Name: detection of phospholipase c activity in the brain homogenate from the honeybee
Uploaded: 2018-09-14T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Phospholipase C Activity in the Brain Homogenate from the Honeybee at JoVE.com

تعديل الشكل 4 باء - 4 د من سوينامي et al. 24 بالإذن من "فتح علم الأحياء". الكتاب ممتنون للناشر للحصول على إذن. وأيد هذا العمل "برنامج العلوم الحدود البشرية" (RGY0077/2016) ميازاكي ريو وشوتا سوينامي.

1-الاستيلاء على مساحات العلف نحل العسل
<ol><li>شراء مستعمرات نحل العسل من موزع محلي.</li>
	<li>باستخدام شبكة الحشرات، صيد النحل محصده التي تعود إلى الخلية مع أكياس حبوب اللقاح على أرجلها الخلفيتين. نقل النحل إلى أنبوب 50 مل مخروطية بلاستيك قياسية وكاب الأنبوب (الشكل 1). وضع الأنبوب ?...

<ol>
	<li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of the Honey Bee. , (1991).</li><li>Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+and+non-associative+plasticity+in+Kenyon+cells+of+the+honeybee+mushroom+body.">Associative and non-associative plasticity in Kenyon cells of the honeybee mushroom body.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 2, 3 (2008).</li><li>M&#252;&#223;ig, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+disruption+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR1+in+the+honeybee+brain+selectively+impairs+memory+formation.">Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation.</a> The Journal of Neuroscience. 30 (23), 7817-7825 (2010).</li><li>Devaud, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+substrate+for+higher-order+learning+in+an+insect:+mushroom+bodies+are+necessary+for+configural+discriminations.">Neural substrate for higher-order learning in an insect: mushroom bodies are necessary for configural discriminations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), E5854-E5862 (2015).</li><li>Gr&#252;nbaum, L., M&#252;ller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+specific+olfactory+memory+leads+to+a+long-lasting+activation+of+protein+kinase+C+in+the+antennal+lobe+of+the+honeybee.">Induction of a specific olfactory memory leads to a long-lasting activation of protein kinase C in the antennal lobe of the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 18 (11), 4384-4392 (1998).</li><li>Kamikouchi, A., Takeuchi, H., Sawata, M., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrated+expression+of+Ca2+/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+and+protein+kinase+C+in+the+mushroom+bodies+of+the+brain+of+the+honeybee+Apis+mellifera+L.">Concentrated expression of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II and protein kinase C in the mushroom bodies of the brain of the honeybee Apis mellifera L.</a> The Journal of Comparative Neurology. 417 (4), 501-510 (2000).</li><li>Sen Sarma, M., Rodriguez-Zas, S. L., Hong, F., Zhong, S., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+central+nervous+system+regions+in+three+species+of+honey+bee+during+dance+communication+behavior.">Transcriptomic profiling of central nervous system regions in three species of honey bee during dance communication behavior.</a> PLoS ONE. 4 (7), e6408 (2009).</li><li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+the+expression+of+futsch,+tau,+and+MESK2+homologues+in+the+brain+of+the+European+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">In situ hybridization analysis of the expression of futsch, tau, and MESK2 homologues in the brain of the European honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 5 (2), e9213 (2010).</li><li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+middle-type+Kenyon+cells+in+the+honeybee+brain+revealed+by+area-preferential+gene+expression+analysis.">Novel middle-type Kenyon cells in the honeybee brain revealed by area-preferential gene expression analysis.</a> PLoS ONE. 8 (8), e71732 (2013).</li><li>Pasch, E., Muenz, T. S., R&#246;ssler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaMKII+is+differentially+localized+in+synaptic+regions+of+kenyon+cells+within+the+mushroom+bodies+of+the+honeybee+brain.">CaMKII is differentially localized in synaptic regions of kenyon cells within the mushroom bodies of the honeybee brain.</a> The Journal of Comparative Neurology. 519 (18), 3700-3712 (2011).</li><li>Suenami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+differentiation+of+Kenyon+cell+subtypes+using+three+mushroom+body-preferential+genes+during+metamorphosis+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">Analysis of the differentiation of Kenyon cell subtypes using three mushroom body-preferential genes during metamorphosis in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 11 (6), e0157841 (2016).</li><li>Farooqui, T., Robinson, K., Vaessin, H., Smith, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+early+olfactory+processing+by+an+octopaminergic+reinforcement+pathway+in+the+honeybee.">Modulation of early olfactory processing by an octopaminergic reinforcement pathway in the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (12), 5370-5380 (2003).</li><li>Matsumoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide-gated+channels,+calmodulin,+adenylyl+cyclase,+and+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+are+required+for+late,+but+not+early,+long-term+memory+formation+in+the+honeybee.">Cyclic nucleotide-gated channels, calmodulin, adenylyl cyclase, and calcium/calmodulin-dependent protein kinase II are required for late, but not early, long-term memory formation in the honeybee.</a> Learning &amp; Memory. 21 (5), 272-286 (2014).</li><li>Scholl, C., K&#252;bert, N., Muenz, T. S., R&#246;ssler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaMKII+knockdown+affects+both+early+and+late+phases+of+olfactory+long-term+memory+in+the+honeybee.">CaMKII knockdown affects both early and late phases of olfactory long-term memory in the honeybee.</a> Journal of Experimental Biology. 218, 3788-3796 (2015).</li><li>Miyata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficient+long-term+synaptic+depression+in+the+rostral+cerebellum+correlated+with+impaired+motor+learning+in+phospholipase+C+&#946;4+mutant+mice.">Deficient long-term synaptic depression in the rostral cerebellum correlated with impaired motor learning in phospholipase C &#946;4 mutant mice.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (10), 1945-1954 (2001).</li><li>Koh, H. -. Y., Kim, D., Lee, J., Lee, S., Shin, H. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+social+behavior+and+sensorimotor+gating+in+mice+lacking+phospholipase+C&#946;1.">Deficits in social behavior and sensorimotor gating in mice lacking phospholipase C&#946;1.</a> Genes, Brain and Behavior. 7 (1), 120-128 (2008).</li><li>Quan, W. -. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+behaviors+and+prepulse+inhibition+in+phospholipase+C&#949;-/-+mice.">Characteristics of behaviors and prepulse inhibition in phospholipase C&#949;-/- mice.</a> Neurology,Psychiatry and Brain Research. 18 (4), 169-174 (2012).</li><li>Rioult-Pedotti, M. -. S., Pekanovic, A., Atiemo, C. O., Marshall, J., Luft, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+promotes+motor+cortex+plasticity+and+motor+skill+learning+via+PLC+activation.">Dopamine promotes motor cortex plasticity and motor skill learning via PLC activation.</a> PLoS ONE. 10 (5), e0124986 (2015).</li><li>Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+in+neurons:+molecular+mechanisms+and+cellular+consequences.">Calcium signaling in neurons: molecular mechanisms and cellular consequences.</a> Science. 268 (5208), 239-247 (1995).</li><li>Smrcka, A. V., Brown, J. H., Holz, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+phospholipase+C&#949;+in+physiological+phosphoinositide+signaling+networks.">Role of phospholipase C&#949; in physiological phosphoinositide signaling networks.</a> Cellular Signalling. 24 (6), 1333-1343 (2012).</li><li>Dusaban, S. S., Brown, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLC&#949;+mediated+sustained+signaling+pathways.">PLC&#949; mediated sustained signaling pathways.</a> Advances in Biological Regulation. 57, 17-23 (2015).</li><li>Elgersma, Y., Sweatt, J. D., Giese, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+genetic+approaches+to+investigating+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+function+in+plasticity+and+cognition.">Mouse genetic approaches to investigating calcium/calmodulin-dependent protein kinase II function in plasticity and cognition.</a> The Journal of Neuroscience. 24 (39), 8410-8415 (2004).</li><li>Giese, K. P., Mizuno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+protein+kinases+in+learning+and+memory.">The roles of protein kinases in learning and memory.</a> Learning &amp; Memory. 20 (10), 540-552 (2013).</li><li>Suenami, S., Iino, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+inhibition+of+phospholipase+C+in+the+brain+attenuates+early+memory+formation+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">Pharmacologic inhibition of phospholipase C in the brain attenuates early memory formation in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> Biology Open. 7 (1), (2018).</li><li>Zhu, L., McKay, R. R., Shortridge, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+expression+of+phospholipase+C+encoded+by+the+norpA+gene+of+Drosophila+melanogaster.">Tissue-specific expression of phospholipase C encoded by the norpA gene of Drosophila melanogaster.</a> The Journal of Biological Chemistry. 268 (21), 15994-16001 (1993).</li><li>Huang, W., Hicks, S. N., Sondek, J., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluorogenic,+small+molecule+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes.">A fluorogenic, small molecule reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> ACS Chemical Biology. 6 (3), 223-228 (2011).</li><li>Yoshioka, T., Inoue, H., Hotta, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+phosphatidylinositol+phosphodiesterase+in+the+head+of+a+Drosophila+visual+mutant,+norpA+(no+receptor+potential+A).">Absence of phosphatidylinositol phosphodiesterase in the head of a Drosophila visual mutant, norpA (no receptor potential A).</a> The Journal of Biochemistry. 97 (4), 1251-1254 (1985).</li><li>Janjanam, J., Chandaka, G. K., Kotla, S., Rao, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLC&#946;3+mediates+cortactin+interaction+with+WAVE2+in+MCP1-induced+actin+polymerization+and+cell+migration.">PLC&#946;3 mediates cortactin interaction with WAVE2 in MCP1-induced actin polymerization and cell migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 26 (25), 4589-4606 (2015).</li><li>Fiala, A., M&#252;ller, U., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+downregulation+of+protein+kinase+A+during+olfactory+learning+using+antisense+technique+impairs+long-term+memory+formation+in+the+honeybee,+Apis+mellifera.">Reversible downregulation of protein kinase A during olfactory learning using antisense technique impairs long-term memory formation in the honeybee, Apis mellifera.</a> The Journal of Neuroscience. 19 (22), 10125-10134 (1999).</li><li>Thamm, M., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKG+in+honey+bees:+spatial+expression,+Amfor+gene+expression,+sucrose+responsiveness,+and+division+of+labor.">PKG in honey bees: spatial expression, Amfor gene expression, sucrose responsiveness, and division of labor.</a> The Journal of Comparative Neurology. 522 (8), 1786-1799 (2014).</li><li>Balfanz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+transmembrane+adenylyl+cyclases+from+the+honeybee+brain.">Functional characterization of transmembrane adenylyl cyclases from the honeybee brain.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (6), 435-445 (2012).</li><li>Lopez, I., Mak, E. C., Ding, J., Hamm, H. E., Lomasney, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+bifunctional+phospholipase+C+that+is+regulated+by+G&#945;12+and+stimulates+the+Ras/mitogen-activated+protein+kinase+pathway.">A novel bifunctional phospholipase C that is regulated by G&#945;12 and stimulates the Ras/mitogen-activated protein kinase pathway.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (4), 2758-2765 (2001).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+membrane-associated,+fluorogenic+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes.">A membrane-associated, fluorogenic reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 293 (5), 1728-1735 (2018).</li></ol>

دراسة الكيمياء الحيوية لنشاط البروتين مهم عميقا لفهم الإشارات الجزيئية في الدماغ، ونظرا لأن نشاط إنزيم تتأثر جزيئات مختلفة، مثل ركائز ومثبطات، وتغيير، ومن ثم، جنبا إلى جنب مع سلوك الحيوانات (مثلالتعلم والذاكرة)5. أفيد في دراسات نحل العسل، والأنزيمات مثل أمبير سيكليك-تع?...

نحل العسل (Apis mellifera L.) الأوروبية الحشرات eusocial، والنحل الإناث تظهر الطبقة الاجتماعية تعتمد على الاستنساخ والعمر-تعتمد على تقسيم العمل. على سبيل المثال، تغذية الأفراد الأصغر سنا في الطبقة العقيمة للنحل يشار إليها 'العمال'، broods بينما الأكبر سنا الأعلاف الرحيق وحبوب اللقاح خارج الخلية1. التعلم والذاكرة القدرة ذات أهمية حاسمة في حياة نحل العسل، لأنه يجب أن مرارا وتكرارا الانتقال ذهابا وإيابا بين مصادر الغذاء والعش باحثات وثم الاتصال بمواقع مصادر غذائية جيدة لما نيستماتيس من خلال الرقص الاتصالات1. أظهرت الدراسات السابقة أن ميغابايت، مركزا أعلى للدماغ في الحشرات، متورطة في القدرة على التعلم والذاكرة لنحل العسل2،،من34. وقد حددت الأثران عن الجينات والبروتينات في مختلف مناطق الدماغ لنحل العسل5،6،،من78،9،10 ،11، مما يوحي بأنها ترتبط بوظائف فريدة من نوعها لكل منطقة الدماغ. رغم تثبيط دوائية أو تنشيط بروتين الاهتمام نهجاً جيدا المستخدمة للكشف عن وظيفة البروتين في نحل العسل السلوك12،،من1314، أنه لا يعرف ما إذا كانت جميع الأدوية أن الآثار الفنية في مناطق مختلفة من الدماغ نحل العسل. وستعزز التحقق المهام لهذه العقاقير الاستنتاجات في الدراسات السلوكية الصيدلة.
هنا، علينا أن نركز على المجلس التشريعي الفلسطيني، واحد من الإنزيمات المتورطين في الماوس الإدراك15،16،،من1718. المجلس التشريعي الفلسطيني يطلق الكالسيوم مما يشير إلى جانب المهينة فوسفاتيديلينوسيتول 4، 5-بيسفوسفاتي (المرحلة2) إلى اينوزيتول 1,4,5-تريسفوسفاتي (IP3) ودياسيلجليسيرول (همرشولد)19،،من2021. الملكية الفكرية3 يفتح IP3 مستقبلات في هيولى (ER)، مما يؤدي إلى الإفراج عن أيونات الكالسيوم لائحة. صدر الكالسيوم ينشط كيناز البروتين الكالسيوم/كالمودولين-تعتمد على الثاني (كامكي) مع كالمودولين والبروتين كيناز ج (PKC) حضور همرشولد. وتشارك كلا مؤنزم البروتين في التعلم والذاكرة22،23، اتساقا مع إشراك المجلس التشريعي في هذه العملية. وتصنف الشركات المحدودة العامة إلى الأنواع الفرعية، بما في ذلك PLCβ، PLCγ، و PLCε، استناداً إلى تلك الهياكل20. يتم تنشيط كل نوع فرعي المجلس التشريعي الفلسطيني في سياق مختلف20، والأثران يتم التعبير عن الجينات ترميز تلك المخططات في أنسجة مختلفة. أظهرنا سابقا أن نحل العسل MBs التعبير عن الجينات ترميز أنواع فرعية PLCβ و PLCε عند مستويات أعلى من مناطق الدماغ المتبقية24، وأن عموم-المجلس التشريعي الفلسطيني هما مثبطات (كبريتات اديلفوسيني والنيوميسين [النيوميسين]) انخفاض نشاط المجلس التشريعي الفلسطيني في مختلف مناطق الدماغ، وفي الواقع، تؤثر على القدرة على التعلم والذاكرة ل نحل العسل24.
تقليديا، تم قياس النشاط الأنزيمي للمجلس التشريعي الفلسطيني باستخدام راديولابيليد النقطة225، الأمر الذي يتطلب توفير التدريب المناسب والمعدات والمرافق. ركيزة فلوروجينيك اصطناعية للمجلس التشريعي الفلسطيني في الآونة الأخيرة أنشئت26، مما يجعل من السهل تقييم النشاط التشريعي في المختبر القياسية. نقدم هنا، بروتوكول مفصلة للكشف عن النشاط التشريعي في مناطق مختلفة من الدماغ لنحل العسل باستخدام الركيزة فلوروجينيك واختبار الآثار المثبطة اديلفوسيني والنيوميسين على المجلس التشريعي الفلسطيني في وقت لاحق في هذه الأنسجة. لأنه يتطلب البروتوكول التلاعب الأساسية فقط، قد يكون المطبقة على الدراسات المتعلقة بالنشاط التشريعي في أنسجة أخرى أو مناطق الدماغ في النحل المخصصة للمهام الاجتماعية المختلفة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:479px;" width="478">
	<tbody>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:113px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:101px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">23227</td>
			<td style="width:125px;">The reagent kit for measurement of protein concentration</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:113px;">Pierce Bovine Serum Albumin Standard Ampules 2mg/mL</td>
			<td style="width:101px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23209</td>
			<td style="width:125px;">The standard samples used in BCA assay</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Paraffin wax</td>
			<td style="width:101px;">GC</td>
			<td>13B1X00155000141</td>
			<td style="width:125px;">Dental wax used as dissection stage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Insect pin</td>
			<td style="width:101px;">Shiga</td>
			<td>No. 0</td>
			<td style="width:125px;">Stainless, solid head</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">PLCglow</td>
			<td style="width:101px;">KXT Bio</td>
			<td>KCH-0001</td>
			<td style="width:125px;">A fluorogenic substrate of PLC</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:113px;">384-well microplate</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td>4511</td>
			<td style="width:125px;">Low-volume, round-bottom plate in black color</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:113px;">Gemini EM microplate reader</td>
			<td style="width:101px;">Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td style="width:125px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Edelfosine</td>
			<td style="width:101px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-201021</td>
			<td style="width:125px;">pan-PLC inhibitor</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:113px;">Neomycin sulfate</td>
			<td style="width:101px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-3573</td>
			<td style="width:125px;">pan-PLC inhibitor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of phospholipase c activity in the brain homogenate from the honeybee

نحل العسل كائن نموذج لتقييم السلوكيات المعقدة وأعلى وظيفة المخ، مثل التعلم والذاكرة، وتقسيم العمل. الجسم الفطر (MB) مركز الدماغ أعلى واقترح أن تكون الركيزة العصبية من سلوكيات نحل العسل المعقدة. على الرغم من أن دراسات سابقة حددت الجينات والبروتينات التي يتم التعبير عنها متفاوتاً في MBs ومناطق أخرى في الدماغ، أنشطة البروتينات في كل منطقة لا بعد فهم فهما كاملا. للكشف عن وظائف هذه البروتينات في الدماغ، تحليل دوائية نهجاً عمليا، ولكن هو الضرورة الأولى لتأكيد أن التلاعب دوائية يغير الواقع نشاط البروتين في هذه المناطق في الدماغ.
ونحن سبق تحديد تعبير أعلى من الجينات ترميز phospholipase C (المجلس التشريعي) في MBs من مناطق أخرى من الدماغ، وتقييم عقاقيري إشراك المجلس التشريعي في سلوك نحل العسل. في هذه الدراسة، ونحن المتحلل اختبار العميلين دوائية وأكدت أنها انخفضت النشاط التشريعي في MBs ومناطق أخرى في الدماغ. هنا، نحن نقدم وصفاً مفصلاً لكيفية الكشف عن النشاط التشريعي في نحل العسل هوموجيناتي الدماغ. في هذا النظام المقايسة، هي رد فعل homogenates المستمدة من مناطق الدماغ المختلفة مع الركازة فلوروجينيك اصطناعية، والأسفار الناتجة عن نشاط المجلس التشريعي هو كمياً ومقارنة بين مناطق الدماغ. كما يصف لنا تقييمنا لتأثيرات بعض العقاقير المثبطة في نشاط المجلس التشريعي الفلسطيني باستخدام نفس النظام. على الرغم من أن هذا النظام من المرجح المتأثرين بغيرها من المركبات الفلورية الذاتية و/أو امتصاص المكونات المقايسة والأنسجة، بقياس نشاط المجلس التشريعي الفلسطيني باستخدام هذا النظام أكثر أماناً وأسهل من استخدام هذا التحليل التقليدي، الذي يتطلب ركائز راديولابيليد. إجراء بسيط والتلاعبات تسمح لنا بدراسة النشاط التشريعي في العقول والأنسجة الأخرى للمشاركة في مختلف المهام الاجتماعية نحل العسل.

تركيزات البروتين في الدماغ هوموجيناتيس: نحن على استعداد هوموجيناتيس باستخدام محصده النحل. وترد في الشكل 3تركيزات البروتين المحسوبة في هوموجيناتيس الأصلي. كانت تركيزات البروتين التقريبي في هوموجيناتي الأصلي كما يلي: 1.5 ملغ/مل في MBs و 2.3 ملغ/مل في...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Phospholipase C Activity in the Brain Homogenate from the Honeybee at JoVE.com

Detection of Phospholipase C Activity in the Brain Homogenate from the Honeybee

الكشف عن نشاط ج فوسفوليباسي في هوموجيناتي المخ من نحل العسل

لاختبار الآثار المثبطة لعوامل دوائية على phospholipase C (PLC) في مناطق مختلفة من الدماغ نحل العسل، نقدم مقايسة بيوكيميائية لقياس النشاط التشريعي في تلك المناطق. هذا التحليل يمكن أن تكون مفيدة لمقارنة النشاط التشريعي بين الأنسجة، وكذلك بين النحل العارضة سلوكيات مختلفة.

The honeybee is a model organism for evaluating complex behaviors and higher brain function, such as learning, memory, and division of labor. The mushroom ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب مثل ما إذا كانت أنشطة PLC في مناطق الدماغ المختلفة وتشارك في وظائف الدماغ من نحل العسل. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الباحثين يمكنهم بسهولة تكوين تجربة مع مرافق المختبر القياسية لأن هذا البروتوكول لا يتطلب سوى التلاعبات الأساسية. للبدء، ضع أنبوب 50 مل يحتوي على نحل العسل على الجليد لمدة 30 دقيقة ل التخدير النحل. بعد ذلك، إعداد مرحلة التشريح عن طريق طي قطعة من شمع الأسنان في النصف ووضعه في طبق من البلاستيك. تحت مجهر منظار، استخدم ملاقط لفصل رأس النحلة عن جسمها. ثم ، قم بإصلاح الرأس على شمع الأسنان وأدخل دبابيس الحشرات في قاعدة كل هوائي لعقد الجزء الداخلي من الرأس في وضع تصاعدي. بعد ذلك، صب ما يكفي من محلول ملحي على الرأس لتغطية ذلك. باستخدام ملاقط إزالة الهوائي. بعد ذلك ، استخدم مشرط لجعل قطع أفقي بالقرب من قواعد الهوائي وقطع طولي عند حدود العينين المركبة. جعل قطع أفقي في الجزء العلوي من الرأس وإزالة بشرة لفتح نافذة على الدماغ. بعد ذلك، استخدم ملاقط لإزالة العين الريتين من العُمَل والنظّاية من السطح الداخلي للدماغ. ثم، إدراج ملاقط مباشرة تحت بشرة العين لإزالة النسيج الضام بين بشرة العينين المركبة والعين retin. بعد ذلك، إزالة بشرة والعين retin من العينين المركب. بعد ذلك، استخدم ملاقط لإزالة بعناية القصبة المتبقية من السطح الداخلي للدماغ. ثم، قطع النسيج الضام بين الدماغ وحول الأنسجة وتشريح الدماغ من كبسولة الرأس. باستخدام الملاقط، قشر القصبة الهوائية قبالة السطح الخلفي للدماغ. ثم استخدام مشرط لقطع الاتصال بين الهيئات الفطر أو MBs ومناطق الدماغ الأخرى بجوار الفصوص الرأسية. ضع MBs المتشَح وأي أنسجة دماغية متبقية في أنابيب 1.5 مل واجمها بسرعة مع الثلج الجاف. أولا، إضافة 10ml من العازلة التجانس إلى أنسجة الدماغ المجمدة. استخدام البيزيل البلاستيكي لتجانس الأنسجة يدويا في أنبوب 1.5ml. بعد ذلك، نقل محلول الأنسجة المتجانسة إلى الأنسجة التالية في الكثير وكرر عملية التجانس. ثم، إضافة 30

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

الكشف عن تعتمد على درجة الحموضة آخر من<em&gt; كولاي</em&gt; الوصيفة HdeB<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

جنبا إلى جنب تقارب تنقية البروتين المجمعات من خلايا حقيقية النواة

The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

Personalized Peptide Arrays for Detection of HLA Alloantibodies in Organ Transplantation

تخصيص صفائف الببتيد للكشف عن Alloantibodies هلا في زرع الأعضاء

In organ transplantation, the function and longevity of the graft critically rely on the success of controlling immunological rejection reactivity against ...

Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

كشف الفسفرة Rab10 بالنشاط LRRK2 باستخدام مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة مع علامة ربط الفوسفات

Mutations in leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) have been shown to be linked with familial Parkinson&#39;s disease (FPD). Since abnormal activation of ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

أسلوب قياس ألوان لقياس محتوى الحديد في النباتات

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Defining Hsp33's Redox-regulated Chaperone Activity and Mapping Conformational Changes on Hsp33 Using Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry

تعريف النشاط وصي ينظم الأكسدة والاختزال في Hsp33 وتعيين التغييرات كونفورماشونال في Hsp33 باستخدام الهيدروجين الديوتريوم التبادل الكتلي

Living organisms regularly need to cope with fluctuating environments during their life cycle, including changes in temperature, pH, the accumulation of ...

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea Camellia Sinensis L. Leaves

دراسة عن الأيض من المبيدات الحشرية النظامية الستة في ثقافة تعليق الخلية المنشأة حديثا المستمدة من الشاي(كاميليا سينينسيس L.) يترك

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

ترجمة تنقية التقارب الريبوسم (TRAP) لعزل الحمض النووي الريبي عن الخلايا البطانية في الجسم الحي

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

كيانات السومو الملزمة (SUBEs) كاداات لإثراء وعزل وتحديد وتوصيف بروتين السومو في سرطان الكبد

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Utilization of Grafix for the Detection of Transient Interactors of Saccharomyces cerevisiae Spliceosome Subcomplexes

Utilization of Grafix for the Detection of Transient Interactors of Saccharomyces cerevisiae Spliceosome Subcomplexes

استخدام Grafix للكشف عن المتفاعلات العابرة من Saccharomyces cerevisiae التشبيكليسومات الفرعية

Pre-mRNA splicing is a very dynamic process that involves many molecular rearrangements of the spliceosome subcomplexes during assembly, RNA processing, ...