler med hurtige vedhæftning ville isolere en befolkning af celler klart characterizable som mesenchymale i naturen. For nylig, vores gruppe rapporteret afledning af MSCs fra æggestokkene væv baseret på deres kapacitet af adhæsion kultur parabol i de første 3 h af kultur, plastik overflade for at opnå en renset befolkning af cellerne udviser hurtig vedhæftning9. Her beskriver vi udviklede metoden for mesenkymale stamceller isoleret fra æggestokkene væv.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:665px;" width="666">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DPBS&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14190144</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Tissue flask</td>
			<td style="width:151px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">CLS3056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DMEM low glucose</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">11054020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">FBS</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">12484-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">TrypLE express</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">12604021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Adipogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Osteogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">STEMdiff Definitive Endoderm Kit</td>
			<td style="width:151px;">StemCell</td>
			<td style="width:123px;">5110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD45</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 2035S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD34</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 2411GA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD90</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 1036G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD44</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 1041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Nestin</td>
			<td style="width:151px;">Milipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">&#946;-Tubulin&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Milipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB1637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DDX4</td>
			<td style="width:151px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">PA5 -23378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">IgG- FITC</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">STAR80F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">IgG- FITC</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">STAR120F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

derivation and differentiation of canine ovarian mesenchymal stem cells

Interesse i mesenchymale stamceller (msc) er steget i det sidste årti på grund af deres lethed af isolation, ekspansion og kultur. For nylig, har undersøgelser vist bred differentiering kapacitet, at disse celler besidder. Æggestokken repræsenterer en lovende kandidat til celle-baserede behandlinger skyldes, at det er rig på MSC'er, og at det ofte kasseres efter ovariectomy operationer som biologisk affald. I denne artikel beskrives procedurer for isolation, ekspansion, og differentiering af MSCs afledt af canine æggestokkene, uden nødvendigheden af celle-sortering teknikker. Denne protokol udgør et vigtigt redskab for regenerativ medicin på grund af den brede anvendelighed af disse meget differentiable celler i kliniske forsøg og terapeutiske bruger.

Mesenkymale stamceller isoleret fra Canine æggestok:
Æggestokkene MSC isolation procedure er sammenfattet i figur 1. Efter kirurgi, væv hakning, collagenase fordøjelse og en media ændring 3 h efter begyndelsen af kulturen var en formodede MSC befolkning med hurtige plast klæbende egenskaber med held isoleret fra canine æggestokkene væv. De høstede celler hu...

Watch this Scientific Journal Video about Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Heri, beskriver vi en metode til isolering, udvidelse og differentiering af mesenkymale stamceller fra canine æggestokkene væv.

Afledning og differentiering af Canine æggestokkene mesenkymale stamceller

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Det overordnede mål med denne procedure er at isolere, udvide og differentiere mesenkymal stængler sælger stammer fra hunde æggestokkene væv. Dette eksperiment blev udført med æggestokkene af fire mongrel kvindelige hunde doneret efter elektiv kirurgi på en hunde sterilisation program. Dette eksperiment blev godkendt af den etiske komité for anvendelse af dyr fra Sao Paulo State University, FVAC.repræsentative resultater. Diskussion.Konklusion.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

Afledning af Cardiac progenitorceller af embryonale stamceller

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

Effektiv Udledning af retinale pigmentepitel Celler fra stamceller

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Derivation of Highly Purified Cardiomyocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Small Molecule-modulated Differentiation and Subsequent Glucose Starvation

Udledning af højt oprenset Cardiomyocytter fra menneskeskabte pluripotente stamceller Brug lille molekyle-moduleret Differentiering og efterfølgende Glucose Sult

Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPSC-CMs) have become an important cell source to address the lack of primary cardiomyocytes ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-fri Udledning af melanocytter fra menneskelige pluripotente stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Epigenetisk forordning af Cardiac Differentiering af embryonale stamceller og væv

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Isolation og udvidelse af mesenchymstamceller / stromacellers afledt af humane Placenta Tissue

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiering af humane mesenkymale stamceller i funktionel Cardiomyocyte-lignende celler

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Integration Free Derivation of Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Laminin 521 Matrix

Integrationsfri afledning af humane inducerede pluripotente stamceller ved anvendelse af Laminin 521 Matrix

Xeno-free and fully defined conditions are key parameters for robust and reproducible generation of homogenous human induced pluripotent stem (hiPS) ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Hurtig, instrueret differentiering af retinale Pigment epitel celler fra menneskelige embryonale eller induceret pluripotente stamceller

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Beregningsmæssige analyse af Caenorhabditis elegans kønscelleoverførsel at studere Distribution kerner, proteiner og cytoskelettet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...