Name: derivation and differentiation of canine ovarian mesenchymal stem cells
Uploaded: 2018-12-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Yazarlar köpek sterilizasyon program UNESP-FCAV, lütfen yumurtalık sağlamak için kabul etmiş oluyorsunuz. Bu eser FAPESP (işlem No 2013/14293-0) ve burunları gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Bu deney dört melez kadın köpek bir köpek sterilizasyon programı seçmeli ameliyat sonrası hibe yumurtalık ile gerçekleştirildi. Bu deney UNESP-FCAV (protokol No 026991/13) hayvanların kullanımı Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. deneysel hazırlık
<ol><li>Hazırlamak veya 500 mL steril Dulbecco'nın fosfat tamponlu tuz (DPBS) kalsiyum ve magnezyum olmadan satın alın.</li>
	<li>Bir collagenase hazırlamak enzim DPBS 1 ml 40 µg karıştırılarak çözüm stok. 0.2 µm...

<ol>
	<li>Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells.">Mesenchymal stem cells.</a> Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).</li><li>Zipori, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+of+stem+cells:+state+rather+than+entity.">The nature of stem cells: state rather than entity.</a> Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).</li><li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium:+biology,+endocrinology,+and+pathology.">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).</li><li>Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+interconversions+in+normal+ovarian+surface+epithelium+and+ovarian+carcinomas:+an+exception+to+the+norm.">Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm.</a> Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).</li><li>Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+in+cultures+derived+from+adult+human+ovaries.">Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).</li><li>Gong, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell-like+cells+established+by+culture+of+adult+ovarian+cells+in+mice.">Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice.</a> Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).</li><li>Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+stem+cells+and+follicular+renewal+in+the+postnatal+mammalian+ovary.">Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary.</a> Nature. 428 (6979), 145 (2004).</li><li>Deans, R. J., Moseley, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+biology+and+potential+clinical+uses.">Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses.</a> Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).</li><li>Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal-like+stem+cells+in+canine+ovary+show+high+differentiation+potential.">Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential.</a> Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).</li><li>Dominici, M. L. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement.">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).</li><li>Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenesis+in+transplants+of+bone+marrow+cells.">Osteogenesis in transplants of bone marrow cells.</a> Development. 16 (3), 381-390 (1966).</li><li>Kuznetsov, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-colony+derived+strains+of+human+marrow+stromal+fibroblasts+form+bone+after+transplantation+in+vivo.">Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).</li></ol>

Burada kanıt MSCs ovariectomy sonra biyolojik atık olarak kabul edilir köpek yumurtalık dokusu yalıtılmış olmasını sağlamak. Birçok hücre tipleri-ebilmek bulunmak içinde Yumurtalık nedeniyle gerçeğini, başarılı bir şekilde büyüdü hücreleri bir monolayer fibroblast benzeri görünümdeki seçili plastik hızlı onların bağlılığı dayalı MSCs seçmek için bir protokol evlenme teklif etti.
MSCs türetmeye kemik iliği ilk rapor MSCs plastik yapışma kapasitesini k...

Kök hücreler üzerinde odak önemli ölçüde güçlü rejeneratif tıp terapiler keşfetmek toplu amacı tarafından yakıt oldu bir araştırma çaba son on yıl içinde artmıştır yayımlanmış çalışmaları sayısı. Kök hücreler var iki birincil tanımlama işaretleri: öz - yenileme ve farklılaşma. Mezenkimal kök hücre normal doku ciro için sorumlu ve embriyonik kök hücre1' e göre farklılaşma daha sınırlı bir kapasiteye sahip. Son zamanlarda, birçok çalışma geniş bir MSCs farklılaşma göstermiştir ve olup farklar embriyonik ve yetişkin kök hücreleri arasındaki tüm2adlı bir konudur tartışma altında.
Ovarium yüzey epitel hücreleri yanıt olarak farklı türdeki ayırt etmek için kapasite istinat hem epitelyal ve mezenkimal işaretçileri3, ifade farklılaşmış, bir kaydedilmemiş katman hücre, nispeten daha az olduğunu çevre sinyalleri4. Yumurtalık kök hücre tam konumunu iyi bilinen değildir; Ancak, tunica albuginea bipotential ataları germ hücreleri5' e çıkmasına önerilmiştir. İmmünolojik araştırmalar bu hücreler stromal kökenli6 veya içinde bulunduğu veya proksimal Over yüzey7onaylanmadığına karar. Mezenkimal kök hücre hücre adezyon8' önemli bir rol oynamaktadır çok sayıda reseptörleri hızlı beri bir deney bir nüfus hızlı adezyon içeren hücrelerin seçerek hücreleri nüfusu açıkça ayırmak hipotezi test etmek için tasarlanmıştır doğada mezenkimal olarak characterizable. Son zamanlarda, bizim grup MSCs türetmeye yumurtalık dokusu hücreleri hızlı yapışma9sergilenmesi arıtılmış nüfusu elde etmek için onların ilk 3 h kültür, kültür tabakta plastik yüzeyine yapışma üzerine kurulu kapasiteli bildirdi. Burada, yumurtalık dokusu mezenkimal kök hücre izolasyon için geliştirilen yöntem açıklanmaktadır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:665px;" width="666">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DPBS&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14190144</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">17100017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Tissue flask</td>
			<td style="width:151px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">CLS3056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DMEM low glucose</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">11054020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">FBS</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">12484-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">TrypLE express</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">12604021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Adipogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">StemPro Osteogenesis Differentiation Kit</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">A1007201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:221px;">STEMdiff Definitive Endoderm Kit</td>
			<td style="width:151px;">StemCell</td>
			<td style="width:123px;">5110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:151px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD45</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 2035S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD34</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 2411GA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD90</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 1036G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">CD44</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">MCA 1041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">Nestin</td>
			<td style="width:151px;">Milipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">&#946;-Tubulin&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Milipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB1637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">DDX4</td>
			<td style="width:151px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">PA5 -23378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">IgG- FITC</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">STAR80F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:221px;">IgG- FITC</td>
			<td style="width:151px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:123px;">STAR120F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

derivation and differentiation of canine ovarian mesenchymal stem cells

Mezenkimal kök hücre (MSCs) ilgi yalıtım, genişleme ve kültür kolaylığı nedeniyle son on yıl içinde artmıştır. Son zamanlarda, çalışmalar bu hücreler sahip geniş farklılaşma kapasite göstermiştir. Yumurtalık hücre tabanlı terapiler için umut verici bir aday MSCs içinde zengin ve sık sık biyolojik atık olarak ovariectomy ameliyat sonra atılan nedeniyle gerçeğini temsil eder. Bu makalede, yalıtım, genişleme, için yordamlar açıklanır ve MSCs farklılaşma hücre sıralama gerekliliği olmadan köpek yumurtalık türetilmiştir teknikleri. Bu iletişim kuralı rejeneratif tıp için önemli bir araç nedeniyle klinik çalışmalar son derece türevlenebilir bu hücrelerde geniş uygulanabilirliği temsil eder ve terapötik kullanır.

Köpek yumurtalık mezenkimal kök hücre izolasyon:
Yumurtalık MSC yalıtım yordamı Şekil 1' de özetlenmiştir. Cerrahi, doku kıyma, collagenase sindirim ve medya Değiştir 3 h başında kültür sonra sonra hızlı plastik yapışkanlı özellikleri sözde MSC nüfusuyla başarıyla köpek yumurtalık dokusundan izole edildi. Hasat hücreleri hızla kültü...

Watch this Scientific Journal Video about Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Burada, yalıtım, genişleme ve köpek yumurtalık dokusundan mezenkimal kök hücre farklılaşma için bir yöntem açıklanmaktadır.

Türetme ve köpek yumurtalık mezenkimal kök hücre farklılaşma

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Bu işlemin genel amacı, izole etmek, genişletmek ve mezenkimal sapları ayırt etmek tir canine yumurtalık dokusundan elde edilen satıyor. Bu deney, köpek sterilizasyon programında elektif cerrahi sonrası bağışlanan dört melez dişi köpeğin yumurtalıkları ile gerçekleştirilmiştir. Bu deney Sao Paulo State University, FVAC hayvanların kullanımı etik komitesi tarafından onaylanmıştır.Temsili sonuçlar. Tartışma.Sonuç.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

Embriyonik Kök Hücreleri Kardiyak Progenitör Hücrelerinin türetilmesi

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

Kök Hücreleri Retina pigment epiteli hücrelerinin Verimli türetilmesi

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Derivation of Highly Purified Cardiomyocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Small Molecule-modulated Differentiation and Subsequent Glucose Starvation

Küçük Molekül-modüle Farklılaşma ve sonraki Glikoz şiddetli açlık kullanma İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin yüksek oranda saf kardiyomiyositlerde türetilmesi

Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPSC-CMs) have become an important cell source to address the lack of primary cardiomyocytes ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

Insan pluripotent kök hücreleri gelen melanosit besleyici içermeyen türetilmesi

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Embriyonik Kök Hücre ve Doku Kardiyak Farklılaşma epigenetik Yönetmelik

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

İnsan Plasenta Doku türetilen İzolasyon ve mezenkimal kök Genişleme / Stromal hücreler

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

Vitro İnsan Mezenkimal Kök hücre farklılaşma fonksiyonel Cardiomyocyte benzeri hücre içine

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Integration Free Derivation of Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Laminin 521 Matrix

Laminin 521 Matrisini Kullanarak İnsan Tarafından Oluşturulan Pluripotent Kök Hücrelerin Entegrasyon Serbest Türevi

Xeno-free and fully defined conditions are key parameters for robust and reproducible generation of homogenous human induced pluripotent stem (hiPS) ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Hızlı, yönlendirilmiş farklılaşma insan embriyonik veya İndüklenmiş Pluripotent kök hücrelerinden retina Pigment epitel hücrelerinin

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Çekirdeklerin dağıtım, proteinler ve sitoiskeleti çalışmaya Caenorhabditis elegans Germline sayısal analizi

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...