Name: detection of phospholipase c activity in the brain homogenate from the honeybee
Uploaded: 2018-09-14T13:30:00
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그림 4B - 4 D Suenami 외 에서 수정 된 생물학 오픈의 허가 함께 24 . 저자는 허가 대 한 게시자에 감사. 이 작품은 쇼타 Suenami와 료 미야자키 인간 프론티어 과학 프로그램 (RGY0077/2016)에 의해 지원 되었다.

1입니다. 구하고 꿀벌의 캡처
<ol><li>꿀벌 식민지는 현지 대리점에서 구입.</li>
	<li>곤충 그물을 사용 하 여, 그들의 뒷 다리에 꽃가루 가방 하이브를 반환 하는 사실을 꿀벌 잡아. 표준 50 mL 플라스틱 원뿔 튜브에 꿀벌을 전송 하 고 캡 튜브 (그림 1). 얼음이 꿀벌을 anesthetize에 튜브를 넣어. 참고: 양 봉 벌 침 방지 하기 위해 지정 된 재킷을 착용 하십시오. 간호 꿀벌 실험에 ?...

<ol>
	<li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of the Honey Bee. , (1991).</li><li>Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+and+non-associative+plasticity+in+Kenyon+cells+of+the+honeybee+mushroom+body.">Associative and non-associative plasticity in Kenyon cells of the honeybee mushroom body.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 2, 3 (2008).</li><li>M&#252;&#223;ig, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+disruption+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR1+in+the+honeybee+brain+selectively+impairs+memory+formation.">Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation.</a> The Journal of Neuroscience. 30 (23), 7817-7825 (2010).</li><li>Devaud, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+substrate+for+higher-order+learning+in+an+insect:+mushroom+bodies+are+necessary+for+configural+discriminations.">Neural substrate for higher-order learning in an insect: mushroom bodies are necessary for configural discriminations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), E5854-E5862 (2015).</li><li>Gr&#252;nbaum, L., M&#252;ller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+specific+olfactory+memory+leads+to+a+long-lasting+activation+of+protein+kinase+C+in+the+antennal+lobe+of+the+honeybee.">Induction of a specific olfactory memory leads to a long-lasting activation of protein kinase C in the antennal lobe of the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 18 (11), 4384-4392 (1998).</li><li>Kamikouchi, A., Takeuchi, H., Sawata, M., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrated+expression+of+Ca2+/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+and+protein+kinase+C+in+the+mushroom+bodies+of+the+brain+of+the+honeybee+Apis+mellifera+L.">Concentrated expression of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II and protein kinase C in the mushroom bodies of the brain of the honeybee Apis mellifera L.</a> The Journal of Comparative Neurology. 417 (4), 501-510 (2000).</li><li>Sen Sarma, M., Rodriguez-Zas, S. L., Hong, F., Zhong, S., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+central+nervous+system+regions+in+three+species+of+honey+bee+during+dance+communication+behavior.">Transcriptomic profiling of central nervous system regions in three species of honey bee during dance communication behavior.</a> PLoS ONE. 4 (7), e6408 (2009).</li><li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+analysis+of+the+expression+of+futsch,+tau,+and+MESK2+homologues+in+the+brain+of+the+European+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">In situ hybridization analysis of the expression of futsch, tau, and MESK2 homologues in the brain of the European honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 5 (2), e9213 (2010).</li><li>Kaneko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+middle-type+Kenyon+cells+in+the+honeybee+brain+revealed+by+area-preferential+gene+expression+analysis.">Novel middle-type Kenyon cells in the honeybee brain revealed by area-preferential gene expression analysis.</a> PLoS ONE. 8 (8), e71732 (2013).</li><li>Pasch, E., Muenz, T. S., R&#246;ssler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaMKII+is+differentially+localized+in+synaptic+regions+of+kenyon+cells+within+the+mushroom+bodies+of+the+honeybee+brain.">CaMKII is differentially localized in synaptic regions of kenyon cells within the mushroom bodies of the honeybee brain.</a> The Journal of Comparative Neurology. 519 (18), 3700-3712 (2011).</li><li>Suenami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+differentiation+of+Kenyon+cell+subtypes+using+three+mushroom+body-preferential+genes+during+metamorphosis+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">Analysis of the differentiation of Kenyon cell subtypes using three mushroom body-preferential genes during metamorphosis in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> PLoS ONE. 11 (6), e0157841 (2016).</li><li>Farooqui, T., Robinson, K., Vaessin, H., Smith, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+early+olfactory+processing+by+an+octopaminergic+reinforcement+pathway+in+the+honeybee.">Modulation of early olfactory processing by an octopaminergic reinforcement pathway in the honeybee.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (12), 5370-5380 (2003).</li><li>Matsumoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide-gated+channels,+calmodulin,+adenylyl+cyclase,+and+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+are+required+for+late,+but+not+early,+long-term+memory+formation+in+the+honeybee.">Cyclic nucleotide-gated channels, calmodulin, adenylyl cyclase, and calcium/calmodulin-dependent protein kinase II are required for late, but not early, long-term memory formation in the honeybee.</a> Learning &amp; Memory. 21 (5), 272-286 (2014).</li><li>Scholl, C., K&#252;bert, N., Muenz, T. S., R&#246;ssler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaMKII+knockdown+affects+both+early+and+late+phases+of+olfactory+long-term+memory+in+the+honeybee.">CaMKII knockdown affects both early and late phases of olfactory long-term memory in the honeybee.</a> Journal of Experimental Biology. 218, 3788-3796 (2015).</li><li>Miyata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficient+long-term+synaptic+depression+in+the+rostral+cerebellum+correlated+with+impaired+motor+learning+in+phospholipase+C+&#946;4+mutant+mice.">Deficient long-term synaptic depression in the rostral cerebellum correlated with impaired motor learning in phospholipase C &#946;4 mutant mice.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (10), 1945-1954 (2001).</li><li>Koh, H. -. Y., Kim, D., Lee, J., Lee, S., Shin, H. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+social+behavior+and+sensorimotor+gating+in+mice+lacking+phospholipase+C&#946;1.">Deficits in social behavior and sensorimotor gating in mice lacking phospholipase C&#946;1.</a> Genes, Brain and Behavior. 7 (1), 120-128 (2008).</li><li>Quan, W. -. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+behaviors+and+prepulse+inhibition+in+phospholipase+C&#949;-/-+mice.">Characteristics of behaviors and prepulse inhibition in phospholipase C&#949;-/- mice.</a> Neurology,Psychiatry and Brain Research. 18 (4), 169-174 (2012).</li><li>Rioult-Pedotti, M. -. S., Pekanovic, A., Atiemo, C. O., Marshall, J., Luft, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+promotes+motor+cortex+plasticity+and+motor+skill+learning+via+PLC+activation.">Dopamine promotes motor cortex plasticity and motor skill learning via PLC activation.</a> PLoS ONE. 10 (5), e0124986 (2015).</li><li>Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+in+neurons:+molecular+mechanisms+and+cellular+consequences.">Calcium signaling in neurons: molecular mechanisms and cellular consequences.</a> Science. 268 (5208), 239-247 (1995).</li><li>Smrcka, A. V., Brown, J. H., Holz, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+phospholipase+C&#949;+in+physiological+phosphoinositide+signaling+networks.">Role of phospholipase C&#949; in physiological phosphoinositide signaling networks.</a> Cellular Signalling. 24 (6), 1333-1343 (2012).</li><li>Dusaban, S. S., Brown, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLC&#949;+mediated+sustained+signaling+pathways.">PLC&#949; mediated sustained signaling pathways.</a> Advances in Biological Regulation. 57, 17-23 (2015).</li><li>Elgersma, Y., Sweatt, J. D., Giese, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+genetic+approaches+to+investigating+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+function+in+plasticity+and+cognition.">Mouse genetic approaches to investigating calcium/calmodulin-dependent protein kinase II function in plasticity and cognition.</a> The Journal of Neuroscience. 24 (39), 8410-8415 (2004).</li><li>Giese, K. P., Mizuno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+protein+kinases+in+learning+and+memory.">The roles of protein kinases in learning and memory.</a> Learning &amp; Memory. 20 (10), 540-552 (2013).</li><li>Suenami, S., Iino, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+inhibition+of+phospholipase+C+in+the+brain+attenuates+early+memory+formation+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+L.).">Pharmacologic inhibition of phospholipase C in the brain attenuates early memory formation in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> Biology Open. 7 (1), (2018).</li><li>Zhu, L., McKay, R. R., Shortridge, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+expression+of+phospholipase+C+encoded+by+the+norpA+gene+of+Drosophila+melanogaster.">Tissue-specific expression of phospholipase C encoded by the norpA gene of Drosophila melanogaster.</a> The Journal of Biological Chemistry. 268 (21), 15994-16001 (1993).</li><li>Huang, W., Hicks, S. N., Sondek, J., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluorogenic,+small+molecule+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes.">A fluorogenic, small molecule reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> ACS Chemical Biology. 6 (3), 223-228 (2011).</li><li>Yoshioka, T., Inoue, H., Hotta, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+phosphatidylinositol+phosphodiesterase+in+the+head+of+a+Drosophila+visual+mutant,+norpA+(no+receptor+potential+A).">Absence of phosphatidylinositol phosphodiesterase in the head of a Drosophila visual mutant, norpA (no receptor potential A).</a> The Journal of Biochemistry. 97 (4), 1251-1254 (1985).</li><li>Janjanam, J., Chandaka, G. K., Kotla, S., Rao, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLC&#946;3+mediates+cortactin+interaction+with+WAVE2+in+MCP1-induced+actin+polymerization+and+cell+migration.">PLC&#946;3 mediates cortactin interaction with WAVE2 in MCP1-induced actin polymerization and cell migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 26 (25), 4589-4606 (2015).</li><li>Fiala, A., M&#252;ller, U., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+downregulation+of+protein+kinase+A+during+olfactory+learning+using+antisense+technique+impairs+long-term+memory+formation+in+the+honeybee,+Apis+mellifera.">Reversible downregulation of protein kinase A during olfactory learning using antisense technique impairs long-term memory formation in the honeybee, Apis mellifera.</a> The Journal of Neuroscience. 19 (22), 10125-10134 (1999).</li><li>Thamm, M., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKG+in+honey+bees:+spatial+expression,+Amfor+gene+expression,+sucrose+responsiveness,+and+division+of+labor.">PKG in honey bees: spatial expression, Amfor gene expression, sucrose responsiveness, and division of labor.</a> The Journal of Comparative Neurology. 522 (8), 1786-1799 (2014).</li><li>Balfanz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+transmembrane+adenylyl+cyclases+from+the+honeybee+brain.">Functional characterization of transmembrane adenylyl cyclases from the honeybee brain.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (6), 435-445 (2012).</li><li>Lopez, I., Mak, E. C., Ding, J., Hamm, H. E., Lomasney, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+bifunctional+phospholipase+C+that+is+regulated+by+G&#945;12+and+stimulates+the+Ras/mitogen-activated+protein+kinase+pathway.">A novel bifunctional phospholipase C that is regulated by G&#945;12 and stimulates the Ras/mitogen-activated protein kinase pathway.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (4), 2758-2765 (2001).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+membrane-associated,+fluorogenic+reporter+for+mammalian+phospholipase+C+isozymes.">A membrane-associated, fluorogenic reporter for mammalian phospholipase C isozymes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 293 (5), 1728-1735 (2018).</li></ol>

단백질 활동의 생화학 검사는 심히 중요 한 효소의 활동 억제제, 기판 등 다양 한 분자에 의해 영향을 함께 따라서, 변경할 수 있습니다 때문에 두뇌에 신호 분자를 이해 하기 위한 동물 행동 (예, 학습 및 메모리)5. 꿀벌 연구, 순환 앰프 종속 단백질 키 니 아 제 A, 순환 GMP 종속 단백질 키 니 아 제, PKC, phosphorylated CaMKII, 및 adenylate 있고 같은 효소에 따라 다양 한 두뇌 지구에?...

유럽 꿀벌 (Apis mellifera L.)는 eusocial 곤충, 그리고 여성 꿀벌 표시 노동의 연령에 따라과 계급 종속 복제. 예를 들어 '노동자' 라고 하는 꿀벌의 메 마른 계급, 젊은 개인이 오래 된 것 들 꼴 꿀 및 꽃가루 하이브1밖에 서 하는 동안이 broods 피드. 학습 및 메모리 채집 반복적으로 음식 소스와 그들의 둥지 사이 앞뒤로 이동 해야 합니다 때문에 좋은 음식 소스 춤을 통해 그들의 nestmates의 위치를 의사 소통 능력은, 꿀벌의 삶에 매우 중요 하다 통신1. 이전 학문 설명 MB, 곤충에 더 높은 두뇌 센터는 꿀벌2,,34의 학습 및 기억 능력에 관여 했다. 차동 표현한 유전자와 단백질 꿀벌5,6,7,8,,910 의 다양 한 두뇌 지역에서 발견 되었습니다. 11, 각 뇌 영역의 독특한 기능 관련 제안. 약리학 적인 억제 또는 관심사의 단백질의 활성화는 꿀벌 행동12,,1314에 단백질의 기능을 잘 사용된 접근, 그것은 알 모든 약물 여부 꿀벌 두뇌의 다른 지역에서 기능적 효과 있다. 같은 약물의 기능 유효성 검사 행동 약리학의 연구에서 결론을 강화 것입니다.
여기, 우리는 PLC, 마우스 인식15,,1617,18에 연루 효소 중 하나에 집중 한다. PLC는 칼슘을 이노 시 톨 1,4,5-trisphosphate (IP3) 및 diacylglycerol (DAG)19,,2021에 phosphatidylinositol 4, 5 bisphosphate (핍2)를 저하 하 여 신호를 트리거합니다. IP3 IP3 수용 체 (ER), 바인딩과 그물에 응급실에서 칼슘 이온의 출시로 이어지는 열립니다. 나온된 칼슘 calmodulin와 칼슘 calmodulin 인당 단백질 키 니 아 II (CaMKII)와 단백질 키 니 아 제 C (PKC) DAG의 존재를 활성화합니다. 두 단백질 kinases는 학습 및 메모리22,23,이 과정에서 PLC의 참여와 참여. Plc는 하위 유형, PLCβ, PLCγ, PLCε,20그들의 구조 따라 등으로 분류 됩니다. 각 PLC 하위 컨텍스트20에서 활성화 되 고 그 하위 인코딩 유전자 차동 다른 조직에 표현 됩니다. 우리는 이전 증명 꿀벌 MBs 유전자는 나머지 뇌 영역24, 보다 높은 수준에서 PLCβ 및 PLCε 하위 인코딩 익스프레스 고 두 팬 PLC 억제제 (edelfosine, 네오 마이 신 황산 [네오 마이 신])에서 PLC 활동 감소 다른 지역 두뇌와, 참으로, 꿀벌24의 학습 및 기억 능력에 영향을 미칠.
전통적으로, PLC의 효소 활동 방사선된 핍225, 적절 한 훈련, 장비 및 시설 필요를 사용 하 여 측정 되었습니다 했다. 최근, PLC의 합성 fluorogenic 기판 설립된26, 표준 실험실에서 PLC 활동을 평가 하기 쉽게 되었습니다. 여기, 우리 fluorogenic 기판을 사용 하 여 꿀벌의 다른 뇌 영역에 PLC 활동을 감지 하 고 이후에이 조직에 PLC에 edelfosine의 네오 마이 신 억제 효과 테스트 하는 자세한 프로토콜을 제시. 프로토콜 기본 조작만 필요, 그것은 꿀벌 다른 사회적 작업에 할당 된 다른 조직에서 PLC 활동 또는 뇌의 연구에 적용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:479px;" width="478">
	<tbody>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:113px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:101px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:139px;">23227</td>
			<td style="width:125px;">The reagent kit for measurement of protein concentration</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:113px;">Pierce Bovine Serum Albumin Standard Ampules 2mg/mL</td>
			<td style="width:101px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23209</td>
			<td style="width:125px;">The standard samples used in BCA assay</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Paraffin wax</td>
			<td style="width:101px;">GC</td>
			<td>13B1X00155000141</td>
			<td style="width:125px;">Dental wax used as dissection stage</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Insect pin</td>
			<td style="width:101px;">Shiga</td>
			<td>No. 0</td>
			<td style="width:125px;">Stainless, solid head</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">PLCglow</td>
			<td style="width:101px;">KXT Bio</td>
			<td>KCH-0001</td>
			<td style="width:125px;">A fluorogenic substrate of PLC</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:113px;">384-well microplate</td>
			<td style="width:101px;">Corning</td>
			<td>4511</td>
			<td style="width:125px;">Low-volume, round-bottom plate in black color</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:113px;">Gemini EM microplate reader</td>
			<td style="width:101px;">Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td style="width:125px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:113px;">Edelfosine</td>
			<td style="width:101px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-201021</td>
			<td style="width:125px;">pan-PLC inhibitor</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:113px;">Neomycin sulfate</td>
			<td style="width:101px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-3573</td>
			<td style="width:125px;">pan-PLC inhibitor</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of phospholipase c activity in the brain homogenate from the honeybee

꿀벌은 복잡 한 행동과 학습, 메모리, 및 분업 등 더 높은 두뇌 기능을 평가 하기 위한 모형 유기 체. 버섯 몸 (MB)은 복잡 한 꿀벌 행동의 신경 기질 수 제안 더 높은 두뇌 센터 이다. 이전 연구 유전자와 단백질을 차동는 MBs 및 다른 뇌 영역에 표시 됩니다 확인, 각 지역에 있는 단백질의 활동은 아직 완전히 이해 되지. 두뇌에 있는이 단백질의 기능을 공개, 약리학 적인 분석 가능한 접근 이지만 약리학 적인 조작 사실 이러한 두뇌 지구에서 단백질 활동 변경 확인을 첫 번째 필요.
우리는 이전 phospholipase C (PLC) 다른 두뇌 지역에 보다 MBs에 인코딩 하는 유전자의 높은 식 식별 하 고 약리학 꿀벌 행동에 PLC의 참여 평가. 그 연구에서 우리는 화학적 두 pharmacologic 에이전트를 테스트 하 고 그들은 PLC는 MBs 및 다른 뇌 영역에서 활동 감소 확인. 여기, 우리는 꿀벌 뇌 homogenate에서 PLC 활동을 검출 하는 방법에 대 한 자세한 설명을 제시. 이 분석 결과 시스템에서 homogenates 서로 다른 뇌 영역에서 파생 된 합성 fluorogenic 기판으로 반응 하 고 PLC 활동에서 발생 하는 형광은 계량 두뇌 지구 사이 비교. 우리는 또한 동일한 시스템을 사용 하 여 PLC 활동에 특정 약물의 억제 효과의 평가 설명 합니다. 이 시스템은 다른 생 형광 화합물 및 분석 결과 구성 요소와 조직의 흡 광도 의해 영향을 가능성이 높습니다, 하지만이 시스템을 사용 하 여 PLC 활동의 측정은 안전 하 고 전통적인 분석 결과 사용 하 여 보다 쉽게는 방사선된 기판을 필요합니다. 간단한 절차와 조작 PLC 활동 두뇌와 다른 사회적 작업에 관련 된 꿀벌의 다른 조직에서 검사 수 있습니다.

Homogenates 뇌에에서 단백질 농도: 우리는 사실을 꿀벌을 사용 하 여 homogenates을 준비. 원래 homogenates에서 계산된 단백질 농도 그림 3에 나와 있습니다. 원래 homogenate에 대략적인 단백질 농도 했다 다음과 같습니다: 1.5 m g/mL는 MBs에서 그리고 다른 두뇌 지역에 2.3 mg/mL. 우리가 사용 하는 많은 당 두 꿀벌 그리고 6 많은 분석 했다.
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Detection of Phospholipase C Activity in the Brain Homogenate from the Honeybee

꿀벌에서 두뇌 Homogenate에서 Phospholipase C 활동의 탐지

꿀벌 두뇌의 다른 지역에서 phospholipase C (PLC)에 pharmacologic 에이전트의 억제 효과 테스트 하려면 우리는 그 지역에서 PLC 활동을 측정 하는 생 화 확 적인 분석 결과 제시. 이 분석 결과 PLC 활동 조직 들 뿐만 아니라 다른 행동을 전시 하는 꿀벌 들을 비교 하는 데 유용 수 있습니다.

The honeybee is a model organism for evaluating complex behaviors and higher brain function, such as learning, memory, and division of labor. The mushroom ...

이 방법은 다른 뇌 영역에서 PLC 활동이 꿀벌의 뇌 기능에 관여하는지 여부와 방법과 같은 신경 과학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 이 프로토콜만 기본적인 조작만 필요하기 때문에 표준 실험실 시설을 사용하여 실험을 쉽게 수정할 수 있다는 것입니다. 먼저 꿀벌을 얼음 위에 꿀벌이 들어 있는 50ml 튜브를 30분 간 놓고 꿀벌을 마취시합니다. 다음으로, 치과 왁스 조각을 반으로 접어 서 서 해부 단계를 준비 하 고 플라스틱 접시에 배치 합니다. 쌍안경 현미경의 밑에, 몸에서 꿀벌의 머리를 분리하기 위하여 핀셋을 사용합니다. 그런 다음, 치과 왁스에 머리를 고정하고 상향 위치에 머리의 내부를 유지하기 위해 각 안테나의 바닥에 곤충 핀을 삽입합니다. 다음으로, 그것을 덮기 위해 머리 위에 충분한 식염수 용액을 붓습니다. 핀셋을 사용하면 안테나가 제거됩니다. 그런 다음 메스를 사용하여 안테나의 기지 근처에서 수평 절단을 하고 복합 눈의 경계에서 세로 절단을 합니다. 머리 의 상단에 수평 컷을 확인하고 뇌를 통해 창을 열 수있는 큐티클을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 소과 기관에서 망막 눈을 제거합니다. 그런 다음, 핀셋을 눈 표기 아래에 직접 삽입하여 복합 눈과 망막 눈의 큐티클 사이의 결합 조직을 제거합니다. 그 후, 화합물 눈의 큐티클과 망막 눈을 제거합니다. 다음으로 핀셋을 사용하여 뇌의 내부 표면에서 남은 기관체를 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 뇌와 조직 주위의 결합 조직을 잘라 헤드 캡슐에서 뇌를 해부합니다. 핀셋을 사용하여 뇌의 후방 표면에서 기관지 껍질을 벗깁니다. 그런 다음 메스를 사용하여 수직 엽 옆에 있는 버섯 몸이나 MB및 기타 뇌 영역 사이의 연결을 잘라냅니다. 해부된 MB와 남은 뇌 조직을 1.5ml 튜브에 넣고 드라이 아이스로 빠르게 얼립니다. 첫째, 냉동 뇌 조직에 균질화 완충제 10ml를 추가합니다. 1.5ml 튜브의 조직을 수동으로 균질화하기 위해 플라스틱 페셀을 사용합니다. 그 후, 균질화된 조직 용액을 제비의 다음 조직으로 옮기고 균질화 과정을 반복한다. 그런 다음 30을 추가합니다.

Research

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Biochemistry

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연구

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